PERCOBAAN 1
TEKNIK TRANSFER KULTUR SECARA ASEPTIK
I. TUJUAN
Mengenalkan teknik pemindahan atau transfer biakan mikrooganisme untuk subkultur secara aseptik.
II. PRINSIP PERCOBAAN
Teknik subkultur adalah teknik untuk memindahkan biakan mikroorganisme dari satu medium ke medium lainnya. Agar hasil yang diperoleh maksimal tanpa adanya kontaminan eksternal, diperlukan adanya transfer kultur secara aseptik sesuai dengan kaidah-kaidah yang seharusnya.
III. TEORI DASAR
Sebelum benar-benar dilakukan proses kultur mikroorganisme, sterilisasi kondisi lingkungan kerja harus dipertimbangkan agar tidak terjadi kontaminasi. Mikroorganisme ada dimana-mana. Karena ukurannya yang sangat kecil, mereka mudah lepas dalam udara dan permukaan. Identifikasi biakan mikroorganisme memerlukan pemindahan ke biakan segar tanpa terjadi pencemaran. Pemindahan mikroorganisme ini dilakukan dengan teknik aseptik untuk mempertahankan kemurnian biakan selama pemindahan berulangkali.
Penanaman bakteri atau biasa disebut juga inokulasi adalah pekerjaan memindahkan bakteri dari medium yang lama ke medium yang baru dengan tingkat ketelitian yang sangat tinggi. Untuk melakukan penanaman bakteri (inokulasi) terlebih dahulu diusahakan agar semua alat yang ada dalam hubungannya dengan medium agar tetap steril, hal ini agar menghindari terjadinya kontaminasi (Dwijoseputro, 1998).
Mikroorganisme dapat ditumbuhkan dalam biakan cair atau padat. Kekeruhan dalam kaldu menunjukkan terjadinya pertumbuhan mikroorganisme. Bila mikroorganisme menumpuk pada dasar tabung maka akan membentuk sedimen, sedangkan pada permukaan kaldu pertumbuhan terlihat sebagai partikel. Inokulasi pada media padat dapat dilakukan dengan teknik agar miring, teknik agar tegak dan teknik lempeng agar. Prinsip utama menginokulasi mikroba pada media padat adalah menumbuhkan mikroba tersebut dan mengamati karakteristik morfologinya.
Tahapan yang harus diikuti untuk melakukan transfer aseptik : a. Disinfeksi daerah bekerja
b. Sterilisasi jarum oose (jarum penanam)/loop, yaitu dengan cara memijarkan jarum dalam api pembakar bunsen
c. Pembakaran tabung kultur dan inokulasi
Sebelum memasukkan jarum steril yang dingin kedalam tabung, tabung kultur dibuka dulu penutupnya lalu bakar mulut tabungnya. Jika tabung berisi medium cair, jarum dimasukkan kedalam tabung kemudian digoyangkan beberapa kali untuk memastikan organisme dalam jarum oose sudah lepas ke medium cair. Jika tabung berisi agar miring, cukup dengan menggesekkan jarum dari bagian bawah ke atas. Untuk kultus stab (tusuk), jarum ditusukkan kedalam medium agar tegak. Setelah itu, mulut tabung yang sudah diinokulasi dibakar kembali dan ditutup.
d. Pemijaran kembali jarum oose e. Disinfeksi terakir meja kerja I. ALAT DAN BAHAN
Alat :
1. Jarum penanam atau oose 2. Pembakar Bunsen
3. Desinfektan 4. Label Bahan :
1. Kultur cair biakan bakteri
2. Kultur agar miring berisi biakan bakteri
3.Medium agar plate yang ditumbuhi koloni bakteri
4. Tabung reaksi berisi medium kaldu nutrisi (Nutrien Broth / NB ) steril 5. Tabung reaksi berisi agar nutrisi (Nutrien Agar / NA) steril
I. CARA KERJA
1. Transfer dari medium cair ke medium cair lainnya
.
1 Jarum oose dipijarkan sampai merah membara
2 Organisme di biakan diratakan dengan mengocok tabung 1
3 Tutup tabung dibuka dan mulut tabung 1 di bakar
4 Jarum oose dimasukkan ke tabung 1 berisi biakan
5 Jarum oose dikeluarkan dari kultur dan mulut tabung 1 dibakar
6 Tabung 1 ditutup kembali
7 Buka tabung 2 berisi kaldu steril dan mulut tabung dibakar
8 Jarum oose dimasukkan ke tabung 2 berisi kaldu steril
9 Jarum oose dikeluarkan dari kaldu dan mulut tabung dibakar
10 Tabung 2 kembali ditutup
2. Transfer bakteri dari Agar miring ke Agar miring lainnya No
.
Cara Kerja Visualisasi Pengerjaan
1 Jarum oose dipijarkan sampai merah membara
2 Tutup tabung 1 berisi agar miring dibuka dan mulut tabung dibakar
3 Organisme diambil dari agar miring dengan jarum inokulasi
4 Mulut tabung dibakar, jarum inokulasi tidak
5 Kultur miring 1 ditutup kembali dan disimpan
6 Buka tabung agar miring steril 2 dan mulut tabung 2 dibakar
7 Permukaan agar miring digesek dengan halus oleh jarum oose
8 Mulut tabung dibakar, ditutup kembali dan diinkubasi
9 Jarum oose dibakar kembali sampai merah berpijar dan disimpan
3. Transfer dari media Agar pada cawan petri (agar plate) ke Agar miring No
.
1 Jarum oose dipijarkan sampai merah membara
2 Bakar mulut cawan petri bagian tepi dengan memutarnya di atas api
3 Dengan tangan yang bebas, angkat tutup cawan
secukupnya untuk akses agar koloni organisme dapat di ambil
4 Setelah mulut tabung di
bakar, gesek permukaan agar miring
5 Mulut tabung di bakar kembali dan ditutup
6 Pijarkan kembali jarum oose
I. DATA PENGAMATAN
1. Transfer dari medium cair ke medium cair lainnya
No Nama bakteri Kondisi sebelum diinkubasi Kondisi setelah diinkubasi Visualisasi hasil pengamatan 1 Pseudomon as sp Warna cairan kuning bening Cairan berwarna jingga, ada buih putih mengapung di permukaan cairan 2 Sarcinna Warna cairan bening Setelah inkubasi 1x24 jam : ada cairan putih (seperti putih telur) mengamban g di atas permukaan
3. Escherichia coli Warna cairan kuning bening Warna cairan kuning keruh dan terdapat endapan bewarna putih kental di bagian bawah tabung. 4. Bacillus Cairan bening Cairan keruh, terdapat endapan putih dan sedikit endapan hijau dipermukaa n
2. Transfer bakteri dari Agar miring ke Agar miring lainnya
No Nama bakteri Kondisi sebelum diinkubasi Kondisi setelah diinkubasi Visualisasi hasil pengamatan
1. Pseudomon as sp Warna media NA = bening polos ○ Te rb en tu k ko lo ni ba kt eri de ng an go re sa n zi g-za g ag ak m el eb ar di at as
pe r m uk aa n m ed ia N A ○ Ko lo ni ya ng te rb en tu k be rb en tu k bu lat an -bu
lat an ○ W ar na m ed ia N A be ru ba h m en ja di ku ni ng
2. Sarcinna Agar miring bening Setelah inkubasi 1x24 jam : ada goresan mengular berwarna agak kekuningan 3. Escherichia coli Warna agar miring bening polos Warna agar miring agak kekuning-kuningan keruh, pertumbuhan bakteri berwarna putih keruh berbentuk zigzag.
4. Bacillus Agar miring bening Agar miring menjadi keruh dan dipermukaan terdapat koloni bakteri berwarna putih kekuningan sesuai bentuk goresan (zigzag)
1. Transfer bakteri dari media Agar pada cawan petri (agar plate) ke Agar miring
No Nama bakteri Kondisi sebelum diinkuba si Kondisi setelah diinkubasi Visualisasi hasil pengamatan
1. Pseudomo nas sp Warna media NA = bening polos • Terbent uk koloni bakteri dengan jumlah banyak di atas permuk aan media sesuai dengan goresa n yang dibentu k • Warna koloni yang terbent uk adalah putih • Warna media NA beruba h menjad i
kuning 2. Sarcinna Warna cairan bening Setelah inkubasi 1x24 jam : ada bintik-bintik berwarna putih kekuningan 3. Escherichia coli Warna agar miring bening polos Warna agar miring agak kekuning-kuningan dan keruh, sedikit pertumbuha n bakteri berbentuk titik (bulat) berwarna putih keruh.
4. Bacillus Warna media NA = bening • Setelah diinkub asi, terbent uk koloni bakteri diatas permuk aan media sesuai dengan goresa n yang dibentu k. • Warna koloni yang terbent uk adalah putih • Warna media NA beruba h menjad
i keruh
I. ANALISIS
Percobaan kali ini adalah inokulasi dalam media padat dan cair. Sebelum melakukan percobaan, ruangan tempat penanaman bakteri harus bersih dan dalam keadaan steril. Hal ini dilakukan agar tidak terjadi kesalahan dalam pengamatan atau percobaan dalam laboratorium. Semua pekerjaan pada praktikum ini dilakukan dengan memperhatikan prosedur teknik aseptik. Kerja aseptic dilakukan dengan bekerja dekat nyala api bunsen. Pada percobaan ini bakteri yang digunakan adalah bakteri E. coli, Sarcinna, Pseudomonas,dan Bacillus.
a. Pseudomonas sp
• Pseudomonas sp pada media cair
Banyak koloni bakteri yang terbentuk diatas permukaan media dapat terlihat Dengan adanya buih putih mengapung di permukaan cairan. Terbentuknya endapan bakteri di permukaan menunjukkan bahwa bakteri bersifat aerob. Warna bakteri adalah putih. Organisme yang memiliki sifat aerob adalah organisme yang membutuhkan oksigen dalam sistem respirasi selnya.
• Pseudomonas sp pada agar miring
Bakteri tumbuh diatas permukaan miring sesuai dengan goresan yang dibuat oleh praktikan. Hal ini menandakan bahwa bakteri ini bersifat aerob.
• Pseudomonas sp pada transfer bakteri dari media Agar pada cawan petri (agar plate) ke Agar miring
Bakteri ini tumbuh membentuk warna putih.
Berdasarakan sistem taksonominya sendiri, klasifikasi pseudomonas adalah sebagai berikut :
Kingdom : Bacteria Phylum : Proteobacteria Class : Gamma Proteobacteria Order : Pseudomonadales Family : Pseudomonadaceae
Genus : Pseudomonas
Bakteri ini terlihat sebagai bakteri tunggal, berpasangan, dan terkadang membentuk rantai yang pendek.
a. Bacillus
• Bacillus pada media cair
Warna media menjadi keruh setelah dimasukkan bakteri, ini menunjukkan bahwa bakteri ini tumbuh di media cair ini secara menyebar. Bakteri pun banyak tumbuh di atas permukaan media cair ini dikarenakan bakteri bergerak ke atas untuk mendapatkan oksigen lebih banyak.
• Bacillus pada agar miring
Bakteri tumbuh diatas permukaan miring sesuai dengan goresan yang dibuat oleh praktikan. Hal ini menandakan bahwa bakteri ini bersifat aerob.
• Bacillus pada transfer bakteri dari media Agar pada cawan petri (agar plate) ke Agar miring
Bakteri ini tumbuh diatas permukaan media, ini menunjukkan bahwa bakteri ini bersifat aerob. Hal ini ditunjukkan dengan pertumbuhan bakteri yang menuju ke atas untuk mendapatkan oksigen yang lebih banyak.
a. Escherichia coli
• Escherichia coli pada media cair
Pada media cair ini, bakteri banyak tumbuh di bawah permukaan media cair sehingga mempunyai sifat anaerob atau organisme yang tumbuh tanpa oksigen molecular.
• Escherichia coli pada agar miring
Terbentuk satu koloni bakteri dan terdapat goresan yang nampak samar. Bentuk koloni yang terbentuk di medium agar miring adalah berwarna putih. Keuntungan media agar miring ini yaitu luas permukaan yang kecil sehingga peluang kontaminasi rendah dan dapat memperluas bidang untuk digunakan strain murni (indukan murni). Sedangkan kerugiannya hanya memuat sedikit mikroorganisme.
• Escherichia coli pada transfer bakteri dari media Agar pada cawan petri (agar plate) ke Agar miring
Bakteri ini sedikit tumbuh di atas permukaan media dengan warna putih keruh berbentuk titik (bulat).
Escherichia coli termasuk dalam famili Enterobacteraceae. Peranan yang menguntungkan adalah sebagai indikator pada level pencemaran air serta mendeteksi patogen pada feses manusia yang disebabkan oleh Salmonella typhi. Berdasarakan sistem taksonominya sendiri, klasifikasi E. coli adalah sebagai berikut :
Superdomain: Phylogenetica Filum: Proteobacteria
Kelas: Gamma Proteobacteria Ordo: Enterobacteriales Famili: Enterobacteriaceae Genus: Escherichia
Spesies: E. coli a. Sarcinna
• Sarcinna pada media cair • Sarcinna pada agar miring
Bakteri tumbuh diatas permukaan miring sesuai dengan goresan yang dibuat oleh praktikan. Hal ini menandakan bahwa bakteri ini bersifat aerob.
• Sarcinna pada transfer bakteri dari media Agar pada cawan petri (agar plate) ke Agar miring
Bakteri ini tumbuh diatas permukaan media, ini menunjukkan bahwa bakteri ini bersifat aerob. Hal ini ditunjukkan dengan pertumbuhan bakteri yang menuju ke atas untuk mendapatkan oksigen yang lebih banyak. .
I. KESIMPULAN
Teknik inokulasi atau penanaman bakteri harus benar-benar aseptik atau steril supaya tidak terjadi kontaminasi oleh mikroorganisme lain. Teknik ini dapat dilakukan pada 3 jenis media yaitu solid, semi solid, dan cair. Dari percobaan ini diperoleh hasil inokulasi : • Pseudomonas sp bersifat aerob.
• Bacillus bersifat aerob.
• Sarcinna bersifat I. DAFTAR PUSTAKA
http://www.scribd.com
Dwidjoseputro, D. 1998. Dasar-Dasar Mikrobiologi. Malang : Djambatan. http://www.renataemily.wordpress.com
