Zona Hambat Ekstrak Daun Sirih Merah Terhadap Staphylococcus Aureus Dan Candida Albicans Diisolasi Dari Denture Stomatitis

Lampiran 1

Skema Alur Pikir

Latar Belakang

1. Daun sirih merah (Piper crocatum) adalah salah satu obat tradisional yang memiliki aktivitas antibakteri, antiseptik dan antijamur. (Rinanda T dkk., 2012; Bangash FA dkk., 2012)

2. Daun sirih merah (Piper crocatum) mengandung senyawa organik seperti polifenol, flavonoid, tanin, alkaloid dan minyak esensial. (Lister INE dkk., 2014; Juliantina RF dkk., 2012; Candrasari A dkk., 2012; Syahrinastiti TA dkk., 2015)

3. Penelitian Juliantina F, dkk tahun 2010 melaporkan bahwa ekstrak etanol daun sirih merah memiliki kemampuan antibakteri terhadap Staphylococcus aureus ATCC 25923 dengan Kadar Hambat Minimum (KHM) 25% dan Kadar Bunuh Minimum (KBM) 25%. (Juliantina F dkk., 2010)

4. Denture stomatitis adalah proses inflamasi yang terutama melibatkan mukosa palatal di rongga mulut yang ditutupi oleh gigitiruan penuh atau sebagian. (Costa F dkk., Aoun G dkk., 2015; Monroy., 2005)

5. Penelitian Bhat V tahun 2013 di India mengemukakan dari 55 orang pemakai gigitiruan penuh, 27 orang (50%) diantaranya menderita DS. Dari 27 orang penderita tersebut, 13 orang (48%) diantaranya positif Candida albicans. ( Bhat V dkk., 2013)

6. Penelitian Monroy tahun 2004 di Meksiko mengemukakan dari 50 orang pasien Atropic Denture stomatitis dengan pH rata-rata 5,2 ditemukan pada membran mukosa yaitu Candida albicans 51,4%, Staphylococcus aureus 52,4% dan Streptococcus mutans 67,6%, sedangkan pada gigitiruan penderita ditemukan Candida albicans 66,7% dan Staphylococcus aureus dan Streptococcus mutans adalah 49,5%. (Monroy TB dkk., 2005)

teknik pembersihan gigitiruan seperti yang telah disarankan menggunakan sikat gigi mekanik, dan sterilisasi microwave menggunakan pembersihan kimia seperti sabun, tablet effervescent dan obat kumur. (Aoun G dkk., 2015) 8. Penelitian Candrasari tahun 2012 melaporkan bahwa ekstrak daun sirih merah memiliki daya hambat terhadap pertumbuhan bakteri Staphylococcus aureus ATCC 6538 pada konsentrasi 20%, 40%, 80% dan 100% sedangkan terhadap Candida albicans ATCC 10231 memiliki daya hambat pada konsentrasi 10%, 20%, 40%, 80% dan 100%. (Candrasari A dkk., 2012) 9. Penelitian Reveny (2011) mengatakan bahwa daya hambat pertumbuhan

bakteri Staphylococcus aureus dan jamur Candida albicans diperoleh KHM dari ekstrak etanol 80% sirih merah adalah 2,5% dan 10%. (Reveny J dkk., 2011)

10.Penelitian junairiah (2014) di Surabaya menunjukkan bahwa ekstrak etil asetat sirih merah dapat menghambat pertumbuhan Streptococcus mutans dan ekstrak methanol sirih merah dapat menghambat pertumbuhan Staphylococcus aureus, E. coli serta Candida albicans.(Junairiah dkk., 2015)

Rumusan Masalah

Berdasarkan uraian latar belakang yang telah dijelaskan, maka dapat dirumuskan masalah sebagai berikut :

4. Berapakah zona hambat ekstrak daun sirih merah yang dibuat dalam konsentrasi 50%, 25%, 12,5% dan 6,25% terhadap pertumbuhan Staphylococcus aureus diisolasi dari denture stomatitis?

5. Berapakah zona hambat ekstrak daun sirih merah yang dibuat dalam konsentrasi 50%, 25%, 12,5% dan 6,25% terhadap pertumbuhan Candida albicans diisolasi dari denture stomatitis?

merah yang dibuat dalam konsentrasi 50%, 25%, 12,5% dan 6,25% terhadap pertumbuhan Staphylococcus aureus dan Candida albicans diisolasi dari denture stomatitis?

Manfaat Penelitian Manfaat Teoritis

3. Sebagai data dan informasi bagi perkembangan ilmu kedokteran gigi mengenai zona hambat ekstrak daun sirih merah terhadap Staphylococcus aureus dan Candida albicans diisolasi dari denture stomatitis.

4. Sebagai data awal untuk melakukan penelitian lanjutan.

Manfaat Praktis

Sebagai data untuk dokter gigi bahwa ekstrak daun sirih merah mempunyai sifat antibakteri dan antijamur.

Tujuan Penelitian

4. Untuk mengetahui zona hambat ekstrak daun sirih merah yang dibuat dalam konsentrasi 50%, 25%, 12,5% dan 6,25% terhadap pertumbuhan Staphylococcus aureus diisolasi dari denture stomatitis.

5. Untuk mengetahui zona hambat ekstrak daun sirih merah yang dibuat dalam konsentrasi 50%, 25%, 12,5% dan 6,25% terhadap pertumbuhan Candida albicans diisolasi dari denture stomatitis.

Lampiran 2

Skema Alur Penelitian

1. Pembuatan Ekstrak Daun Sirih Merah

Daun sirih merah dicuci dan dikering dalam lemari pengering dengan suhu 30-40oC

Campur bubuk dengan etanol 96%

Masukkan ke dalam botol perkolasi, atur tetesan agar penarikan ekstrak maksimal (20 tetes per menit)

Haluskan dengan blender sampai jadi bubuk kering

Tambah etanol secara terus menerus dan tetap dijaga agar tidak kering, hentikan apabila cairan sudah berubah warna menjadi bening

Setelah proses perkolasi selesai, selanjutnya proses rotavaporasi yaitu menguapkan etanol pada larutan, Ambil panci dan masukkan hasil perkolasi kedalam panci tersebut, aduk sampai mengental

Setelah mengental dan volumenya sudah berkurang, pindahkan larutan ke cawan yang lebih kecil agar lebih mudah diaduk. Cawan dipanaskan diatas beaker glass yang berisi air

Setelah kental hentikan rotavaporasi, pindahkan ekstrak ke suatu wadah

2. Isolasi Bakteri Staphylococcus aureus dan Jamur Candida albicans dari Pasien Denture stomatitis

Pasien disuruh puasa selama ± 3 jam

Spesimen diambil dengan cara swab dengan menggunakan kapas lidisteril pada daerah yang terkena Denture stomatitis

Pemeriksaan langsung : dengan pewarnaan Gram. Identifikasi hasil pewarnaan Gram Staphylococcus sp dan Candida sp

penanaman Candida sp. pada media Sabaroud Dextrose Agar (SDA) untuk melihat Candida albicans

Penanaman Staphylococcus sp. pada media Mannitol Salt Agar

(MSA) untuk melihat Staphylococcus aureus

3. Uji Antimikroba

Siapkan 16 _{disk kosong untuk uji Staphylococcus aureus dan} 16 disk kosong untuk Candida albicans. Kemudian masukkan kedalam botol ekstrak sirih merah pada masing-masing disk.

Sediakan 8 cawan petri yang berisi MHA, 4 petri untuk Staphylococcus aureus dan 4 petri untuk Candida albicans

kemudian ambil biakan Staphylococcus aureus dan Candida albicans dengan ose masukkan ke media dan distreak/gores

Kemudian dilakukan pengukuran diameter yang bebas koloni (zona bening) dengan menggunakan kaliper geser

Zona hambat yang terbentuk diukur sebanyak dua kali yaitu pengukuran secara diameter vertikal dan diameter horizontal

Kemudian hasilnya ditambahkan dan dibagi dua dan catat hasilnya

Disk yang telah direndam dengan ekstrak daun sirih merah diletakkan ke media dengan pinset dengan cara menekankan sedikit ke media

MHA

Inkubasi selama 24-48 jam dengan suhu 37oC

Lampiran 3

DEPARTEMEN BIOLOGI ORAL FAKULTAS KEDOKTERAN GIGI UNIVERSITAS SUMATERA UTARA

ZONA HAMBAT EKSTRAK DAUN SIRIH MERAH TERHADAP Staphylococcus aureus DAN Candida albicans DIISOLASI DARI

DENTURE STOMATITIS

IDENTITAS SAMPEL

Nama :

Umur :

Jenis Kelamin :

Alamat :

No Telp/HP :

RIWAYAT SAMPEL

1. Apakah Bapak/Ibu memiliki penyakit sistemik ( sakit gula, darah tinggi, jantung, dll )

a. Ya b. Tidak

2. Bila jawaban diatas tidak, apakah Bapak/Ibu sedang meminum obat dari dokter?

a. Ya b. Tidak

STATUS GIGITIRUAN

1. Sudah berapa lama Bapak/Ibu memakai gigitiruan?

2. Apakah Bapak/Ibu membuka gigitiruannya pada malam hari?

………

3. Apakah Bapak/Ibu membersihkan gigitiruannya setiap hari?

………..

4. Apa yang Bapak/Ibu gunakan untuk membersihkan gigitiruan?

………..

PEMERIKSAAN INTRA ORAL

1. Gigitiruan longgar a. Ya

b. Tidak

2. Eritema pada jaringan mukosa dibawah gigitiruan a. Ada

Lampiran 4

LEMBAR PENJELASAN KEPADA CALON SUBJEK PENELITIAN

Kepada Yth:

Bapak/Ibu

...

Bersama ini saya, Lara Veronika (umur 21 tahun) yang sedang menjalani program pendidikan sarjana pada Fakultas Kedokteran Gigi Universitas Sumatera Utara, memohon kesedian Bapak/Ibu untuk berpatisipasi sebagai subjek penelitian saya yang berjudul :

ZONA HAMBAT EKSTRAK DAUN SIRIH MERAH TERHADAP Staphylococcus aureus DAN Candida albicans DIISOLASI DARI

DENTURE STOMATITIS

Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui larutan ekstrak daun sirih merah yang dibuat dalam beberapa konsentrasi dapat menghambat pertumbuhan Staphylococcus aureus dan Candida albicans diisolasi dari denture stomatitis dan untuk mengetahui perbedaan zona hambat larutan ekstrak daun sirih merah yang dibuat dalam beberapa konsentrasi terhadap pertumbuhan Staphylococcus aureus dan Candida albicans diisolasi dari Denture stomatitis. Pada penelitian ini Bapak/Ibu akan menjalani prosedur penelitian. Pertama-tama Bapak/Ibu akan diberikan kuesioner dan akan dilakukan pemeriksaan terhadap keadaan rongga mulut dan gigitiruan. Kemudian akan dilakukan pengambilan bakteri pada daerah yang terinfeksi dengan batang kapas steril.

membutuhkan waktu sekitar 5-10 menit. Selama penelitian tidak akan terjadi masalah atau komplikasi yang serius.

Demikian lembar penjelasan ini saya perbuat, semoga keterangan ini dapat dimengerti dan atas kesediaan Bapak/Ibu untuk berpatisipasi dalam penelitian saya ini saya ucapkan terima kasih.

Lara Veronika

Fakultas kedokteran Gigi Universitas Sumatera Utara

Telp : 085278068065

Medan, 2016

Lampiran 5

SURAT PERNYATAAN PERSETUJUAN SUBJEK PENELITIAN

(INFORMED CONSENT)

Saya yang bertanda tangan di bawah ini :

Nama :

Umur :

Jenis kelamin :

Alamat :

Menyatakan telah membaca lembar penjelasan kepada subjek penelitian dan sudah mengerti serta bersedia untuk turut serta sebagai subjek penelitian, dalam penelitian atas nama Lara Veronika yang berjudul Zona Hambat Ekstrak Daun

Sirih Merah Terhadap Staphylococcus aureus dan Candida albicans diisolasi dari DENTURE STOMATITIS dan menyatakan tidak keberatan maupun melakukan

tuntutan di kemudian hari.

Demikian pernyataan ini saya perbuat dalam keadaan sehat, penuh kesadaran dan tanpa paksaan dari pihak manapun.

Medan, 2016

Pembuat Pernyataan

(...)

Lampiran 7

Tabel hasil penelitian zona hambat ekstrak daun sirih merah terhadap Staphylococcus aureus

Lampiran 8

Group Statistics

Uji N Mean Std. Deviation Std. Error Mean

6,25% staphylococcus aureus 4 .0000 .00000a _.00000

Candida albicans 4 .0000 .00000a _.00000

12,5% staphylococcus aureus 4 10.2500 .28868 .14434

Candida albicans 4 8.6250 .75000 .37500

25% staphylococcus aureus 4 13.6250 .25000 .12500

Candida albicans 4 14.1250 .47871 .23936

50% staphylococcus aureus 4 16.7500 .28868 .14434

Candida albicans 4 17.2500 .28868 .14434

Independent Samples Test

Levene's Test for

Equality of Variances t-test for Equality of Means

F Sig. t df Sig. (2-tailed)

Mean

Difference

Std. Error

Difference

95% Confidence Interval of the

Difference

Lower Upper

12,5% Equal variances

assumed 13.500 .010 4.044 6 .007 1.62500 .40182 .64178 2.60822

Equal variances not

assumed 4.044 3.870 .017 1.62500 .40182 .49441 2.75559

25% Equal variances

assumed 2.455 .168 -1.852 6 .114 -.50000 .27003 -1.16074 .16074

Equal variances not

assumed -1.852 4.523 .129 -.50000 .27003 -1.21674 .21674

50% Equal variances

assumed . . -2.449 6 .050 -.50000 .20412 -.99947 -.00053

Equal variances not

Staphylococcus aureus

Descriptives

pengulangan

N Mean Std. Deviation Std. Error

95% Confidence Interval for Mean

Minimum Maximum Lower Bound Upper Bound

6,25% 4 ,0000 ,00000 ,00000 ,0000 ,0000 ,00 ,00

12,5% 4 10,1250 ,25000 ,12500 9,7272 10,5228 10,00 10,50

25% 4 13,6250 ,25000 ,12500 13,2272 14,0228 13,50 14,00

50% 4 16,7500 ,28868 ,14434 16,2907 17,2093 16,50 17,00

Total 16 10,1250 6,50769 1,62692 6,6573 13,5927 ,00 17,00

Test of Homogeneity of Variances

pengulangan

Levene Statistic df1 df2 Sig.

Multiple Comparisons

Dependent Variable: pengulangan

LSD

(I) konsentrasi (J) konsentrasi

Mean Difference

(I-J) Std. Error Sig.

95% Confidence Interval

Lower Bound Upper Bound

6,25% 12,5% -10,12500* _{,16137 ,000 -10,4766 -9,7734}

25% -13,62500* _{,16137 ,000 -13,9766 -13,2734}

50% -16,75000* _{,16137 ,000 -17,1016 -16,3984}

12,5% 6,25% 10,12500* _{,16137 ,000 9,7734 10,4766}

25% -3,50000* _{,16137 ,000 -3,8516 -3,1484}

50% -6,62500* _{,16137 ,000 -6,9766 -6,2734}

25% 6,25% 13,62500* _{,16137 ,000 13,2734 13,9766}

12,5% 3,50000* _{,16137 ,000 3,1484 3,8516}

50% -3,12500* _{,16137 ,000 -3,4766 -2,7734}

50% 6,25% 16,75000* _{,16137 ,000 16,3984 17,1016}

12,5% 6,62500* _{,16137 ,000 6,2734 6,9766}

25% 3,12500* _{,16137 ,000 2,7734 3,4766}

Candida albicans

Descriptives

pengulangan

N Mean Std. Deviation Std. Error

95% Confidence Interval for Mean

Minimum Maximum Lower Bound Upper Bound

6,25% 4 ,0000 ,00000 ,00000 ,0000 ,0000 ,00 ,00

12,5% 4 8,6250 ,75000 ,37500 7,4316 9,8184 8,00 9,50

25% 4 14,1250 ,47871 ,23936 13,3633 14,8867 13,50 14,50

50% 4 17,2500 ,28868 ,14434 16,7907 17,7093 17,00 17,50

Total 16 10,0000 6,77495 1,69374 6,3899 13,6101 ,00 17,50

Test of Homogeneity of Variances

pengulangan

Levene Statistic df1 df2 Sig.

Multiple Comparisons

Dependent Variable: pengulangan

LSD

(I) konsentrasi (J) konsentrasi

Mean Difference

(I-J) Std. Error Sig.

95% Confidence Interval

Lower Bound Upper Bound

6,25% 12,5% -8,62500* _{,33072 ,000 -9,3456 -7,9044}

25% -14,12500* _{,33072 ,000 -14,8456 -13,4044}

50% -17,25000* _{,33072 ,000 -17,9706 -16,5294}

12,5% 6,25% 8,62500* _{,33072 ,000 7,9044 9,3456}

25% -5,50000* _{,33072 ,000 -6,2206 -4,7794}

50% -8,62500* _{,33072 ,000 -9,3456 -7,9044}

25% 6,25% 14,12500* _{,33072 ,000 13,4044 14,8456}

12,5% 5,50000* _{,33072 ,000 4,7794 6,2206}

50% -3,12500* _{,33072 ,000 -3,8456 -2,4044}

50% 6,25% 17,25000* _{,33072 ,000 16,5294 17,9706}

12,5% 8,62500* _{,33072 ,000 7,9044 9,3456}

25% 3,12500* _{,33072 ,000 2,4044 3,8456}