TEKNIK PENYIAPAN SAMPEL (KIMIA FARMASI ANALISIS I)

TEKNIK PENYIAPAN SAMPEL

(KIMIA FARMASI ANALISIS I)

Oleh

Purwadi, M.Si

Purwadi, S.Si. M.Si.

Graduated from:

Master of Science with Cume Laude,

School of Pharmacy - Institut Tecnology of Bandung, 2007

Bachelor of Science in Chemistry, University of Lampung, 1999

Works:

Obat

Alam Semisintesis Sintesis kimia Rekayasa

• Peningkatan kualitas hidup

Senyawa anorganik Senyawa organik

Struktur molekul

(kimia) Aktivitas biologi (farmakologi)

Berdasar: Unsur /ion Gugus fungsi Rangka utama Ikatan kimia

Analisis bedasarkan tujuan:

Kualitatif: Penentuan Identitas Senyawa Kuantitatif: Penentuan Jumlah/Kadar Prepapatif: Mendapatkan/memurnikan

Analisis berdasarkan metode/teknik:

Fisika Kimia

Analisis berdasarkan kerumitan matrik

Langsung:

> pada senyawa murni

> pada analisis senyawa spesifik > matriks tidak mengganggu

Tidak langsung/pemisahan

Matriks mengganggu =>

> Lakukan pemisahan analit terhadap matriks

_{Rusak matriks tsb}

Perlu pernyiapan / preparasi sampel

Alasan lain preparasi:

Menurunkan batas deteksi  dengan pemekatan /

Teknik- Teknik Preparasi Sampel:

a. Penggerusan / blender / cincang

pada: sampel padat atau sampel dengan

matriks padat

tujuan: memperluas permukaan kontak

b. Penyaringan

c. Sentrifugasi

pada : pada analit dengan matriks partikel padat

terdispersi

tujuan: matriks mengendap

d. Pemekatan dengan gas Nitrogen (gas inert)

pada: analit dengan pelarut yang dapat menguap

Tujuan: pemekatan analit karena pelarut

Penguapan pelarut dengan nitrogen

e. Pemekatan / pemisahan dengan Destilasi

Destilasi dibagi:

1. Destilasi Sederhana 2. Destilasi Vakum

3. Destilasi Fraksionasi 4. Destilasi uap

Destilasi Sederhana

Laboratory distillation setup:

1: Heat source 2: Still pot 3:

Still head 4: Thermometer /Boiling point temperature 5:

Condenser 6: Cooling water in

7: Cooling water out 8:

Distillate/receiving flask 9:

Vacuum/gas inlet 10: Still receiver 11: Heat control 12:

Stirrer speed control 13:

Stirrer/heat plate 14: Heating (Oil/sand) bath 15: Stiring means e.g. magnetic follower (shown), anti-bumping

granules or mechanical stirrer

Pada distilasi sederhana, semua uap panas yang

dihasilkan dilewatkan melalui Kondenser / pengembun yang akan mendinginkan dan mengembunkan uap.

Destilat / hasil destilasi tidak akan murni, komposisinya akan identik dengan komposisi uap pada suhu dan

Destilasi Vakum

_{Pada tekanan rendah cairan akan}

mendidih pada suhu lebih kecil

Rotary Vacuum evaporator:

Digunanakan untuk mendestilasi pelarut lrbih cepat pada

temperatur lebih rendah, karena

Perkin Triangle Distillation Setup

1: Stirrer bar/anti-bumping granules 2: Still pot 3:

Fractionating column 4:

Thermometer/Boiling point temperature 5: Teflon tap 1

6: Cold finger 7: Cooling water out 8: Cooling water in 9: Teflon tap 2 10:

Vacuum/gas inlet 11:

f. Metode Ekstraksi

Tujuan:

- pemisahan

- prekonsentrasi

• Ekstraksi merupakan distribusi solute

diantara dua fase larutan yang tidak saling

bercampur satu dengan yang lain hingga

tercapainya kesetimbangan.

Ekstraksi berdasarkan kontak antar fase:

1. Ekstraksi satu tahap

misal: ECC

2. Ekstraksi Sinambung

misal: sokletasi

Ekstraksi pelarut sering disebut

juga Distribusi Cair Cair atau

Ekstraksi Cair Cair (ECC).

_[A]Org

[A]Aq

Fase kontak satu kali

Konstanta Distribusi

• Konstanta distribusi (Kd) dikemukakan oleh Nernst,

1898, sebagai nilai yang dapat mendeskripsikan data

hasil ekstraksi

• Konsentrasi solute pada masing-masing solven

ditentukan pada saat distribusi solute pada 2 solven

tersebut mencapai kesetimbangan.

Ekstraksi dipengaruhi oleh

Ekstraksi sinambung; Jika ekstraktan lebih ringan

E: ekstraktan: pelarut pengekstraksi

Ekstraksi sinambung; Jika rafinat lebih ringan

E: ekstraktan: pelarut pengekstraksi

Peralatan ekstraksi sinambung disain

Peralatan ekstraksi cair-cair

sinambung, disain untuk sanpel dimana solven pengekstrak lebih berat dibanding air

Dengan sistem ekstraksi dan pemekatan pada satu

h. SOKLETASI

_{Merupakan teknik ekstraksi sinambung menggunakan}

panas

Menggunakan panas => senyawa analit harus termostabil

1: Stirrer bar/anti-bumping granules

2: Still pot (extraction pot) - still pot should not be overfilled and the volume of solvent in the still pot should be 3 to 4 times the volume of the soxhlet

chamber.

3: Distillation path

4: Soxhlet Thimble

5: Extraction solid (residue solid)

6: Syphon arm inlet

7: Syphon arm outlet

8: Expansion adapter

9: Condenser

10: Cooling water in

11: Cooling water out

h. Rekristalisasi: metode pemurnian kristal dengan cara pelarutan dan pengkristalan ulang

A. Rekristalisasi dengan pelarut tunggal

→ Solvent added (clear) to compound (orange) → Solvent heated to give saturated compound solution (orange) → Saturated compound solution (orange)

B. Rekristalisasi multi-pelarut

→ Solvent added (clear) to compound (orange) → Solvent

heated to give saturated compound solution (orange) → Second solvent (blue) added to compound solution (orange) to give

mixed solvent system (green) → Mixed solvent system (green) allowed to cool over time to give crystals (orange) and a non-saturated mixed solvent system (green-blue).

Rekristalisasi penyaringan panas

non-→ First solvent added (clear) to compound (orange) non-→ Solvent heated to give saturated compound solution (orange) → Second solvent (blue) added to compound solution (orange) to give first mixed solvent system (green) → Volatile first solvent (clear) is

removed (e.g. evaporation) from first mixed solvent system (green) to give a second mixed solvent system (dark-green) → Second mixed solvent system (dark-green) allowed to cool over time to give crystals (orange) and a non-saturated second mixed solvent system

(green-blue)

Prinsip pemisahan secara membran permeabel

Membran mempunyai pori dengan ukuran tertentu

Analit akan bermigrasi dari konsentrasi tinggi ke konsentrasi lebih rendah

i. Metode digesti:

Digunakan untuk analisis logam pada matriks organik kompleks

Bagaimana: matiks rusak, analit (logam) tidak rusak

 Basah : dengan H₂SO₄, HNO₃, HCl, H₂O₂, dll

 Kering: tanur, pengabuan , mikrowave dll

J. Presipitasi

Untuk pengendapan matriks biologi:

 Lakukan presipitasi pada sampel darah

Dengan penambahan metanol, etanol, kloroform, asam perklorat, dll

Mengapa:

1. matriks berupa biomolekul berupa protein akan terdenaturasi / mengendap

Pustaka:

Miller, J.M. 1975. Sparation Methods in Chemical Analysis. John Willey & Sons. New York.

J D. WINEFORDNER (ed.). 2003. Sample

Preparation Techniques in Analytical Chemistry. VOL. 162. A JOHN WILEY & SONS, INC.,

PUBLICATION

www.wikipedia.com