Nucleic Acid Extraction and Purification KIT
(Fosun Magpure Nucleic Acid Extraction and Purification KIT)
A. Tipe 32Test/KIT
B. Tujuan penggunaan
Tujuan penggunaan dari produk ini adalah untuk mengekstrasi dan meleburkan Nucleic Acid (DNA/RNA), dari serum, plasma, darah, urin, stupum, swab hidung, cairan cerebrospinal, oropharyngeal swab, nasopharyngeal swab, dan urogenital swab. Purified nucleic acid digunakan untuk kebutuhan diagnostic molekuler, dan tidak digunakan untuk kebutuhan diagnosis langsung, pencegahan atau menanggulagi wabah penyakit.
C. Deteksi
Sampel feses: Gunakan wadah khusus yang kering, bersih, dan disterilkan untuk menampung feses segar seukuran jari tangan (sekitar 3-5g). Sampel jaringan: Ambil sampel ukuran butiran beras, masukkan ke dalam tabung pembekuan bebas RNA, dan masukkan ke dalam nitrogen cair untuk pembekuan cepat. Lebih baik untuk menguji sampel beku tertanam OCT dan sampel tertanam parafin tetap formalin.
Sampel harus dikirim untuk pengujian sesegera mungkin setelah pengumpulan, atau disimpan selama 48 jam pada 2º - 8º c, atau - 20 c untuk penyimpanan jangka panjang.
D. Protokol
1. Preparasi Reagen
Pemuatan pelat I: Setelah sentrifugasi seketika, buka film penutup Pelat 2-e yang Telah Dipasang Sebelumnya. Harap pipet 200 1-1.
L etanol anhidrat ke dalam lubang kolom 2/8, pipet 400 u L etanol anhidrat ke dalam lubang kolom 3/9, pipet 100, L isopropanol (atau etanol anhidrat) ke dalam lubang kolom 1/7.
2. Proses sempel
Tambahkan sampel 100-400 u L ke lubang kolom 1/7. Sebelum menambahkan sampel freeze- thaw, sampel perlu diseimbangkan dengan suhu kamar dan disentrifugasi secara instan dengan kecepatan rendah selama beberapa detik.
3. Prosedur Operasi
Put Pre-installed Plate or single test strip 2 into the nucleic acid extractor, confirm the installation is correct, and insert the mixing plastic sleeve into the vibration frame under the magnetic rod.
Turn on the power supply and select the program according to the instruction manual of nucleic acid extractor to start the operation.
After the operation, the nucleic acid extracted from the elution buffer can be used for PCR detection or transferred to a centrifuge tube without nuclease for long-term storage at -20
oc.
Catatan: Jangan menjalankan program tanpa memasukkan selongsong plastik pencampur, jika tidak batang magnet akan berkarat dan rusak.
4. Quality Control
Rangkaian leukosit manusia dari pengenceran tenaga kesehatan disiapkan dengan larutan garam steril, diaplikasikan pada kit Fosun Magpure NA dengan larutan garam steril sebagai kontrol negatif, dicuci dan dielusi mengikuti protokol kit. 5 HL eluat dianalisis dengan RT-PCR gen housekeeping GAPDH. Produk terdeteksi pada gel agarosa, dan kontrol negatif tidak terdeteksi. Setidaknya 2 x 103 molekul RNA / 200 sampel HL dijamin.
E. PENJELASAN ASAY
Deteksi kemurnian asam nukleat dengan rasio absorbansi OD260 / OD280.
Rasionya kurang dari I .5, menunjukkan bahwa terdapat lebih banyak pengotor protein F. LIMIT METODE TES
Jika sampel usap mengandung dahak, hal itu dapat mempengaruhi efisiensi ekstraksi G. SPESIFIKASI PERFORMANCE
Manik-manik magnet yang digunakan dalam kit ini secara khusus dapat mengidentifikasi dan secara efisien bergabung dengan molekul asam nukleat (DNA dan RNA), dan memisahkan molekul asam nukleat dari sampel di bawah aksi garam dan medan magnet eksternal.
H. MATERIAL PRODUK
Catatan:
a. Buffer pada kolom 1/7 dan 2/8 mengandung garam chaotropic yang bersifat iritan. Tidak kompatibel dengan reagen desinfektan yang mengandung pemutih. lihat untuk (PERHATIAN) b. Reagen dan peralatan yang akan dipasok oleh pengguna:
a. Etanol anhidrat, JANGAN gunakan alkohol yang diubah sifatnya yang mengandung zat lain seperti metanol atau metiletilketon.
b. Isopropanol (Isopropanol dapat diganti dengan etanol anhidrat)
c. Ujung pipet steril dengan penghalang aerosol untuk mencegah kontaminasi silang d. Pipet
I. PENYIMPANAN DAN KADALUARSA
Reagen ini stabil selama 18 bulan selama disimpan pada suhu kamar (8-25ºC). Lihat label untuk tanggal produksi dan tanggal kedaluwarsa.
J. INSTRUMEN YANG DAPAT DIGUNAKAN
Produk ini cocok untuk ekstraktor asam nukleat berdasarkan prinsip adsorpsi manik magnet:
Ekstraktor asam nukleat. Sistem (Berdasarkan metode manik magnet) K. PENANGANAN SAMPEL
Darah lengkap: Ambil 5mL darah vena dari pasien dengan pengambilan darah vakum (antikoagulan EDTA) dan campurkan secara terbalik setidaknya 8 kali segera.
Serum: Gunakan jarum suntik sekali pakai atau tabung pengumpul darah vakum tanpa antikoagulan untuk mengekstrak 5mL darah vena pasien, letakkan pada suhu kamar, dan ambil serum terpisah untuk diuji.
Plasma: Ambil 5mL darah vena dari pasien dengan tabung pengumpul darah vakum (antikoagulan:
heparin, EDTA, sitrat, ACD), campurkan segera minimal 8 kali, sentrifugasi pada 4000rpm selama 5 menit, dan ambil plasma yang terpisah untuk pemeriksaan.
Urine: Gunakan wadah bersih dengan penutup (wadah satu kali lebih baik), retensi urin bersih di tengah tahap miksi.
Susu: Gunakan wadah yang bersih dan steril untuk mengumpulkan susu bagian tengah, dan ambil 15 ml. susu setelah tercampur sepenuhnya.
Usap serviks: letakkan sikat pengambilan sampel serviks di mulut serviks, gosok sikat serviks dengan lembut untuk membuatnya berputar 4-5 lingkaran, dan perlahan-lahan keluarkan sikat serviks.
Usap hidung: Sejajar dengan langit-langit atas, masukkan kapas ke dalam rongga hidung, letakkan selama 2-3 detik untuk menyerap sekresi; kedua sisi rongga hidung harus diambil sampelnya.
Usap faring (Usap tenggorokan): Masuk jauh ke dalam mulut, seka dinding faring posterior dan amandel di kedua sisi dengan kekuatan sedang untuk menghindari menyentuh lidah.
Usap nasofaring: Perlahan rentangkan usap nasofaring ke dalam lubang hidung sampai bagian belakang nasofaring (Catatan: jangan gunakan tenaga), putar perlahan, dan diam selama sekitar 20-30 detik, lalu keluarkan dengan cepat.
Usap urogenital: Uretra dan serviks pria dan wanita harus dimasukkan ke dalam uretra atau leher rahim setinggi 2-3 cm dan dipaksa memutar 1-2 lingkaran untuk diperiksa, agar tidak terkontaminasi oleh sekret sekret vagina.
1. Kemurnian DNA: rasio absorbansi OD260 / OD280> l.5; Kemurnian RNA: rasio absorbansi OD260 / OD280> 1,8. Kit ekstraksi DNA bebas serum dalam kit genom manusia dan kit ekstraksi asam nukleat virus dalam kit ekstraksi asam nukleat patogen tidak sesuai untuk indeks ini.
2. Presisi: kesalahan pengulangan reagen ekstraksi genom manusia (tidak termasuk reagen bebas serum) adalah CV <15% (N = IO) dengan reagen amplifikasi PCR, dan kesalahan pengulangan reagen ekstraksi asam nukleat patogen adalah CV <5% (N = 10).
L. PERINGATAN DAN PENCEGAHAN
1. Harap baca instruksi kit dengan seksama sebelum percobaan, dan operasikan sesuai dengan instruksi
2. Penyangga pelat mengandung garam guanidin, yang dapat membentuk senyawa yang sangat reaktif jika dikombinasikan dengan pemutih. Jika cairan yang mengandung penyangga pelat tumpah, bersihkan dengan deterjen laboratorium yang sesuai dan air. Jika cairan yang tumpah mengandung agen yang berpotensi menyebabkan infeksi, bersihkan area yang terkena terlebih dahulu dengan deterjen laboratorium dan air, kemudian dengan I% (v / v) natrium hipoklorit. PERHATIAN: JANGAN menambahkan pemutih atau larutan asam secara langsung ke limbah preparasi sampel
3. Langkah-langkah pengoperasian harus dilakukan di dalam lemari biosafety atau fasilitas pelindung dasar lainnya
4. Sebelum membuka pelat atau kit uji tunggal, pastikan kemasannya tertutup rapat dan cairannya bebas dari kebocoran.
5. Asam nukleat yang dimurnikan cocok untuk PCR, Southern blotting, RAPD, AFLP dan pengeluaran biologis molekuler lainnya.
6. Sampel RNA harus dikumpulkan dalam wadah plastik steril sebanyak mungkin tanpa RNase;
kaca atau wadah plastik yang tidak sekali pakai harus dirawat terlebih dahulu untuk memastikan tidak ada kontaminasi RNase
7. Buang bahan berbahaya atau terkontaminasi biologis sesuai dengan praktik di institusi Anda
8. Buang semua materi dengan cara yang aman dan dapat diterima, sesuai dengan semua persyaratan hokum
9. Lihat Tabel 3 untuk kemungkinan masalah dan metode penanganan dalam proses ekstraksi dan deteksi asam nukleat
