Uji Aktivitas Antikejang Ekstrak Etanol Daun Titanus (Leea aequata L.) Terhadap Ileum Marmut (Cavia cobaya) Terisolasi Secara In Vitro

(1)

(2)

(3)

Lampiran 3. Bagan kerja penelitian

1. Pembuatan serbuk simplisia, karakterisasi simplisia dan skrining fitokimia

Dicuci dari pengotor sampai bersih

Ditiriskan lalu ditimbang berat basah

Disortasi kering

Ditimbang berat kering

Dihaluskan Daun Titanus

Simplisa

Serbuk Simplisia

Karakterisasi Simplisia Skrinning Fitokimia

- Penetapan kadar air

- Penetapan kadar sari larut air

- Penetapan kadar sari

larut etanol

- Penetapan kadar abu

total

- Penetapan kadar abu

tidak larut

- Pemeriksaan alkaloid

- Pemeriksaan glikosida

antrakuinon

- Pemeriksaan saponin

- Pemeriksaan flavonoid

(4)

Lampiran 3. (Lanjutan)

2. Pembuatan ekstrak etanol daun titanus (EEDT)

Dimasukkan dalam sebuah bejana

Ditambahkan sebanyak 75 bagian

etanol 96%

Ditutup

Dibiarkan selama 5 hari terlindung

dari cahaya sambil diaduk

Dipindahkan kedalam bejana tertutup

Dibiarkan ditempat sejuk dan terlindung

cahaya selama 2 hari

Dienap tuangkan atau disaring

Dipekatkan dengan rotary evaporator pada

suhu tidak lebih dari 40o C

Ekstrak etanol kental Serbuk simplisia

daun titanus

Maserat Ampas

Maserat

(5)

3.Bagan kerja pengukuran kontraksi ileum marmut terisolasi

Didislokasi tulang belakang Marmut

Pengujian kontraksi

seri konsentrasi

Asetilkolin terhadap

otot polos ileum

Pengujian efek

relaksasi ekstrak

etanol daun Titanus

pada kontraksi otot

polos ileum melalui

induksi Asetilkolin

Pengujian efek

relaksasi Atropin

Sulfat pada kontraksi

otot polos ileum

melalui induksi

Asetilkolin Tahapan pengujian

Ekulibrasi selama 45 menit

(6)

Lampiran 4. Gambar sediaan daun Titanus (Leea aequata L.) di pasaran

Serbuk daun titanus

(7)

Lampiran 5. Gambar bagian makroskopik tumbuhan dari daun titanus

(Leea aequata L.)

Tumbuhan titanus (Leea aequata L.)

(8)

Lampiran 6. Gambar simplisia dan serbuk simplisia daun titanus

(9)

Lampiran 7. Gambar hasil pemeriksaan mikroskopik serbuk simplisia daun titanus(perbesaran 10x40)

Keterangan :

1. Rambut penutup

2. Rambut kelenjar

3. Kristal kalsium oxalat bentuk jarum

(10)

Lampiran 8. Data pengujian kontraksi seri konsentrasi asetilkolin terhadap otot polos ileum

Konsetrasi

* = %relaksasi dihitung dari titik kontraksi maksimal yang dicapai

(11)

2. Hitungan EC80 asetilkolin

Log EC80=

[

80 – Y1

Y2-Y1

x

�

x

2

-x

1

�

]+ x

1

Keterangan:

X1 : Log. konsentrasi dengan respons tepat di bawah 80%

X2 : Log. konsentrasi dengan respons tepat di atas 80%

(12)

Lampiran 9. Data efek relaksasi ekstrak etanol daun titanus pada kontraksi ileum melalui induksi asetilkolin 1,889x10-4 M

Keterangan :

* = %relaksasi dihitung dari titik kontraksi maksimal yang dicapai oleh pemberian

asetilkolin 1,889x10-4 M Dosi

28.3018 23.9130 37.5000 26.4705 38.4615 20.0000 29.1

078 3.03

02

1

84.9056 65.2173 60.7142 35.2941 76.9230 34.2857 59.5

567 8.57

29

1,5

96.2264 78.2608 83.9285 85.2941 102.7581 85.7124 88.6

967 3.68

12

2

111.3207 86.9565 94.6428 105.8823 111.5384 95.7124 101.

0089 4.11

10

2,5

113.2075 104.3478 107.1428 111.7647 115.3846 107.1428 109.

8317 1.73

6862

3

115.0943 106.5217 110.7142 111.7647 119.2307 111.4285 112.

4590 1.75

73

3,5

115.0943 106.5217 117.8571 117.6470 119.2307 112.8571 114.

8680 1.91

00

4

115.0943 106.5217 117.8571 117.6470 119.2307 114.2857 115.

1061 1.87

(13)

Lampiran 10. Data efek relaksasi atropin sulfat pada kontraksi ileum melalui induksi asetilkolin 1,889x10-4 M.

Keterangan :

* = %relaksasi dihitung dari titik kontraksi maksimal yang dicapai

oleh pemberian asetilkolin 1,889x10-4 M Konsen

trasi Atropin

Sulfat (M)

% Relaksasi Ileum *

Rerata SEM

1 2 3 4 5 6

1x10-8 _24.5238 _17.6470 _27.7777 _18,0000 _44.1176 _35.8974 _27.993 _4.2484

3x10-8 41.5094 32.3529 44.4444 26,0000 50,0000 46.1538 40.076 3.7164

1x10-7 54.7169 47.0588 75,0000 38,0000 58.8235 53.8461 54.574 5.0564

3x10-7 62.2641 47.0588 83.3333 50,0000 61.7647 56.4102 60.138 5.2692

1x10-6 66.0377 102.9411 87.5000 52,0000 76.4705 76.9230 76.978 7.1383

3x10-6 84.9056 102.9411 113.8888 110,0000 88.2352 133.333 105.55 7.2894

1x10-5 116.981 107.3529 116.6666 116,0000 144.117 133.333 122.40 5.5402

(14)

Lampiran 11. Data AUC efek relaksasi ekstrak etanol daun Titanus

56.6037 90.566 103.7736 112.2641 114.1509 115.0943 115.0943 707.5469 2

44.5652 71.7391 82.6087 95.6522 105.4348 106.5217 106.5217 613.0434 3

49.1071 72.3214 89.2857 100.8928 108.9285 114.2857 117.8571 652.6783 4

30.8823 60.2941 95.5882 108.8235 111.7647 114.7059 117.647 639.7057 5

57.6923 89.8406 107.1483 113.4615 117.3077 119.2307 119.2307 723.9118 6

27.1429 59.9991 90.7124 101.4276 109.2857 112.1428 113.5714 614.2819 Rerata

44.33225 74.12672 94.85282 105.4203 111.1454 113.6635 114.987 658.528 SEM

5.254547 5.528915 3.783095 2.91511 1.716339 1.711067 1.888552 19.22928

Keterangan :

(15)

Lampiran 12. Data AUC efek relaksasi atropin pada kontraksi ileum melalui induksi asetilkolin 1,889 x 10-4M

Marmut

AUC*

Total

1 2 3 4 5 6 7

1

33.0166 48.11315 58.4905 64.1509 75.47165 100.9434 116.9811 497.1673

2

24.99995 39.70585 47.0588 74.99995 102.9411 105.1470 109.5586 504.4113

3

36.11105 59.7222 79.16665 85.41665 100.6944 115.2777 116.6666 593.0553

4

22.0000 32.0000 44.0000 51.0000 81.0000 113.0000 116.0000 459.0000

5

47.0588 54.41175 60.2941 69.1176 82.35285 116.1764 147.0588 576.4703

6

41.0256 49.99995 55.12815 66.6666 105.1282 133.3333 133.3333 584.6151

Rerata

27.19773 38.99216 48.16834 57.44752 73.74333 91.75742 101.0442 438.3507

SEM

3.87431 4.101204 5.082658 4.680845 5.328101 4.582553 5.748007 22.8700

Keterangan :

(16)

Lampiran 13.Hasil uji korelasi efek relaksasi ekstrak etanol daun Titanus pada kontraksi ileum melalui induksi asetilkolin 1,889 x 10-4 M

Correlations

Dosis Relaksasi

Dosis Pearson Correlation 1 .891**

Sig. (2-tailed) .003

N 8 8

Relaksasi Pearson Correlation .891** 1

Sig. (2-tailed) .003

N 8 8

(17)

Lampiran 14. Hasil uji-t independen nilai %relaksasi ekstrak etanol daun Titanus 2,5 mg/ml dengan nilai %relaksasi atropin sulfat 1 x 10-5M

terhadap kontraksi otot polos ileum oleh asetilkolin 1,889 x 10-4 M

Descriptives

%relaksasi Statistic Std. Error

Sampel Ach+EEDT Mean 105.420283 2.9151098

95% Confidence Interval

for Mean

Lower Bound 97.926755

Upper Bound 112.913812

5% Trimmed Mean 105.516220

Median 105.125550

Variance 50.987

Std. Deviation 7.1405315

Minimum 95.6522

Maximum 113.4615

Range 17.8093

Interquartile Range 12.9808

Skewness -.172 .845

Kurtosis -1.864 1.741

Ach+Atropi

n

Mean 113.979633 4.5825526

95% Confidence Interval

for Mean

Lower Bound 102.199807

Upper Bound 125.759460

5% Trimmed Mean 113.628665

Median 114.138850

Variance 125.999

Std. Deviation 11.2249156

Minimum 100.9434

Maximum 133.3333

Range 32.3899

Interquartile Range 16.3695

Skewness .924 .845

(18)

Lampiran 14. (lanjutan)

Tests of Normality

%relaksasi

Kolmogorov-Smirnova Shapiro-Wilk

Statistic Df Sig. Statistic Df Sig.

Sampel Ach+EEDT .212 6 .200* .918 6 .489

Ach+Atropin .256 6 .200* .924 6 .532

a. Lilliefors Significance Correction

*. This is a lower bound of the true significance.

Group Statistics

%relaksasi N Mean Std. Deviation Std. Error Mean

Sampel Ach+EEDT 6 105.420283 7.1405315 2.9151098

Ach+Atropin 6 113.979633 11.2249156 4.5825526

Independent Samples Test

s t-test for Equality of Means

F Sig. T df

Interval of the

(19)

Lampiran 15. Gambar alat organ bath

A

(20)

Lampiran 15. Lanjutan

C

D

Keterangan:

A = empat set organ bath volume 50,0 ml C = transduser isometrik

(21)

Lampiran 16. Gambar pola kontraksi dan relaksasi ileum marmut terisolasi

Gambar a. Pola kontraksi otot polos organ ileum terisolasi yang dikontraksi dengan pemberian seri konsentrasi asetilkolin (10-8 – 3 x 10-3 M).

(22)

Gambar c.Pola relaksasi setelah pemberian seri konsentrasi atropin sulfat pada otot polos ileum terisolasi yang dikontraksi dengan asetilkolin 1,889 x10-4 M.