Analisa Perubahan Genetik Planlet Kelapa Sawit Induksi Kalus
Induksi Embrio
LAMPIRAN
Lampiran 1.Diagram Alir Tahapan Penelitian
Mulai
Sterilisasi Eksplan
Selesai Verifikasi Perubahan
Genetik
Analisis Morfologi Analisis Molekuler
Isolasi DNA
Uji Kualitas dan Kuantitas
Amplifikasi DNA dengan Teknik SSR - Waktu Inisiasi Planlet
- Persantase Embrio yang Membentuk Planlet
- Tinggi Planlet - Jumlah Daun - Jumlah Akar - Berat Kering Daun
- Berat Kering Akar
Subkultur Kalus ke Media Induksi Embrio (Y3 + 0,1 mg/L 2,4 D + 0,5 mg/L kasein)
Eksplan Tunas Apikal
Sel Kalus
Embrio Somatik Eksplan Steril
Inokulasi Ekplan Steril ke Media Induksi Kalus
Perlakuan Induksi Planlet (Y3 + Kombinasi NAA (0; 0,5; 1; 1,15 mg/L) + Kinetin (0; 0,05; 0,1; 0,15 mg/L))
Lampiran 2. Komposisi Media Y3(Eeuwens, 1976)
Bahan Kimia Konsentrasi dalam Media
(mg/L) Makro Nutrien
KNO3 2020
KCl 1492
NH4Cl 535
NaH2PO4.2H2O 312
CaCl2.2H2O 294
MgSO4.7H2O 247
Mikro Nutrien
Fe-EDTA 32,5
MnSO4.4H2O 11,2
KI 8,3
ZnSO4.7H2O 7,2
H3BO3 3,1
CoCl2.5H2O 0,24
Na2MoO4.2H2O 0,24
CuSO4.5H2O 0,16
Lampiran 3. Protokol Penggunaan GoTaq® Green Master Mix (Promega, USA)
Bahan Campuran Jumlah
GoTaq® Green Master Mix, 2X 12,5 µL
Forward Primer, 10 µM 0,25-2,5µL
Reverse Primer, 10 µ M 0,25-2,5µL
Template DNA 1-5 µL
ddH2O ≈ 25 µL
PCR Cycle Temperatur Waktu
Initial Denaturation 95oC 2 min
40 cycle Denaturation 95oC 30 sec – 1 min 40 cycle Annealing 50-55oC 30 sec – 1 min
40 cycle Extention 72-74oC 1 min
Final Extension 72-74oC 5 min
Lampiran 4. Data Pengamatan Waktu Inisiasi Organ (Hari) Konsentrasi ZPT Ulangan
Rata-Rata SD
Uji Statistik Waktu Inisiasi Organ Source
Corrected Total 10690,500 17
Uji Duncan 5% Perlakuan Kinetin
Konsentrasi Kinetin N Subset
1 2
0 mg/L 3 86,6667
0,1 mg/L 6 27,8333
0,2 mg/L 9 24,2222
Sig. 0,337 1,000
Uji Duncan 5% Perlakuan Kombinasi NAA dan Kinetin
Kombinasi N Subset for alpha = 0.05
1 2 3 4
K2N0 3 12,6667
K1N0 3 23,0000
K2N2 3 24,0000
K1N2 3 32,6667 32,6667
K2N1 3 36,0000
K0N1 3 86,6667
Sig. 1,000 ,069 ,484 1,000
Lampiran 5. Data Pengamatan Jumlah Akar
Uji Statistik Jumlah Akar Source
Corrected Total 36,944 17
Uji Duncan 5% Perlakuan Kinetin
Konsentrasi Kinetin N Subset
1
0 mg/L 3 2,3333
0,1 mg/L 6 3,5000
0,2 mg/L 9 3,0000
Sig. 0,288
Uji Duncan 5% Perlakuan NAA
Konsentrasi NAA N Subset
1
0 mg/L 6 3,6667
0,05 mg/L 6 3,1667
0,1 mg/L 6 2,3333
Sig. 0,185
Uji Duncan 5% Perlakuan Kombinasi NAA dan Kinetin
Perlakuan Ulangan Total Rata-rata Persentase SD
1 2 3
Total Botol Perlakuan 55
Kombinasi N
Subset for alpha = 0.05 1
K0N1 3 2,3333
K2N1 3 23333
K2N2 3 2,6667
K1N0 3 3,3333
K1N2 3 3,6667
K2N0 3 4,0000
Sig. ,259
Lampiran 6. Data Pengamatan Jumlah Tunas
Perlakuan Ulangan Total Rata-rata Persentase SD
1 2 3
K0N0 0 0 0 0 0,00 0,0% 0,000
K0N1 0 0 0 0 0,00 0,0% 0,000
K0N2 0 0 0 0 0,00 0,0% 0,000
K1N0 1 1 1 3 1,00 27,2% 0,000
K1N1 0 0 0 0 0,00 0,0% 0,000
K1N2 1 1 1 3 1,00 27,2% 0,000
K2N0 0 0 0 0 0,00 0,0% 0,000
K2N1 2 1 2 5 1,67 45,4% 0,577
K2N2 0 0 0 0 0,00 0,0% 0,000
Total Botol Perlakuan 11
Lampiran 7.Kualitas dan kuantitas DNA kultur tunas apikal kelapa sawit pada beberapa tingkat konsentrasi NAA dan Kinetin
Tabel 4.4.Kualitas dan kuantitas DNA kalus tunas apikal kelapa sawit pada
beberapa tingkat konsentrasi NAA dan kinetin Konsentrasi ZPT Konsentrasi
(ng/µL)
Kemurnian (A260/280) NAA (mg/L) Kinetin (mg/L)
Tanaman Induk 466 1,720
Tanaman Hasil Kultur 285 1,326
Kalus 27,7 1,307
Embrio 820 1,640
0 0 422 1,617
0,05 0 741 1,876
0,1 0 763 1,655
0 0,1 18,5 1,814
0,05 0,1 437 1,668
0,1 0,1 591 1,813
0 0,2 379 1,541
0,05 0,2 11,3 1,728
0,1 0,2 392 1,675
Lampiran 8. Data biner dan matriks kemiripan genetik pita DNA hasil amplifikasi dengan primer P1A0, P4T12a dan P1T6
Data biner pita DNA hasil amplifikasi dengan primer P1A0, P4T12a dan P1T6. No.
Ciri
Perlakuan
TI TK K E D1 D2 D3 D4 D5 D6 D7 D8 D9
1 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0
2 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1
3 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0
4 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0
5 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 1 1
6 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0
7 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0
Matriks kemiripan genetik berdasarkan pita hasil amplifikasi dengan primer P1A0, P4T12a dan P1T6
TI TK K E D1 D2 D3 D4 D5 D6 D7 D8 D9
TI 1,00
TK 1,00 1,00
K 0,67 0,67 1,00
E 1,00 1,00 0,67 1,00
D1 1,00 1,00 0,67 1,00 1,00
D2 1,00 1,00 0,67 1,00 1,00 1,00
D3 1,00 1,00 0,67 1,00 1,00 1,00 1,00
D4 1,00 1,00 0,67 1,00 1,00 1,00 1,00 1,00
D5 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 1,00
D6 0,67 0,67 0,50 0,67 0,67 0,67 0,67 0,67 0,00 1,00
D7 0,67 0,67 0,50 0,67 0,67 0,67 0,67 0,67 0,00 0,50 1,00
D8 0,33 0,33 0,57 0,33 0,33 0,33 0,33 0,33 0,00 0,28 0,57 1,00
D9 0,50 0,50 0,40 0,50 0,50 0,50 0,50 0,50 0,00 0,40 0,80 0,50 1,00
