ransogan fukumaku hashu keisei ni okeru MUC1 muchin bunshi no yakuwari

Title Sub Title Author Publisher Publication year Jtitle Abstract Notes Genre URL. Powered by TCPDF (www.tcpdf.org). 卵巣癌腹膜播種形成におけるMUC1ムチン分子の役割 玉田, 裕(Tamada, Yutaka) 野澤, 志朗 慶應医学会 2003 慶應医学 (Journal of the Keio Medical Society). Vol.80, No.2 (2003. 6) ,p.T133- T147 学位論文 Journal Article http://koara.lib.keio.ac.jp/xoonips/modules/xoonips/detail.php?koara_id=AN00069296-20030601 -0133.

慶應 医 学 ・82(2):T133∼T147,2003. 学位論文. 卵 巣 癌 腹 膜 播 種 形 成 にお け るMUC1ム. チ ン分 子 の役 割. 慶應義塾大学医学部産婦人科学教室 (指導:野 澤志朗教授) 玉. 田. 裕. (平成15年1月8日. Key words:ovarian. 受 付). neoplasms, mucin core peptide(MUC),. 上 皮 性 卵 巣 癌 は骨 盤 内 の み な らず 上 腹 部 を含 む広 範 な. carbohydrate, peritonealdissemination,MUCl. さ れ て お り,0一 結 合 型 糖 鎖 付 着 部 位 で あ る セ リ ン,ス. 領 域 に腹 膜 播 種 に よ る癌 性 腹 膜 炎 を形 成 す る頻 度 が高 い. レオ ニ ンを 多 数 含 む タ ンデ ム ・リ ピー ト(ア ミノ酸 の 繰. た め致 死 性 の 高 い癌 で あ る1).腫 瘍 細 胞 は腹 腔 や 大 網,. り返 し配 列)を. 有 す こ とが 構 造 的特 徴 で あ る7).な か で. 腸 管 漿 膜 を覆 う中 皮 細 胞 に接 着 し腫 瘍 結 節 を形 成 す る こ. も最 初 に ク ロ ー ニ ン グ さ れ たMUC1分. と に よ って,最 終 的 に は腸 閉 塞 な ど を ひ き お こ し患 者 を. の 全長 配 列 が 明 らか に され て お り,構 造 的,機 能 的 解 析. 死 に至 ら しめ る.こ れ らの腹 膜 播 種 巣 を手 術 に よ って完. が 進 ん で い る.MUC1分. 全 に除 去 す る こ と は不 可 能 で あ り,さ. ンパ ク質 で あ り,20個. らに術 後 補 助 化 学. 子 につ い て はそ. 子 は膜 貫 通 部 位 を有 す る糖 タ の ア ミノ酸 か ら構 成 され る タ ン. 療 法 あ る い は寛 解 導 入 化 学 療 法 を行 っ た と して も治 療 抵. デ ム ・ リ ピー トを 有 して い る8^-10).その 反 復 数 に は30. 抗 性 の 再 発 を きた す た め に進 行 卵 巣 癌 の 治 癒 は困 難 で あ. 回 か ら90回. る',z).ま た,卵. acne. 巣 癌 は そ の解 剖 学 的位 置 関 係 に よ り早. の 範 囲 で遺 伝 的 多 型性 が 認 め られ て お り"),. vulgarisで は そ の 多 型 性 と病 態 と の関 連 性 が指 摘. 期 診 断 が 難 し く,明 らか な初 期 症 状 もな い た め他 の婦 人. され て い る'2).本 研 究 で は ま ず,3っ. 科 癌 よ り予 後 が 悪 い こ と に加 え て,卵 巣 癌 に は様 々 な組. 腺 癌,粘. 織 型 が 存 在 し,組 織 型 ご と に異 な る臨 床 的 特 性 を 有 す る. 細 胞 株 を用 い て,ム チ ン遺 伝 子 の発 現 な らび に糖 鎖 抗 原. と考 え られ るた め 画 一 的 な 治 療 法 で は予 後 の 改 善 は望 め. の発 現 を解 析 し,組 織 型 ご とに異 な る発 現 パ ター ンが 見. な い 。 漿 液 性 腺 癌 で は 国 際 進 行 期 分 類(the. い だせ る か ど うか を検 討 した.そ の結 果,本 邦 に お い て. national Federation FIGO,1988)に. of Gynecology. Inter-. and Obstetrics;. 液 性 腺 癌,漿. 液 性 腺 癌)に. の組 織 型(明 細 胞 由 来 す る17種. 類の. 増 加 傾 向 が うか が わ れ る卵 巣 明細 胞 腺 癌 に 由来 す る細 胞. お け るIII期 症 例 の 割 合 が 高 く,一 方. 株 で はMUC1分. 子 の み の 発 現 が 認 め られ,他. の組織型. 粘 液 性 腺 癌 や 明 細 胞 腺 癌 で は1期 症 例 の 割 合 が 高 い3,4).. 由来 の 培 養 細 胞 で はMUC1以. 外 の ムチ ン分 子 の 発 現 が. しか しな が ら,漿 液性 腺 癌 で は シス プ ラチ ンを 中心 と し. 種 々 の程 度 で見 られ た こ とか ら,明 細 胞 腺 癌 細 胞 に お け. た化 学 療 法 に感 受 性 が 高 い もの の,明 細 胞 腺 癌 で は抗癌. るMUC1分. 剤 に対 す る感 受 性 が 著 し く低 い た あ 全 体 と して は1期 症. 考 え られ た3).こ れ ま でMUC1分. 例 が 多 い に もか か わ らず 明 細 胞腺 癌 の 予 後 は 不 良 で あ. との 関 わ りに っ い て 多 くの 報 告 が あ る もの の,MUC1. る5).こ の よ う に各 々 の組 織 型 ご と の病 態 を 解 析 す る こ. 分 子 が 癌 の病 態 に果 たす 役 割 や そ の生 物 学 的 意 義 に関 し. とが 卵 巣癌 克服 にっ な が る と考 え られ る6).. て の知 見 は ほ とん ど報 告 さ れ て い な い.そ. 一 方,癌. 関 連 抗 原 の1つ. リル ル イスX(sLeX)や. で あ る ム チ ン分 子 は,シ. シア リル ル イスa(sLea)と. ア いっ. 子 の 発 現 は本 組 織 型 に 特 徴 的 なパ ター ンと. は卵 巣 癌 の病 態,特 たすMUC1分. 子 の 発 現 と癌 の 予 後. こで本 研 究 で. に臨 床 上 重 要 視 され る腹 膜 播 種 に果. 子 発 現 の 意 義 に関 して も検 討 を 行 った.. た 臨床 上 腫 瘍 マ ー カ ー と して 用 い られ て い る さ まざ まな 糖鎖 抗 原 が付 着 す る糖 鎖 供 与 体 と して の能 力 を も って い る.現 在 ま で10数 本 論 文 は,Tamada human. ovarian. 種 類 の ム チ ン遺 伝 子 が ク ロー ニ ン グ Y, carcinoma. Iida. S, Aoki cell. lines.. D,. Nozawa. Oncol. Res. S, and. IrimuraT:Carbohydrate. 11:233-241,1999の. 一T133一. epitopes 一 部 を 含 む.. and. mucins. expressed. by. 17.

慶 鷹 医学. 80巻2号(平. 成15年6月). PCRに. 実験材料と方法. Co.,. は0.1. U/ｵl. Emeryville,. 8.3),50mM 1.卵. 巣 癌 由来 細 胞 株. 0.2mM. 実 験 材 料 と し た17種 覧 を 第1表 modified Ham's calf. に 示 す13∼26).培 Eagle's. 地 はD/F(Dulbecco's. minimum. essential. F-12を1=1(v/v)混 serum,. 20%FCSを. Co.,. し た.た. Purchase,. NY,. イ ク ル 反 応 さ せ た(RT-PCR).各. USA)を. 加. 用 い て 設 計. 行 っ た.た. 発 現 解 析. Inc., Houston, 混 入 を 避iけ Mannheim,. TX,. MgC12,75. 5 unit,50. mM. KCI,20. (Pharmacie. Biotech,. U/ｵlRNase. inhibitor(宝. 12-18primer(Pharmacia. れ たcDNAの5%を. USA),0.5. North. Peapack, 酒 造,滋. 間,逆. 持 田 製 薬 株 式 会 社(東. 発 酵 工 業 株 式 会 社(東. USA),0.05. 用 い て,最. 転 写 反 応 を 行 い,得 応 に供. tion, Rockville,. 終. 島)よ. 京)よ. 京)よ り,抗. 阪)よ. MD,. USA)よ. type. ら. さ れ た ハ イ ブ リ ドー マ の 培 養 上 清 を 使 用 し た.HMFG一. 使 用 した ヒ ト卵 巣 癌 由 来細 胞株. 樹立者. 文. 献. OMC-3 RTSG. HUOA Y. et a1:0ncol. Res. 11:233-241,1999のTable. 一T134一. 2.を 一 部 改 変,許. ) 6 2 (. HTOA. ) 5 2 (. MH. ) 5 1 (. KFr. ) 4 2 (. KF. ) 3) 4 2( 2 (. 0V1063. ) ) 12 2( 2 (. HMKOA. ) 9) 0 1( 2 (. MCAS. 慶鷹 義塾大学産婦人科 慶鷹 義塾 大学産婦人科 防衛 医科 大学校産婦人科 石渡 産婦人科病院 ATCCよ り購入 慶鷹義塾 大学 産婦人科 慶 _.,塾 大学 産婦人科 JCRBよ り購入 石渡産婦人科 病院 大 阪医科 大学 産婦人科 ATCCよ り購入 慶鷹義塾大学産婦人科 防衛医科大学校産婦人科 防衛医科大学校産婦人科 防衛医科大学校産婦人科 石渡産婦人科病 院 石渡産婦人科病 院. ) 8 1 (. RMUG-L. collec-. は東 京 大 学 大 学 院薬 学 系 研究 科 生 体 異 物 学 教 室 にて樹 立. ) 8 1 (. RMUG-S. culture. り ハ イ ブ リ ドー マ 細 胞 を. ) ) 67 1( 1 (. ES-2. 協和. り 提 供 を 受 け た.CA19-. ) ) 45 1( 1 (. HUOCA-II. TKH-234). り,KM9336)は. ) 3 1 (. KK. り,. ル イ スb(Leb). 購 入 し そ の 培 養 上 清 を 用 い た.91.9H39)とMY。1E1240). し た.. 明細胞腺癌 明細胞腺癌 明細胞腺癌 明細胞腺癌 明細胞腺癌 粘液性腺癌 粘液性腺癌 粘液性腺癌 粘液性腺癌 粘 液性腺癌 粘 液性腺癌 漿液性腺癌 漿液性腺癌 漿液性腺癌 漿液性腺癌 漿液性腺癌 漿液性腺癌. RMG-II. 使 用 し. に 示 す.MA61と. 937)とFH638)はATCC(American pdT. 由来す る組織型. RMG-I. (Tamada. BRL)を. 用 した抗 体 な らび に レ クチ ン. MA5433)は. dNTPs. 第1表. 細胞株. 物 は. 子 量 マ ー カ ー に. pair(bp)ladder(GIBCO. は 大 塚 製 薬 株 式 会 社(徳. 賀),1mg/ml. 鋳 型 と し てPCR反. 対. に 設 定 し た.PCR産. て 電 気 泳 動 し,分. 抗 体35)は 旧 ミ ド リ十 字 社(大. mM NJ,. MUC5ACとMUC5Bに. 抗 体 お よ び レ ク チ ン の 一 覧 を 第3表. dithiothreitol(GIBCO. MD,. 変 性 を94℃,45秒,. 細 胞 表 面 糖 鎖 の 解 析 に 使 用 し た モ ノ ク ロ ー ナ ル 濃. 8.3),3mM. Biotech)を. 容 量20ｵ1で37。C,90分. 3.使. 1μgをM-. Tris-HCI(pH mM. Gaithersburg,. RNA. Mac. た.. DNAの. U/mlの. し た.Total. に 示 す9,10,27^-32).. Lab.. RNase-free(Boehringer. Germany)を100. 処 理. mM. kit(Biotecx. 用 い て 抽 出 し た. I,. Mannheim,. RTase. BRL,. USA)を. る た めDNase. 度 で37℃,30分 MLV. RNA. gelに. は100base. 各 培 養 細 胞 が サ ブ コ ン フ ル エ ン トの 状 態 に な っ た と こ RNAをUltraspec. ム チ ン遺 伝. 長 反 応 を72℃,2分. だ し,. し て は ア ニ ー リ ン グ を64℃ 1.5%agarose. ろ で,total. し た.熱. ア ニ ー リ ン グ を60℃,45秒,伸 でPCRを. 使 用. 対 す る プ ラ イ マ ー はGENETYX. softwareを. だ し,HTOAとHUOAは. 種 ム チ ン 分 子mRNAの. MgClz,0.001%gelatin,. 種 プ ラ イ マ ー0.25∼0.5ｵMを. な お,MUC3に. 用 い た.. 2.各. mM. Tris-HCI(pH. 子 に 対 す る プ ラ イ マ ー の 一 覧 を 第2表. mediumと. 合)に10%FCS(fetal. Intergen. え た もの を 使 用. dNTPs,各. polymerase(Perkin-Elmer. USA),10mM. KCI,1.5. し,35サ. 類 の ヒ ト卵 巣 癌 由 来 細 胞 株 の 一. Taq CA,. 可 を 得 て 転 載).

玉田. 第2表. 卵 巣 癌 腹 膜 播 種 とMUC1ム. ム チ ン遺 伝 子 のRT-PCR解. PCR産. 上 段 がsense,下. MUC1 MUC2. MUC3 MUC5AC. MUC5B MUC6. ﾟ一actin. 段 がantisense. CGT. CGT. GGA. CAT. TGA. TGG. GGT. ACC. TCC. TCT. CAC. CTC. Maackia. CAG. CAC. CGA. TTG. CTG. AGT. T. GTG. CGT. AGT. AGG. TGT. CGT. T. CTC. TTC. CTG. GCG. TCT. CTA. CC. TCT. GGC. ATC. TGG. TCT. GGA. GC. TAC. AAC. AAC. ATC. ATC. ACG. AGT. GCG. CTA. GGG. TGC. TAG. GAG. CTG. TCA. CAG. CAT. CGG. CCC. CCA. TAA. CCA. CG. AGG. CTG. CAT. TCC. ACG. ACC. TG. TCA. CTC. CCT. CAG. ACC. ACT. CCT. GGG. TGC. TGG. TGT. CTC. TAC. TGG. CAC. TGT. GTT. GGC. GTA. CAG. GT. TCA. TCA. CCA. TTG. GCA. ATG. AG. (27). 317. (28). 275. (29). 238. (30). 360. (31). 154. (32). 可 を 得 て 転 載). フロ ー サ イ トメ ー ター解 析 に使 用 した 抗 体 お よび レ クチ ン ア イ ソ タイ プ. Tn sialylTn sialylTn sialylLewisa sulfo Lewisa Lewisb sialylLewisX(dimeric) sialyl LewisX underglycosylated MUCl sialylatedMUCl CA125 CD44. IgM(x) IgM(x) IgGl IgGl IgGl IgM IgM IgM IgGl IgG2a IgGl IgGl Igel IgM(x) IgM. ﾟ1-integrin Heparan sulfate(10E4 epitope) E-selectin sialicacida 2-3Gal sialicacida 2-6Ga1/Ga1NAc. Amurensis. leukoagglutinin;SSA,. Sambucus Y. et. al:Oncol. Sieboldiana Res. agglutinin;Gal. , Galactose;. 11:233-241,1999のTable. 4 .を 一 部. 可 を 得 て 転 載). 式 会 社 テ イ エ フ ビ ー(東. 京)よ. 京)よ. り,M11は. り 購 入 し た.抗. 体(clone:OS/37),抗. ヒ トﾟ1-integrin抗. (clone:SG/19),抗heparan. leukoagglutinin),. 3.を 一 部 改 変,許. 441. 特異性. コ ス モ ・ バ イ オ 株 式 会 社(東. F58-10E4),ビ. C. 233-241,1999のTable. N-acetylgalactosamine(Tamada. 改 変,許. 献. (9)(10). ... GCA. MA61 MA54 TKH-2 CA19-9 91.9H anti-Lewis b FH6 KM93 HMFG-2 MY.lEl2 Mll CD44/human Integrinﾟ1 chain/human anti-Heparan sulfate anti E-selectin MAL SSA. CD44抗. C. レク チ ン. GalNAc,. 文. CAA. CTG. 第3表. 2は. TAC CTC. CAC. OncolResll. 物. (bp). CAA. (TamadaYetal. MAL,. 析 に使 用 した プ ライ マ ー対. 塩 基 配 列(5'→3'). ムチ ン遺 伝 子. 抗体. チン. sulfate抗. チ. ヒ ト 体. Sieboldiana. agglutinin)は. よ り 購 入 した.抗 (日 本 た ば こ,東 抗 体 に 対 す る2次. 体(clone:. オ チ ン 化MAL(Maackia ビ オ. 株. Amurensis. 抗 体(CAPPEL,. 生 化 学 工 業 株 式 会 社(東. ヒ トE-selectin抗. 京)よ り 供 与 を 受 け た.モ 抗 体 と し てFITC標 West. Chester,. PA,. 京). 体41)は 玉 谷 卓 也 博 士 ノ ク ロー ナ ル. 識 ヤギ抗 マウス USA)を. 使 用 し,. ビ オ チ ン 化 レ ク チ ン を 蛍 光 標 識 す る た め にFITC一. ン 化SSA(Sambucus. 一T135一.

慶鷹医学. Streptavidin(ZYMED Francisco,. 4.ヒ. Laboratories. CA,. USA)を. Inc.,. 80巻2号(平. South. San. 試 薬(Roche. 使 用 し た.. ト卵 巣 癌 由 来 細 胞 株 に 発 現 す る 細 胞 表 面 分 子 の解 析. ヒ ト卵 巣 癌 由 来 細 胞 株 を0.05%ト EDTAに. albuminと0.1%sodium. phate-buffered. azideを. saline(PBS)(以 呼 ぶ)を. cells/100ｵ1と. な る よ う に 調 製 し た 。 細 胞 は1次. 標 識2次. て 洗 浄 を2回. 抗 体 を30分. 浄 の 後,30mM. MO,. 細 胞 を 調 製 し,生 CO,東. 京)に. USA)を. 行 い,. FITC. iodide(Sigma. Chemical 500ｵ1に. をCyto-Ace. て 解 析 し た.な. Hercules,. 照 波 長655. nm)の. お,陽. し た.腫. 松)に. 皮 下 移 植 し,造. 満. 上 を++. 明細胞腺癌株. チ ンの 発 現 が 低 か っ た た め,本. 細 胞 を 用 い てMUC1の. 遺 伝 子 導 入 株 を 作 製 し た.タ. MUC1の. 士42)よ り,タ. 膜 播 種 モ デ ル(in. vitro). 細 胞 の 調 製 に 用 い た.文. り供 与 を 受 け,制. リプ シ ン/0.02%EDTAを. ク タ ーpCEP4(Invitrogen. ampicillin. Co.),1ｵg/ml. 用 い て プ ラ ス ミ ドベ. mical. Co.)を. CA,. USA). cDNA発. CA,. ES-2/T-22,. さ ら に,sialylated. D/F培. Fullerton, い,各. CA,. MUC1を. 認 識 す るMY.1E12抗. USA)を. Coulter. 用 い てcell. 々 の 細 胞 集 団 か らMY.1E12抗. し た.ベ. 体 Inc.,. sortingを3回. 行. 体陽性細胞を選別. ク タ ー の み の 遺 伝 子 導 入 株 をES-2/mock,タ. ン デ ム ・ リ ピ ー ト22回 れES-2/T-22,. と42回. ES-2/T-42と. 名 付 け た.. Shaker. べ て のwel1をFCS無. Plate. Seal. MS-30010(住. て 密 閉 し,プ 6,細. 胞 増 殖 ア ッ セ イ(in. 各5×103個. vitro). のES-2/mock, 養 プ レ ー ト(住. に 培 養 し,24時. 間 後,48時. 間 後,72時. 蛍 光 顕 微 鏡200倍. ES-2/T-. 友 べ 一 ク ラ イ ト,東. 京). 間 後 にWST-1. wellに. 条 件 で 添 加 し た. 間 振 盈 し な が ら培 養. 津 製 作 所,東 添 加 のD/F培. 京).培. 養. 地 で 満 た し,. 友 ベ ー ク ラ イ ト,東. 接 着 細 胞 を 除 去 した.接. 京)に. 着 した 癌 細 胞 は. 率 の 視 野 に て カ ウ ン ト し た.な. つ き 視 野 は 無 作 為 に10個. 胞 数 の 平 均 値 を1デ. 一T136一. 添 加の. レ ー トを 逆 さ ま に し た 状 態 で250rpm,5. 分 間 遠 心 し,非 ES-2/T-22,. 42を96-well培. 度FCS無. 識. 識 癌 細 胞 を5×105個/1. 地/wellの. MS-1,島. 後,す. 地. 仁 化 学,熊. 養 プ レ ー トに 単 層 培 養. プ レ ー トは37℃,80rpmで30分 し た(Multi. を 導 入 した 株 を そ れ ぞ. の 洗 浄 を へ て,再. 添 加 のD/F培. 各細 胞の. 間 反 応 さ せ た.標. 地 に 混 じ た.24-well培. FCS無. Che-. 添 加 のD/F培. solution(同. さ れ た 腹 膜 中 皮 細 胞 に 対 し,標 ml. Che-. B(Sigma. FCS無. DMSO. 加 し て,37℃,30分. さ れ た 癌 細 胞 は1回. ELITE(Beckman. Chemical. ES-2/T-42の. 蛍 光 標 識 に は5×106個/1ml. 本)を3ｵ1添. 生物質. 培 地 に加 え た.. 濃 度 に て 遺 伝 子 導 入 株 を 選 別 し安 定 発 現 株 を 樹 立 し た.. を 使 い,EPICS. まで に と ど. sulfate(Sigma. amphotericin. に 対 し てBCECF-AM. USA)400ｵg/ml. お 継 代 は5回. sodium(Sigma. streptomycin. ES-2/mock,. 現ベ. 胞 に 再 度D/F+20%. 網 組 織 か ら細 胞 を 調 製 し た 直 後 の み,抗. と し て50ｵg/ml. B(Calbiochem-. Diego,. め た.大. mical. ク タ ー を 導 入 し た.Hygromycin Co., San. 地 を 加 え ト リプ シ ンを不 活 化. 地 を 添 加 し て 細 胞 培 養 ボ トル に 移 し,37℃,5%. Co.),100ｵg/ml. Co., Carlsbad,. て. 径 の メ ッシ ュ を通 し. の 遠 心 後,細. 士43)よ. に 組 み 換 え た の ち 電 気 穿 孔 法 に てMUCI. Novabiochem. ン. 含 むPBSに. 間 反 応 さ せ,80ｵm孔. を含 む. A. Hollingsworth博. 限 酵 素BamHIを. FCS培. 膜 中皮. 献 に し た が い44,45),ヒ ト大 網 組. CO、 の 条 件 下 に て 培 養 し た.な. 全 長cDNAは0.. ン デ ム ・ リ ピ ー ト42回. 全 長cDNAはM.. freeに. ウス を 用 いた 実 験 は慶 磨 義 塾 大学 医学 部. し,1000rpm,5分. を 含 むMUC1の. 径)2に て 算 出 し pathogen. 動 物 実 験 ガ イ ドラ イ ン を 遵 守 して 行 っ た.. 織 を0.25%ト. 伝子導入. ヒ ト卵 巣 明 細 胞 腺 癌 由 来 細 胞 株ES-2は. 径)×(短. ウ ス は す べ てspecific. 腫 瘍 能 を検 討. 患 者 の 同 意 を 得 て 術 中 大 網 の 一 部 を 採 取 し,腹. 性 細 胞 が5%未. の な か で 最 もMUC1ム. J.Finn博. て 測 定 波 長. ES-2/T-42(各1×106. て か らD/F+20%FCS培. デ ム ・ リ ピ ー ト22回. USA)に. ー ドマ ウ ス(KSN/nu,5週. 瘍 容 積 は(1/2)×(長 お,マ. 37℃,20分. cDNA遺. 550(Bio-. 吸 光 度 を 測 定 した.. ES-2/T-22,. 本SLC,浜. た.な. 8.腹. と判 定 し た.. 5.MUCI. Germany)に Model. vivo). 個/100ｵlPBS)をKSNヌ. 150(JAS. ±,30∼59%を+,60%以. 胞 増 殖 ア ッ セ イ(in. て 飼 育 した.マ. の洗. 含 むFACS-PBS. 細 胞5,000個. を 一,5∼29%を. 間反. 間 氷 上 に て 反 応 さ せ た.2回. propidium. Co., St. Louis,. 450nm(参. 齢)(日. 抗 体1. で 氷 上 に て30分. 応 さ せ た 後,FACS-PBSに. CA,. Laboratories,. ES-2/mock,. 養 細 胞 数 が5-10×105. 含 む100ｵlFACS-PBS中. Rad. 7.細. の 溶 液 を. FACS-PBSと. ｵgを. Mannheim, Reader. 含 むphos-. 降,こ. 使 い,培. Diagnostics,. て 反 応 さ せ た 後,Microplate. リ プ シ ン と0.02%. て プ レ ー ト よ り 剥 離 し た 後,0.1%bovine. serum. 成15年6月). 所 選 び,各. ー タ と し た.有. お,1. 々 の接 着 細. 意 差 検 定 に は.

玉 田:卵 巣 癌 腹 膜 播 種 とMUC1ム. Mann-Whitney. U-testを. 使 用 し,. p〈0.05を. も っ て 有. 10.腹. 意 と 判 定 し た.. チン. 膜 中 皮 細 胞 表 面 に 発 現 す る分 子 の 解 析. フ ロ ー サ イ トメ ー タ ー 解 析 に あ た り,上 で 細 胞 を 調 整 し た.細. 9.腹. 膜 播 種 モ デ ル(in. ES-2/mock, 個/1ml. レ ク チ ン1ｵgを. ES-2/T-22,. Hank's. 匹,11匹. のKSNヌ. 移 植3週. 間 後,マ. Salt. 京)に. 調 製 後,そ. よ び 子 宮,卵. 間 反 応 さ せ た 後,FACS-PBSに. て 反 応 さ せ た.2回. て 洗 浄 を2回. 識2次. 管 を 除 く腸 間 膜,. 巣 を 腫 瘍 と と もに 摘 出 し,. 含 むFACS-PBS. 抗 体 を,ビ. 胞5,000個. をEPICS. 500ｵ1に. 行 い,. オ チ ン化 レ 間氷上 に propidium. 細 胞 を 調 製 し,生. XL(Beckman. Coulter. Inc.)を. 用 い て 解 析 し た.. 結. 果. 細 胞 株 の ヌ ー ドマ ウ ス 腹 腔 内 移. 生 存 率 を 検 討 し た,. 1.ヒ. ト卵 巣 癌 由 来 細 胞 株 に お け る ム チ ン遺 伝 子 の 発 現. (RT-PCR). M12345M67891011M121314151617P. コ畔 ・樽. 1. 鱒 鱒 蔭・ 獅:. 轍難欝. MUC. 細. 意 差 検 定 はMann-. 用 い た.. 同 様 の 実 験 系 に て,各. で氷上にて. の 洗 浄 の 後,30mM. iodideを. 方 法. 抗 体 また は ビ オ チ ン化. ク チ ン に 対 し て はFITC-Streptavidinを30分. 細 胞株 の腹膜播 種. 価 法 と して は,腸. 胞 は1次. 含 む100ｵlFACS・PBS中. 抗 体 に 対 し て はFITC標. れ ぞ れ14匹,11. ウ ス を 解 剖 し,各. U-testを. 植 に よ る3週. 30分. Solutior1(HBSS;日. 摘 出 組 織 全 重 量 を 測 定 し た.有 Whitney. 各2×106. ー ドマ ウ ス の 腹 腔 内 に 移 植 し た.. 形 成 能 を 検 討 した.評 網,お. ES-2/T-42を. Balanced. 水 製 薬 株 式 会 社,東. 腹 膜,大. vivo). 記4.の. MUC2. 灘. に. 磯 撒 ◎ 箒 鋤 轡1嚇. q闘膨. 驚. 脚. 齢. 欄. 脚. ...... 撒. 蜘. 騨 く 内景. 劇灘. 隔監 燕脳. 繋 ー 農 囁. '. RT(一). 脚畢 攣 協 蹄. ﾟ一actin. 御轍. 17種. 闘. 鹸. 鴨 纈糊膨 縣. 綿騨篇 淵. 曙脚)綱 欝. 繍牒 聯"鞘. 齢. 類 の ヒ ト卵 巣 癌 細 胞 株 に お け る 各 種 ム チ ン遺 伝 子 のRT-PCRに. に は,M(100. bp. DNA. HUOCA-II;5,. 9,HMKOA;io,. ladder)に ES-2),粘. 続 い て 明 細 胞 腺 癌 細 胞 株5株(1, 液 性 腺 癌 細 胞 株6株(6,. OMC-3;11,0V1063),漿. KFr;15,. MH;16,. 軸 にMUC1(288 (238bp), (Tamada. 纈脚 膨. 鴨. MUC6. HTOA:17, bp),. MUC6(360 Y. et a1:0ncol. 示 す.右. RMUG-S;7,. 端 のPは. MUC3(317bp),. bp),. 転 写 酵 素 反 応 な し),. Res. 11:233-241,1999のFigure. 一T137一. 轍輔廉轍. 欄醐齢 纈鵬鱒 撒. よ る 発 現 解 析 .横. RMUG-L;8,. MCAS;. RTSG;13,. KF;14, あ る.縦. MUC5AC(275bp),. 1.を. 軸. RMG-II;3,. 陽 性 対 照(cDNA)で. MUC2(441bp), RT(一)(逆. 嚇. RMG-1;2,. 液 性 腺 癌 細 胞 株6株(12, HUOA)を. 鞘. MUCSB 騨. 脚. 響鱒. MUC5AC翼. KK;4,. ㎜. 0. MUC3. 第1図. 鱒 一 盤 鰍締. 哨. 0. MUC5B. R-actin(154. bp)を. 一 部 改 変,許. 可 を 得 て 転 載). 示 す..

慶鷹医学. 今 回 使 用 し た17種 移 植 した 際,由. 類 の 細 胞 株 は ヌ ー ドマ ウ ス に 皮 下. 来 す る 組 織 型 に 合 致 す る組 織 像 を 呈 し て. い た た め(デ. ー タ未 提 示) ,各. 細 胞 株 は 由来 す る組 織 型. を あ る程 度 反 映 す る も の と 考 え ら れ た .第1図 ム チ ン遺 伝 子 のRT-PCRの bp)は. に 各種. 結 果 を 示 し た . MUC1(288. す べ て の 細 胞 株 に て そ のmRNAの. れ た.明. 80巻2号(平. 第4図. に 示 し た.明. 細 胞 腺 癌 で は発 現 量 の程 度 は各 細. 胞 株 に よ り異 な る も の の,FH6あ て 認 識 さ れ るsLexと, lated MUC1の. 外 の ム チ ン遺 伝. る い はKM93に. MY.1E12で. よ っ. 認 識 さ れ るsialy-. 発 現 が 共 通 し た 特 徴 で あ っ た(第2図). 粘 液 性 腺 癌 で はsialylated. 発現が確認 さ. 細 胞 腺 癌 細 胞 株 で はMUC1以. 成15年6月). MUC1,. sLexの. 多 種 多 様 な 発 現 様 式 を 呈 し た.MA61で 抗 原 はOMC-3,. HMKOA,. .. み な ら ず,. 認 識 さ れ るTn. OV1063に,. TKH-2で. 認. 子 の 発 現 は 認 め られ ず 他 の 組 織 型 由 来 細 胞 株 と比 較 し特. 識 さ れ るSialyl. 徴 的 で あ っ た.MUC2(441. ル フ ォ ル イ スaはOMC-3とMCASに. その発現 が認. め ら れ た.概. 現 に多 様 性 を. OMC-3,. KF,. KFr,. bp)の. MHに. 発 現 はMCAS,. て 確 認 さ れ た が,漿. 癌 細 胞 株 で はMUC1とMUC2以. 液性腺. 外 の ム チ ン遺 伝 子 の. 発 現 は 確 認 さ れ な か っ た.一. 方,粘. 液性 腺癌 細 胞 株 で は. Tn抗. 原 はOMC-3に,. Leb,. し て ム チ ン分 子 のmRNA発. 認 め る細 胞 株 ほ ど 多 様 な 糖 鎖 抗 原 の 発 現 が 認 め られ る 傾 向 が み られ た(第3図).漿. 液性腺癌 では今回検索対象. 多 種 多 様 な ム チ ン遺 伝 子 の 発 現 が み られ,MUC3(317. と し た 糖 鎖 抗 原 の 発 現 は 認 め ら れ ず,さ. bp)で. で は 発 現 が み ら れ たMUC1ム. はMCAS,. (238bp)で bp)で. HMKOA,. OMC-3に,. はMCASとOMC-3に,. はMCASに,. MUC5AC(275. MUC6(360. そ れ ぞ れ の ム チ ン分 子mRNAの お,陽. bp)で. bp)は. ら にRT-PCR. チ ンに 関 して も フ ロ ー サ. イ トメ ー タ ー 解 析 で は そ の 発 現 を 確 認 す る こ と が で き な. はOMC-3に. か っ た(第4図).な. 発 現 が 確 認 さ れ た .な. 性 対 照 で あ るﾟ一actin(154. 株 に 発 現 が 確 認 さ れ,ま. MUC5B. SLea,ス. す べ て の細 胞. た 逆 転 写 酵 素 反 応(RT)を. 省. お,細. 胞 株HTOAとHUOAに. して は 増 殖 が 著 し く遅 く,プ 悪 い た め,フ. 関. レ ー トに 対 す る 接 着 効 率 も. ロ ー サ イ トメ ー タ ー に 供 す る だ け の 十 分 な. 細 胞 数 が 得 られ な か っ た.. 略 し た 陰 性 対 照 で は す べ て の 細 胞 株 で バ ン ドの 消 失 が 確 認 さ れ た.. 3.MUC1遺. 伝子導入株の作製. シ ア ル 酸 に 修 飾 さ れ たMUC1の 2.. ヒ ト卵 巣 癌 細 胞 株 に お け る 細 胞 表 面 糖 鎖 な ら び に. MUC1ム 第2表. チ ンの 発 現. 体40)を 使 用 し た フ ロ ー サ イ. トメ ー タ ー 解 析 に お い て 最 も そ の 発 現 が 低 か っ た 明 細 胞. に 提 示 した モ ノ ク ロ ー ナ ル 抗 体 を 用 い フ ロ ー. サ イ トメ ー タ ー 解 析 を 行 っ た 結 果 を 第2図,第3図. MA61. RMG・. 部 分 を 認 識 す るMY.1E12抗. タ ンデ ム ・ リ ピー ト. MA54. ,. TKH-2 CA19-991.9H. 腺 癌 株ES-2を. 使 っ てMUC1遺. 伝 子 導 入 株 を 作 製 し た.. 遺 伝 子 導 入 細 胞 株 の 選 別 に あ た り しば しば ク ロー ニ ン グ. Lewisb FH6. KM93 HMFG-2 MY .IE12 Mll. 夏. RMG-II. KK. HUOCA-II. ES-2. 第2図. 5種 類 の 明 細 胞 腺 癌 株 に お け る 各 種 糖 鎖 な ら び にMUC1の. せ た 後,フ ロ ー サ イ ト メ ー タ ー(Cyto-Ace 150)に ,縦 軸 に は 細 胞 数 を 示 す.陽 性 細 胞 の 割 合 が5%未 %以. 上 を++と. 評 価 し た.(Tamada. Y. et al:Oncol. 一 部 改 変,許 可 を得 て転 載). 一T138一. 発 現 .細. よ り解 析 し た.横 満 を 一 ,5∼29%を Res. 胞 は各 種 抗 体 で 反 応 さ. 軸 に は蛍 光 強 度 の 対 数 を 示 し ±,30∼59%を+,60. 11:233-241,1999のFigure. 2.を.

玉田. MA61. MA54 TKH-2 CA19-991.9H. 口 +▲ 昌. ﹂. 刊. 十. ﹂. 十. 十 十 十 十. +. 十. ﹂ 十 十. 軋. 鳳 ﹂ 臨+. '. 副+▲. ﹂. 箋. 過 ＼. ﹄ L㌦ ・. L. 十 十. 十. 偉 冠. 十 晶. ▲ へ 、. △. 冠. 、 欺. + △占. 村. +. M. 一. 渉L. ︼. 、. 曲-、. p、. コ. 十. 杭 ﹂ けL. 叡" ーー乖. 虹 、鞭 曳. + 匁 ト 1. +. +. ±. ±. 、. 、 へ ・. ム ▲. + 遵. 十. 什 逃+. 亀. ﹂. 眠. x. -. 粒 十. +. 胞 は各 種 抗 体 で反 応 さ. 軸 に は蛍 光 強 度 の対 数 を示. 満 を 一,5∼29%を Res. +. 、. 一. ﹄. 発 現.細. よ り 解 析 し た.横. et al:Oncol. + 跳. -篭. { 晶1、 ±. ﹂. 甘 ﹂ ーにu. -. Y. ▲ , 十 、西. 卜. 盛. し ∼1. 嵐. 一 部 改 変,許. 150)に. 性 細 胞 の 割 合 が5%未. 評 価 し た.(Tamada. 一 、. 曳. ー 一. 一. ∼. 一. ー. i-mー覧. 一. 一. 軸 に は 細 胞 数 を 示 す.陽 上 を++と. L. 触. 舳 十. 十. 十. 魯 ﹂ 、. し,縦 %以. ロ ー サ イ トメ ー タ ー(Cyto-Ace. 軒讃 響 幽. ー. △ ﹂ + 一 畠 十 十 ㎞. ーL-. ミ. ー. ÷﹄. 6種 類 の 粘 液 性 腺 癌 株 に お け る 各 種 糖 鎖 な ら び にMUC1の. せ た 後,フ. KM93 HMFG-2 MY.IE12 Mll. 刊. 一. L気. ﹁. 一. ±. 第3図. 一. 1. ±. , へ. 1063. I. 枇菖. ∼. -. l 一. 一. 十. OV. I. ﹂. へ一. OMC-3. 一. ∼ へ. ±. 舳 一. ・. HMKOA. Lewisb FH6 一. [. m. ー- L. 一. 一. MCAS. チン. I. ∼ー. ﹂. ︺ ぺ. ︺ 喰. RMUG-L. ︻. 一. 一. RMUG-S. 卵 巣 癌 腹 膜 播 種 とMUC1ム. ±,30∼59%を+,60. 11:233-241,1999のFigure. 3.を. 可 を 得 て 転 載). MA61. MA54. TKH-2. CA19-991.9H. Lewis b. FH6. KM93. HMFG-2. MY. IE12 Mll. RTSG. KF. KFr. MH. 第4図. 4種. せ た 後,フ し,縦 %以. 類 の 漿 液 性 腺 癌 株 に お け る 各 種 糖 鎖 な ら び にMUC1の ロ ー サ イ トメ ー タ ー(Cyto-Ace. 軸 に は 細 胞 数 を 示 す.陽. 上 を++と. 部 改 変,許. 操 作 が な さ れ る が`clonal. 150)に. 性 細 胞 の 割 合 が5%未. 評 価 した.(Tamada. Y. し,本 (EPICS. selection'に. よ る他 分 子 の発. ±,30∼59%を+,60. 11:233-241,1999のFigure. 4.を 一. はES-2/T-22の. の 蛍 光 強 度 が 認 め ら れ,フ. ロ ー サ イ ト メ ー タ ー解 析 タ ン デ ム ・ リ ピ ー ト上 の. シ ア ル 酸 と ペ プ チ ドを 認 識 す る こ とか ら異 な る タ ン デ ム ・ リ ピ ー ト数 を 有 す るMUCI. cDNAが. 導 入 さ れ,タ. ンデ. ム ・ リ ピ ー ト数 に 応 じ た 分 子 が 発 現 し て い る こ と が 確 認. よ る 遺 伝 子 導 入 細 胞 の 選 別 を3回. の 結 果,ES-2/T-42で. 2倍. に 使 用 し た 抗 体(MY.1E12)が. 実 験 で は ク ロ ー ニ ン グ を 行 う こ と な くcell sorter. 行 っ た.そ. Res. 胞 は各 種 抗 体 で反 応 さ. 軸 に は蛍 光 強 度 の対 数 を示. 可 を 得 て 転 載). チ ンが 細 胞 膜 タ ンパ ク質 で あ る こ とを 利 用. ELITE)に. 満 を 一,5∼29%を. et a1:0ncol. 現 変 化 が 以 降 の 実 験 に 影 響 す る こ と を 回 避 す る た め,ま たMUC1ム. 発 現.細. よ り 解 析 し た.横. 約 一T139一. さ れ た(第5図)..

慶慮医学. 80巻2号(平. 成15年6月). Abs.1.25(. a). 0.75. 0.5. +. ES-21mock. 十. ES凹21r鱒22. +. ES-2/r-42. 細胞数. o.2s. 24. 72. 48. k. hr. 蛍光強度. 第5図. MUC1遺. 現.フ. 伝 子 導 入 株 に お け るMUC1ム. チ ンの 発. ロ ー サ イ トメ ー タ ー解 析 に お いて 最 もMUC1の. 現 が 低 か った 明 細 胞 腺 癌 株ES-2を 株ES-2/mock,. ES-2/T-22,. れ たMUC1の. 使 っ て,遺 伝 子 導 入. ES-2/T-42を. 各 遺 伝 子 導 入 細 胞 はMY-IEI2抗. 発. 3. (b)cm1 .25. 体(シ. 作 製 した.. ア ル酸 に修 飾 さ 0.75. タ ンデ ム ・ リ ピー ト部 分 を認 識 す る)で 反. 応 させ た後,フ り解 析 した.. ロ ー サ イ トメ ー タ ー(EPICS. XL)に. よ o.s. 十. ES-2/mock. 十. ES贈2/r-22. 一 一〇 一 一. ES -2!r・42. o.as. 4.細. 胞 増 殖 に与 え るMUC1ム. 3つ のMUC1遺. チ ンの影 響. 伝 子 導 入 株 のin. 増 殖 能 を 検 討 した.WST-1ア. vitroに. 7. お け る細 胞. 示 す.In. vitroで. は3っ. に 有 意 な 差 は 認 め ら れ な か っ た.し 図(b)に. 示 す よ う にKSNヌ. の細胞 株の間. か し な が ら,第6. MUC1遺. 伝 子 導 入 株 のin. 細 胞 増 殖 能.a:in. vitroに. 個 のES-2/mock,. ES-2/T-22,. ー ドマ ウ ス 皮 下 に お け る. 伝 子 導 入 株 の 方 が 高 く,ES-2/. mockとES-2/T-22,. Reader. ES-2/mockとES-2/T-42の. Model. 550に. 膜 播 種 能 に 与 え るMUC1ム. チ ン の 影 響(in. vitro). 間 後,72時. て 測 定 波 長450nmの. け る 造 腫 瘍 能:各1×106個. お ける. ES-2/T-42を96-well 間 後,48時. のES-2/mock,. 間. Microplate 吸 光 度 を測 定. ー ドマ ウ ス 皮 下 移 植(in. ES-2/T-42をKSNヌ. 5.腹. in vivoに. 薬 に て 反 応 さ せ た 後,. し た(Nニ9).b:ヌ. 間 に 有 意 な 差 が 認 め られ た(p<0.05).. vitro,. お け る 細 胞 増 殖 能:各5×103. 培 養 プ レ ー トに 培 養 し,24時 後 にWST-1試. 造 腫 瘍 能 はMUC1遺. days. ッセ イ に て 解 析 した結 果 第6図. を 第6図(a)に. 21. ia. vivo)に. ー ド マ ウ ス に 皮 下 移 植 し た.移. 後,7日. 目,14日. 径)×(短. 径)2に. 目,21日. お. ES-2/T-22, 植. 目 の 腫 瘍 容 積 は(1/2)×(長. て 算 出 し た(N=6).. 卵 巣 癌 の 特 徴 的 な 病 態 と し て 腹 膜 播 種 が あ げ ら れ,そ のin. vitroモ. デ ル を 確 立 す る た あ に ヒ ト大 網 よ り調 製 し. た 腹 膜 中 皮 細 胞 を 使 用 し た.腹. 膜 中皮 細 胞 を 使 用 す るに. あ た っ て 他 の 細 胞 の 混 入 が な い こ と を 確 認 す る た め,文 献 に し た が っ て46),抗keratin抗 抗 体 陽 性,抗factor た(デ. VIII抗. ー タ 未 提 示).接. に 近 い 条 件 と して37℃. チ ン の 影 響(in. した.移. vivoに. 伝子導 入株の接着実. て どの よ う に反 映 され るか を検 討. 植 法 と し て1mlのHBSS液. で 調 整 した単 細 胞. 着 実 験 に 際 し て,生. 体 内の環境. 浮 遊 液(single. を 採 用 し た.第7図. に示 す よ う. 腹 膜 微 小 転 移 巣 も 評 価 で き る よ う に,腹. 野 の 接 着 細 胞 数(mean±SD). が855.8±108.6で. あ る の に 対 し て,ES-2/T-22,. cell suspension)を. を 除 く腸 間 膜,お ES-. そ れ ぞ れ270.8±137.5,150.2±70.1で. も に 摘 出 し,摘. よ び 子 宮,卵. 有 意 に 抑 制 さ れ た(p<0.01).. 3.118±1.239g ES-2/T-22,. 一T140一. 腹 腔 内 に 注 入 し た. 膜,大. 網,腸. 管. 巣 を 形 成 され た 腫瘍 と と. 出 した 臓 器 と播 種 巣 す べ て の 重量 を グ ラ. フ 化 し た も の が 第8図. タ ン デ ム ・ リ ピ ー ト数 の 増 加 に よ っ て 接 着 が. vivo). ヌ ー ドマ ウ ス 腹 腔 内 に 細 胞 株 を 移 植 す る こ と に よ り,. 験 の 結 果 がin. 体 陰 性 で あ る こ と を確 認 し. はr視. MUC1の. 膜 播 種 能 に与 え るMUC1ム. 腹 膜 中 皮 細 胞 に 対 す る各MUC1遺. 体 陽 性,抗vimentin. に,ES-2/mockで. 2/T-42は. 6.腹. で あ る.ES-2/mockで. (mean±SD)で ES-2/T-42で. は. あ っ た の に 対 し, は そ れ ぞ れ2.290±1.094.

玉田. 卵 巣 癌 腹 膜 播 種 とMUC1ム. チン. *. 5. 0. 1000. 0 O O. 4 800. 2. ) ︿ ○○. 輔. §. field(x200). × OO. cells. O Q目 U. of one. ○×. total weightof 3 resected tissue (9). 600 attachment. 0. ○○. cut-off b 200 且. 0 ES-2/mock. ES-2/'1'-22. ES-2/T-42. 0 ES-2/mock. 第7図. 腹 膜 中 皮 細 胞 に 対 す る 各MUC1遺. 着 能.24-well培. 1ml. ES-2/T-22, D/F培. DMSOで ES-2/T-42を. 地(FCS無. そ れ ぞ れ5×105個/. 添 加)/wellの. び,各. お,1wel1に. 第8図. 蛍 光 標 識 し たES-2/. 条 件 で 接 着 さ せ た.. 接 着 し た 癌 細 胞 は 蛍 光 顕 微 鏡200倍 ト し た.な. ES-2fl'-42. 一22. 養 プ レ ー トに 単 層 培 養 さ れ た 腹 膜 中 皮. 細 胞 に 対 し,BCECF-AM mock,. ES-2π. 伝 子 導 入 株 の接. 率 の視 野 に て カ ウ ン. っ き 視 野 は 無 作 為 に10個. 々 の 接 着 細 胞 数 の 平 均 値 を1デ. 所選. ヌ ー ドマ ウ ス腹 腔 内 に お け る各MUC1遺. 株 の 増 殖 能.ES-2/mock,. ES-2/T-22,. 各2×106個/1ml. 調 製 後, KSNヌ. HBSSに. 伝子導入. ES-2/T-42を ー ドマ ウ ス. の 腹 腔 内 に移 植 した.移 植3週. 間 後,マ. 腹 膜,大. 巣 を形 成 さ れ た 腫 瘍 と と. 網,腸. 間 膜,子. 宮,卵. ウ ス を 解剖 し,. もに 摘 出 し,摘 出組 織 全 重 量 を グ ラ フ化 した.○. ー タ と し た(N=6).. ス1匹. あ た りの 結 果 を,×. は平 均 値 を 表 す.な. はマウ お,Cut. offラ イ ンは肉 眼 的 に腹 膜 播 種 が認 め られ な い場 合 の摘 出 組 織 全 重 量(検 体 中 の最 大値)で. g,2.033±0.716gで,. ES-2/mockの. 7.本. 方 が よ り重 篤 な. 腹 膜 播 種 を 形 成 す る 傾 向 が 認 め ら れ た(ES-2/T-22に 対 し てp=0.1585,ES-2/T-42に し か しな が ら,第4表 2/T-22,ES-2/T-42が. ES-2/mockに. ヒ ト大 網 よ り調 製 し た 腹 膜 中 皮 細 胞 が い か な る 分 子 を. な ら び に レ ク チ ン を 使 用 し,フ. ES-. 比 較 してES-2/T-22,. lylated. あ り, ES-2/T-42は. ロ ー サ イ トメ ー タ ー に よ. る 解 析 を 行 っ た(第9図).CD44,ﾟ1-integrin,. 腹 腔 内 移 植 さ れ た マ ウ ス の3. 週 生 存 率 は そ れ ぞ れ429%,90.9%,100%で. 実 験 に使 用 した腹 膜 中皮 細 胞 の性 状. そ の細 胞 表 面 に発 現 して い るか検 索 す る た め に各 種 抗 体. 対 してp=0.0562).. に 示 す よ う にES-2/mock,. あ る.. 有. MUC1,. galactose残 3galactose残. 意 に 予 後 良 好 で あ っ た(p〈0.05).. heparan. 基(SSAに. sulfate,. て 認 識 さ れ る)は. acidやsLexは. 腹 膜 播 種 モ デ ル(in. ES-2/mock (n-14) 42.9%*,*z. 3-week survival(rate) 各 細 胞 株 を2×106個/1ml 生 存 率 を 示 す,有. HBSSに. 意 差 検 定 はFisher's. 調 製 後, exact. vivo). (n=11). ES-2/Tz42 (n=11). 90.9%*. 100%*z. ES-2/T-22. KSNヌ. ー ドマ ウ ス の 腹 腔 内 に 移 植 し た.移. probability. 示 す.. 一T141一. testに. 植3週. て お こ な っ た.*'・*2はp<0.05で. 高発現 し. 低 発 現E-selectin. の 発 現 は 全 く認 め られ な か っ た.. 第4表. a 2-6. て 認 識 さ れ る), sialic acid a 2-. 基(MALに. て お り,hyaluronic. sia・. sialic acid. 間後のマウス あ る こ とを.

慶慮医学. 80巻2号(平. 成15年6月). 細胞数. 細胞 数. 細 胞数 蛍光強度. 蛍光 強度. 蛍光強度 細胞数. 細胞数. n . 畠 U C e 創 唱 E. 細胞 数. 12). !八 蛍光強度. 蛍光強度. 蛍光強度 細胞敬. 細胞数. ・i・lylL・wi・X(KM93)襲. .ノ 蛍 光強度. 第9図. 蛍光強度. 蛍光強度. 腹 膜 中 皮 細 胞 表 面 に発 現 す る分 子.細 胞 は各 種 抗 体,レ. た後,フ ロ ー サ イ トメ ー タ ー(EPICS 縦 軸 に は細 胞 数 を 示 す.. XL)に. クチ ン(第3表. 参 照)で 反 応 させ. よ り解 析 し た.横 軸 に は 蛍 光 強 度 の対 数 を 示 し,. 鎖 抗 原 の 発 現 状 況 を 示 して い た.卵 巣 粘 液 性 腫 瘍 は良 性. 考. 察. の場 合,形 態 学 的 に子 宮 頸 管 腺 上 皮 に類 似 した 組 織 型 で あ るが,悪 性 の場 合,腸 上 皮 に類 似 して くる頻 度 が増 す.. 卵 巣 明 細 胞 腺 癌 は,臨. 床 的 に 罹 患 患 者 の7割. 未 産 婦 で あ っ た り47),60%以 (FIGO,1988)の1期 を50∼70%と. 上 が 国 際 進 行 期 分 類. に 属 し た り,骨. 盤 内 の子 宮 内 膜 症. 高 頻 度 に 合 併 し て い る な ど,他. と は 異 な る 特 徴 を 有 し て い る4),ム 況 を み る と,検. 近 くが. の組織型. チ ン遺 伝 子 の 発 現 状. 索 し た す べ て の 明 細 胞 腺 癌 株 はMUC1. 以 外 の ム チ ン遺 伝 子 を 発 現 し て い な か っ た.さ. Hanski,. 発 現 も 明 細 胞 腺 癌 に は 特 徴 的 で あ っ た が, C.ら. が 報 告 し て い る よ う に48,49), MUC1分. 上 に はsLexの. 発 現 が 認 め ら れ る た め,. 粘 液 性 腺 癌 の 患 者 は,進. 行 期 分 類 の1期. 満 で あ る4).H6gberg,. る よ う に,腫. 瘍 の 進 展 が 遅 い も の の,い. 進 展 し て し ま う と,っ. T.ら. MUC6で. て お り5'),一 方 腸 上 皮 に はMUC2, MUC5Bが. あ る と報 告 さ れ MUC3,. MUC4,. 発 現 して い る52).今 回 の 検 討 で は,卵 巣 粘 液. 性 腺 癌 由来 の 培 養 細 胞 に はMUC2とMUC3のmRNA. 腸 上 皮 型 の粘 液 性 腺 癌 を説 明す る分 子 マ ー カ ー に な る可 能 性 を示 唆 して い る.. り,最. 占め て お. も発 症 率 の高 い組 織 型 で あ る.そ の80∼85%で. 床 的 に は明細 胞 腺 癌 や 粘 液性 腺 癌 と異 な って い る4).. に分 類 され る. が 指 摘 して い っ た ん卵 巣 外 に. ま り浸 潤 転 移 能 を 獲 得 す る と 最 も. 治 癒 し に く い 組 織 型 で あ る50).本 研 究 結 果 で は,粘. MUC5B,. は,開 腹 時 す で に腹 膜 播 種 性 転 移 を 認 め る と い う点 で 臨. MUC1とsLex. 瘍 が 卵 巣 を越 え て進 展 して い る ケ ー ス は. 全 体 の5%未. MUC5AC,. 漿 液 性 腺 癌 は,卵 巣 癌 全 体 の 約40∼50%を 子. の 発 現 は リ ン ク し て い る 可 能 性 が 考 え られ る.. こ と が 多 く,腫. MUC4,. 発 現 が 認 め られ て お り,卵 巣 粘 液 性 腺 癌 の腸 上 皮 化 生 や. ら に,フ. ロ ー サ イ ト メ ー タ ー に よ る 細 胞 表 面 分 子 の 解 析 で は, sLeXの. 子 宮 頸 管 腺 上 皮 に発 現 して い る ムチ ン遺 伝 子 はMUC1,. 液性. 腺 癌 細 胞 株 は 多 種 多 様 な ム チ ン遺 伝 子 の 発 現 な ら び に 糖 一T142一. 本 研 究 結 果 で は,漿 MUC2のmRNA発. 液 性 腺 癌 株 に お い てMUC1と. 現 が 認 め られ た も の の,フ. ローサ. イ トメ ー ター に よ る細 胞 表 面 分 子 の 解 析 で はMUC1の 発 現 は認 め られ な か った.MUC1を. 認 識 す る抗 体 の 特. 異 性 も考 え られ るが,ム チ ン型 糖 鎖 抗 原 の発 現 も これ ら の漿 液 性 腺 癌 株 で は全 く認 め られ なか った ことか ら,む しろ な ん らか の 過 程 でmRNAか. らの翻 訳 が 阻 害 され て.

玉 田:卵 巣 癌 腹 膜 播 種 とMUC1ム. T-42は,ES-2/T-22に. い る可 能性 が 考 え られ る. 当初,ム. チン. チ ン遺 伝 子 の発 現 とム チ ン型 糖 鎖 の発 現 に は. 比 較 して 中皮 細 胞 との接 着 能. が さ ら に 低 下 す る こ と か ら,MUC1タ. ン デ ム ・ リ ピー. 関連 が あ るの で はな い か と予 想 した が,本 実 験 結 果 で は. トの 長 さ も接 着 阻 害 因 子 と して のMUC1の. 積 極 的 に肯 定 で き る証 拠 は得 られ な か った.し か しな が. を 与 え る こ と が 示 さ れ た.こ. ら,こ れ らの ムチ ン遺 伝 子 の発 現 パ ター ン と糖 鎖 抗 原 の. 皮 細 胞 と の 接 着 に か か わ る分 子 と し て ピ ア ル ロ ン酸 結 合. 発 現 パ タ ー ンを組 み合 わ せ る と,卵 巣 癌 の組 織 学 的 分 類. 部 位 を 有 す るCD44な. ご とに異 な った発 現様 式 を呈 した ことか ら,こ れ らの デー. 腹 膜 中 皮 細 胞 へ の 接 着 を 抑 制 す る背 景 と し て は,こ. の分. タ は卵 巣 癌 細 胞 の ムチ ンや糖 鎖 抗 原 を 合 成 す る能 力 が 組. 子 が 細 胞 外 に 進 長 し た 巨 大 分 子 で あ る こ と か ら,物. 理的. 織 型 に依 存 した 形 で お こな わ れ て い る こ とを 示 唆 して い. に接 着 分 子 とそ の受 容 体 との相 互 作 用 を 阻害 して い る こ. る と考 え られ る.. と が 推 測 さ れ る.. Einhorn,. N.ら は,卵 巣 癌 の 予 後 因 子 の な か で 臨床 進. MUC1の. 機 能 に影 響. れ ま で卵 巣 癌 細 胞 と腹 膜 中. ど が 知 ら れ て い る58). MUC1が. ム チ ン様 領 域,す. な わ ち タ ンデ ム ・ リ ピー. 行 期 と組 織 型 が 重要 で あ り,組 織 型 の重 要 性 は 腫 瘍 の 進. ト1回. 行 度 に影 響 す る こ と に あ る と指 摘 して い る6).卵 巣 癌 に. MUC1分. お け るMUC1の. る60).接 着 分 子 を は じ め と す る 多 く の 膜 タ ンパ ク 分 子 の. 発 現 量 は進 行 期 が 上 が る につ れ増 加 し,. 分 の 平 均 長 は お よ そ5nmで 子 は,200∼500. 進 行 例 で の 低 発 現 は予後 を 良好 とす る因 子 で あ る こ とが. 細 胞 外 領 域 が30nm以. 報 告 され て お り53),明 細 胞 腺 癌 株 が ム チ ン遺 伝 子 の な か. か にMUC1分. で もMUC1を. る61'62).実 際 に,癌. 特 異 的 に 発 現 して い た本 研 究 結 果 を考 え. 胞 腺 癌 の病 態 に対 す るMUC1ム た め,MUC1の. cDNAの. の2種. J.ら は,悪. 子 が 巨大 な 分 子 で あ るか が 想 像 さ れ 細 胞 にMUC1を. 高 発 現 さ せ る と,. こで,明 細. 接 着 能 が 減 少 す る と報 告 さ れ て い る54,63).こ れ ら の 報 告. を 使 って, 類 のMUCl. や 本 実 験 結 果 よ り,MUC1は. 接 着 分 子 とそ の受 容 体 と. の結 合 を非 特 異 的 に 阻 害 す る作 用 が あ るの で は な い か と 考 え ら れ る.. 遺 伝 子 導 入 株 を作 製 した.. Wesseling, cDNAを. と42回. 下 で あ る こ と と 比 較 す る と,い. イ ンテ グ リンを 介 した コ ラー ゲ ンな ど の細 胞 外 基 質 との. チ ンの役 割 を 解 明 す る. 発 現 が 最 も低 か っ たES-2株. タ ン デ ム ・ リ ピー ト22回. たが っ て. 胞 表 面 か ら突 出 し て い. チン. 合 わ せ る と3),明 細 胞 腺 癌 の 臨 床 病 態 にMUC1ム が 深 く関 わ って い る可 能 性 が考 え られ た.そ. あ る59).し. nm細. ES-2/mock,. ES-2/T-22,. ES-2/T-42を. ウ ス の 腹 腔 内 に 移 植 し,3週. 性 黒 色 腫 の 細 胞 株 にMUCl. 遺 伝 子 導 入 した と こ ろ,培 養 プ レー トに対 す. 価 した.こ. ヌ ー ドマ. 間 後 に腹 膜 播 種 の程 度 を評. れ ま で の 報 告 で は,生. じた 腫 瘍 の 重 量 の み で. る遺 伝 子 導 入 株 の 接 着 性 が 下 が る こ と を 報 告 して い た. 播 種 の 程 度 が 論 じ ら れ る こ と が 多 か っ た が,本. が54),今 回 検 索 した 卵 巣 癌 細 胞 株(ES-2)で. 卵 巣 癌 の 腹 腔 内 微 小 転 移 を もそ の 評 価 に 反 映 させ るた め. は,培 養. プ レー トに対 す る接 着 効 率 や 細 胞 形 態 に 変 化 はみ られ な. に,腹. か った(デ. た 腫 瘍 と と も に 摘 出 し,摘. ー タ未 提 示).こ. の よ うな 違 い は実 験 に 用 い. 膜,腸. 間 膜,大. 網,お. よ び 子 宮,卵. に よ っ て 播 種 の 程 度 を 評 価 し た.そ. られ る.. mockはES-2/T-22やES-2/T-42な. 細 胞 増 殖 を 制 御 す る と い う報 告 が な. 伝 子 導 入 株 よ り も,さ. 巣 を 形 成 され. 出組織全重量を測定す ること. た細 胞 株 の由 来 す る癌 腫 に起 因 す るの で は な いか と考 え. ま た,MUC1が. 研究 では. の 結 果,ES-2/ ど のMUC1遺. ら にES-2/T-22の. 方 がES-2/. さ れて きた が55∼57),これ らの結 果 は相 反(促 進 的 で あ っ. T-42よ. り も 腹 膜 播 種 の 程 度 が 強 か っ た こ と か ら,. た り,抑 制 的 で あ った り)し て お り,や は り実 験 に使 用. MUC1の. 発 現 程 度 の み な らずMUC1の. した癌 腫 に よ ってMUC1の. リ ピ ー ト数 も 癌 細 胞 と 腹 膜 中 皮 細 胞 と の 接 着 能 に 影 響 を. 果 たす 役 割 が 変 化 す るの で. は な い か と 考 え ら れ る.卵. 巣 癌 の 場 合,MUC1は. 与 え る と考 え ら れ た.し. 有 す る タ ンデ ム ・. か し な が ら,in. uitroに お け る. in vitroで は特 に細 胞 増 殖 に影 響 を お よ ぼ す もの で は な. 有 意 差 はin. い が,in. 形 成 の 要 因 が 接 着 能 だ けで は説 明 で きな い こ と も同 時 に. vivoに お いて はMUC1遺. 伝子導入株が マゥス. vivoの. 実 験 で は 得 られ ず,実. 皮 下 造 腫 瘍 能 を有 意 に増 大 させ た ことか ら,腫 瘍 増 殖 を. 示 して い る と 考 え られ た.さ. 促 進 す る分 子 の1っ. 植 後3週. と も考 え られ た.. 多 くの卵 巣 癌 は卵 巣 表 面 に まで 浸 潤 し,腫 瘍 被 膜 を破. ら に,同. 際 の腹 膜 播 種. 様 の 実 験 に よ る移. 生 存 率 を 比 較 す る と,ES-2/mock移. 意 に 低 か っ た こ と よ り,少. 植 群 で有. な く と も腹 膜 播 種 巣 の 形 成 そ. 綻 させ,腹 腔 内 に腫 瘍 細 胞 を播 種 す る ことで 腹 膜 表 面 に. の もの は 生 存 率 に 直 接 的 に 影 響 を 与 え た と い う こ と が で. 転 移 巣 を 形 成 す る.本. き る.. MUC1が. 研 究 結 果 で は,癌. 細 胞 表面 に. 発 現 す る こ と に よ り,腹 膜 中皮 細 胞 と癌 細 胞. 転 移 の 成 立 に は,宿. 主 細 胞 と癌 細 胞 の 相 互 作 用 を理 解. す る こ と が 重 要 で あ る.癌. との 接 着 が 抑 制 され る こ とを 見 い だ した.ま た,ES-2/ 一T143一. 細 胞 表 面 のMUC1ム. チ ンの.

慶慮 医 学. 80巻2号(平. 成15年6月). 発 現 は,腹 膜 中皮 細胞 との接 着 を む しろ抑制 して しま う. そ の 原 因 は癌 細 胞 がMUC1を. 総. 発現 す ることだけにあ る. 括. の だ ろ うか.そ の手 が か り と して,実 験 に用 い た腹 膜 中 皮 細 胞 の細 胞 表 面 に お け る分 子 の発 現 パ タ ー ンを,各 種. ヒ ト卵 巣 癌 由来 細 胞 株17種. 類 を用 い て,各 種 ム チ ン. 抗 体 な らび に レ クチ ンを用 い て フロ ー サ イ トメ ー タ ー に. 遺 伝 子 の 発 現 と各 種 糖 鎖 抗 原 の 発 現 を そ れ ぞ れRT-. よ って解 析 した.そ の結 果,腹 膜 中皮 細 胞 表 面 に も シア. PCR法. と フ ロ ー サ イ トメ ー タ ー を使 って 検 討 した.ま. ル 酸 で 修 飾 され たMUC1が. た,ヒ. ト卵 巣 明 細 胞 腺 癌 株ES-2を. 高 発 現 して お り,こ の 分 子. 用 い て, MUC1遺. は腹 腔 内 の癒 着 や腸 管 蠕 動 の際 の摩 擦 回避 に役 立 って い. 伝 子 導 入 株 を作 製 し,増 殖 能 や腹 膜 播 種 形 成 能 に対 して. るの で は な いか と報 告 され て い る こ とか ら64,65),腹膜 中. MUC1ム. 皮 細 胞 表 面 に発 現 して い るsialylated. MUC1も. 同様 の. チ ンの 及 ぼ す 影響 を検 討 した.. 1.明 細 胞 腺 癌 株 で は,MUC1の. み を 発 現 し,糖 鎖 で. 機 能 を有 して い る もの と考 え られ た.ま た,本 実 験 で示. はsLeXの. さ れ た 腹 膜 中 皮 細 胞 表 面 分 子 の 発 現 パ タ ー ン は,. 多 様 な ム チ ン遺 伝 子 と糖 鎖 の発 現 が認 め られ た.漿 液 性. Cannistra,. 腺 癌 株 で は,mRNAレ. S.A.ら に よ って 報 告 さ れ た結 果58)と一 致 し. 発 現 が 特 徴 的 で あ っ た.粘 液 性 腺 癌 株 で は,. ベ ル でMUC1,. MUC2を. 発現. て お り,人 種 や個 体 差 を越 え た共 通 の特 徴 と見 な す こ と. す る もの の タ ンパ ク レベ ルで の発 現 は認 め られ ず,糖 鎖. が で き る.さ らに,腹 膜 中皮 細 胞 に はsialylated MUC1. 抗 原 に関 して も検 索 した限 りほ と ん ど発 現 が認 め られ な. の み な らず,ヘ パ ラ ン硫 酸 な ど も高 発 現 して お り,こ れ. か った.総. らの分 子 が比 較 的 強 い陰 性 電 荷 を帯 び て い る こ と,一 方 で 卵 巣 癌 細 胞 にMUCI sialylated MUC1を. cDNAを. 遺 伝子 導入 し. 高 発 現 させ る と,中 皮 細 胞 と の接. 着 阻害 が生 じ る こ とな ど を考 え合 わ せ る と,シ ア ル酸 の. じて,組 織 型 ご と に特 色 の あ る結 果 を示 した.. 2.細 胞 株 にMUC1遺. 伝 子 を導 入 す る こ とに よ って,. 形 態 の変 化 やin vitroで の増 殖 能 に 影 響 はみ られ なか っ たが,腹 膜 中皮 細 胞 と の接 着 は有 意 に抑 制 さ れ た. 3.MUC1遺. 伝 子 導 入 株 は,ヌ ー ドマ ウ ス皮 下 にお け. 有 す る陰 性 電 荷 同 士 の反 発 が 接 着 阻 害 に重 要 で あ る可 能. るin vivo造 腫 瘍 能 を 促 進 さ せ た が,腹 腔 内 にお け る播. 性 が あ る.し た が って,陰 性 電 荷 の主 た る原 因 で あ る シ. 種 能 は抑 制 さ れ る傾 向 に あ った.. ア ル酸 が減 少 す る こ とで 接 着 阻 害 機 序 が解 除 さ れ,結 果 的 に腹 膜 播 種 が お こ りやす くな る こ とが想 定 され るた め,. 以 上 の 結 果 か ら,卵 巣 明 細 胞 腺 癌 に お い てMUC1ム チ ンの発 現 は,腹 膜 播 種 形 成 に む しろ抑 制 的 に作 用 す る. 今 後,腹 膜 播 種成 立 の機 序 を論 じ る際,重 要 な視 点 に な. こ とが判 明 した.ま た,こ の作 用 機 序 の重 要 な要 因 と し. る もの と思 わ れ た.. て,腹 膜 中皮 細 胞 表 面 にMUC1ム. 卵 巣 明 細 胞 腺 癌 はFIGOの. 国 際 進 行 期 分 類 でIc期 が. 最 も多 く,卵 巣癌 の 中 で発 症 率 が最 も高 い 漿 液性 腺 癌 が. る こ とが あ げ られ,ム. チ ンが 高発 現 して い. チ ン分 子MUC1の. 生 体内 におけ. る新 た な役 割 を 明 らか に した.. IIIC期 に分 布 して い る の と は対 照 的 で あ る3,4).実験 結 果 チ ン は腹 膜 播 種 を 抑 制 す る こ. 本稿 を終 え る にあ た り,ご 指 導 な らび に ご校閲 を賜 りま. 高 発 現 した癌 細 胞 は,腹 腔 内 で 生 存. した慶 慮義 塾 大 学 医 学 部産 婦 人 科 学 教 室 野 澤志 朗 教 授 に. して い く上 で 進展 の足 場 を失 うと い う点 か ら不 利 で あ る.. 深 甚 な る感 謝 の意 を表 します.ま た,本 研 究 に対 して直 接. しか しな が ら,一 度 腹 膜 播 種 が形 成 され た 場 合,漿 液性. の ご指導 をい た だ きま した東 京 大学 大 学院 薬 学系 研究 科 生. 腺癌 で は一 般 に抗 癌 剤感 受 性 が 比 較 的 高 い ことが知 られ,. 体 異物 学 教 室 入村 達 郎教 授 に深 謝 します.実 験 の ご協力,. あ る程 度 病 勢 を 抑 制 す る こ と が で き るの に 対 して66),抗. お よび ご助 言 を いた だ い た慶 慮 義塾 大学 医学 部産 婦人 科 学. 癌 剤 の 奏 効 が 期 待 で き な い 明細 胞 腺 癌67)では腹 膜 播 種 そ. 教 室 青 木 大輔 講 師 に御 礼 申 し上 げ ます.. よ り推 察 す る とMUC1ム とか ら,MUCIを. う した新 た. 本研 究 に対 し,細 胞 株 を ご供 与 い ただ い た防衛 医科 大 学. チ ンの 発 現 の程. 校 産 婦 人科 学 教 室 菊地 義 公 教 授,大 阪 医科 大学 産 婦 人 科. の もの を抑 制 す る こ とが重 要 と考 え られ,こ な 治 療 戦 略 を 構 築 す る うえ でMUC1ム. 度,す な わ ち本分 子 を 介 す る腹膜 中 皮 細 胞 との相 互 作 用. 学 教 室 植木 實 教授,同. の 状 態 を 把 握 す る こ とが有 益 な情 報 にな る と思 わ れ る.. 院 石 渡 勇博 士 に この場 を借 りて御 礼 申 し上 げ ます.さ. この 種 の転 移 形式 に起 因 す る死 亡 率 の 高 さを鑑 み る と,. に,ご 協力 いた だい た研 究室 の諸 先生 方 に感 謝 い た します.. 卵 巣 癌 細 胞 の 腹 膜播 種 を抑 制 す る治 療 戦 略 は,致 死性 の. ま た,本. 植 田政 嗣助 教 授,石 渡産 婦 人科 病. 研 究 の要 旨 の一 部 は第57回. 高 い この 疾 患 に罹 患 した 患者 の 予 後 を大 き く改 善 す る可. (横 浜,1998年),第3回. 能 性 が あ る.. 遺 伝 子 診断 学 会(佐 賀,1999年),第58回 総 会(広 島,1999年),第52回 一T144一. ら. 日本 癌 学 会 総 会. 日本産 婦 人科 腫 瘍 マー カ ー ・ 日本 癌 学 会. 日本 産科 婦 人科 学 会総.

玉 田:卵 巣 癌 腹 膜 播 種 とMUC1ム. 会(徳. 島,2000年),第53回. 日本 産 科 婦 人 科 学 会 総 会. (札 幌,2001年),第10回. 日本 が ん 転 移 学 会(徳. チン. Cell. membrane-associated. sion-modulating. 島,2001. mucins. property.. and. Trends. their. Biochem. adhe-. Sci. 17. 359-363,1992. 年),第30回. 日本 婦 人 科 腫 瘍 学 会(横. 浜,2001年)に. 12)Ando. お い て 発 表 し た. 本 研 究 は平 成11年 平 成13年. I, Kukita. ber. of tandem. mucin. 度 慶 鷹 義 塾 大 学 医 学 部 研 究 奨 励 費,. 度 慶 慮義 塾 学事 振 興 資 金 に よ る研 究補 助 を受 け. is. S, Tsukazaki. carcinoma. 一T145一. with. numepithelial. severe. a. acne.. M, Jeng. human. J. Cell. M,. Sakayori. M,. Furusako. S, Mochizuki. its single. Sasaki. Udagawa. cell. cell clon-. H, Tsukazaki. Y,. K, Aoki. Kobayashi. H:Anew. gen(CA602)recognized. by. T,. two. monoclonal ovarian. cell line(RMG-II).Jpn. D,. Sato. CAI25-like. established. a newly. carcinoma. clear. 1:426-435,1988. S, Yajima. against. C-H, Iizuka. ovarian. cell line(RMG・1)and. 14)Nozawa. ies. H:Alarge. polymorphic. K, Sakayori of. ing. Human. 1)CannistraSA:Why shouldtheclonogenic cellassay be prognostically importantinovariancancer?JCIin Oncol9:368-370,1991 2)Omura GA, Brady MF, Homesley HD, Yordan E, Major FJ,Buchsbaum HJ,and Park RC:Long-term follow-up and prognostic factoranalysis inadvanced ovarian carcinoma the GynecologicOncology Group experience. J CIinOncol9:1138-1150,1991 3)Tamada Y,IidaS,Aoki D,Nozawa S,and IrimuraT Carbohydrateepitopesand mucins expressedby 17 human ovariancarcinomacelllines. OncolRes 11 233-241,1999 4)PeterRussell:Surface Epithelial-Stromal Tumors of the Ovary.BLAUSTEIN'S Pathologyof theFemale GenitalTract,4thed.(Ed)Kururan RJ, SpringerVerlag,New York,p.705-782,1994 5)Rubin SC,Wong GYC, CurtinJP,BarakatRR, Hakes TB, HoskinsWJ:Platinum-basedchemotherapyof high-risk stageI epithelial ovariancancerfollowing comprehensive surgical staging. ObstetGyneco182 143-147,1993 6)Einhorn N, NilssonB,Sjovall K:Factors influencing survivalin carcinomaof the ovary.Study from a well-defined Swedishpopulation. Cancer55:20192025,1985 7)Kim YS, Gum J.BrockhausenI:Mucin glycoproteinsin neoplasia. Glycoconjugate J 13:693-707, 1996 8)LightenbergMJL, Vos HL, GennissenAMC, Hilkens J:Episialin, a carcinoma-associated mucin,isgeneratedby a polymorphicgeneencodingsplice variants with alternative amino termini. J BiolChem 265:5 573-5578,1990 9)Lan MS, BatraSK, Qi W-N, MetzgarRS, Hollingsworth MA:Cloning and sequencingof a human pancreatic tumor mucin cDNA. J BiolChem 265 15294-15299,1990 10)GendlerSJ, BurchellJM, Duhing T, Lamport D, WhiteR,ParkerM, Taylor-Papadimitriou J:Cloning ofpartial cDNA encodingdifferentiation and tumorassociated mucin glycoproteins expressedby human mammary epithelium. ProcNatlAcad SciUSA 84 6060-6064,1987 11)HilkensJ,LightenbergMJL, Vos HL, LitvinovSV. in the. associated. R:Establishment. 献. Hino. 25:150-152,1998. 13)Nozawa. 文. G, and. repeats. gene. Dermatol. た.. A, Soma. I,. antiantibod-. clear. J Cancer. cell. Res. 82. 854-861,1991 15)笹. 秀 典,菊. 池 義 公,久. 野. 河 合 俊 明,相. 田 真 介,杉. 田 道 夫,杉. 篤,石. 井 賢 治,永. 田 一 郎,. 下. 神 美 夫:. 匡,天. シ ス プ ラ チ ン耐 性 卵 巣 癌 培 養 細 胞 の 細 胞 周 期 に 与 え る シ ス プ ラ チ ン の 影 響.Human 16)Ishiwata. I, Ishiwata. ishment. of. HUOCA-II,. adenocarcinoma JNatl 17)Lau torial. Ishikawa. a human. H:Establ. ovarian. clear. its angiogenic. cell. activity.. Inst 78:667-673,1987. Lewis. AD,. Ehsan. mechanisms. resistance. M,. cell line, and. Cancer DHM,. Ce115:384-391,1992. C, Soma. of. MN,. Sikic. associated. ovarian. cyanomorpholino. BI:Multifac. with. carcinoma. broad. cells. doxorubicin.. cross-. selected. Cancer. by. Res. 51. 5181-5187,1991 18)酒. 依 元 子,野. 澤 志 朗,宇. 佐 久 間 達 朗,飯. 田 川 康 博,陳. 塚 理 八,和. 啓 子,李. 田 順 子,吉. 順 坤,. 田 茂 子,武. 田 佳 彦:. 同 一 の 卵 巣 ム チ ン性 嚢 胞 腺 癌 よ り樹 立 さ れ た2種 細 胞 株(RMUG-S, Human 19)木. RMUG-L)の. の培 養. 細 胞 生 物 学 的 特 性.. Cell 3:52-56,1990. 寺 義 郎,吉. 村 隆 宏,大. 隈 良 成,岩. 坂. 剛,杉. 森. ヒ ト卵 巣 ム チ ン 性 嚢 胞 腺 癌 由 来 細 胞 株MCASの 性 状.日 20)石. 渡 恵 子,木. 甫: 樹立 と. 産 婦 誌,37:1820-1824,1985 勇,佐. 藤 善 郎,井. ロ ー 成,石. 胞 株HMKOAの. 口 め ぐ み,時. 川. 博:ヒ. 枝 由 布 子,石. 渡千. ト卵 巣 粘 液 性 嚢 胞 腺 癌 細. 樹 立 と 性 状.. Human. Cell. 12:P59,. 1999 21)Yamada. T, Ueda. Establishment. M,. Otsuki. and. Y, Ueki. M,. Sugimoto. characterization. (OMC-3)originating. from. cystadenocarcinoma. of the ovary.. a. of human. a. O. cell. line. mucinous. Gynecol. Oncol. 40. 118-128,1991 22)Horowitz. AT,. Davidson noma. Treves. L, Biran. AJ, S:Anew. Voss. R, Okon human. cell line:Establishment. mor-associated. markers.. and Oncology. E, Fuks ovarian. Z,. carci-. analysis. of tu-. 42:332-337,. 1985 23)宇. 田 川 康 博,野 太 田 邦 彦,塚. 澤 志 朗,陳. 啓 子,酒. 崎 克 己,木. 性 上 皮 性 卵 巣 癌 株(RTSG)の. ロ ー 成,飯. 依 元 子,三. 上 幹 男,. 塚 理 八:hCG産. 生. 樹 立 と そ の 細 胞 特 性..

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