RESPON HISTOPATOLOGI HEPAR MECIT (Mus musculus) YANG DIINDUKSIBENZO(α)PIRENTERHADAP PEMBERIAN
TAURIN DAN EKSTRAK DAUN SIRSAK (Annona muricata)
Oleh Annisa Agata
HEPAR HISTOPATHOLOGY RESPONSE OF MICE INDUCED BY BENZO(α)PHYREN TO THE ADMINISTRATION OF TAURINE AND LEAF SOURSOP EXTRACT (Annona muricata)
By Annisa Agata
Cancer is a disease that is characterized by the existence of damage and cell abnormality in growth and differentiation. Liver cancer is a disorder of hepar tissue derivated from its tumors. Taurine is known as antioxidant but its role as anticancer needs to be explored more as well the role of Annona muricataleaf soursop extract which was believed has its role as anticancer substance. This research, therefore, aimed to explore the effect of taurine and Annona muricata leaf soursop extract on the hepar histopathology of male mice (Mus musculus) induced by benzo(α)phyren in vivo. This research was carried out by using a complete randomized design, which consisted of 5 treatment groups which was repeated 5 times. Group I was given 0.2 ml corn oil for 15 days, group II wasinduced by benzo(α)phyren without taurine nor A. Muricataleaf soursop extract for 10 days, group III was given 7.8 mg taurine/bw/day (twice a day) starting from the 15thdays before the induction of benzo(α)phyren, group IV, after induced with benzo(α)phyren, taurine was given with dosage of 7.8 mg/bw/day, group V, after induced withbenzo(α)phyren, soursop leaf extract was given with amount of 277,8 mg/bw/day). Data analyzed by Kruskal-Wallis test and one way ANOVA with Fisher test (p>0.05). The results indicated that taurine had ability to recover the liver tissueinduced by benzo(α)phyrenas (carcinogenic) while,Annona muricata leaf soursop extract had not shown any recover of tissue damage.
Oleh
Annisa Agata
Tesis
Sebagai Salah Satu Syarat untuk Mencapai Gelar MAGISTER SAINS
Pada
Program Studi Magister Biologi
Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Lampung
PROGRAM PASCASARJANA MAGISTER BIOLOGI
FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM UNIVERSITAS LAMPUNG
Penulis dilahirkan di Bandar Lampung, pada tanggal 25 September 1991 yang
merupakan putri tunggal pasangan Bapak Ujang Rilwadi, SP dan Ibu Sherly
Wenur. Penulis menyelesaikan pendidikan Taman Kanak-Kanak di TK Taruna
Jaya Bandar Lampung pada tahun 1997. Sekolah Dasar diselesaikan di SD
Al-Azhar 2 Bandar Lampung pada tahun 2003. Sekolah Menengah Pertama
diselesaikan di SMP Negeri 29 Bandar Lampung pada tahun 2006. Sekolah
Menengah Atas diselesaikan di SMA Negeri 9 Bandar Lampung pada tahun 2009.
Sarjana Biologi Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas
Lampung yang diselesaikan pada tahun 2013.
Pada tahun 2013 penulis terdaftar sebagai mahasiswa Program Studi Magister
Biologi Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Lampung,
Alhamdulillah puji syukur kehadirat ALLAH SWT yang Maha Pengasih dan Maha Penyayang karena atas rahmat dan karunia-Nya penulis dapat menyelesaikan Tesis yang berjudul “Respon Histopatologi Hepar Mencit (Mus musculus) Yang Diinduksi Benzo(α)piren Terhadap Pemberian Taurin Dan Ekstrak Daun Sirsak (Annona muricata)”. Ucapan terimakasih dan penghargaan yang sebesar-besarnya penulis tunjukan kepada semua yang telah membantu sejak memulai kegiatan sampai terselesaikannya tesis ini, ucapan tulus penulis sampaikan kepada :
1. Ibu Endang Linirin Widiastuti, Ph.D., selaku pembimbing I yang telah banyak meluangkan waktu untuk memberikan bimbingan, semangat, ilmu, arahan, ide, saran, dan kritik dengan penuh kesabaran selama penulisan tesis ini.
2. Bapak Dr. G. Nugroho Susanto, M.Sc., selaku pembimbing II yang telah banyak meluangkan waktu untuk memberikan bimbingan, arahan, ide, saran, dan kritik dengan penuh kesabaran selama penulisan tesis ini. 3. Bapak Dr. Sutyarso, M. Biomed., selaku pembahas, atas saran, kritik, ilmu
serta dukungan yang telah diberikan sehingga tesis ini terselesaikan. 4. Bapak Dr. Sumardi, M.Si., selaku Ketua Program Studi Magister Biologi
5. Bapak Prof. Dr. Ir. Sudjarwo, M.S., selaku Direktur Program Pascasarjana Universitas Lampung.
6. Bapak Prof. Suharso, Ph.D., selaku Dekan Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Lampung.
7. Papa dan Mama tersayang, terkasih dan tercinta yang telah memberikan kasih sayang, restu, do’a, pengertian dan dukungan moril maupun materi
untuk penulis.
8. Bapak dan Ibu dosen, staf beserta laboran Jurusan Biologi FMIPA Unila atas ilmu dan pengalaman yang telah banyak diberikan kepada penulis. 9. Ibu Endang Linirin Widiastuti, Ph.D., selaku Pembimbing Akademik atas
bimbingannya kepada penulis dalam menempuh pendidikan di Program Studi Magister Biologi.
10. Teman-teman seperjuangan satu ruang lingkup penelitian, Arini Pradita Roselyn, S.Si, M.Si., Henny Marlinda, S.Si, M.Si dan Elfa Verda Puspita, S.Si, M.Si., yang telah menjadi partner selama penelitian berlangsung. 11. Sahabat-sahabat ku tersayang drg. Tri Septi Utami, Nur Wahyu Ningsih,
S.E, M.S, Ak., Arini Pradita Roselyn, S.Si, M.Si., dan Ari Khusuma, S.Si, M.Biomed yang walau jauh di mata tetapi tetap dekat di hati atas doa, semangat dan dukungan kepada penulis.
canda tawa, dan kebersamannya kepada penulis.
13. Semua pihak yang telah banyak membantu dalam proses perkuliahan, penelitian hingga akhir, yang tidak dapat dituliskan satu persatu di tesis ini.
14. Almamater tercinta Universitas Lampung.
Penulis berharap semoga Allah SWT membalas kebaikan yang telah mereka berikan. Dan semoga tesis ini bermanfaat bagi kita semua. Amiin Ya Rabbal Alamin.
Bandar Lampung, Mei 2015 Penulis
Halaman
LEMBAR PERSETUJUAN ... i
ABSTRAK... ii
DAFTAR ISI ... iii
DAFTAR GAMBAR ... iv
DAFTAR TABEL ... v
I. PENDAHULUAN A. Latar Belakang dan Masalah ... 1
B. Rumusan Masalah... 8
C. Tujuan Penelitian ... 8
D. Manfaat Penelitian ... 8
E. Kerangka Pemikiran ... 9
F. Hipotesis ... 11
II. TINJAUAN PUSTAKA A. Biologi Sel Kanker ... 12
B. Hepar... 16
C. Kanker Hepar... 17
H. Patofisiologi Kanker Hepar ... 21
I. Karsinogenesis ... 22
J. Mencit (Mus musculus)... 27
K. Sirsak (Annona muricata)... 28
L. Taurin... 32
M. Benzo(α)piren... 34
III. METODE PENELITIAN A. Waktu dan Tempat... 37
B. Alat dan Bahan ... 37
C. Rancangan Percobaan ... 38
D. Parameter ... 38
E. Alur Penelitian ... 39
F. Pelaksanaan... 39
1. Hewan Uji ... 39
2. Aklimasi Hewan Uji ... 39
3. Makanan dan Minuman Mencit ... 40
4. Induksi Karsinogenik terhadap Hewan Uji dengan Benzo(α)piren... 41
5. Penentuan Dosis dan Pemberian Senyawa Taurin serta Ekstrak Daun Sirsak ... 41
6. Uji Antikanker Taurin terhadap Hewan Uji... 42
7. Preparasi Pembuatan Sediaan Histologis Hepar ... 43
G. Penilaian Histopatologi... 48
H. Prosedur Pengamatan Bobot Hepar Mencit... 49
I. Analisis Data... 49
IV. HASIL DAN PEMBAHASAN A. Berat Badan Mencit yang TerinduksiBenzo(α)piren... 50
B. Bobot Hepar Mencit yangTerinduksi Benzo(α)piren... 53
C. Histologis Hepar Mencit yangTerinduksi Benzo(α)piren... 55
B. Saran ... 72
DAFTAR PUSTAKA
Halaman
Tabel 1. Bahan dan Komposisi Pakan Mencit... 40
Tabel 2. Dosis pada Tiap Kelompok Perlakuan ... 43
Tabel 3. Skor Penilaian Derajat Kerusakan Histopatologi Sel Hepar ... 48
Tabel 4. Bobot Hepar Mencit pada Tiap Kelompok Perlakuan ... 53
Tabel 5. Analisis Data Kerusakan Hepar dengan Pengujian Kruskal-Wallis... 55
Tabel 6. BB Hari Perlakuan ke-10... 81
Tabel 7. BB Hari Perlakuan ke-20... 81
Tabel 8. BB Hari Perlakuan ke-25... 81
Tabel 9. Bobot Hepar (g) ... 86
Tabel 10. Histopatologi Hati Mencit Dosis Kontrol Normal ... 89
Tabel 11. Histopatologi Hati Mencit Dosis Kontrol Positif ... 89
Tabel 12. Histopatologi Hati Mencit Preventif ... 89
Tabel 13. Histopatologi Hati Mencit Dosis 2 ... 90
Halaman
Gambar 1. Struktur Taurin. ... 6
Gambar 2. Skema Sederhana Dasar Molekuler Kanker ... 13
Gambar 3. Enam Tanda Utama Kanker... 15
Gambar 4. Mencit Putih (Mus musculus) ... 27
Gambar 5. Daun Sirsak (Annona muricata) ... 30
Gambar 6. Pohon dan Daun Sirsak... 31
Gambar 7. Bagan Alur Pembuatan Ekstak Daun Sirsak ... 42
Gambar 8. Histogram Perubahan Berat Badan Mencit (g) pada Tiap Kelompok Perlakuan . ... 50
Gambar 9. Struktur Histologis Hepar Kelompok Kontrol Normal. ... 59
Gambar 10. Struktur Histologis Hepar Kelompok Kontrol Positif ... 60
Gambar 11. Struktur Histologis Hepar Kelompok Preventif ... 64
Gambar 12. Struktur Histologis Hepar Kelompok Taurin Dosis 2. ... 65
Gambar 13. Struktur Histologis Hepar KelompokDosis Ekstrak Daun Sirsak ... 67
Gambar 14. Perbandingan Struktur Histologis Hepar pada Tiap Kelompok Perlakuan ... 71
Gambar 15. Pemeliharaan Mencit (Mus Musculus) ... 95
Gambar 16. Larutan Taurin, Ekstrak Daun Sirsak dan Benzo(α)piren... 95
Gambar 17. Ekstrak Daun Sirsak Laruta Taurin ... 95
Gambar 18. Pemberian Zat Uji, Sonde, Pengukuran BB Mencit ... 96
I. PENDAHULUAN
A. Latar Belakang dan Masalah
Neoplasma (tumor) terutama yang bersifat ganas (kanker), diketahui masih mempunyai mortalitas yang tinggi, dan pengobatannya saat ini belum memuaskan. Menurut WHO, Indonesia menduduki peringkat ke-6 dengan tingkat kejadian kanker adalah 180 per 100.000 penduduk.Hepatocellular Cell Carsinoma(HCC) merupakan salah satu dari neoplasma organ dalam yang paling umum terdapat pada manusia. Kanker merupakan suatu jenis penyakit berupa pertumbuhan sel yang tidak terkendali secara normal. Penyakit ini dapat menyerang semua bagian organ tubuh dan dapat menyebabkan kematian, serta dapat terjadi pada manusia dari semua kelompok usia dan ras. Diperkirakan kematian akibat kanker di dunia mencapai 4,3 juta per tahun dan 2,3 juta diantaranya ditemukan di negara berkembang. Di Indonesia diperkirakan terdapat 100 penderita kanker baru untuk setiap 100.000 penduduk per tahunnya(Mun’imet al, 2006).
Kanker merupakan penyakit dengan multi faktor penyebab yang terbentuk dalam jangka waktu yang lama dan mengalami kemajuan melalui stadium yang berbeda-beda. Kanker dapat terjadi karena adanya perubahan DNA sel atau disebut juga mutasi, yang dapat terjadi pada sekuens DNA yang
apoptosis seperti p53. Kanker merupakan penyakit yang ditandai dengan terjadinya pembentukan jaringan baru yang abnormal dan bersifat ganas serta tidak terkendali (Zeinabet al, 2012).
Kanker dapat disebabkan oleh faktor endogen maupun eksogen. Faktor endogen dapat berupa faktor genetik, penyakit, dan hormon. Sedangkan faktor eksogen dapat berasal dari makanan, virus, senyawa-senyawa karsinogenik seperti polusi udara, zat warna, logam-logam karsinogen, dan banyak penyebab lainnya seperti siklofosfamida (Hanahan and Weinberg, 2000).
Zat-zat yang dapat menyebabkan mutasi disebut dengan mutagen. Salah satu mutagen adalah polisiklik aromatis hidrokarbon (PAH) yang merupakan kelompok dari senyawa berukuran besar dengan dua atau lebih cincin
aromatik yang umumnya terbuat dari atom karbon dan hidrogen yang bersifat karsinogen. PAH ditemukan pada saat pembakaran bahan organik yang tidak
sempurna. Benzo(α)pirenmerupakan salah satu dari tiga produk degradasi PAH yang berpotensi sebagai bahan sitotoksik, mutagenik, agen
imunosupresif, dan karsinogen. Beberapa penelitian menyatakan bahwa benzo(α)piren adalah mutagen dan dapat menginduksi pertumbuhan kanker (Halliwel and Gutteridge, 1998).
Kejadian dan jenis penyakit kanker erat hubungannya dengan berbagai faktor
antara lain adalah jenis kelamin, usia, ras, dan paparan terhadap beberapa zat
dapat dibagi dalam beberapa kelompok baik yang sintetik maupun yang
berasal dari alam (Weizman dan Yanif, 1999).
Pengobatan kanker secara medis dilakukan dengan terapi penyinaran,
pembedahan, dan kemoterapi (Ceruttiet al, 1994). Obat antikanker yang ideal seharusnya dapat menghabiskan sel kanker tanpa membahayakan jaringan sehat. Namun sampai sekarang belum ditemukan obat yang memenuhi kriteria demikian. Pemakaian sitostatika sebagai antikanker menimbulkan efek samping yang besar, diantaranya kerusakan pada jaringan dengan laju proliferasi yang tinggi. Sebagian besar sitostatika juga bersifat karsinogenik pada dosis tinggi. Oleh karena itulah pengembangan penelitian terus
dilakukan sampai saat ini untuk menemukan obat antikanker yang ideal (Corwin, 1997).
Pengobatan dengan menggunakan obat-obatan/ kemoterapi yang sekarang diterapkan, seperti taxol, klorambusil, alkaloid indo seperti vinblastin, dan vinkristin, bekerja dengan cara mempengaruhi metabolisme asam nukleat terutama DNA atau biosintesis protein secara tidak selektif, sehingga bersifat toksik tidak hanya pada sel kanker tetapi juga pada sel normal, terutama sel normal yang memiliki kecepatan proliferasi yang tinggi seperti sumsum tulang belakang (Siswandono, 2000).
menggali sumber alam nabati yang secara empiris telah banyak digunakan oleh masyarakat untuk mengobati kanker. Mengenai efek suatu bahan sangat erat kaitannya dengan senyawa kimia yang terkandung dalam bahan tersebut, salah satunya adalah daun sirsak. Dalam daun sirsak terkandung senyawa alkaloid, saponin, dan flavonoid (Gotamaet al, 1999).
Diantara senyawa-senyawa tersebut, flavonoid mempunyai bermacam-macam efek, yaitu efek antitumor, anti HIV, immunostimulant, antioksidan,
analgesik, antiradang (anti inflamasi), antivirus, antibakteri, antifungal, antidiare, antihepatotoksik, antihiperglikermik, dan sebagai vasodilator (Tjindarbumi dan Mangunkusumo, 2001).
Kanker merupakan penyakit yang menempati peringkat kedua sebagai
penyebab kematian. Hal ini menyebabkan pengembangan penelitian untuk
menemukan obat-obat baru terus berkembang, bahkan dari bahan alampun
kini banyak diteliti untuk pengobatan penyakit kanker ini (Albertet al, 1994).
Salah satu jenis tanaman yang dapat yang memiliki aktivitas sebagai agen kemopreventif adalah sirsak, terutama pada daunnya. Zat aktif dalam tanaman sirsak yang mampu berperan sebagai antikanker adalahAnnonaceous
acetogenins. Acetogeninsmerupakan inhibitor kuat dari kompleks I mitokondria atauNADH dehidrogenase. Zat ini akan mengakibatkan
terkendali. Selain itu, senyawa triterpenoid dan flavonoid di dalam daun sirsak juga memiliki efek antikarsinogenesis (Retnani, 2011).
Pengobatan kanker menggunakan tanaman obat yang di dalamnya terkandung senyawa flavonoid. Senyawa flavonoid memiliki kemampuan menangkap radikal bebas yang dapat menyebabkan kanker. Flavonoid merupakan
senyawa golongan fenol yang pada umumnya banyak terdapat pada tumbuhan berpembuluh. Sirsak (Annona muricata) merupakan tanaman yang berasal dari negara Amerika Selatan, yaitu Meksiko. Keberadaan tanaman tersebut diduga dibawa oleh orang Belanda semasa zaman penjajahan. Tanaman ini telah menyebar di seluruh pelosok Indonesia, walaupun masih ditanam di pekarangan rumah. Penyebaran tanaman sirsak di Indonesia dapat dijumpai di daerah Jawa Barat, terutama Rajamandala dan Bandung Selatan serta Jawa Tengah di daerah Karanganyar (Mahendra, 2005).
dalam tubuh memproduksi asam hipoklorit (HOCl) sebagai produk
sampingan. Bahan kimia ini merupakan oksidan kuat yang memiliki potensi merusak sel. Taurin bereaksi dengan proses biokimia tersebut untuk
menghasilkan senyawataurine chloramineyang kurang reaktif (Murray, 1996).
Gambar 1. Struktur Taurin (Murray, 1996)
Aroumaet al(1988), berpendapat taurin mampu secara langsung mengikat spesies oksigen reaktif klasik (ROS) pada antioksidan. Satu-satunya spesies reaktif yang langsung dinetralkan oleh taurin adalah HOCl, yang diubah menjadiN chlorotaurine. DikarenakanN-chlorotaurinekurang beracun dari HOCl, sehingga netralisasi HOCl oleh taurin mungkin membatasi miokard kerusakan yang disebabkan oleh neutrofil. Hal ini menyebabkan
pembentukanN-chlorotaurineyang memiliki aktivitas antioksidan yang paling penting dari taurin.
memanfaatkan tingkat farmakologi dari b-amino asam untuk meminimalkan kerusakan oksidatif (Schafferet al, 2009).
Taurin dapat berfungsi sebagai antikarsinogenik, manfaatnya sebagai antikarsinogenik yaitu pelindung sel-sel tubuh dari kerusakan yang
disebabkan oleh radikal bebas. Taurin dianggap sebagai faktor penting untuk mengontrol berbagai perubahan biokimia yang terjadi selama proses penuaan dan membantu pembuangan radikal bebas (Redmonet al, 1983).
Beberapa studi telah meneliti potensi kerusakan oksidatif oleh taurin. Dalam satu studi tersebut, Haradaet al(1988), menunjukkan bahwa induksi yang potensial adalah taurin, menunjukkan tekanan oksidatif yang disebabkan adanyaadriamycindalam hati, suatu efek dianggap memperburuk
cardiotoxicitydariadriamycin. Dalam penelitian terkait, Schafferet al (2009), juga menemukan bahwa defisiensi obat induksi taurin meningkatkan angiotensin II-dimediasi apoptosis yang dapat mencegah kanker. Sejauh ini belum pernah dilakukan penelitian tentang pemberian senyawa taurin dan ekstrak daun sirsak (Annona muricata)sebagai anti kanker, oleh karena itu akan dilakukan penelitian tentang pemberian senyawa taurin dan ekstrak daun sirsak (Annona muricata)sebagai anti kanker terhadap gambaran
B. Rumusan Masalah
Berdasarkan latar belakang yang dikemukakan di atas, maka rumusan
masalah dalam penelitian ini yaitu apakah pemberian taurin dan ekstrak daun sirsak berpengaruh terhadap gambaran histopatologi hepar mencit putih (Mus musculus) yang diinduksi benzo(α)piren.
C. Tujuan Penelitian
Tujuan penelitian ini adalah untuk mengetahui pengaruh pemberian taurin dan ekstrak daun sirsak terhadap gambaran histopatologi hepar mencit (Mus musculus) yang terinduksi benzo(α)piren.
D. Manfaat Penelitian
Hasil penelitian ini diharapkan :
1. Dapat berguna bagi pengembangan penelitian dari taurin sebagai antikanker secarain vivo.
2. Penelitian aktivitas taurin dan daun sirsak diharapkan dapat
dikembangkan sebagai bahankemopreventif baru dalam pencegahan kanker hati yang lebih poten dan aman.
E. Kerangka Pemikiran
Kanker merupakan suatu penyakit yang ditandai dengan adanya kerusakan dan ketidaknormalan gen yang mengatur pertumbuhan dan diferensiasi sel-sel yang mengakibatkan timbulnya mutasi genetik yang sangat potensial menghasilkan sel kanker. Di Indonesia, penyakit kanker merupakan
penyebab kematian sekitar 4,3% dan menduduki peringkat keenam dengan kecenderungan yang semakin meningkat.
Adanya kecenderungan peningkatan jumlah pasien penderita kanker di Indonesia erat kaitannya dengan perubahan perilaku atau gaya hidup(life style)masyarakat yang semakin modern antara lain mengkonsumsi bahan makanan instant atau melalui proses pengolahan yang tidak sehat yang kemungkinan banyak mengandung karsinogen. Salah satu jenis kanker berbahaya adalah kanker hati. Kanker hati merupakan gangguan pada hepar yang berawal dari tumor hepar, kondisi ini dimulai dari sirosis. Kanker merupakan penyakit yang ditandai dengan terjadinya pembentukan jaringan baru yang abnormal dan bersifat ganas serta tidak terkendali. Oleh sebab itu upaya penemuan obat kanker yang efektif dan selektif sebagai usaha
pengobatan kanker secara kemoterapi menjadi sangat penting saat ini disamping pengobatan secara fisik seperti pembedahan dan radioterapi.
Pada umumnya obat kanker yang berasal dari senyawa kimia sintetik
digunakan secara tradisional sebagai obat dan pencegah penyakit kanker yang tidak menimbulkan efek toksik yang merugikan. Disamping itu juga ada senyawa taurin yang berfungsi sebagai antioksidan. Antioksidan membantu menghentikan proses perusakan sel dengan cara memberikan elektron kepada radikal bebas. Dengan demikian dapat dikatakan jika suatu senyawa berfungsi sebagai antioksidan maka dapat berfungsi juga sebagai anti kanker. Oleh sebab itu perlu diteliti penggunaan senyawa taurin dan ekstrak daun sirsak sebagai anti kanker pada mencit yang diinduksi zat karsinogenik yaitu benzo(α)piren.
Belum ada penelitian tentang bagaimana gambaran histopatologi pada sel hepar yang rusak, yang diberi taurin dan ekstrak daun sirsak, apakah ada perubahan gambaran histopatologi hepar yang diinduksi zat karsinogenik. Penelitian ini dilakukan pada mencit putih yang diinduksi dengan
F. Hipotesis
Hipotesis yang diajukan dalam penelitian ini adalah pemberian taurin dan ekstrak daun sirsak (Annona muricata) dapat memperbaiki dan melindungi kerusakan histopatologi hepar mencit (Mus musculus) yang diinduksi
II. TINJAUAN PUSTAKA
A. Biologi Sel Kanker
Kanker adalah penyakit yang ditandai dengan pembelahan sel yang tidak terkendali. Sel kanker memiliki kemampuan untuk menyerang jaringan biologis lainnya, baik dengan pertumbuhan langsung di jaringan yang bersebelahan (invasi) atau dengan migrasi sel ke tempat yang jauh
(metastasis). Pertumbuhan yang tidak terkendali tersebut disebabkan adanya kerusakan DNA, menyebabkan mutasi di gen vital yang mengontrol
pembelahan sel. Beberapa buah mutasi dibutuhkan untuk mengubah sel normal menjadi sel kanker. Mutasi tersebut dapat diakibatkan oleh agen kimia maupun agen fisik yang disebut karsinogen. Mutasi dapat terjadi secara spontan ataupun diwariskan (mutasi germline) (Kumar dan Robin, 1995).
Kanker disebabkan adanya genom abnormal, terjadi karena adanya kerusakan gen yang mengatur pertumbuhan diferensiasi sel. Gen yang mengatur
pertumbuhan dan diferensiasi sel disebutprotooncogendantumor suppressor genes, dan terdapat pada semua kromosom dengan jumlah yang banyak.
kelompok gen yang berperan pada DNA repair yang berpengaruh pada proliferasi sel. Ketidakmampuan dalam memperbaiki DNA yang rusak menyebabkan terjadinya mutasi pada genom dan menyebabkan terjadinya keganasan. Proses karsinogenesis merupakan suatu proses multi tahapan dan terjadi baik secara fenotip dan genetik. Pada tingkat molekuler, suatu progresi merupakan hasil dari sekumpulanlesi genetic(Maramis, 2005).
The six hallmark of cancer( enam karakter sel kanker ) adalah kontek enam perubahan mendasar dalam fisiologi sel yang secara bersama-sama
menentukan fenotipe keganasan (Karsono, 2006) (Gambar 3).
1. Growth signal autonomy: Sel normal memerlukan sinyal eksternal untuk pertumbuhan dan pembelahannya, sedang sel kanker mampu
memproduksigrowth factorsdangrowth factor receptorssendiri. Dalam proliferasinya sel kanker tidak tergantung pada sinyal pertumbuhan normal. Mutasi yang dimilikinya memungkinkan sel kanker untuk memperpendekgrowth factor pathways.
2. Evasion Growth inhibitory signal: Sel normal merespon sinyal
penghambatan pertumbuhan untuk mencapai homeostasis. Jadi ada waktu tertentu bagi sel normal untuk proliferasi dan istirahat. Sel kanker tidak mengenal dan tidak merespon sinyal penghambatan pertumbuhan, keadaan ini banyak disebabkan adanya mutasi pada beberapa gen (protoonkogen) pada sel kanker.
3. Evasion of Apoptosis Signal: Pada sel normal kerusakan DNA akan dikurangi jumlahnya dengan mekanisme apoptosis, bila ada kerusakan DNA yang tidak bisa lagi direparasi. Sel kanker tidak memiliki kepekaan terhadap sinyal apoptosis. Kegagalan sel kanker dalam merespon sinyal apoptosis lebih disebabkan karena mutasinya gen-gen regulator apoptosis dan gen-gen sinyal apoptosis.
4. Unlimited replicative potential: Sel normal mengenal dan mampu
pemendekan telomere pada kromosom yang akan berlangsung setiap ada replikasi DNA. Sel kanker memiliki mekanisme tertentu untuk tetap menjaga telomere yang panjang, hingga memungkinkan untuk tetap membelah diri. Kecacatan dalam regulasi pemendekan telomere inilah yang memungkinkan sel kanker memilikiunlimited replicative potential.
Gambar 3. Enam tanda utama kanker (The Hallmarks of Cancer, Cell). Sebagian besar kanker memperoleh berbagai kemampuan ini selama perkembangannya melalui mutasi di gen tertentu (Karsono, 2006).
5. Angiogenesis (formation of blood vessel): sel normal memiliki
ketergantungan terhadap pembuluh darah untuk mendapatkan suplai oksigen dan nutrient yang diperlukan untuk hidup. Namun bentuk dan karakter pembuluh darah sel normal lebih sederhana atau konstan sampai dengan sel dewasa. Sel kanker mampu menginduksi angiogenesis, yaitu pertumbuhan pembuluh darah baru di sekitar jaringan kanker.
kanker dan ekspansi kebagian lain dari tubuh (metastase). Kecacatan pada pengaturan keseimbanganinduser angiogenikdan inhibitornya dapat mengaktifkanangiogenic switch.
6. Invasion and metastasis: Sel normal berpindah ke lokasi lain di dalam
tubuh. Perpindahan sel kanker dari lokasi primernya ke lokasi sekunder atau tertiernya merupakan faktor utama adanya kematian yang disebabkan karena kanker. Mutasi memungkinkan peningkatan aktivitas enzim enzim yang terlibat invasi sel kanker (MMPs). Mutasi juga memungkinkan berkurangnya atau hilangnya adhesi antar sel oleh molekul-molekul adhesi sel, meningkatnyaattachment, degradasi membran basal, serta migrasi sel kanker (Karsono, 2006).
B. Hepar
Hepar merupakan salah satu organ dalam tubuh yang mempunyai berat rata-rata 1500gr atau 2.5% BB orang dewasa normal, yang terletak pada kavum abdominalisregio hipokondriumbagian kanan. Terbagi menjadi tiga lobus yaitu lobus kanan (terbesar), kiri dan kaudal (terkecil). Hepar atau hepar mendapat darah dari dua sumber, yaituarteri hepaticadan vena porta. Hepar penting untuk mempertahankan hidup dan berperan pada hampir setiap fungsi metabolisme tubuh dan bertanggung jawab lebih dari 500 aktivitas. Seluruh sel dalam hepar mempunyai kemampuan untuk regenerasi. Sel hepar
tergolong sel yang stabil. Dalam keadaan normal sel hepar tidak mengalami replikasi, tetapi apabila hepar mengalami cedera sel terangsang untuk
penyembuhan kerusakan hepar akibat infeksi virus, obat atau trauma. Kanker hepar merupakan salah satu gangguan pada hepar yang berawal dari tumor hepar (adenoma hepar), kondisi ini dimulai dari sirosis (Weizman and Yanif, 1999).
Hepar (hepar) merupakan organ terbesar dalam tubuh manusia. Didalam hepar terjadi proses-proses penting bagi kehidupan, yaitu proses penyimpanan energi, pembentukan protein dan asam empedu, pengaturan metabolisme kolesterol, dan penetralan racun yang masuk dalam tubuh, sehingga timbulnya kerusakan pada hepar akan mengganggu proses penting dalam kehidupan tersebut (Kumar dan Robin, 1995).
Nekrosis hepar terjadi karena interaksi radikal bebas hasil metabolisme obat dan metabolisme tubuh dengan biomolekul penyusun membran sel hepar. Interaksi radikal bebas ini menyebabkan perubahan dan merusak membran sel. Kerusakan sel hepar menyebabkan meningkatnya lipid peroksida darah karena lipid peroksida tubuh tidak dapat lagi didetoksifikasi dalam hepar (Weizman dan Yanif, 1999).
C. Kanker Hepar
pada hepar, akibat pertumbuhan sel-sel hepar yang tidak terkendali yang biasanya diawali oleh sirosis yang merupakan kondisi premaligna. Gambaran klinis dari penyakit ini antara lain (Corwin, 1997) :
1. Pada stadium awal gejala belum jelas 2. Adanya oedema
3. Perasaan penuh pada abdomen
4. Hemoperitoneum, adanya darah pada rongga perut 5. Timbul gejala ikterus merupakan gejala kuning
6. Keluhan berkaitan dengan saluran pencernaan seperti mual dan muntah
D. DefinisiHepatocellular Carcinoma(HCC)
Hepatocellular Carcinoma(HCC) adalah jenis tumor yang ditemukan di organ hepar yang dikenal sebagai kanker hepar primer atau hepatoma. Setiap tahun, karsinoma hepatoseluler didiagnosis pada lebih dari setengah juta orang di seluruh dunia, dimana sekitar tiga per empat kasus-kasus kanker hepar ditemukan di Asia Tenggara antara lain China, Hong Kong, Taiwan, Korea, dan Japan. Hepar terbentuk dari tipe-tipe sel yang berbeda, contohnya : pembuluh-pembuluh empedu, pembuluh-pembuluh darah, dan sel-sel
E. Patologi Karsinoma Hepatoseluler (Hepatocellular Carcinoma)
Secara makroskopis karsinoma hepatoseluler dapat muncul sebagai masa soliter besar, sebagai nodul multipel atau sebagai lesi infiltratif difus. Secara mikroskopis, neoplasma disusun oleh sel-sel hepar abnormal dengan berbagai diferensisasi. Tumor dengan diferensiasi yang lebih baik disusun oleh sel-sel mirip sel hepar yang teratur di dalam pita-pita yang terpisah oleh sinusoid-sinusoid. Sel-sel ini berinti besar yang memperlihatkan anak inti yang menonjol dan hiperkromasi dan dapat mengandung empedu di dalam sitoplasmanya. Tumor–tumor yang kurang berdiferensiasi baik mempunyai lembaran-lembaran sel-sel anaplastik. Invasi pada radikulus vena hepatika merupakan gambaran khas yang membedakan dengan adenoma. Sulit membedakan karsinoma hepatoselular berdiferensiasi buruk dengan
carsinoma metastatic. Pewarnaan imunohistokimia dapat memperlihatkanalfa
–fetoproteindidalam sel neoplasma. Karsinoma hepatoseluler juga mensekresi peningkatan kadar darah di jumpai pada 90% pasien. Karsinoma hepatoseluler cenderung bermetastasis dini melalui pembuluh limfa ke kelenjar getah bening regional dan melalui darah menimbulkan metastasis pada paru. Metastasis ke tempat lain terjadi pada tahap akhir (Chandrasoma, 2005).
F. Stadium Klinis
Tingkat penyakit (stadium) hepatoma primer terdiri dari :
Ib : Tumor tunggal atau dua tumor dengan diameter≤ 5 cmpada separuh hepar, tanpa emboli tumor, tanpa metastasis kelenjarlimfe peritoneal
ataupun jauh.
IIa : Tumor tunggal atau dua tumor dengan diameter gabungan≤10 cm di separuh hepar, atau dua tumor dengan gabungan≤5 cm di kedua belahan hepar kiri dan kanan tanpa emboli tumor, tanpa metastasis kelenjarlimfe peritonealataupun jauh
IIb : Tumor tunggal ataumultipledengan diameter gabungan≥10 cm di separuh hepar, atau tumormultipledengan gabungan≥5 cm di kedua
belahan hepar kiri dan kanan tanpa emboli tumor, tanpa metastasis kelenjarlimfe peritonealataupun jauh
IIIa : Tidak peduli kondisi tumor, terdapat emboli tumor di pembuluh utama vena porta atau vena kava inferior, metastasis kelenjarlimfe peritoneal jauh salah satu daripada nya
IIIb : Tidak peduli kondisi tumor, tidak peduli emboli tumor, metastasis IV : Penyebaran kanker melibatkan beberapa situs di seluruh tubuh.
Seringkali, operasi tidak dianjurkan dan kemoterapi merupakan pilihan terbaik (Desen, 2008).
G. Penyebab Kanker Hepar
1. Aflatoksin,mikrotoksin karsinogenik yang diproduksi oleh jamur
Aspergillus Flavus,yang mengkontaminasi makanan yang disimpan dalam
keadaan lembab
2. Akibat virus hepatitis B 3. Sirosis sel hepar
4. Mengkonsumsi alkohol 5. Radikal bebas
6. Karsinogen yaitu zat-zat yang dapat menyeabkan pertumbuhan kanker, misalnya: benzo(α)piren.
7. Zat pengawet makanan seperti formaldehid, sebagai pengawet bakso atau tahu, zat pewarna tekstil, sepertimethany lyellowpada krupuk, tahu dll. 8. Tidur terlalu malam
9. Hal lainyang dapat memicu timbulnya kanker (Kumar dan Robin, 1995).
H. Patofisiologi Kanker Hepar
Suatu jenis karsinoma sel hepar dengan gambaran spesifik adalahvarian fibrolamelardimana sel hepar neoplastik tersusun dalam pita yang lebar atau lamella yang dipisahkan oleh jaringan fibrosa padat. Varian ini kebanyakan timbul pada wanita muda, tanpa sirosis sebagai faktor predisposisi.
Kanker hepar terbagi dua yaitu : 1. Kanker hepar primer
2. Kanker hepar sekunder
Kanker hepar sekunder timbul akibat metastasis kanker dari bagian tubuh lain, misalnya usus, payudara, kolon, lambung, pankreas,dan lain-lain yang mengalirkan darahnya ke hepar melalui vena porta.
Kanker hepar primer dan sekunder sering bermetastasis keluar hepar, terutama jantung dan paru-paru karena aliran darah dari hepar mula-mula menyerang kedua organ tersebut. Semua jenis kanker hepar memiliki prognosisyang sangat buruk, dengan angka bertahan hidup 5 tahun sekitar 1% (Corwin, 1997).
I. Karsinogenesis
Menurut Schneider (1997) kanker terjadi karena adanya kerusakan atau transformasi protoonkogen dan gen penghambat tumor sehingga terjadi perubahan dalam cetakan protein dari yang telah diprogramkan semula yang mengakibatkan timbulnya sel kanker. Karena itu terjadi kekeliruan transkripsi dan translasi gen sehingga terbentuk protein abnormal yang terlepas dari kendali normal pengaturan dan koordinasi pertumbuhan dan diferensiasi sel. Pengaturan sifat individu dilakukan oleh gen (DNA) dengan pembentukan protein melalui proses transkripsi dan translasi.
Karsinogenesis merupakan suatu proses multi tahap,dengan 3 tahapan (Schneider, 1997), yaitu :
1. Inisiasi (Initiation)
dapat menimbulkan mutasi gen. Pada tahap inisiasi karsinogen bereaksi dengan DNA, menyebabkan amplifikasi gen dan produksicopy multiple gen.
2. Promosi (Promotion)
Promoter adalah zat non mutagen tetapi dapat meningkatkan reaksi karsinogen dan tidak menimbulkan amplifikasi gen. Sifat-sifat promotor ialah: mengikuti kerja inisiator, perlu paparan berkali-kali, keadaan dapat reversible, dapat mengubah ekspresi gen seperti: hiperplasia, induksi
enzim, induksi diferensiasi. 3. Progresi (Progression)
Pada progresi ini terjadi aktivasi, mutasi atau hilangnya gen. Pada progresi ini timbul perubahan benigna menjadi pre-maligna dan maligna.
Dalam karsinogenesis ada 3 mekanisme yang terlibat: a. Onkogen yang dapat menginduksi timbulnya kanker.
b. Antionkogen atau gen suppressor yang dapat mencegah timbulnya kanker. c. Gen modulator yang dapat mempengaruhi eksperimen karakteristik gen
yang mempengaruhi penyebaran kanker.
terbentuk sel yang normal dan bila gagal akan terbentuk sel yang abnormal, yaitu sel yang mengalami mutasi, atau transformasi, yang pada akhirnya dapat menjadi sel kanker.
Teori karsinogenesis untuk menerangkan bagaimana kanker itu terjadi didasarkan atas:
1. Mutasi Somatik, yaitu perubahan urutan letak nukleotida dalam asam amino rantai DNA, yang menyebabkan perubahan kode genetik. Menghasilkan produksi protein yang abnormal, sehingga regulasi
pertumbuhan dan diferensiasi sel terganggu, sel menjadi otonom dan lepas dari regulasi normal dan sel dapat tumbuh tanpa batas.
2. Penyimpangan Diferensiasi Sel (Teori Epigenetik), terjadinya gangguan system atau mekanisme regulasi gen seperti represif, depresi serta ekspresi regulasi, sehingga timbul gangguan pertumbuhan dan diferensiasi sel. Defek yang terjadi karena mekanisme regulasi gen yang mengatur pertumbuhan, dan bukan pada struktur gen itu sendiri, maka teori ini disebut teori epigenetik.
4. Seleksi Sel. Pada sel tubuh manusia diperkirakan terdapat lebih dari 50.000 gen dan masing-masing gen mempunyai fungsi tersendiri. Di dalam tubuh setiap saat ada sel yang mati dan ada pula sel baru yang terbentuk melalui proses mitosis. Karena adanya mutasi maka timbul sel yang defektif dan akan mati atau tidak dapat mengadakan mitosis lebih lanjut. Hanya sel-sel yang baik dan memenuhi syarat tertentu yang akan dapat tetap bertahan hidup. Dalam menyeleksi sel mana yang boleh terus hidup dan berkembang, terjadi kekeliruan. Di sini ada sel yang mengalami mutasi atau transformasi yang lepas dari seleksi dan terus berkembang menjadi sel kanker (King, 2000).
Keganasan pada sel eukariota terjadi akibat adanya perubahan perilaku sel yang abnormal, yaitu sel mempunyai kemampuan proliferasi dan diferensiasi yang sangat tinggi. Perubahan perilaku tersebut terjadi karena sel
mengekspresikan berbagai protein yang abnormal. Berbagai protein abnormal muncul karena sel mengalami mutasi/kecacatan gen, khususnya gen yang mengkode protein, yang sangat berperan pada pengaturan siklus pembelahan sel. Contohnya adalah gen yang termasuk kelompokprotooncogenatau kelompoktumor suppressorgene, serta gen yang mengatur dan menghambat pemendekan telomer pada ujung kromosom.
Pertumbuhan kanker merupakan proses mikroevolusioner yang dapat
sama. Selanjutnya perubahan genetik (misalnya aktivasi onkogen) terjadi dalam koloni sel yang abnormal dan menjadi tumor ganas (Schneider, 1997). Proses karsinogenesis terjadi melalui beberapa fase yang meliputi fase inisiasi, fase promosi, fase progresi, dan metastasis. Inisiasi merupakan fase pertama dan merupakan akibat adanya perubahan genetik yang menyebabkan adanya proliferasi abnormal dari satu sel. Promosi merupakan kelanjutan inisiasi, yaitu adanya pacuan dari faktor promosi tumor yang menyebabkan pertumbuhan yang cepat dan pembentukan tumor benigna. Progresi merupakan perubahan genetik semakin bertambah banyak sehingga akan menambah koloni sel tumor. Tumor pada stadium ini bersifat invasif dan seringkali diikuti dengan proses pembentukan pembuluh darah baru yang dinamakan angiogenesis. Fase berikutnya adalah metastasis, yaitu
perkembangan tumor yang bersifat malignan dan terjadinya pelepasan sel-sel tumor ganas dari koloni primernya. Sel-sel tumor ganas ini dapat memasuki saluran limfatik, sehingga dapat menyebar ke seluruh tubuh dan berkembang di tempat yang jauh (Schneider, 1997).
J. Mencit (Mus musculus)
Klasifikasi mencit putih menurut Pramono dan Malole (1989) adalah sebagai berikut :
Kingdom : Animalia Filum : Chordata Sub filum : Vertebrata Class : Mamalia Sub class : Theria
Ordo : Rodentia
Sub ordo : Myomorpha Famili : Muridae Sub family : Murinae
Genus :Mus
Species :Mus musculus
Gambar 4. Mencit putih (Mus musculus)(Pramono dan Malole, 1989).
Mencit merupakan hewan percobaan yang banyak digunakan dalam
penelitian biomedis dan kedokteran. Hal tersebut disebabkan oleh beberapa alasan, yaitu mencit memiliki tingkat reproduksi yang tinggi dan periode gestasi yang pendek. Hewan tersebut juga merupakan model yang cukup repesentatif untuk berbagai model penyakit kanker dan kelainan manusia. Selain itu, hewan tersebut mudah untuk ditangani, pemeliharaannya cukup murah, dan terdapat banyak literatur yang dapat digunakan berkaitan dengan hewan tersebut (Pramono dan Malole, 1989).
K. Sirsak (Annona muricata)
tanaman sirsak dapat digunakan sebagai obat tradisional, termasuk kulit kayu, daun, akar, buah, dan biji. Buah sirsak umumnya digunakan untuk mengobati penyakit yang disebabkan oleh cacing dan parasit, mengobati demam,
meningkatkan produksi ASI pada ibu menyusui, dan untuk diare dan disentri. Biji yang dihancurkan dapat digunakan sebagai vermifug dan antelmintik terhadap internal dan eksternal parasit dan cacing (Thompsond, 1994).
Bagian lain pada tanaman sirsak yang terkenal dapat digunakan sebagai obat-obatan adalah daun. Daun sirsak banyak dimanfaatkan sebagai obat herbal seperti untuk penyakit kulit, rematik, batuk dan flu, serta antikanker dan hipertensi. Daun sirsak biasa dikonsumsi dalam bentuk teh. Teh daun sirsak digunakan sebagai obat radang selaput lendir hidung. Rebusan daun sirsak juga efektif digunakan untuk kutu rambut dan kutu busuk. Daun segar yang dihaluskan mampu membantu penyembuhan luka pada kulit. Penduduk di beberapa negara seperti Brazil dan Peru diketahui menggunakan daun sirsak sebagai obat diabetes (Mahendra, 2005).
Menurut Retnani (2011), daun sirsak mengandung flavonoid, alkaloid, asam lemak, fitosterol, mirisil alkohol dan anonol. Senyawa pada daun sirsak yang diduga memiliki khasiat antidiabetes adalah senyawa alkaloid dan flavonoid. Senyawa flavonoid sebenarnya terdapat pada semua bagian tumbuhan termasuk daun, akar, kayu, kulit, tepung sari, bunga, buah, dan biji. Kebanyakan flavonoid berada di dalam tumbuh-tumbuhan kecuali alga. Penyebaran jenis flavonoid pada golongan tumbuhan yaitu pada
Gambar 5. Daun Sirsak (Annona muricata)(Mahendra, 2005)
Tanaman sirsak (Annona muricataLinn.) berasal dari bahasa Belanda, yakni zuurzak, berarti kantong asam. Daun sirsak banyak digunakan sebagai obat herbal untuk mengobati berbagai penyakit, antara lain penyakit asma di Andes Peru, diabetes dan kejang di Amozania Peru (Dewi, 2007).
Senyawa dalam daun sirsak antara lain steroid/terpenoid, flavonoid, kumarin, alkaloid, dan tanin. Senyawa flavonoid berfungsi sebagai antioksidan untuk penyakit kanker, anti mikroba, anti virus, pengatur fotosintetis, dan pengatur tumbuh. Masyarakat Indonesia menggunakan daun sirsak sebagai obat herbal untuk mengobati penyakit kanker, yaitu dengan cara meminum air rebusan daun sirsak segar. Air rebusan daun sirsak segar dapat menimbulkan efek panas seperti pada kemoterapi, namun air rebusan daun sirsak ini hanya membunuh sel-sel yang abnormal (kanker) dan membiarkan sel-sel normal tetap tumbuh. Hal ini berbeda dengan efek yang ditimbulkan pada pengobatan kemoterapi, dimana pengobatan kemoterapi ini tidak saja membunuh sel-sel abnormal (kanker) tetapi sel-sel yang normal pun ikut mati
Klasifikasi tanaman sirsak (Annona muricata)menurut Syamsuhidayat dan Hutapea (1991) adalah sebagai berikut :
Kingdom : Plantae
Divisi : Magnoliophyta Kelas : Magnoliopsida Orde : Magnoliales Famili : Annonaceae Marga :Annona
Species :Annona muricata
Gambar 6. Pohon dan daun sirsak (Annona muricata)(Dalimartha, 2003).
Tumbuhan ini berbentuk pohon, berwarna coklat tua, batang berkayu
(lignosus), silindris, permukaan kasar, percabangan simpodial. Arah tumbuh batang tegak lurus, arah tumbuh cabang ada yang condong ke atas dan ada yang mendatar (Dalimartha, 2003).
L. Taurin
Taurin atauasam 2-aminoethanesulfonikadalah asam organik yang merupakan kandungan utama empedu, dan dapat ditemukan pada jaringan tubuh manusia terutama pada otot rangka, jantung, serta dalam sel darah putih dan sistem saraf pusat. Taurin adalah turunan dari asam amino yang mengandung belerang (sulfhidril),cysteine. Berbeda dengan asam amino yang sudah banyak dikenal, taurin, atau L-taurin khususnya, tidak digunakan sebagai protein blok pembangun. Taurin digunakan untuk membantu
penyerapan lemak dan vitamin yang larut dalam lemak. Taurin juga membantu mengatur detakan jantung, menstabilkan-membran sel, dan memelihara kelangsungan sel-sel otak (Aroumaet al, 1988).
a. Sumber Taurin
Taurin terdapat dalam daging, ikan, telur dan produk susu. Karena manusia dewasa mampu memproduksi zat ini sendiri, asupan dari
makanan bisa dijadikan alternative bila kadar produksi taurin dalam tubuh mulai menurun. Meskipun diet vegetarian tidak mengonsumsi makanan di atas, namun banyak makanan nabati seperti kacang-kacangan dan
b. Fungsi Taurin
1. Taurin untuk meningkatkan performa mental. Seiring dengan proses penuaan, tingkat konsentrasi taurin di otak akan menurun secara perlahan. Tingkat taurin yang tinggi dalam tubuh akan membuat memori dan fungsi mental Anda menjadi lebih baik. Studi ilmiah menemukan bahwa taurin dapat meningkatkan level kewaspadaan dan penalaran verbal.
2. Taurin untuk mencegah penuaan dini. Taurin dapat berfungsi sebagai antioksidan, manfaatnya sebagai antioksidan yaitu pelindung sel-sel tubuh dari kerusakan yang disebabkan oleh radikal bebas. Taurin dianggap sebagai faktor penting untuk mengontrol berbagai perubahan biokimia yang terjadi selama proses penuaan dan membantu
pembuangan radikal bebas.
3. Taurin untuk mencegah gagal jantung. Taurin digunakan untuk membantu menyerap lemak dan vitamin yang larut dalam lemak serta untuk mengatur detak jantung, menjaga stabilitas membran sel, dan mencegah aktivitas berlebih dari sel otak, juga diyakini berguna dalam melindungi terhadap gagal jantung kongestif.
M. Benzo(α)piren
Benzo(α)piren merupakan senyawa hidrokarbon polisiklikaromatik (PAH)
yang digolongkan sebagai senyawa pro karsinogen kuat. Senyawa ini
dijumpai di lingkungan sebagai hasil pirolisis lemak atau sebagai hasil
proses pembakaran yang tidak sempurna, seperti pada daging panggang,
sate, makanan yang diasap, asap rokok dan asap kendaraan bermotor.
Hingga saat ini masih terus berkembang anggapan benzo(α)piren sebagai
penyebab kanker. Sebagai senyawa karsinogen, benzo(α)piren dapat
menimbulkan mutasi gen yang dapat dimanifestasikan sebagai kerusakan
kromosom, yaitu terjadi aberasi atau terbentuk patahan-patahan
kromosom. Pada tahap telofase, fragmen kromosom dan atau massa
kromatin dalam sel akan tertinggal pada sitoplasma membentuk struktur
menyerupai inti sel dengan diameter antara 1/20 sampai 1/5 diameter inti
yang dinamai mikronukleus (MN). Jadi terbentuknya mikronukleus pada
sel merupakan indikasi terjadinya aktivitas mutagenik yang merusak
kromosom dan akhirnya memicu terjadinya kanker (Sumpena, 2009).
Proses metabolisme dan distribusi benzo(α)piren dalam tubuh terjadi secara bertahap dan dalam waktu yang relatif berbeda untuk tiap jenis makhluk hidup. Penelitian pada tikus,benzo(α)piren dapat menginduksi 3 kanker sekaligus antara lain yaitu kanker paru, kanker hepar, kanker darah dan menunjukkan proses distribusibenzo(α)piren bertahap yang
esophagus, usus kecil, dan mencapai darah 30 menit setelah pemaparan (Faust and Reno, 1994).
Secara detail, dalam 5 menit presentase kandunganbenzo(α)pirendalam tiap organ dan jaringan tubuh tikus adalah paru-paru (59.5%),carcass (14.4%), liver (12.5%), darah (3.9%), dan usus (1.9%). Pada menit ke 60, prosentase tersebut menjadi paru-paru (15.4%),carcass(27.1%), liver (15.8%), darah (1.6%), dan usus (9.9%) (Feust dan Reno, 1994). Selain dalam organ-organ tersebut, pada tubuh manusiabenzo(α)piren juga ternyata ditemukan di urin pada wanita hamil dan anak-anak, dalam plasenta, darah pada tali pusat, darah pada ibu hamil, organ reproduksi dan ASI (EPA, 2006).
Pemaparan benzo(α)piren selama kehamilan juga berimbas pada sistem
imun, yaitu perkembanganT lymphocytes(sel limfosit yang bekerja sebagai sel perantara imun yang memiliki reseptor khusus pada permukaan).
Menurut EPA (2006) pada tikus hamil yang dipaksa mengkonsumsi benzo(α)pirenterjadi peningkatan artropithymus sebagai organ penting untuk perkembanganT lymphocyte, dan penurunanT lymphocytepada organ liver embrio tikus akibat injeksi atau ingestibenzo(α)pirenselama masa kehamilan. Bila tikus mengalami pemaparanbenzo(α)pirenpada kulitnya selama kehamilan, terjadi penurunan jumlah reseptorthymic glucocorticoid(hormon asam nukleat yang terdapat pada kelenjar kecil yang terletak di bagian belakang tulang dada atas, yang berfungsi dalam metabolisme karbohidrat, lemak, protein, dan imun), terbentuk ikatan benzo[a]pyrene-hemoglobinadductpada eritrosit, meningkatkan
pembentukan mikronuklei (nucleus kecil yang mengindikasikan kerusakan DNA) pada eritrosit. Peristiwa mutasi pada tingkat DNA yang terjadi pada tikus hamil tidak jauh berbeda pada manusia.
Rojaset al(2004), menemukan bahwa benzo(a)piren menyebabkan kerusakan yang sangat parah pada sel epitel bronchia manusia, yaitu tepatnya pada sel terjadinya permulaanbronchial carcinoma (kanker bronchus), dan terjadi transversi basaguanine-timinepada DNA.
III. METODE PENELITIAN
A. Waktu dan Tempat
Penelitian ini dilakukan pada bulan Desember 2014 - Februari 2015. Pembuatan larutan taurin, ekstrak daun sirsak dan pengamatan mikroskop cahaya dilakukan di Laboratorium Biologi Molekuler FMIPAUniversitas Lampung. Pemeliharaan mencit, menginduksi benzo(α)piren, pemberian taurin dan ekstrak daun sirsak dilakukan di Laboratorium MIPA Terpadu Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Lampung. Pembedahan dan proses mikroteknik dilakukan di Balai Penyidikan dan Pengujian Veteriner (BPPV) Regional III Bandar Lampung.
B. Alat dan Bahan
kertas saring, blender, corong kecil,rotary evaporator, neraca analitik, mikroskop cahaya, counter, penggaris, alat tulis dan kamera.
Bahan-bahan yang digunakan adalah : pakan pelet, air minum, mencit jantan (Mus musculus) galurddyberumur 5-7 minggu dengan berat badan ±20 gram, benzo(a)piren, aquades, daun sirsak (Annona muricata),etanol, aquadest 200 mL, corn oil , taurin,eosin, giemsa dan benzo(α)piren.
C. Rancangan Percobaan
Penelitian yang dilakukan bersifat eksperimental. Oleh karena itu, rancangan eksperimen yang digunakan adalah rancangan acak lengkap yang terdiri atas 5 kelompok perlakuan, dengan masing-masingperlakuan terdiri dari 5 ekor sebagai ulangan. Kelompok I, diberi 0,2 ml corn oil selama 15 hari ;
Kelompok II,diinduksi denganbenzo(α)pirentanpa pemberian bahan uji selama 10 hari ; Kelompok III, diberi taurin dengan 7,8 mg/bb/hari, pagi dan sore = 15,6 mg/bb/haridimulai sejak 15 hari sebelum induksibenzo(α)piren; Kelompok IV,setelah diinduksi benzo(α)piren,daun sirsak dosis 277,8 mg/bb BB mencit ; Kelompok V, setelah diinduksi benzo(α)piren, dilanjutkan pemberian senyawa taurin dengan dosis7,8 mg/bb/hari,pagi dan sore
sebanyak 15,6 mg/bb/hari.
D. Parameter
E. Alur Penelitian
F.Pelaksanaan
1. Hewan Uji
Hewan uji yang digunakan adalah mencit (Mus musculus) jantan galurddy sebanyak 25 ekor, yang berumur 5-7 minggu, bobot badan ± 20 g. Hewan tersebut diperoleh dari bagian Non Ruminansia dan Satwa Harapan, Institut Pertanian Bogor (IPB), Bogor, Jawa Barat.
2. Aklimasi Hewan Uji
Penelitian diawali dengan aklimasi mencit jantan (Mus musculus) galur ddyselama 15 hari di Laboratorium MIPA Terpadu Universitas Lampung.
Mencit putih umur 5-7 minggu, bobot badan ± 20 g
Adaptasi pakan standar (ad libitum)sampai akhir penelitian
Induksi denganbenzo(α)pirendengan dosis 0,3 mg/bb setiap hari selama 10 hari secara subkutan kemudian dilanjutkan dengan
pemberian zat uji selama 15 hari
Pengambilan sampel, pembuatan histopatologi hepar, dan pemeriksaan preparat di laboratorium
Penentuan dosis dan pemberian taurin serta ekstrak daun sirsak dengan dosis277,8 mg/bb/hari/mencit.
dikelompokkan dalam 5 kelompok. Selama aklimasi, mencit percobaan dipelihara dalam kandang secara individu pada kondisi lingkungan yang homogen.
3. Makanan dan Minuman Mencit (Mus musculus)
Makanan mencit berupa pakan pelet yaitucomfeed BR IIyang ditunjukkan pada Tabel 1.
Tabel 1. Bahan dan Komposisi Pakan Mencit
BAHAN DASAR PAKAN MENCIT
4. Induksi Karsinogenik Terhadap Hewan Uji Dengan Benzo(a)piren
Induksi karsinogenik dilakukan dengan cara menyuntikkan larutan
benzo(α)piren pada jaringan subkutan mencit di bagian tengkuk. Benzo(α) piren 0,3 mg dilarutkan dalam 0,2 ml corn oil. Injeksi dilakukan setiap hari selama 10 hari. Semua kelompok diinduksi dengan benzo(α)piren selama 10 hari secara subkutan kemudian dilanjutkan dengan pemberian zat uji selama 15 hari (Sugitha dan Djalil, 1989).
Kemudian ditunggu sampai adanya kanker, yaitu munculnya benjolan (nodul) di bagian tengkuk.Benzo(α)piren diberikan selama 10 hari karena sel kanker akan tumbuh setelah terinduksi antara 9-13 hari. Pada periode ini terlihat dan terasa perubahan pada tengkuk dan kaki mencit (Gustanti, 1999). Untuk kontrol mencit (Mus musculus) tidak diinjeksi
benzo(α)piren.
5. Penentuan Dosis dan Pemberian Senyawa Taurin serta Ekstrak Daun Sirsak.
Penentuan dosis sediaan senyawa taurin dibuat berdasarkan literatur dari Shao (2008), yaitu 3 g/70 kg berat badan pada manusia. Dosis taurin pada mencit dihitung dengan menggunakan tabel konversi manusia ke mencit ukuran 20 g menurut Nugraha (2011). Nilai konversi dari manusia ke mencit adalah 0,0026. Sehingga diperoleh dosis senyawa taurin untuk mencit, yaitu 3000 mg X 0,0026 = 7,8 mg/bb/hari.
ekstrak daun sirsak pada mencit dihitung dengan menggunakan tabel konversi manusia ke mencit adalah 0,0026, sehingga diperoleh dosis seduhan daun sirsak untuk mencit, yaitu 106,84615 x 0,0026 = 0,27779 g/bb/hari sehingga diperoleh 277,8 mg/bb/hari (Ngatidjan, 1991).
Gambar 7. Bagan alur pembuatan ekstrak daun sirsak (Annona muricata)
6. Uji Anti Kanker Taurin Terhadap Hewan Uji
Ujiin vivountuk antikanker dilakukan dengan memberikan taurin pada mencityang telah diinduksi benzo(α)piren. Pemberian zat uji taurin Daun sirsak yang telah halus dimaserasi selama 24 jam dengan pelarut
etanol 96%.
Ekstrak yang dihasilkan disaring dengan corong buncher
Ekstrak yang diperoleh dipekatkan dengan menggunakanrotary evaporatorpada suhu 90 derajat Celcius sampai diperoleh ekstrak kental.
Menyiapkan daun sirsak
Dilakukan penyortiran dengan mengambil daun terbaik
Daun sirsak yang telah disortir kemudian dicuci dengan air mengalir
Daun sirsak yang sudah dicuci kemudian dikeringkan pada open dengan dengan suhu 30◦C-50◦C. Dalam pengeringan ini hendaknya
dihindarkan dari panas matahari langsung.
diberikan setiap hari (pagi dan sore) secara oral selama 15 hari. Perlakuan tersebut meliputi:
Tabel 2. Dosis pada tiap kelompok perlakuan
Kelompok Keterangan Jumlah Mencit
I (kontrol normal) Diberi 2ml corn oil selama 15 hari. 5 II (kontrol negatif) Diinduksi denganbenzo(α)pirentanpa
pemberian bahan uji selama 10 hari.
5
III (preventif) Diberi taurin dengan 7,8 mg/bb/hari (pagi&sore = 15,6 mg/bb/hari) dimulai sejak 15 hari sebelum induksi
benzo(α)piren.
5
IV Setelah diinduksi benzo(α)piren, dilanjutkan pemberian taurin dengan dosis 7,8 mg/bb/hari (pagi&sore = 15,6 mg/bb/hari).
5
V Setelah diinduksi benzo(α)piren, dilanjutkan pemberian ekstrak daun sirsak dengan dosis 277,8 mg/bb mencit.
5
Pengamatan terhadap adanya nodul (kanker) dilakukan secara mikroskopik dengan membuat preparat dari organ yang diambil dan dilakukan
pengamatan secara histopatologi untuk melihat adanya pembentukan kanker pada organ tersebut.
7. Preparasi Pembuatan Sediaan Histologis Hepar
Pada akhir perlakuan mencit dikorbankan dan diambil hepar untuk dibuat sediaan mikroskopis dengan metode paraffin dan pewarnaanHematoxylin Eosin(HE).Hematoxylin Eosinbersifat pewarna basa, yaitu memulas jaringan basofilik sedangkan eosin memulas jaringan yang bersifat asidofilik. Kombinasi ini merupakan pewarnaan yang paling sering digunakan.
Metode teknik histopatologi menurut Ali (2007) dibagi menjadi 10 teknik, yaitu :
1.Fixation
a) Memfiksasi specimen berupa potongan organ hati yang telah dipilih segera dengan larutan pengawet formalin 10%.
b) Mencuci dengan air mengalir. 2.Trimming
a) Mengecilkan organ ±3mm
b) Memasukkan potongan organ hati tersebut kedalamembedding cassette.
3.Dehidrasi
a) Menuntaskan air dengan meletakkanembedding cassettepada kertas tisu
b) Berturut-turut melakukan perendaman organ hati dalam alkohol bertingkat 80% dan 90% masing-masing selama 2 jam. Selanjutnya dilakukan perendaman alkohol 95%, absolute I, II, III selama 1 jam. 4.Clearing
Untuk membersihkan sisa alkohol, dilakukan clearing dengan xylol I, II, III masing-masing selama 1 jam.
5.Impregnasi
6. Embedding
a) Membersihkan sisa paraffin yang ada pada pan dengan memanaskan beberapa saat diatas api dan di usap dengan kapas.
b) Menyiapkan paraffin cair dengan mmasukkan paraffin ke dalam cangkir logam dan memasukkan ke dalam oven dengan suhu diatas 58 derajat Celcius.
c) Menuangkan paraffin cair ke dalam pan
d) Memindahkan satu-persatu dariembedding cassetteke dasar pan dengan mengatur jarak satu dengan yang lainnya.
e) Memasukkan pan kedalam air.
f) Melepaskan paraffin yang berisi potongan hati dari pan dengan memasukkan ke dalam suhu empat derajat Celcius beberapa saat. g) Memotong paraffin sesuai dengan letak jaringan yang ada dengan
menggunakan scalpel hangat.
h) Meletakkan pada balok kayu, ratakan pinggirnya dan buat ujungnya sedikit meruncing.
i) Memblok paraffin siap dipotong dengan mikrotom. 7. Cutting
a) Melakukan pemotongan pada ruang dingin
b) Sebelum memotong, mendinginkan blok terlebih dahulu
c) Melakukan pemotongan kasar, dilanjutkan dengan pemotongan halus dengan ketebalan 4-5 mikron.
sisi lembaran jaringan tersebut dengan ujung jarum dan sisi yang lain ditarik menggunakan kuas runcing.
e) Memindahkan lembaran jaringan kedalamwaterbathselama beberapa detik sampai mengembang sempurna.
f) Dengan gerakan menyendok mengambil lembaran jaringan tersebut dengan slide bersih dan menempatkan pada sepertiga atas atau bawah, mencegah jangan sampai ada gelembung udara dibawah jaringan.
g) Menempatkan slide yang berisi jaringan pada inkubatir (suhu 37 derajat celcius) selama 24 jam sampai jaringan melekat sempurna. 8. Staining(pewarnaan) denganharris Hematoxylin Eosin.
Setelah jaringan melekat sempurna pada slide, memilih slide yang terbaik selanjutnya secara berurutan memasukkan ke dalam zat kimia dibawah ini dengan waktu sebagai berikut:
a) Untuk pewarnaan , zat kimia yang pertama digunakanxylolI, II, III masing-masing selama 5 menit.
b) Zat kimia yang yang digunakanalcohol absoluteI, II, III masing-masing selama 5 menit.
c) Zat kimia yang ketiga yaitu aquades selama 1 menit.
d) Potongan organ dimasukkan dalm zat warnaHarris Hematoxylin Eosinselama 20 menit.
e) Memasukkan potongan organ hati dalam aquades selama 1 menit dengan sedikit mengoyang-goyangkan organ.
g) Dibersihkan dalam aquades bertingkat masing-masing1 an 15 menit.
h) Memasukkan potonga organ dalan eosin selama 2 menit.
i) Secara berurutan memasukkan potngan organ dalamalcohol96% selama 2 menit ,alcohol96%,alcoholIII dan IV masing-masing selama 3 menit.
j) Terakhir memasukkan kedalamxylolIV dan V masing-masing selama 5 menit.
9. Mounting
Setelah pewarnaan selsai menempatan slide diatas kertas tisu pada tempat datar, menetesi dengan bahan mounting yaitu kanada balsam dan ditutup dengancover glass, cegah jangan sampai terbentuk gelembung udara.
10. Membaca slide dengan mikroskop
Slidediperiksa di bawah mikrokop sinar dengan pembesaran 400x. Metode yang digunakan dalam melihat preparat adalah prosedur double blinded (Ali, 2007).
G) Penilaian Histopatologi
Skoring derajat histopatologi hepar yang digunakan berdasarkan penelitian Uji Toksisitas Akut dan Subakut yang dilakukan Maretnowatiet al(2005), yang telah dipublikasikan dalam Majalah Farmasi Airlangga, sebagai berikut:
Tabel 3. Skor Penilaian Derajat Kerusakan Histopatologi Sel Hepar
Tingkat perubahan Skor
Normal 0
Ringan (mild) 1
Sedang (moderate) 2
Berat (severe) 3
Derajat kerusakan hati terbagi dalam tiga tingkatan, yaitu derajat
H. Prosedur Pengamatan Bobot Hepar Mencit
Prosedur pengamatan berat basah organ hepar dilakukan dengan
menimbang organ hepar yang masih segar menggunakan timbangan digital dengan 2x ulangan dan dibandingkan dengan perlakuan kontrol (Dewi, 2012).
I. Analisis Data
V. SIMPULAN DAN SARAN
A. Simpulan
Berdasarkan penelitian yang telah dilakukan maka dapat diambil simpulan sebagai berikut :
1. Pemberian taurin berpengaruh protektif dan terapeutik terhadap gambaran histopatologi hepar yang diinduksi benzo(α)piren.
2. Taurin memiliki kemampuan memperbaiki kerusakan jaringan hepar yang diinduksi zat karsinogenik (benzo(α)piren).
3. Ekstrak daun sirsak tidak dapat memperbaiki kerusakan jaringan hepar mencit (Mus musculus) yang diinduksi benzo(α)piren secarain vivo.
B. SARAN
Perlu dilakukan penelitian lanjutan dengan dosis taurin dan ekstrak daun sirsak yang lebih tinggi, dan juga waktu yang lebih lama untuk proses
Alberts, B., D. Bray, J. Lewis, K. Roberts, J.D. Watson. 1994,Molecular Biology of the Cell, Third ed, 1255, 1269, 1270, 1282, 1283, Garland Publ Inc, NY and London.
Ali, H.T. 2007.Beneficial Efects Of Nigella sativa On The Testis Tissues Of Mice Exposed to UV Irradiation. Biology Departement/ Educatioan College/ Mosul University.
Amelia, F., E. Angeline, K. Wahyu. 2012. Tablet salut enterik ekstrak etanol daun sirsak (Annona muricata) sebagai antikanker kolon yang potensial. Skripsi. Yogyakarta : Fakultas Kedokteran Universitas Gadjah Mada.
Atmodjo, A.P. 1990.Album Patologi Umum. Airlangga University Press, Surabaya. hlm. 19.
Arief, S. 2006.Radikal Bebas. Surabaya: Bagian Ilmu Kesehatan Anak FK Unair/ RS. Dr. Sutomo.
Arouma, O.I., B. Halliwell, B.M. Hoey, J. Butler. 1988.The antioxidant action of taurine, hypotaurine and their metabolic precursors. Biochem J, 256:251-255.
Baskar, R., V. Rajeswari, T.S. Kumar. 2007.In vitro antioxidant studies in leaves of Annona sp. Indian J Exp Biol. 45 (5) :480-5.
Bhattacharya, T., A. Bhakta, and S.K. Ghosh . 2011. Longterm effect of monosodium glutamate in liver of albino mice after neo-natal exposure. Nepal Med Coll J; 13 (1): 11-16
Chandrasoma, P. dan C.R. Taylor. 2005, Ringkasaan Patologi Anatomi. Jakarta EGC .
Corwin, J. Elizabeth .1997.Buku Saku Patofisiologi. Penerbit Buku Kedokteran EGC. Jakarta.
Dalimartha, S., 2003,Atlas Tumbuhan Obat Jilid 3, Trubus Agriwidya, Jakarta. Dellman, H.D. and E.M. Brown. 1992. Buku Teks Histologi Veteriner. Ed ke-3. R.
Hartono, penerjemah. Universitas Indonesia Press. Jakarta.
Dewi, K. 2007.Pengaruh Ekstrak Daun Sirsak (Annona muricata L.) terhadap Penurunan Berat Badan, Kadar Trigeliserida, dan Kolesterol Total Pada Tikus Jantan Galur Wistar. Fakultas Kedokteran Universitas Kristen Maranatha : Bandung.
Dewi, Sri. 2012.Uji Potensi Hepatoprotektif Senyawa Dimer dari Isoeugenol
terhadap Histologi Hati Mencit (Mus musculus) Jantan Galur DDY. Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Departemen Biologi Universitas Indonesia : Jakarta.
Depkes RI. 2007. Modul TOT Manajemen Pengendalian Penyakit Kanker. Jakarta: Direktorat Pengendalian Penyakit Tidak Menular Direktorat Jenderal PP & PL, Depkes RI.
Desen, Wan. 2008. BukuAjar Onkologi Klinis (2nd ed) (Wilie Japaries,Penerjemah). Jakarta: Balai Penerbit Fakultas Kedokteran Universitas Indonesia.
Dimitrios, B. 2006.Sources of natural phenolic antioxidants laboratory of Food Chemistry and Technology, School of Chemistry, Aristotle University of Thessa-loniki.
EPA (Environmental Protection Agency). 2006.Benzo(a)pyrene (BaP). TEACH Chemical Summary.
http://www.epa.gov/teach/chem_summ/BaP_summary.pdf (diakses 5 November 2014).
Ganiswarna, S.G. 1995.Farmakologi Dan Terapi. Gaya Baru. Jakarta.
Gotama, I. B. I., S. Sugiarto , M. Nurhadi, Y. Widiyastuti, S.Wahyono, I.J Prapti. 1999.Inventaris Tanaman Obat Indonesia. Jilid V. Jakarta, Departemen Kes. Badan Penelitian dan Pengembangan Kesehatan: Medan.
Gustanti, Elza. 1999. Uji Efek Anti Kanker Dadih S. lactis Terhadap Mencit yang Diinduksi dengan Benzopiren. Skripsi. Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam. Universitas Andalas. Padang.
Halliwel, B., J.M.C. Gutteridge. 1998. Free Radicals in Biology and Medicine, 3rded. Oxford University Press.
Hanafiah, A.K. 2011.Rancangan Percobaan : Teori dan Aplikasi. PT. Raja Grafindo Persada. Jakarta
Hanahan, D and R. A. Weinberg . 2000. The Hallmarks of Cancer.Cell. 100 (2):57-70.
Harada, H., S. Allo, N. Viyuoh, J. Azuma, K. Takahashi, S.W. Schaffer . 1988. Regulation of calcium transport in drug-induced taurine-depleted hearts. Biochim Biophys Acta, 944:273-278.
Hariyatmi, 2004. Kemampuan Vitamin E sebagai Antioksidan terhadap Radikal Bebas pada Usia Lanjut.MIPA14(1): 54.
Himawan, S.1992.Kumpulan Kuliah Patologi. Fakultas Kedokteran Universitas Indonesia. Jakarta.
Karsono, B. 2006.Teknik-Teknik Biologi Molekular Dan Selular Pada Kanker.Buku Ajar Ilmu Penyakit Dalam. (3rdEd.). Pusat Penerbit Departemen Penyakit Dalam FKUI. Jakarta.
Katz, B. G. 2002. Basic and clinical pharmacology.alih bahasa: Dripa Sjabana, Endang Isbianti, Achmad Basori, Moch. Sudjak N, Indriyatni, Ramadhani RB, Sunarni Zakaria. Salemba Medika. Surabaya.
King, R. J. B., 2000, Cancer Biology,2nded. Pearson Education Limited. London. Klaassen, C.D. 2001.Casarett and Doull’s Toxicology.The Science of Poison.
Li, K., Q. Li, J.Li, D. Gao, Z. Lin, F. Zheng. 2008. Alkaloid from angelicae daharaicae inhibits hela cell growth by inducing apoptosis and increasing cascape-3 activity.Labmedicine. 39 (9): 540-6.
Li, N., Z. Shi, Y. Tang, J. Chen, X. Li. 2008. Recent progress on the total synthesis of acetogenins from Annonaceae.Beilstein Journal of Organic Chemistry. 4 (48): 4-12.
Lu, F. C. 1994.Toksikologi Dasar.Edisi Kedua. Universitas Indonesia Press. Jakarta. Mahendra, B. 2005.13 Jenis Tanaman Obat Ampuh, Penebar Swadaya. Jakarta. Maramis, W.F. 2005.Catatan Ilmu Kedokteran Jiwa. Airlangga University Press.
Surabaya.
Maretnowati, N., A. Widyawaruyanti, M.H Santosa. 2005.Uji toksisitas akut dan subakut ekstrak etanol dan ekstrak air kulit batang Artocarpus champeden spreng dengan parameter histopatologi hati mencit. Majalah Farmasi Airlangga; 5(3):91-5.
Muliyah, E. 2013. Struktur Sekretori beberapa tanaman obat. Skripsi. Bogor: Institut Pertanian Bogor.
Murray, R.W. 1996. Biokimia Kedokteran Harper, Edisi 24. Penerbit Buku Kedokteran EGC. Jakarta.
Mun’im, A.,R. Andrajati dan H. Susilowati. 2006, Uji Hambatan Tumorigenensis sari. Buah Merah (Pandanus conoideusLam.) Merek M terhadap Tikus Putih Betina yang diinduksi 7,12-dimetilbenz[a]antrasen (DMBA). Majalah Ilmu Kefarmasian, 3 (3), 153161.
Niendya, W.A., A. D. Muhammad, S. Teguh. 2011. Rasio Hepar Bobot-Tubuh Mencit (Mus musculus) setelah Pemberian Diazepam, Formalin, dan Minuman Beralkohol.Buletin Anatomi dan Fisiologi Vol. XIX,No. 1, Maret 2011.
Nugraha, L.S.A. 2011.Cara dan Rute Pemberian Obat Pada Hewan Percobaan Mencit. Akademi Farmasi Theresiana. Semarang.
Parkin, D.M, Bray and F.J. Ferlay. 2000. Estimating the world cancer Burden. GLOBOCAN 2000. Int J Cancer. 2001; 94:153-156.
Pramono dan Malole. 1989.Pengantar Hewan-Hewan Percobaan di Laboratorium. Pusat Antar Universitas Bioteknologi IPB. Bogor.
Prasetya, G., H. Laksono. 2013. Ekstrak daun sirsak (Annona muricata)
menggunakan pelarut etanol.Jurnal Tekonologi Kimia Industri. 1 (2): 111-5. Redmon, H., P.Stapkleton, and David. 1983. Immunustrition.The ple of Taurine.
Nutrition14. 559-604.
Ren, W., Z. Qiao, H. Wang, L. Zhu, L. Zhang . 2003. Flavonoids: promising anticancer agent.Medicinal Research Review. 23 (4): 519-34.
Ressang, A.A. 1984.Patologi Khusus Veteriner. Ed ke-2. Percetakan Bali. Denpasar. Retnani ,V. 2011. Pengaruh suplementasi ekstrak daun Annona muricata terhadap
kejadian displasia epitel kelenjar payudara tikus sprague dawley yang diinduksi 7,12-dimetilbenz(a)antrasena (DMBA). Skripsi. Fakultas Kedokteran Universitas Diponegoro: Semarang.
Rojas, M., B. Marie, J. M. Vignaud, N. Martinet, J. Siat, G. Grosdidier, I. Cascorbi, K. Alexandrov. 2004. High DNA damage by benzo[a]pyrene 7,8-diol-9,10-epoxide in bronchial epithelial cells from patients with lung cancer :
comparison with lung parenchyma.Cancer Letters(207) : 157- 163. Schaffer, S., K.C. Ramila, C.J. Jong, T. Ito, J. Azuma. 2009.Role of protein
phosphorylation in Tau TKO cardiomyopathy. Int Taurine Symp.
Schneider, K.A. 1997. Cancer Genetics,Encyclopedia of Human Biology, 2nded. Academic Press.
Shao, A. and J.N. Hathcock. 2008. Risk assessment for the amino acids taurine, l-glutamine and l-arginine.Regul Toxicol Pharmacol50(3) : 376-399.
