UJI ANTIMUTAGENIK EKSTRAK ETANOL KULIT BUAH
ROTAN JERNANG (
Daemonorops draco
(Wild.) Blume)
PADA MENCIT JANTAN YANG DIINDUKSI
SIKLOFOSFAMID
SKRIPSI
OLEH:
DITA AYUDHYAS CANALOVTA
NIM 121524142
PROGRAM EKSTENSI SARJANA FARMASI
FAKULTAS FARMASI
UJI ANTIMUTAGENIK EKSTRAK ETANOL KULIT BUAH
ROTAN JERNANG (
Daemonorops draco
(Wild.) Blume)
PADA MENCIT JANTAN YANG DIINDUKSI
SIKLOFOSFAMID
SKRIPSI
Diajukan sebagai salah satu syarat untuk memperoleh
gelar Sarjana Farmasi pada Fakultas Farmasi
Universitas Sumatera Utara
OLEH:
DITA AYUDHYAS CANALOVTA
NIM 121524142
PROGRAM EKSTENSI SARJANA FARMASI
FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
MEDAN
PENGESAHAN SKRIPSI
UJI ANTIMUTAGENIK EKSTRAK ETANOL KULIT BUAH
ROTAN JERNANG (
Daemonorops draco
(Wild.) Blume)
PADA MENCIT JANTAN YANG DIINDUKSI
SIKLOFOSFAMID
OLEH:
DITA AYUDHYAS CANALOVTA NIM 121524142
Dipertahankan diHadapanPanitiaPengujiSkripsi FakultasFarmasiUniversitas Sumatera Utara
Padatanggal: 20 Desember 2014 DisetujuiOleh:
Pembimbing I,
Dr. Poppy Anjelisa Z. Hsb, M.Si., Apt. NIP 197506102005012003
Pembimbing II,
Prof. Dr. SumadioHadisahputra, Apt. NIP 195311281983031002
PanitiaPenguji,
Prof. Dr. Rosidah, M.Si., Apt. NIP 195103261978022001
Dr. Poppy Anjelisa Z. Hsb, M.Si., Apt. NIP 197506102005012003
Dra. Azizah Nst, M.Sc., Ph.D., Apt. NIP 195503121983032001
Aminah Dalimunthe, S.Si., M.Si., Apt. NIP197806032005012004
Medan, Desember2014 Fakultas Farmasi
Universitas Sumatera Utara a.n. Dekan,
WakilDekan I,
KATA PENGANTAR
Puji dan syukur kehadirat Allah yang Maha Kuasa yang telahmelimpahkan rahmat, karunia, dan ridho-Nya, sehingga penulis dapat menyelesaikan skripsi yang berjudul “Uji Antimutagenik Ekstrak Etanol KulitBuah Rotan Jernang (Daemonoropsdraco) Pada Mencit Jantan Yang Diinduksi Siklofosfamid”. Skripsi ini merupakan salah satu syarat untuk memperoleh gelar sarjana Farmasi pada Fakultas Farmasi Universitas Sumatera Utara.
Penulis juga tidak lupa mengucapkan terima kasih yang tak terhingga dan penghargaan yang tulus kepada ayahanda Drs. Yusvandi dan Ibunda Arnita Isfa, Ibu Yusni Elizar, SH., Hakimi Wahyudi Ritonga, Dita Vathyas Canalovta, S.Pd., Farkhan Muhammad, Dita Azkhyas Canalovta, Fenny Adlia Z, S.Farm., Dwi Ayu Septiati Hasanah, Septia Adrina Dalimunthe, dan Zuhra Alaili atas dukungan baik moral maupun material dalam penyelesaian skripsi ini.
Penulis menyadari skripsi ini masih belum sempurna, oleh karena itu diharapkan kritik dan saran yang membangun untuk penyempurnaannya. Harapan saya semoga skripsi ini dapatbermanfaatbagi ilmu pengetahuan kefarmasian.
Medan, Desember 2014 Penulis,
UJI ANTIMUTAGENIK EKSTRAK ETANOL KULIT BUAH
ROTAN JERNANG (
Daemonorops draco
(Wild.) Blume)
PADA MENCIT JANTAN YANG DIINDUKSI
SIKLOFOSFAMID
ABSTRAK
Buah rotan jernang telah dimanfaatkan masyarakat sebagai antiseptik, antirematik, antibakteri, antivirus, antitumor, dan obat luka. Kulit buah rotan jernang yang mengandung resin dilaporkan berpotensi sebagai antioksidan. Penelitian-penelitian sebelumnya telah membuktikan bahwa drakorhodin yang terkandung dalam rotan jernang memiliki potensi untuk menginduksi apoptosis sel dan menghambat proliferasi sel yang mengalami mutasi.
Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui karakteristik simplisia, skrining fitokimia dan uji antimutagenik ekstrak etanol kulit buah rotan jernang (Daemonorops draco (Wild.) Blume) pada mencit jantan yang diinduksi siklofosfamid secara intraperitonial.
Ekstraksi serbuk simplisia kulit buah rotan jernang dilakukan dengan cara maserasi menggunakan pelarut etanol 96%. Uji efek antimutagenik menggunakan mencit jantan yang diinduksi siklofosfamid dosis 30 mg/kg bb secara intraperitonial. Ekstrak etanol kulit buah rotan jernang (EEKBRJ) diberikan secara oral pada dosis 5, 10, dan 15 mg/kg bb. Aktivitas antimutagenik ditunjukkan oleh adanya penurunan jumlah mikronukleus dalam setiap 200 sel eritrosit polikromatik pada preparat apusan sumsum tulang femur mencit. Data hasil pengujian dianalisis dengan metode analisis variansi (ANAVA), kemudian dilanjutkan dengan Post Hoc Tukey.
Hasil karakterisasi simplisia terhadap kadar air 6,65%, kadar sari larut air 12,44%, kadar sari larut etanol 27,25%, kadar abu total 9,41%, dan kadar abu tidak larut asam 0,4%. Hasil skrining fitokimia simplisia dan EEKBRJ menunjukkan adanya flavonoid, tanin, saponin, steroida/triterpenoida, dan glikosida. Hasil analisis menunjukkan adanya penurunan jumlah mikronukleus pada mencit dimana dengan pemberian ekstrak etanol kulit buah rotan jernang dosis 15 mg/kg bb memberikan hasil yang lebih baik dibandingkan dosis 5 dan 10 mg/kg bb. Hasil analisis statistik menunjukkan bahwa pemberian EEKBRJ mampu menurunkan jumlah sel mikronukleus yang terbentuk secara signifikan terhadap kelompok penginduksi (p < 0,05). Dengan demikian disimpulkan bahwa EEKBRJ mempunyai aktivitas sebagai antimutagenik. Penurunan jumlah mikronukleus meningkat sejalan dengan kenaikan dosis yang diberikan.
ANTIMUTAGENIC TEST OF ETHANOLIC EXTRACT RATTAN JERNANG RIND
(
Daemonorops draco
(Wild.) Blume)
ON MALE MICE INDUCED BY CYCLOPHOSPHAMIDE ABSTRACT
Fruit of rattan jernang has been used as traditional medicines for antiseptic, antirheumatic, antibacteries, antiviral, antitumor, and wound healing. Rattan jernang rind which contain resin reported have potention as antioxidant. Researches showed that dracorhodin contained in rattan jernang had a capability to induced cell apoptosis and inhibited proliferation of several mutation cell.
This study aimed to perform characterization of simplex rattan jernang rind, phytochemical screening and antimutagenic test of ethanolic extract rattan jernang rind (Daemonorops draco (Wild.) Blume) on male mice induced by cyclophosphamide.
The extraction was done by maceration using 96% ethanol. Antimutagenic test using male mice were induced by cyclophosphamide dose 30 mg/kg bw by intraperitoneal. Ethanolic extract rattan jernang rind administrated orally at doses of 5, 10, and 15 mg/kg bw. Antimutagenic activity showed by a decrease in the number of micronucleus in polychromatic erythrocytes per 200 cells in smear preparations femur bonemarrow of mice. Test result were analyzed by the method of Analysis of Variance (ANOVA) followed by Post Hoc Tuckey method
The result of the characterization rattan jernang rind simplex moisture content 6.65%, water-soluble extract concentration 12.44%, soluble in ethanol extract concentration 27.25%, total ash content 9.41%, and insoluble ash content in acid 0.4%. The result of phytochemical screening showed that the simplex have flavonoids, tannins, saponins, steroids/triterpenoids and glycosides. The analysis showed a decrease the number of micronucleus in which the administration ethanol exctract rattan jernang rind dose of 15 mg/kg bw give the better effect than dose 5 and 10 mg/kg bw. The statistic analysis, it is showed that the administration of EEKBRJ was able to reduce the number of micronucleus cells formed significantly to the inducer group (p < 0.05). Thus, it is concluded that EEKBRJ has antimutagenic activity. The decrease in micronucleus increase with increase the doses given..
DAFTAR ISI
Halaman
Judul ... i
Halaman Judul ... ii
Halaman Pengesahan ... iii
KATA PENGANTAR ... iv
ABSTRAK ... vi
ABSTRACT ... vii
DAFTAR ISI ... viii
DAFTAR TABEL ... xii
DAFTAR GAMBAR ... xiii
DAFTAR LAMPIRAN ... xiv
BAB I PENDAHULUAN ... 1
1.1 Latar Belakang ... 1
1.2 Perumusan Masalah ... 3
1.3 Hipotesis ... 3
1.4 Tujuan Penelitian ... 4
1.5 Manfaat ... 4
1.6 Kerangka Pikir Penelitian ... 5
BAB II TINJAUAN PUSTAKA ... 6
2.1 Uraian Tumbuhan Rotan Jernang ... 6
2.1.1 Habitat (Daerah Tumbuh) ... 6
2.1.2 Morfologi Tumbuhan Rotan Jernang ... 6
2.1.4 Kandungan Kimia ... 7
2.1.5 Khasiat Tumbuhan ... 8
2.2 Ekstraksi ... 9
2.2.1 Metode-metode Ekstraksi ... 9
2.3 Mikronukleus ... 10
2.4 Siklofosfamid ... 13
2.5 Mencit ... 16
BAB III METODE PENELITIAN ... 17
3.1. Alat dan Bahan ... 17
3.1.1. Alat-alat ... 17
3.1.2. Bahan-bahan ... 17
3.2. Hewan Percobaan ... 18
3.3. Pembuatan Pereaksi ... 18
3.3.1. Pereaksi Mayer ... 18
3.3.2. Pereaksi Dragendorff ... 18
3.3.3. Pereaksi Bouchardat ... 19
3.3.4. Pereaksi Molish ... 19
3.3.5. Pereaksi Liebermann-Burchard ... 19
3.3.6. Pereaksi besi (III) klorida 1% ... 19
3.3.7. Pereaksi timbal (II) asetat ... 19
3.3.8. Pereaksi natrium hidroksida 2 N ... 19
3.3.9. Pereaksi asam klorida 2 N ... 19
3.4.2. Identifikasi sampel ... 20
3.4.3. Pengolahan bahan tumbuhan ... 20
3.5. Pemeriksaan Karakteristik Simplisia ... 20
3.5.1 Pemeriksaan makroskopik ... 21
3.5.2 Pemeriksaan mikroskopik ... 21
3.5.3 Penetapan kadar air ... 21
3.5.4 Penetapan kadar sari larut dalam air ... 22
3.5.5 Penetapan kadar sari larut dalam etanol ... 22
3.5.6 Penetapan kadar abu total ... 23
3.5.7 Penetapan kadar abu tidak larut asam ... 23
3.6. Pemeriksaan Skrining Fitokimia Serbuk Simplisia ... 23
3.6.1 Pemeriksaan alkaloida ... 23
3.6.2 Pemeriksaan flavonoida ... 24
3.6.3 Pemeriksaan tanin ... 24
3.6.4 Pemeriksaan glikosida ... 25
3.6.5 Pemeriksaan saponin ... 25
3.6.6 Pemeriksaan steroida/triterpenoida ... 26
3.7. Pembuatan EEKBRJ ... 26
3.8. Pemeriksaan Skrining Fitokimia EEKBRJ ... 26
3.9. Uji Efek Antimutagenik ... 27
3.9.1 Penyiapan hewan percobaan ... 27
3.9.2 Penyiapan suspensi Na-CMC 1% ... 27
3.9.3 Penyiapan suspensi EEKBRJ ... 27
3.9.5 Pembuatan serum darah sapi (SDS) ... 28
3.9.6 Pengujian antimutagenik ... 28
3.9.7 Pembuatan preparat hapusan sumsum tulang femur ... 29
3.9.8 Pengamatan apusan ... 30
3.10. Analisis data ... 30
BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN ... 31
4.1. Simplisia dan Ekstrak ... 31
4.2. Pengujian Efek Antimutagenik ... 32
BAB V KESIMPULAN DAN SARAN ... 36
5.1. Kesimpulan ... 36
5.2. Saran ... 36
DAFTAR PUSTAKA ... 37
DAFTAR TABEL
Halaman Tabel 1 Hasil Pemeriksaan Karakteristik Simplisia Kulit Buah
Rotan Jernang ... 31
Tabel 2 Hasil Pemeriksaan Skrining Fitokimia Serbuk Simplisia dan EEKBRJ ... 32
Tabel 3 Jumlah Mikronukleus dalam 200 Sel Eritrosit Polikromatik .. 59
Tabel 4 Uji Deskriptif ... 60
Tabel 5 Uji ANAVA satu arah (One Way ANOVA) ... 60
Tabel 6 Uji Normalitas ... 61
Tabel 7 Uji Post Hoc Tuckey ... 62
DAFTAR GAMBAR
Halaman
Gambar 1 Diagram kerangka pikir penelitian ... 5
Gambar 2 Struktur drakorodin ... 8
Gambar 3 Pembentukan mikronukleus ... 12
Gambar 4 Struktur siklofosfamid ... 14
Gambar 5 Reaksi alkilasi pada basa DNA ... 15
Gambar 6 Grafik jumlah sel mikronukleus dalam tiap 200 sel eritrosit polikromatik ... 33
Gambar 7 Pohon rotan jernang pada pohon rambatan ... 43
Gambar 8 Buah rotan jernang ... 43
Gambar 9 Simplisia kulit buah rotan jernang ... 44
Gambar 10 Serbuk simplisia kulit buah rotan jernang ... 44
Gambar 11 Mikroskopik serbuk simplisia kulit buah rotan jernang perbesaran 10 x 40 ... 45
Gambar 12 Velocity 18RRefrigerated Centrifuge ... 54
Gambar 13 Alat bedah ... 54
Gambar 14 Oral sonde dan spuit ... 55
Gambar 15 Mikroskop Boeco BM-180 dan lensa ... 55
Gambar 16 Mencit jantan ... 56
Gambar 17 Pengambilan sumsum tulang femur mencit ... 56
DAFTAR LAMPIRAN
Halaman
Lampiran 1 Hasil Identifikasi Tumbuhan ... 41
Lampiran 2 Persetujuan Etik Penelitian Kesehatan ... 42
Lampiran 3 Rotan Jernang ... 43
Lampiran 4 Hasil Pemeriksaan Mikroskopik ... 45
Lampiran 5 Perhitungan Hasil Pemeriksaan Karakterisasi Simplisia ... 46
Lampiran 6 Bagan Alur Penelitian ... 51
Lampiran 7 Bagan Pmbuatan Preparat/Apusan Sumsum Tulang Femur Mencit ... 53
Lampiran 8 Alat-Alat ... 54
Lampiran 9 Hewan Percobaan ... 56
Lampiran 10 Contoh Perhitungan Dosis ... 57
Lampiran 11 Hasil Pengamatan Apusan Menggunakan Mikroskop ... 58
Lampiran 12 Jumlah Sel Mikronukleus pada Sumsum Tulang Femur Mencit ... 59
UJI ANTIMUTAGENIK EKSTRAK ETANOL KULIT BUAH
ROTAN JERNANG (
Daemonorops draco
(Wild.) Blume)
PADA MENCIT JANTAN YANG DIINDUKSI
SIKLOFOSFAMID
ABSTRAK
Buah rotan jernang telah dimanfaatkan masyarakat sebagai antiseptik, antirematik, antibakteri, antivirus, antitumor, dan obat luka. Kulit buah rotan jernang yang mengandung resin dilaporkan berpotensi sebagai antioksidan. Penelitian-penelitian sebelumnya telah membuktikan bahwa drakorhodin yang terkandung dalam rotan jernang memiliki potensi untuk menginduksi apoptosis sel dan menghambat proliferasi sel yang mengalami mutasi.
Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui karakteristik simplisia, skrining fitokimia dan uji antimutagenik ekstrak etanol kulit buah rotan jernang (Daemonorops draco (Wild.) Blume) pada mencit jantan yang diinduksi siklofosfamid secara intraperitonial.
Ekstraksi serbuk simplisia kulit buah rotan jernang dilakukan dengan cara maserasi menggunakan pelarut etanol 96%. Uji efek antimutagenik menggunakan mencit jantan yang diinduksi siklofosfamid dosis 30 mg/kg bb secara intraperitonial. Ekstrak etanol kulit buah rotan jernang (EEKBRJ) diberikan secara oral pada dosis 5, 10, dan 15 mg/kg bb. Aktivitas antimutagenik ditunjukkan oleh adanya penurunan jumlah mikronukleus dalam setiap 200 sel eritrosit polikromatik pada preparat apusan sumsum tulang femur mencit. Data hasil pengujian dianalisis dengan metode analisis variansi (ANAVA), kemudian dilanjutkan dengan Post Hoc Tukey.
Hasil karakterisasi simplisia terhadap kadar air 6,65%, kadar sari larut air 12,44%, kadar sari larut etanol 27,25%, kadar abu total 9,41%, dan kadar abu tidak larut asam 0,4%. Hasil skrining fitokimia simplisia dan EEKBRJ menunjukkan adanya flavonoid, tanin, saponin, steroida/triterpenoida, dan glikosida. Hasil analisis menunjukkan adanya penurunan jumlah mikronukleus pada mencit dimana dengan pemberian ekstrak etanol kulit buah rotan jernang dosis 15 mg/kg bb memberikan hasil yang lebih baik dibandingkan dosis 5 dan 10 mg/kg bb. Hasil analisis statistik menunjukkan bahwa pemberian EEKBRJ mampu menurunkan jumlah sel mikronukleus yang terbentuk secara signifikan terhadap kelompok penginduksi (p < 0,05). Dengan demikian disimpulkan bahwa EEKBRJ mempunyai aktivitas sebagai antimutagenik. Penurunan jumlah mikronukleus meningkat sejalan dengan kenaikan dosis yang diberikan.
ANTIMUTAGENIC TEST OF ETHANOLIC EXTRACT RATTAN JERNANG RIND
(
Daemonorops draco
(Wild.) Blume)
ON MALE MICE INDUCED BY CYCLOPHOSPHAMIDE ABSTRACT
Fruit of rattan jernang has been used as traditional medicines for antiseptic, antirheumatic, antibacteries, antiviral, antitumor, and wound healing. Rattan jernang rind which contain resin reported have potention as antioxidant. Researches showed that dracorhodin contained in rattan jernang had a capability to induced cell apoptosis and inhibited proliferation of several mutation cell.
This study aimed to perform characterization of simplex rattan jernang rind, phytochemical screening and antimutagenic test of ethanolic extract rattan jernang rind (Daemonorops draco (Wild.) Blume) on male mice induced by cyclophosphamide.
The extraction was done by maceration using 96% ethanol. Antimutagenic test using male mice were induced by cyclophosphamide dose 30 mg/kg bw by intraperitoneal. Ethanolic extract rattan jernang rind administrated orally at doses of 5, 10, and 15 mg/kg bw. Antimutagenic activity showed by a decrease in the number of micronucleus in polychromatic erythrocytes per 200 cells in smear preparations femur bonemarrow of mice. Test result were analyzed by the method of Analysis of Variance (ANOVA) followed by Post Hoc Tuckey method
The result of the characterization rattan jernang rind simplex moisture content 6.65%, water-soluble extract concentration 12.44%, soluble in ethanol extract concentration 27.25%, total ash content 9.41%, and insoluble ash content in acid 0.4%. The result of phytochemical screening showed that the simplex have flavonoids, tannins, saponins, steroids/triterpenoids and glycosides. The analysis showed a decrease the number of micronucleus in which the administration ethanol exctract rattan jernang rind dose of 15 mg/kg bw give the better effect than dose 5 and 10 mg/kg bw. The statistic analysis, it is showed that the administration of EEKBRJ was able to reduce the number of micronucleus cells formed significantly to the inducer group (p < 0.05). Thus, it is concluded that EEKBRJ has antimutagenic activity. The decrease in micronucleus increase with increase the doses given..
BAB I PENDAHULUAN
2.1Latar Belakang
Mutagen (mutagene) adalah bahan yang dapat menginduksi
deoxyribonucleic acid (DNA) menjadi mutasi. Adapun yang dimaksud dengan
mutasi adalah perubahan susunan nukleotida pada DNA baik karena pengurangan
(deletion), penambahan (insertion), maupun perpindahan atau pertukaran
(translocation). Oleh karena itu, bila terjadi perubahan susunan nukleotida pada
DNA, maka asam amino penyusun protein yang dikodenya akan mengalami
perubahan, sehingga protein yang bersangkutan menjadi abnormal. Protein yang
abnormal tersebut tentunya akan mempunyai fungsi yang abnormal pula (Sudiana,
2008).
Uji mikronukleus merupakan salah satu metode untuk meneliti adanya
efek mutagenik. Uji tersebut merupakan prosedur skrining secara in vivo untuk
mendeteksi adanya kerusakan atau kehilangan kromosom yang disebabkan oleh
mutagen (Schmid, 1975). Selain digunakan untuk pengujian efek mutagenik, uji
mikronukleus juga dapat digunakan untuk pengujian efek antimutagenik (Kong, et
al., 1995).
Mutasi merupakan proses perubahan materi genetik suatu organisme
yang diketahui sebagai faktor dasar dari karsinogenesis atau pembentukan sel
kanker (Kong, et al., 1995). Terjadinya kanker melewati proses yang panjang dan
dapat berawal dari setitik kelainan akibat mutasi pada DNA, maka kerusakan
sekecil apapun perlu disikapi sebelum setitik kelainan tersebut berubah menjadi
kanker yang sangat sulit untuk disembuhkan. Hubungan mutagen pada manusia
dalam kehidupan sehari-hari dapat terjadi melalui berbagai hal, antara lain:
makanan dan minuman, obat-obatan, kosmetika dan perantaraan lingkungan.
Mengingat banyaknya pemaparan mutagen atau karsinogen yang mungkin terjadi,
perlu adanya upaya untuk mencegah terjadinya pemaparan tersebut atau dengan
menggunakan antimutagen. Oleh karena itu perlu dikembangkan bahan dari obat
tradisional yang dapat bersifat antimutagen (Sumpena, et al., 2009).
Buah rotan jernang mengandung resin berwarna merah, hasil sekresi dari kulit buah tanaman rotan jernang. Di pasar internasional rotan jernang asal Indonesia umumnya dikenal dari jenis Daemonorops spp (Waluyo dan Pasaribu, 2013). Rotan jernang telah digunakan sebagai pengobatan tradisional yang terkenal sejak zaman dahulu oleh banyak suku sebagai antiseptik, antirematik, antibakteri, antivirus, antitumor, dan obat luka (Gupta, et al., 2008).
dan Molyneux, 2008). Drakorhodin perklorat merupakan senyawa yang diisolasi dari buah rotan jernang (Daemonorops draco) dapat menginduksi kematian sel kanker melanoma dan sel kanker payudara melalui jalur apoptosis dan menghambat proliferasi sel HeLa (Xia, et al., 2005; Yu, et al., 2013; Xia, et al., 2004).
Berdasarkan uraian di atas peneliti tertarik untuk melakukan pengujian efek antimutagenik ekstrak etanol kulit buah rotan jernang pada mencit jantan yang diinduksi siklofosfamid. Penelitian dilakukan secara in vivo dengan menggunakan metode mikronukleus. Metode tersebut dilakukan karena prosesnya mudah dan tidak memerlukan alat dan biaya yang terlalu mahal serta umum digunakan untuk melihat genotoksisitas suatu senyawa tertentu.
2.2Perumusan Masalah
Perumusan masalah dalam penelitian ini adalah:
a. apakah golongan senyawa yang terkandung dalam simplisia kulit buah rotan jernang dan EEKBRJ?
b. apakah EEKBRJ memiliki aktivitas antimutagenik? 1.3Hipotesis
Berdasarkan perumusan masalah diatas, maka hipotesis:
a. golongan senyawa metabolit sekunder yang terkandung dalam simplisia kulit buah rotan jernang dan EEKBRJ adalah flavonoid, tanin, steroida/triterpenoida, saponin, dan glikosida.
1.4Tujuan Penelitian Tujuan penelitian ini adalah:
a. untuk mengetahui golongan senyawa metabolit sekunder yang terkandung dalam simplisia kulit buah rotan jernang dan EEKBRJ.
b. untuk mengetahui aktivitas antimutagenik EEKBRJ. 1.5 Manfaat
Manfaat dari penelitian ini adalah sebagai berikut:
a. sebagai informasi tentang kandungan golongan senyawa metabolit sekunder kulit buah rotan jernang.
1.6Kerangka Pikir Penelitian
Kerangka Pikir Penelitian ini adalah sebagai berikut:
Variabel Bebas Variabel Terikat Parameter
Gambar 1 Diagram kerangka pikir penelitian Simplisia kulit
buah rotan jernang
Ekstrak etanol kulit buah rotan jernang dosis 5, 10, dan 15
mg/kg bb
Suspensi CMC 1%
Karakteristik simplisia
Skrining fitokimia
Penurunan jumlah sel mikronukleus
1. Pemeriksaan makroskopik 2. Pemeriksaan mikroskopik 3. Kadar air
4. Kadar sari larut dalam air
5. Kadar sari larut dalam etanol
6. Kadar abu total 7. Kadar abu tidak larut
asam 1. Flavonoid 2. Tanin 3. Glikosida 4. Saponin 5. Steroid/Triterpenoid
Sel yang bermikronukleus pada 200 sel eritrosit
polikromatik dari sumsum tulang femur
mencit Larutan
Siklofosfamid 30 mg/kg bb Ekstrak etanol kulit
BAB II
TINJAUAN PUSTAKA
2.3Uraian Tumbuhan Rotan Jernang
Uraian tumbuhan meliputi habitat (daerah tumbuh), morfologi tumbuhan, sistematik tumbuhan, kandungan kimia, dan khasiat tumbuhan.
2.1.1 Habitat (Daerah Tumbuh)
Potensi rotan jernang di Indonesia tersebar di Sumatera, Kalimantan dan Jawa. Di Sumatera, rotan jernang dapat dijumpai di Provinsi Aceh, Riau dan Jambi sedangkan di Kalimantan terdapat di Kalimantan Barat, Kalimantan Tengah dan Kalimantan Selatan. Dengan kata lain pohon rotan jernang pada umumnya masih terdapat di hutan alam dan hutan lindung sedangkan saat ini keberadaannya di Jawa suda h sulit ditemukan (Winarto dan Alwis, 2013).
Dari 530 jenis rotan di dunia, sebanyak 316 jenis terdapat di hutan Indonesia. Di wilayah hutan Sumatera terdapat 132 jenis, Jawa 29 jenis, Kalimantan 138 jenis, Sulawesi 86 jenis, Maluku dan Papua 47 jenis. Tanaman rotan jernang tumbuh baik pada ketinggian 150-200 m di atas permukaan laut. Suhu udara optimal untuk pertumbuhan tanaman ini adalah 22-32°C, kelembaban nisbi rata-rata 81%, intensitas cahaya sekitar 56%. Pemberian pupuk kimia dan pupuk organik pada dosis yang tepat akan memberikan respon positif terhadap kualitas pertumbuhan tanaman (Winarto dan Alwis, 2013).
2.1.2 Morfologi Tumbuhan Rotan Jernang
2-3 cm dipenuhi duri-duri kecil dan tajam. Daun rotan jernang berwarna hijau terdiri dari helaian anak daun yang tersusun berpasang-pasangan, permukaan bagian bawah daun sedikit cekung. Buah rotan jernang seperti buah rotan pada umumnya, yaitu bulat kecil-kecil berkumpul seperti buah salak (Winarto dan Alwis, 2013).
Resin jernang atau dikenal dengan pula dengan nama dragon’s blood atau darah naga merujuk pada warnanya yang merah pekat seperti darah, merupakan hasil sekresi buah rotan jernang yang menempel pada kulit buah (Waluyo, 2008). 2.1.3 Sistematika Tumbuhan
Sistematika tumbuhan rotan jernang adalah sebagai berikut (Winarto dan Alwis, 2013).
Kingdom : Plantae
Divisio : Angiospermae Kelas : Monocotyledoneae Ordo : Arecales
Familia : Arecaceae Genus : Daemonorops
Spesies : Daemonorops draco (Wild.) Blume 2.1.4 Kandungan Kimia
tannin, saponin, steroid/triterpenoid dan beberapa pigmen terutama drakorhodin dan nordrakorhodin (Purwanto et al, 2005; Waluyo dan Pasaribu, 2013).
Drakorhodin merupakan komponen jernang utama yang memberikan warna dan merupakan turunan senyawa flavonoid antosianin. Kerangka drakorhodin terdiri atas 2 cincin aromatik yang dihubungkan oleh 3 atom karbon yang juga membentuk cincin ketiga dengan atom oksigen. Warna drakorhodin yang menyolok disebabkan oleh adanya system ikatan rangkap yang sangat terkonjugasi dan umumnya memiliki aktivitas antioksidan (Shi, et al., 2009).
Gambar 2 Struktur drakorhodin (Shi, et al., 2009). 2.1.5 Khasiat Tumbuhan
Resin/getah jernang telah digunakan oleh bangsa Arab, Yunani, dan
Romawi sebagai obat luka, membantu mengetalkan darah, menyembuhkan diare,
dan menurunkan demam. Masyarakat Cina menggunakannya untuk mengobati
keseleo dan mengatasi pendarahan ulkus. Resin jernang juga memiliki efek
sebagai antikoagulasi, analgetik, antiinflamasi, antibakteri, antivirus, antitumor
2.4Ekstraksi
Ekstraksi adalah kegiatan penarikan kandungan kimia yang dapat larut sehingga terpisah dari bahan yang tidak dapat larut dengan menggunakan suatu pelarut cair. Senyawa aktif yang terdapat dalam berbagai simplisia dapat digolongkan kedalam golongan minyak atsiri, alkaloida, flavanoida, dan lain-lain. Dengan diketahuinya senyawa aktif yang dikandung simplisia akan mempermudah pemilihan pelarut dengan cara ekstraksi yang tepat (Depkes RI, 2000).
Ekstrak adalah sediaan kering, kental, atau cair dibuat dengan menyari simplisia nabati atau hewani menurut cara yang cocok, diluar pengaruh cahaya matahari langsung (Ditjen POM, 1979).
2.2.1 Metode-metode Ekstraksi
Menurut Depkes RI (2000), ada beberapa metode ekstraksi: 1. Cara dingin
Ekstraksi dengan cara dingin terdiri dari:
a. Maserasi, adalah proses pengekstraksian simplisia dengan menggunakan pelarut dengan beberapa kali pengocokan atau pengadukan pada temperatur ruang (kamar). Secara teknologi termasuk ekstraksi dengan prinsip metode pencapaian konsentrasi pada keseimbangan. Maserasi kinetik berarti dilakukan pengadukan yang kontinu (terus-menerus). Remaserasi berarti dilakukan pengulangan penambahan pelarut setelah dilakukan penyaringan maserat pertama dan seterusnya.
Proses terdiri dari tahapan pengembangan bahan, tahap maserasi antara, tahap perkolasi sebenarnya (penetesan/penampungan ekstrak) terus menerus sampai diperoleh ekstrak (perkolat) yang jumlah nya 1-5 kali bahan.
2. Cara panas
Ekstraksi dengan cara panas terdiri dari:
a. Refluks, adalah ekstraksi dengan pelarut pada temperatur titik didihnya selama waktu tertentu dan jumlah pelarut terbatas yang relatif konstan dengan adanya pendingin balik. Umumnya dilakukan pengulangan proses pada residu pertama sampai 3-5 kali sehingga dapat termasuk proses ekstraksi sempurna.
b. Sokletasi, adalah ekstraksi menggunakan pelarut yang selalu baru yang umumnya dilakukan dengan alat khusus sehingga terjadi ekstraksi kontinu dengan jumlah pelarut relatif konstan dengan adanya pendingin balik.
c. Digesti, adalah maserasi kinetik (dengan pengadukan kontinu) pada temperatur ruangan (kamar), yaitu secara umum dilakukan pada temperatur 40-50°C. d. Infundasi, adalah ekstraksi dengan pelarut air pada temperatur penangas air
(bejana infus tercelup dalam penangas air mendidih, temperatur terukur 96-98°C) selama waktu tertentu (15-20 menit).
e. Dekoktasi, adalah infus dengan waktu yang lebih lama (30 menit) dan temperatur sampai titik didih air.
2.5Mikronukleus
beberapa faktor seperti radiasi, senyawa kimia tertentu, dan virus. Faktor-faktor penginduksi mutasi dikenal sebagai mutagen (Purwadiwarsa, et al., 2000).
Salah satu indikator terjadinya mutasi adalah adanya mikronukleus (MN). Mikronukleus merupakan hasil mutasi dari kromosom utuh yang patah dan kemudian tampak sebagai nukleus berukuran kecil di dalam suatu sel. Mikronukleus mudah diamati pada sel polikromatik eritrosit (PCE) (Purwadiwarsa, et al., 2000). Terbentuknya mikronukleus menunjukkan adanya kerusakan sitogenetik pada kromosom atau tidak berfungsinya benang spindel pada saat anafase yang disebabkan mutagen. Oleh karena itu, mikronukleus dapat menjadi parameter untuk mengetahui efek paparan suatu senyawa karsinogenik (Sumpena et al.,2009).
Keterangan :
a. Pembentukan MN akibat satu kromosom utuh yang tertinggal saat anafase b. Pembentukan MN akibat patahan kromosom yang tertinggal saat anafase c. Pembentukan MN melalui Jembatan Kromatin
Gambar 3 Pembentukan Mikronukleus (Fenech, et al., 2011).
dalam sel akan tertinggal pada sitoplasma membentuk struktur menyerupai inti sel dengan diameter antara 1/20 sampai 1/5 diameter inti yang dinamakan mikronukleus. Terbentuknya mikronukleus pada sel merupakan indikasi terjadinya aktivitas mutagenik yang merusak kromosom dan akhirnya memicu terjadinya kanker. Metode uji mikronukleus merupakan cara sederhana untuk mengetahui efek sitotoksik suatu senyawa yang dapat dilakukan pada sel PCE dari apusan sumsum tulang hewan rodensia (Heddle, et al., 1983; Sumpena, et al., 2009).
Uji mikronukleus pada sumsum tulang mencit sangat efektif untuk mendeteksi kerusakan dan hilangnya kromosom akibat induksi zat kimia mutagenik karena uji tersebut lebih sederhana dan cepat dibandingkan cara analisis yang lain (Ciccheti, et al., 1999). Pada uji mikronukleus, efek karsinogenik dapat diukur dengan menghitung jumlah mikronukleus yang terdapat dalam sel. Uji mikronukleus terhadap mencit merupakan prosedur yang umum digunakan untuk mendeteksi potensi agen-agen mutagen yang dapat merusak kromosom (Hayes, et al.,2009).
2.6Siklofosfamid
Gambar 4 Struktur Siklofosfamid (International Agency of Research on Cancer, 2010).
Efek samping yang ditimbulkan oleh penggunaan siklofosfamid adalah sistitis hemoragik dan leukopenia berat. Selain itu, obat ini juga menyebabkan anoreksia, mual, muntah, dan alopesia. Efek samping khas yang terjadi pada penggunaan siklofosfamid ataupun bahan pengalkilasi lainnya serta radiasi adalah timbulnya kanker sekunder (Penn, 1986).
[image:30.595.234.417.118.242.2]2.7Mencit
BAB III
METODE PENELITIAN
Penelitian ini menggunakan metode eksperimental dengan tahapan identifikasi sampel, pengumpulan dan pengolahan sampel, pembuatan simplisia, pemeriksaan karakterisasi simplisia, pemeriksaan skrining fitokimia serbuk simplisia dan EEKBRJ, penyiapan hewan uji, pengujian efek antimutagenik pada mencit, dan pengolahan data. Data dianalisis secara analysis of variance
(ANOVA) dan dilanjutkan dengan uji Post Hoc Tuckey meggunakan program
Statistical Product and Service Solution (SPSS) versi 22. Bagan alur penelitian dapat dilihat pada Lampiran 6 halaman 51.
3.1Alat dan Bahan 3.1.1 Alat-alat
Alat-alat yang digunakan dalam penelitian ini meliputi alat-alat gelas,
aluminium foil, blender (Philips), neraca kasar (OHAUS), neraca listrik (VIBRA), seperangkat alat destilasi penetapan kadar air, stoples kaca, desikator, stopwatch, mortir dan stamfer, objek glass, rotary evaporator (Heidolph VV-300), neraca hewan (Presica), spuit 1 ml (Terumo), oral sonde, alat bedah (Wells Spencer), mikroskop (Boeco), centrifuge (Velocity 18R), polytube dan mikrotube. Sebagian gambar alat–alat yang digunakan dapat dilihat dalam Lampiran 8 halaman 54. 3.1.2 Bahan-bahan
iodida, merkuri (II) klorida, bismut nitrat, asam nitrat, iodium, kalium iodida, α -naftol, asam asetat anhidrida, asam sulfat pekat, kloroform, besi (III) klorida, timbal (II) asetat, natrium hidroksida, asam klorida pekat, n-heksana, etil asetat, serbuk seng, serbuk magnesium, isopropanol, air suling (teknis), etanol (teknis),
natrium-carboxy metil cellulosa (Na-CMC), larutan giemsa, siklofosfamid (Cyclovid®), aqua pro injeksi, serum darah sapi dan larutan fisiologis natrium klorida (NaCl) 0,9%.
3.2Hewan Percobaan
Hewan yang digunakan pada penelitian ini adalah mencit jantan berumur 6-8 minggu dengan berat badan 20-30 g. Sebelum percobaan dimulai, terlebih dahulu mencit dipelihara selama dua minggu dalam kandang yang baik untuk menyesuaikan lingkungannya.
3.3Pembuatan Pereaksi 3.3.1 Pereaksi Mayer
Sebanyak 5 g kalium iodida dalam 10 ml air suling kemudian ditambahkan larutan 1,36 g merkuri (II) klorida dalam 60 ml air suling. Larutan dikocok dan ditambahkan air suling hingga 100 ml (Ditjen POM, 1995).
3.3.2 Pereaksi Dragendorff
3.3.3 Pereaksi Bouchardat
Sebanyak 4 g kalium iodida ditimbang, dilarutkan dalam air suling secukupnya, kemudian sebanyak 2 g iodium dilarutkan dalam larutan kalium iodida, setelah larut dicukupkan volume dengan air suling hingga 100 ml (Ditjen POM, 1995).
3.3.4 Pereaksi Molish
Seban yak 3 g α-naftol dilarutkan dalam asam nitrat 0,5 N secukupnya
hingga diperoleh larutan 100 ml (Ditjen POM, 1995). 3.3.5 Pereaksi Liebermann-Burchard
Campur secara perlahan 5 ml asam asetat anhidrida dengan 5 ml asam sulfat pekat tambahkan etanol hingga 50 ml (Merck, 1978).
3.3.6 Pereaksi besi (III) klorida 1%
Sebanyak 1 g besi (III) klorida dilarutkan dalam air suling hingga 100 ml kemudian disaring (Ditjen POM, 1995).
3.3.7 Pereaksi timbal (II) asetat
Sebanyak 15,17 g timbal (II) asetat ditimbang, kemudian dilarutkan dalam air suling bebas karbon dioksida hingga 100 ml (Ditjen POM, 1995).
3.3.8 Pereaksi natrium hidroksida 2 N
Sebanyak 8 g kristal natrium hidroksida dilarutkan dalam air suling hingga diperoleh larutan 100 ml (Depkes RI, 1979).
3.3.9 Asam klorida 2 N
3.4Penyiapan Sampel
Penyiapan sampel meliputi pengumpulan bahan tumbuhan, identifikasi sampel, dan pengolahan sampel.
3.4.1 Pengumpulan bahan tumbuhan
Pengumpulan bahan tumbuhan dilakukan secara purposif, yaitu tanpa membandingkan dengan daerah lain. Bahan yang digunakan dalam penelitian ini adalah kulit buah rotan jernang yang diambil dari Kecamatan Cot Girek, Kabupaten Aceh Utara, Provinsi Aceh.
3.4.2 Identifikasi sampel
Identifikasi sampel dilakukan di Lembaga Ilmu Pengetahuan Indonesia, Pusat Penelitian Biologi, Bogor.
3.4.3 Pengolahan bahan tumbuhan
Bahan tumbuhan yang digunakan pada penelitian ini adalah kulit buah rotan jernang yang telah matang. Kulit buah dipisahkan dari daging buahnya, dirajang-rajang dan ditimbang, diperoleh berat basah 980 g. Selanjutnya kulit buah dikeringkan selama 2 hari dalam lemari pengering dengan temperatur ±400C. Simplisia yang telah kering diblender menjadi serbuk kemudian serbuk ditimbang dan diperoleh berat kering sebesar 750 g. Serbuk simplisia dimasukkan ke dalam kantong plastik, diberi etiket dan disimpan di tempat yang kering.
3.5Pemeriksaan Karakteristik Simplisia
3.5.1 Pemeriksaan makroskopik
Pemeriksaan makroskopik dilakukan dengan cara mengamati bentuk, ukuran, bau, rasa dan warna dari simplisia.
3.5.2 Pemeriksaan mikroskopik
Pemeriksaan mikroskopik terhadap simplisia dilakukan dengan cara menaburkan serbuk simplisia di atas kaca objek yang telah diteteskan dengan larutan kloral hidrat dan ditutup dengan kaca penutup kemudian diamati di bawah mikroskop.
3.5.3 Penetapan kadar air
Penetapan kadar air dilakukan menurut metode Azeotropi (destilasi toluena) (WHO, 1992).
Cara kerja:
dihitung dalam persen. Hasil perhitungan penetapan kadar air dapat dilihat pada Lampiran 5 halaman 46.
3.5.4 Penetapan kadar sari larut dalam air
Sebanyak 5 g serbuk yang telah dikeringkan di udara, dimaserasi selama 24 jam dalam 100 ml air-kloroform (2,5 ml kloroform dalam air suling sampai 1 liter) dalam labu bersumbat sambil dikocok sesekali selama 6 jam pertama, kemudian dibiarkan selama 18 jam, lalu disaring. Sejumlah 20 ml filtrat pertama diuapkan sampai kering dalam cawan penguap yang berdasar rata yang telah ditara dan sisa dipanaskan pada suhu 105oC sampai bobot tetap. Kadar dalam persen sari yang larut dalam air dihitung terhadap bahan yang telah dikeringkan (Ditjen POM, 1995). Hasil perhitungan penetapan kadar sari larut dalam air dapat dilihat pada Lampiran 5 halaman 47.
3.5.5 Penetapan kadar sari larut dalam etanol
3.5.6 Penetapan kadar abu total
Sebanyak 2 g serbuk yang telah digerus dan ditimbang seksama dimasukkan dalam krus porselin yang telah dipijar dan ditara, kemudian diratakan. Krus dipijar perlahan-lahan sampai arang habis, pijaran dilakukan pada suhu 600oC selama 3 jam kemudian didinginkan dan ditimbang sampai diperoleh bobot tetap. Kadar abu dihitung terhadap bahan yang telah dikeringkan (Ditjen POM, 1995). Hasil perhitungan penetapan kadar abu total dapat dilihat pada Lampiran 5 halaman 49.
3.5.7 Penetapan kadar abu tidak larut asam
Abu yang diperoleh dalam penetapan kadar abu dididihkan dalam 25 ml asam klorida encer selama 5 menit, bagian yang tidak larut dalam asam dikumpulkan, disaring melalui kertas saring bebas abu, cuci dengan air panas, dipijarkan, kemudian didinginkan dan ditimbang sampai bobot tetap. Kadar abu yang tidak larut dalam asam dihitung terhadap bahan yang telah dikeringkan (Ditjen POM, 1995). Hasil perhitungan penetapan kadar abu tidak larut asam dapat dilihat pada Lampiran 5 halaman 50.
3.6Pemeriksaan Skrining Fitokimia Serbuk Simplisia 3.6.1 Pemeriksaan alkaloida
b. Ditambahkan 2 tetes pereaksi Bouchardat c. Ditambahkan 2 tetes pereaksi Dragendorff
Alkaloid positif jika terjadi endapan atau kekeruhan pada dua dari tiga percobaan diatas (Ditjen POM, 1995).
3.6.2 Pemeriksaan flavonoida
Serbuk simplisia ditimbang 0,5 g, lalu ditambahkan 10 ml metanol, direfluks selama 10 menit, disaring panas-panas melalui kertas saring. Filtrat diencerkan dengan 10 ml air suling, setelah dingin ditambahkan 5 ml petroleum eter, dikocok hati-hati, lalu didiamkan sebentar. Lapisan metanol diambil, diuapkan pada temperatur 40oC, sisanya dilarutkan dalam 5 ml etilasetat, disaring. Filtratnya digunakan untuk uji flavonoid dengan cara berikut:
a. Sebanyak 1 ml filtrat diuapkan sampai kering, sisa dilarutkan dalam 2 ml etanol 96%, lalu ditambah 0,5 g serbuk Zn dan 2 ml asam klorida 2 N. Didiamkan selama 1 menit. Kemudian ditambahkan 10 tetes asam klorida pekat. Jika dalam waktu 2-5 menit terjadi warna merah intensif menunjukkan adanya flavonoid (glikosida-3-flavonol).
b. Sebanyak 1 ml filtrat diuapkan sampai kering, sisa dilarutkan dalam 1-2 ml etanol 96%, lalu ditambah 0,1 g serbuk Mg dan 10 tetes asam klorida pekat. Jika terjadi warna merah jingga sampai warna merah ungu menunjukkan adanya flavonoid. Jika terjadi warna kuning jingga menunjukkan adanya flavon, kalkon dan auron (Ditjen POM, 1995).
3.6.3 Pemeriksaan tanin
Larutan diambil sebanyak 2 ml dan ditambahkan 1-2 tetes pereaksi besi (III) klorida 1%. Jika terjadi warna biru atau hijau kehitaman menunjukkan adanya tanin (Farnsworth, 1966).
3.6.4 Pemeriksaan glikosida
Sebanyak 3 g serbuk simplisia disari dengan 30 ml campuran etanol 96% dengan air (7:3) direfluks selama 10 menit, didinginkan dan disaring. Kemudian diambil 20 ml filtrat ditambahkan 25 ml air suling dan 25 ml timbal (II) asetat 0,4 M, dikocok, didiamkan selama 5 menit lalu disaring. Filtrat disari dengan 20 ml campuran kloroform dan isopropanol (3:2), dilakukan berulang sebanyak 3 kali. Kumpulan sari air diuapkan pada suhu tidak lebih dari 50oC. Sisanya dilarutkan dalam 2 ml metanol. Larutan sisa digunakan untuk percobaan: sebanyak 0,1 ml larutan percobaan dimasukkan dalam tabung reaksi dan diuapkan diatas penangas air. Pada sisa ditambahkan 2 ml air dan 5 tetes pereaksi Molish. Kemudian secara perlahan-lahan ditambahkan 2 ml asam sulfat pekat melalui dinding tabung, terbentuk cincin warna ungu pada batas kedua cairan, menunjukkan adanya ikatan gula (Ditjen POM, 1995).
3.6.5 Pemeriksaan saponin
3.6.6 Pemeriksaan steroida/triterpenoida
Serbuk simplisia ditimbang sebanyak 1 g, dimaserasi dengan 20 ml nheksan selama 2 jam, disaring. Filtrat diuapkan dalam cawan penguap dan pada sisanya ditambahkan pereaksi Liebermann-Burchard melalui dinding cawan. Apabila terbentuk warna ungu atau merah yang berubah menjadi biru ungu atau biru hijau menunjukkan adanya triterpenoid/steroid (Harborne, 1987).
3.7Pembuatan EEKBRJ
Serbuk simplisia dimaserasi dengan etanol, dilakukan dengan cara 500 gram serbuk simplisia (10 bagian) dimasukkan kedalam bejana, kemudian dituangi dengan 3,75 liter (75 bagian) cairan etanol, ditutup dan dibiarkan selama 5 hari terlindung dari cahaya, sambil berulang-ulang diaduk. Setelah 5 hari sari diserkai (saring), ampas diperas. Ampas ditambah cairan penyari secukupnya diaduk dan diserkai, sehingga diperoleh seluruh sari sebanyak 5 liter (100 bagian). Bejana ditutup, dibiarkan ditempat sejuk, terlindung dari cahaya, selama 2 hari. Kemudian endapan dipisahkan. Maserat yang diperoleh dikumpulkan dan dipekatkan dengan bantuan alat rotary evaporator sehingga diperoleh ekstrak etanol (Depkes RI, 1986).
3.8Pemeriksaan Skrining Fitokimia EEKBRJ
3.9Uji Efek Antimutagenik
Pengujian efek antimutagenik meliputi penyiapan hewan percobaan, penyiapan suspensi Na-CMC 1%, penyiapan suspensi EEKBRJ, penyiapan larutan siklofosfamid (LS), pembuatan serum darah sapi (SDS), pengujian antimutagenik dan pembuatan preparat apusan sumsum tulang femur mencit dan pengamatan apusan pada mikroskop.
3.9.1 Penyiapan hewan percobaan
Hewan yang digunakan adalah mencit jantan putih dengan berat 20-30 g dibagi 5 kelompok, setiap kelompok terdiri dari 5 ekor mencit.
Sebelum digunakan sebagai hewan percobaan, semua mencit dipelihara terlebih dahulu selama kurang lebih dua minggu untuk penyesuaian lingkungan, mengontrol kesehatan dan berat badan serta menyeragamkan makanannya (Kusmardi, 2007).
3.9.2 Penyiapan suspensi Na-CMC 1%
Sebanyak 1 g Na-CMC ditaburkan dalam lumpang yang berisi 20 ml air suling panas. Didiamkan selama 15 menit lalu digerus hingga diperoleh massa yang transparan, lalu digerus sampai homogen, diencerkan dengan sedikit demi sedikit air hangat, dihomogenkan dan dimasukkan ke labu tentukur 100 ml, dicukupkan volumenya dengan air suling hingga 100 ml.
3.9.3 Penyiapan suspensi EEKBRJ
ditambahkan suspensi Na-CMC 1% sedikit demi sedikit dan digerus hingga homogen, dimasukkan ke dalam labu tentukur 10 ml, kemudian dicukupkan volumenya hingga batas tanda, konsentrasi suspensi adalah 1%. Suspensi yang digunakan adalah suspensi EEKBRJ dengan konsentrasi 0,1%, maka suspensi EEKBRJ 1% diencerkan menjadi suspensi EEKBRJ 0,5% lalu diencerkan menjadi 0,1%.
3.9.4 Penyiapan larutan siklofosfamid (LS)
Pembuatan LS dilakukan dengan cara yang tertera pada etiket cyclovid®, yaitu dengan melarutkan serbuk steril cyclovid® yang mengandung 200 mg siklofosfamid dengan larutan injeksi NaCl 0,45%. Pengenceran larutan fisiologis NaCl 0,9% menjadi 0,45% yaitu dengan memipet 5 ml larutan NaCl 0,9% lalu ditambahkan dengan aqua pro injeksi hingga 10 ml. Konsentrasi LS yang diperoleh adalah 20 mg/ml (2%), dosis LS yang digunakan dalam penelitian ini adalah 30 mg/kg bb (Kong, et al., 1995).
3.9.5 Pembuatan serum darah sapi (SDS)
Serum diperoleh dari darah sapi segar. Darah ditampung langsung menggunakan vakum tube, vakum tube ditutup dan didiamkan lebih kurang 30 menit, kemudian disentrifuge dengan kecepatan 2000 rpm selama 15 menit hingga terpisah antara endapan dan cairan yang berwarna bening kekuning-kuningan yang merupakan serumnya, kemudian cairan tersebut dipisahkan dari endapan. 3.9.6 Pengujian antimutagenik
Hewan percobaan dikelompokkan menjadi 5 kelompok, masing-masing terdiri dari 5 ekor hewan percobaan. Kelompok tersebut adalah:
- Kelompok II: Penginduksi, diberikan suspensi Na-CMC 1% selama 7 hari secara oral dan setelah hari ke-7, diinduksikan LS.
- Kelompok III: Perlakuan, diberikan suspensi EEKBRJ dengan dosis 5 mg/kg bb secara oral selama 7 hari dan setelah hari ke-7, diinduksikan LS. - Kelompok IV: Perlakuan, diberikan suspensi EEKBRJ dengan dosis 10 mg/kg
bb secara oral selama 7 hari dan setelah hari ke-7, diinduksikan LS.
- Kelompok V : Perlakuan, diberikan suspensi EEKBRJ dengan dosis 15 mg/kg bb secara oral selama 7 hari dan setelah hari ke-7, diinduksikan LS.
Cara perhitungan dosis dapat dilihat pada Lampiran 10 halaman 57.
Setelah 30 jam pemberian LS, hewan dibunuh dengan cara dislokasi leher dan diambil sumsum tulang femurnya dengan cara diaspirasi dengan spuit yang berisi SDS sebanyak 0,3 ml dan ditampung di dalam mikrotube (Khrisna dan Hayashi, 2000).
3.9.7 Pembuatan preparat hapusan sumsum tulang femur
perbesaran 10 × 40 dan 10 × 100 dengan bantuan minyak immersi. Jumlah sel mikronukleus dalam 200 sel dihitung. Perhitungan dilakukan sebanyak 2 kali pada setiap hapusan. Ukuran sel mikronukleus lebih kecil dari ukuran nukleus normal. (Khrisna dan Hayashi, 2000). Bagan pembuatan apusan dapat dilihat pada Lampiran 7 halaman 53 dan gambar pengambilan tulang femur mencit dapat dilihat pada Lampiran 9 halaman 56.
3.9.8 Pengamatan apusan
Data pengamatan masing-masing hewan harus dipresentasikan dalam bentuk tabel. Jumlah eritrosit polikromatik bermikronukleus maupun tidak bermikronukleus dihitung paling tidak sebanyak 200 sel. Pengamatan dilakukan menggunakan mikroskop dengan perbesaran 10 × 40 dan 10 × 100 dengan bantuan minyak immersi (Khrisna dan Hayashi, 2000). Gambar sel mikronukleus sumsum tulang mencit dapat dilihat pada Lampiran 11 halaman 58.
3.10 Analisis Data
Data hasil penellitian dianalisis dengan menggunakan program SPSS 22. Data hasil penelitian ditentukan homogenitas dan normalitasnya untuk menentukan analisis statistik yang digunakan. Data dianalisis dengan menggunakan uji one way ANOVA untuk menentukan perbedaan rata-rata di antara perlakuan. Jika terdapat perbedaan, dilanjutkan dengan menggunakan uji
BAB IV
HASIL DAN PEMBAHASAN
4.1 Simplisia dan Ekstrak
Tumbuhan yang diteliti telah diidentifikasi di Lembaga Ilmu Pengetahuan Indonesia, Pusat Penelitian Biologi, Bogor. Hasil identifikasi tumbuhan yaitu Daemonorops draco (Wild.) Blume (Arecaceae). Surat hasil identifikasi dapat dilihat pada Lampiran 1 halaman 41.
Hasil pemeriksaan makroskopik, simplisia kulit buah rotan jernang berwarna merah kehitaman, tekstur keras dan bersisik, panjang kira–kira 1-2 cm, dan rasanya pahit. Hasil pemeriksaan mikroskopik serbuk simplisia kulit buah rotan jernang terlihat adanya fragmen sel batu, berkas pengangkut berbentuk spiral, Parenkim mesokarp, dan hablur kalsium oksalat. Hasil pemeriksaan makroskopik simplisia dapat dilihat pada Lampiran 3 halaman 43 dan hasil pemeriksaan mikroskopik terhadap serbuk simplisisa dapat dilihat pada Lampiran 4 halaman 45.
[image:47.595.114.513.585.683.2]Hasil pemeriksaan karakteristik simplisia kulit buah rotan jernang yang diperoleh dapat dilihat pada Tabel 1 berikut:
Tabel 1 Hasil Pemeriksaan Karakteristik Simplisia Kulit Buah Rotan Jernang
No. Parameter Hasil
1. Kadar air 6,65%
2. Kadar abu total 9,41%
3. Kadar abu tidak larut dalam asam 0,4%
4. Kadar sari larut dalam air 12,44%
Hasil pemeriksaan skrining fitokimia baik terhadap simplisia maupun ekstrak menunjukkan bahwa keduanya mengandung senyawa kimia golongan flavonoid, tannin, steroida/triterpenoida, saponin dan glikosida seperti yang terlihat pada Tabel 2 berikut:
Tabel 2 Hasil Pemeriksaan Skrining Fitokimia Serbuk Simplisia dan EEKBRJ
No. Golongan Senyawa Hasil
Simplisia Ekstrak
1. Alkaloida - -
2. Flavonoida + +
3. Tanin + +
4. Steroida / Triterpenoida + +
5. Saponin + +
6. Glikosida + +
Keterangan: (+) = Positif; (-) = Negatif
Adanya senyawa flavonoida dan senyawa-senyawa polifenol yang terkandung dalam kulit buah rotan jernang menunjukkan bahwa kulit buah rotan jernang memiliki aktivitas antioksidan yang dapat digunakan sebagai antimutagenik.
4.2 Pengujian Efek Antimutagenik
Perhitungan jumlah sel mikronukleus dilakukan sebanyak 2 kali pada tiap apusan sumsum tulang femur mencit untuk mengurangi kesalahan pada perhitungan. Adapun grafik hasil perhitungan jumlah sel mikronukleus dalam penelitian ini dapat dilihat pada Gambar 6:
Gambar 6 : Grafik Jumlah sel mikronukleus dalam tiap 200 sel eritrosit polikromatik
Keterangan:
1 = pemberian Na-CMC 1% (kontrol normal)
2 = pemberian Na-CMC 1%, kemudian diinduksi dengan LS (Penginduksi) 3 = pemberian suspensi EEKBRJ dosis 5 mg/kg bb, kemudian diinduksi dengan
LS
4 = pemberian suspensi EEKBRJ dosis 10 mg/kg bb, kemudian diinduksi dengan LS
5 = pemberian suspensi EEKBRJ dosis 15 mg/kg bb, kemudian diinduksi dengan LS
Pada Gambar 2 terlihat bahwa pemberian Na-CMC 1% (kelompok 1) dan suspensi EEKBRJ dosis 5, 10, dan 15 mg/kg bb kemudian diinduksikan dengan LS (kelompok 3, 4, dan 5) menunjukkan jumlah sel mikronukleus yang terbentuk berbeda dengan pemberian Na-CMC 1% yang kemudian diinduksikan dengan siklofosfamid (kelompok 2). Jumlah rata-rata sel mikronukleus pada pemberian
21,6 66 54,5 35 25,4 0 10 20 30 40 50 60 70 80
1 2 3 4 5
adalah 21,60 sel, 54,40 sel, 35,00 sel dan 25,40 sel. Jumlah ini lebih sedikit jika dibandingkan dengan jumlah sel mikronukleus yang terbentuk pada kelompok yang diberikan Na-CMC 1% kemudian diinduksikan dengan LS (penginduksi), yang jumlah rata-ratanya mencapai 66,00 sel.
Untuk melihat ada tidaknya perbedaan dari setiap perlakuan pada tiap kelompok hewan coba, dilakukan analisis variansi menggunakan program SPSS versi 22 terhadap jumlah sel mikronukleus yang terbentuk, hasil analisis variansi dapat dilihat pada Tabel 5, Lampiran 13 halaman 60. Dari hasil ini menunjukkan adanya perbedaan yang signifikan antar kelompok perlakuan terhadap jumlah sel mikronukleus yang terbentuk dengan nilai signifikansi p < 0,05.
Untuk mengetahui kelompok perlakuan mana yang memiliki efek yang sama atau berbeda antara satu perlakuan dengan perlakuan yang lain dilakukan uji
Post Hoc Tuckey untuk semua perlakuan, hasil uji tersebut dapat dilihat pada Tabel 7, Lampiran 13 halaman 62.
mampu ditangkap oleh sistem ikatan rangkap terkonjugasi pada flavonoid. Kandungan senyawa tanin, saponin, steroid/triterpenoid, dan glikosida juga berperan dalam mengurangi pembentukan mikronukleus dengan cara meningkatkan jumlah kematian sel dan menghambat proliferasi sel yang mengalami mutasi melalui inhibisi terhadap aktivitas protein kinase sehingga menghambat jalur tranduksi sinyal dari membran sel ke inti sel (Amin dan Moussa, 2007).
BAB V
KESIMPULAN DAN SARAN
5.1 Kesimpulan
Berdasarkan penelitian yang telah dilakukan, dapat disimpulkan bahwa: a. Simplisia dan EEKBRJ mengandung senyawa golongan flavonoid, tanin,
steroida/triterpenoida, saponin, dan glikosida.
b. Ekstrak etanol kulit buah rotan jernang mempunyai efek sebagai antimutagenik. Pemberian EEKBRJ dosis 15 mg/kg bb memberikan efek penurunan jumlah mikronukleus yang paling kuat..
5.2 Saran
a. Disarankan kepada peneliti selanjutnya untuk menguji efek toksisitas dari EEKBRJ.
DAFTAR PUSTAKA
Amin, A., dan Mousa, M. (2007). Merits of anti-cancer plants from the Arabian Gulf region. Cancer Therapy. 5: 55-66.
Balmer, C.M., Valley, A.W., dan Iannucini, A. (2005). Cancer Treatment and Chemotherapy. Dalam: Pharmacotherapy: A Patophysiologic Approach.
Edisi 6. Editor Joseph DiPiro. New York: McGraw-Hill. Halaman 2282. Brundage, D. (2008). Cancer Chemotherapy and Treatment. Dalam:
Pharmacotheraphy Principles & Practice. Editor Marie Chisholm-Burns. New York: McGraw-Hills.
Ciccheti, R., Bari, M., dan Argentin, G. (1999). Induction of Micronuclei in Bone Marrow by Two Pesticides and Their Differentiation With CREST Staining: In vivo Study in Mice. Mutation Research 439: 239-248.
Colegate S.M., dan Molyneux, R.J. (2008). Bioactive Natural Products: Detection, Isolation, and Structural Determination. California: CRC Press. Halaman 352-354.
Czyzewska, A., dan Mazur, L. (1995). Supressing Effect or WR-2721 on Micronuclei Induced by Cyclophosphamide in Mice. Teratogenesis, Carcinog. Mutagen.15: 109-114.
Depkes RI. (1979). Farmakope Indonesia. Edisi Ketiga. Jakarta: Departemen Kesehatan RI. Halaman 7, 744, 748.
Depkes RI. (1986). Sediaan Galenik. Jakarta: Departemen Kesehatan RI. Halaman 19.
Depkes RI. (2000). Parameter Standar Umum Ekstrak Tumbuhan Obat. Cetakan Pertama. Jakarta: Ditjen POM. Halaman 17, 31-32.
Ditjen POM. (1995). Materia Medika Indonesia. Jilid VI. Jakarta: Departemen Kesehatan RI. Halaman 300-306, 321, 325, 333-337.
Farnsworth, N.R. (1966). Biological and Phytochemical Screening of Plants. J. Pharm. Sci. 55(3): 264.
Fox, J.G., Davisson, M.T., Quimby, F.W., Barthold, S.W., Newcomer, C.E., dan Smith, A.L. (2007). The Mouse in Biomedical Research. Volume. 3. Edisi 2. San Diego: Elsevier. Halaman 25.
Gupta, D., Bleakly, B., dan Gupta, R.K. (2008). Dragon’s Blood: Botany, Chemistry and Therapeutic Uses. Journal of Ethnopharmacology. 115: 361-380.
Harborne, J.B. (1987). Metode Fitokimia. Penerjemah: Kosasih Padmawinata dan Iwang Soediro. Edisi II. Bandung: Penerbit ITB. Halaman 152.
Hayes, J., Doherty, A.T., Adkins, D.J., Oldman, K., dan O’Donovan, M.R. (2009). The Rat Bone Marrow Micronucleus Test-Study Design and Statistical Power. Mutagenesis 24(5): 419-424.
Heddle, J.A., Hite, M., Kirkhart, B., Mavournin, K., MacGregor, J.T., Newel, G.W., dan Salamone, M.F. (1983). The Induction of Micronuclei As a Measure of Genotoxicity. Mutation Research. 123: 61-118.
Hemminki, K., dan Kallama, S. (1986). Reactions of Nitrogen Mustards with DNA. International Agency for Research on Cancer Scientific Publication.
78: 55-70.
International Agency of Reasearch on Cancer. (2010). IARC Monographs – 100A: Cyclophosphamide. Paris: International Agency of Reasearch on Cancer. Halaman 63-82.
Kong, Z., Liu, Z., dan Ding, B. (1995). Study On The Antimutagenic Effect Of Pine Needle Extract. Mutation Research. 347: 101-104.
Krishna, G., dan Hayashi, M. (2000). In Vivo Rodent Micronucleus Assay: Protocol, Conduct and Data Interpretation. Mutation Research. 455: 155-166.
Kusmardi, S.K., dan Enif, E.T. (2007). Efek Imunomodulator Ekstrak Daun Ketepeng Cina (Cassia alata L.) Terhadap Aktivitas dan Kapasitas Fagositosis Makrofag. Makara Kesehatan. 11(2): 50-51.
Lusiyanti, Y., Indrawati I., Wa’id, A., dan Lubis, M. (1996). Studi Awal Mikronukleus Pada Sel Limfosit Perifer. Jakarta: Pusat Standarisasi dan Penelitian Keselamatan Radiasi-Batan. Halaman 278-282.
Lyngdoh, D. (1994). Mutagenic Role of Watson-Crick Protons in Alkylated DNA Bases : A Theotrical Study. J. Biosci. 19(2): 131-143
Penn, I. (1986). Malignancies Induced by Drug Therapy: A Review. International Agency for Research on CancerScientific Publication. 78: 13-27.
Purwadiwarsa. D.J., Subarnas, A., Hadiansyah, C., dan Supriyatna. (2000). Aktivitas anitimutagenik dan antioksidan daun puspa (Schima wallichii
Kort.). Cermin Dunia Kedokteran. 127: 18-21
Purwanto, Y., Polosokan, R., Susiarti, S., Waluyu, B.E. (2005). Ektraktivisme Jernang (Daemonorops sp.) dan Kemungkinan Pengembangan: Studi Kasus di Jambi, Sumatera, Indonesia. Laporan Teknik Bidang Botani, Pusat Penelitian Biologi-LIPI Bogor.
Ramu, K., Perry, C.S., Ahmed, T., Pakenham, G., dan Kehrer, J.P. (1996). Studies on the Basis For The Toxicity of Acrolein Mercapturates. Toxicol. Appl. Pharmacol. 140(2): 487-498.
Salmon, S.E., dan Alan, C.S. (1998). Kemoterapi Kanker. Dalam: Farmakologi Dasar dan Klinik. Edisi keempat. Editor Bertram Katzung. Jakarta: Penerbit Buku Kedokteran ECG. Halaman 860-861, 865.
Schmid, W. (1975). The Micronucleus Test. Mutation Research. 31: 9-15.
Shi, J., Hu, R., Lu, Y., Sun, C., dan Wu, T. (2009). Single-Step Purification of Dracorhodin From Dragon’s Blood Resin of Daemonorops draco Using High-Speed Cunter-Current Chromatography Combined With pH Modulation. J. Sep. Sci. 32: 4040-4041.
Sirois, M. (2005). Laboratory Animal Medicine: Prnciples and Procedures. St. Louis: Elsevier Mosby. Halaman 89.
Smith, F.T., dan Clark, C.R. (2011). Antineoplastic Agents. Dalam: Wilson and Gisvold’s Textbook of Organic Medicinal and Pharmaceutical Chemistry.
Edisi 12. Editor John H. Block. Philadelphia: Lippincott Wiliams & Wilkins. Halaman 358-369.
Sudiana, I.K. (2008). Patobiologi Molekuler Kanker. Jakarta: Salemba Medika. Halaman 27.
Sumpena, Y., Sofyan, R., dan Rusilawati, R. (2009). Uji Mutagenisitas
Benzo(α)piren Dengan Metode Mikronukleus Pada Sumsum Tulang
Mencit Albino (Mus musculus). Cermin Dunia Kedokteran. 36(1): 35. Waluyo, T.K. (2008). Teknik Ekstraksi Tradisional dan Analisis Sifat-sifat
Wilastra, F.H. (2013). Potensi Antikanker dan Identifikasi Fraksi Drakorodin Jernang Daemonorops draco. Skripsi. Bogor: Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam IPB.
Winarto, V., dan Alwis. (2013). Budidaya Tanaman Rotan Jernang (Daemonorops sp.). Pusat Penyuluhan Kehutanan. Kementerian Kehutanan. Halaman 2-6. World Health Organization. (1992). Quality Control Methods For Medicinal
Plant Materials. Hongkong: Printed in England. Halaman 36.
Xia, M., Wang, D., Wang, M., Tashiro, S., Onodera, S., Minami, M., Ikejima, T. (2004). Dracorhodin Perchlorate Induces Apoptosis via Activation of Caspases and Generation of Reactive Oxygen Species. J Pharmacol Sci.
95: 273–283.
Xia, M., Wang, M., Tashiro, S., Onodera, S., Minami, M., dan Ikejima, T. (2005). Dracorhodin Perchlorate Induces A375-S2 Cell Apoptosis Via Accumulation of p53 and Activation of Caspases. Biol. Pharm. Bull.
28(2): 226-232.
LAMPIRAN
Lampiran 3. Rotan Jernang
Gambar 7 Pohon Rotan Jernang pada Pohon Rambatan Keterangan : A : Pohon Rotan Jernang
[image:59.595.114.465.444.737.2]Lampiran 3. (lanjutan)
Gambar 9 Simplisia kulit buah rotan jernang
[image:60.595.116.468.459.733.2]Lampiran 4. Hasil Pemeriksaan Mikroskopik
1
2 3 4
5
Gambar 11 Mikroskopik serbuk simplisia kulit buah rotan jernang perbesaran 10 x 40
Keterangan :
1. Parenkim Mesokarp 2. Hablur kalsium oksalat 3. Sel batu
[image:61.595.117.437.113.400.2]Lampiran 5. Perhitungan Hasil Pemeriksaan Karakterisasi Simplisia 1. Perhitungan Penetapan Kadar Air
% Kadar air = x 100%
(g) sampel berat (ml) air volume
a. Berat sampel = 5,0003 g Volume air = 0,3 ml
% Kadar air = x 100% 5,99% g
5,0003 ml
0,3 =
b. Berat sampel = 5,0001 g Volume air = 0,4 ml
% Kadar air = x 100% 7,99% g
5,0001 ml 0,4
=
c. Berat sampel = 5,0001 g Volume air = 0,3 ml
% Kadar air = x 100% 5,99% g
5,0001 ml 0,3
=
% Kadar air rata-rata = 6,65%
3
5,99% 7,99%
Lampiran 5. (Lanjutan)
2. Perhitungan Penetapan Kadar Sari Larut dalam Air
% Kadar sari larut dalam air = x 100% 20 100 x (g) sampel berat (g) sari berat
a. Beratsampel = 5,0003 g
Berat sari = 0,1233 g
% Kadar sari larut dalam air = x 100% 12,33% 20 100 x g 5,0003 g 0,1233 =
b. Berat sampel = 5,0002 g
Berat sari = 0,1352 g
% Kadar sari larut dalam air = x 100% 13,52% 20 100 x g 5,0002 g 0,1352 =
c. Berat sampel = 5,0002 g
Berat sari = 0,1148 g
% Kadar sari larut dalam air = x 100% 11,48% 20 100 x g 5,0002 g 0,1148 =
% Kadar sari larutdalam air rata-rata = 3
11,48% 13,52%
12,33%+ +
Lampiran 5.(Lanjutan)
3. Perhitungan Penetapan Kadar Sari Larut dalam Etanol
% Kadar sari larut dalam etanol = x 100% 20 100 x (g) sampel berat (g) sari berat
a. Berat sampel = 5,0002 g
Berat sari = 0,2514 g
% Kadar sari larut dalam etanol = x 100% 25,13% 20 100 x g 5,0002 g 0,2514 =
b. Beratsampel = 5,0004 g
Berat sari = 0,2932 g
% Kadar sari larut dalam etanol = x 100% 29,31% 20 100 x g 5,0004 g 0,2932 =
c. Berat sampel = 5,0004 g
Berat sari = 0,2733 g
% Kadar sari larut dalam etanol = x 100% 27,32% 20 100 x g 5,0004 ml 0,2733 =
% Kadar sari larut dalam etanol rata-rata = 3
27,32% 29,31%
25,13%+ +
Lampiran 5. (Lanjutan)
4. Perhitungan Penetapan Kadar Abu Total
% Kadar Abu Total = x 100% (g) sampel berat (g) abu berat
a. Berat sampel = 2,0029 g
Beratabu = 0,2102 g
% Kadar abu total = x 100% 10,49% g
2,0029 g
0,2102 =
b. Berat sampel = 2,0048 g
Beratabu = 0,1736 g
% Kadar abu total = x 100% 8,65% g
2,0048 g 0,1736
=
c. Berat sampel = 2,0044 g
Beratabu = 0,1824 g
% Kadar abu total = x 100% 9,09% g
2,0044 g 0,1824
=
% Kadar abu total rata-rata =
3
9,09% 8,65%
10,49%+ +
Lampiran 5. (Lanjutan)
5. Perhitungan Penetapan Kadar Abu Tidak LarutAsam
% Kadar Abu Tidak LarutAsam = x 100% (g) sampel berat (g) abu berat
a. Berat sampel = 2,0046 g
Berat abu = 0,0082 g
% Kadar abu tidak larut asam = x 100% 0,40% g
2,0046 g
0,0082 =
b. Berat sampel = 2,0025 g
Beratabu = 0,0078 g
% Kadar abu tidak larut asam = x 100% 0,38% g
2,0025 g 0,0078
=
c. Berat sampel = 2,0044 g
Berat abu = 0,0086 g
% Kadar abu tidak larut asam = x 100% 0,43% g
2,0044 g 0,0086
=
% Kadar abu tidak larut asam rata-rata = 3
0,43% 0,38%
0,40%+ +
Lampiran 6. Bagan Alur Penelitian
Dipisahkan dari tangkainya Dikupas kulit buahnya
Dirajang-rajang Ditimbang
Dikeringkan dalam lemari pengering Ditimbang
Dihaluskan (diblender) Ditimbang
Buah rotan jernang
Kulit buah rotan jernang
Berat basah 980 g
Berat kering 820 g
Beratserbuk750 g
8. Pemeriksaan Makroskopik 9. Pemeriksaan Mikroskopik 10.Penetapan Kadar Air
11.Penetapan Kadar Sari Larut Dalam Air 12.Penetapan Kadar Sari Larut Dalam Etanol 13.Penetapan Kadar Abu Total
14.Penetapan Kadar Abu Tidak Larut Asam
6. Pemeriksaan Alkaloid 7. Pemeriksaan Flavonoid 8. Pemeriksaan Tanin 9. Pemeriksaan Glikosida 10.Pemeriksaan Saponin 11.Pemeriksaan
Lampiran 6.(Lanjutan)
Dimasukkan ke dalam wadah Ditambahkan etanol 96% hingga serbuk terendam
Dibiarkan selama lima hari terlindung dari cahaya, sambil sesekali diaduk
Disaring
Dimaserasi ulang menggunakan etanol 96%
Dibiarkan selama duahari terlindung daricahaya, sambil sesekali diaduk
Diuapkan dengan rotavapor(suhu 40oC)
Diuji aktifitas anti mutagenik Dilakukan skrining fitokimia
Serbuk Simplisia
Maserat Ampas
Maserat Ampas
Ekstrak kental (62,78 g)
Hasil + Hasil (Alkaloid, Flavonoid,
Lampiran 7. Bagan Pembuatan Preparat/Apusan Sumsum Tulang Femur Mencit
Dibunuh dengan cara dislokasi leher
Diambil salah satu tulang femurnya, dan dipotong pada bagian pangkal dan ujungnya
Pada salah satu ujung tulang femur, tusukkan jarum syringe yang telah diisi dengan 0,3 ml serum darah sapi, lalu diaspirasi sum-sum tulangkedalammikrotube
Disentrifuge dengan kecepatan 1.200 rpm selama 5 menit
Dibuang bagian supernatan
Diambil dengan menggunakan mikropipet Ditaruh pada salah satu ujung sisi objek glass, dan dioleskan hingga menyebar menggunakan objek glass yang lain
Dibiarkan hingga kering
Difiksasi menggunakan methanol selama 10 menit
Diwarnai dengan Giemsa-Metanol (20% v/v) selama 30 menit
Dicuci dengan air yang mengalir
Dikeringkan pada suhu kamar selama satu malam Mencit
Endapan / seluntuk dibuat apusan
Lampiran 8. Alat-alat
Gambar 12 Velocity 18 R Refrigerated Centrifuge
[image:70.595.114.502.456.731.2]Lampiran 8(Lanjutan)
[image:71.595.114.522.457.716.2]Lampiran 9 Hewan Percobaan
Gambar 16 Mencit Jantan
[image:72.595.113.503.368.575.2]Lampiran 10. Contoh perhitungan dosis
Contoh perhitungan dosis unuk mencit dengan berat badan 25 g dengan dosis ekstrak etanol kulit buah rotan jernang 5 mg/kg bb
Dosis = 5 mg/kg bb
= x 25g 0,125mg g
1000 mg 5
=
Konsentrasi suspensi ekstrak yang dibuat 0,1% =
ml mg 1 ml 100 mg 00 1 ml 100 g ,1 0 = =
Jumlah obat yang disuntikkan = 0,125ml mg/ml 1 mg ,125 0 =
Digunakan syringe 1 ml dengan skala 100, maka 1 skala = 0,01 ml Maka suspense yang diberikan = 12,5skala
Lampiran 11. Hasil Pengamatan Apusan Menggunakan Mikroskop
A B
[image:74.595.122.436.102.576.2]
C D
Gambar18 Sel yang Tampak pada Apusan Sumsum Tulang Mencit Keterangan:
Lampiran 12. Jumlah Sel Mikronukleus Pada SumsumTulang Femur Mencit Tabe l3 Jumlah mikronukleus dalam 200 sel eritrosit polikromatik
Kelompok Perlakuan Jumlah sel mikronukleus
Mencit1 Mencit2 Mencit3 Mencit4 Mencit5 I Suspensi CMC
1% 23 20 21 24 20
II
Suspensi CMC 1%, Induksi
dengan Siklofosfamid
68 65 64 66 67
III
Suspensi EEKBRJ dosis 5
mg/kg bb, Induksi dengan
Siklofosfamid
59 54 55 53 51
IV
Suspensi EEKBRJ dosis
10 mg/kg bb, Induksi dengan
Siklofosfamid
37 34 36 35 33
V
Suspensi EEKBRJ dosis
15 mg/kg bb, Induksi dengan
Siklofosfamid
Lampiran 13. Hasil Analisis Statistik Menggunakan SPSS 22 Tabel 4 Uji Deskriptif
Descriptives
jumlahmikronukleus
N Mean Std.
Deviation
Std.
Error
95% Confidence
Interval for Mean
Minimum Maximum
Lower
Bound
Upper
Bound
Kontrol
Normal 5 21,6000 1,81659 ,81240 19,3444 23,8556 20,00 24,00
penginduksi 5 66,0000 1,58114 ,70711 64,0368 67,9632 64,00 68
