II.. JJuudduull : : RReeaakkssi i UUjji i PPrrootteeiin n ((PPeennggeennddaappaan n ddeennggaan n LLooggaamm)) IIII.. TTuujjuuaann ::UUnnttuuk k mmeenngguujji i ddaan n mmeennggiiddeennttiiffiikkaassi i pprrootteeiinn
menggunakan
menggunakan uji uji pengendapan pengendapan LogamLogam IIIIII.. DDaassaar r TTeeoorrii
Protei
Protein n adalah sekelompoadalah sekelompok k senasena!a !a orgaorganik nik ang naris ang naris keselukeseluruhannruhannaa ter
terdiri diri atas atas karkar"on"on# # hidhidrogrogen# en# oksoksigeigen# n# dan dan nitnitrogrogen. en. ProProtein tein "ia"iasansana a suasuatutu polimer ang tersusun
polimer ang tersusun atas "anak su"unit atas "anak su"unit (monomer) ang dikenal se(monomer) ang dikenal se"agai asam"agai asam ami
amino. no. $s$sam am amiamino no anang g "ia"iasansana a ditditemuemukan kan daldalam am proprotein tein menmenunjunjukkukkanan struktur se"agai "erikut (%ried dan &ademenos# ').
struktur se"agai "erikut (%ried dan &ademenos# ').
%un
%ungsi gsi proprotein tein ditditententukaukan n oleh oleh konkonforformasmasinina# a# atau atau polpola a liplipatan atan tigtigaa dimensina# ang merupakan pola dari rantai polipeptida. *e"erapa protein seperti dimensina# ang merupakan pola dari rantai polipeptida. *e"erapa protein seperti keratin ram"ut dan "ulu# "erupa sera"ut# dan tersusun mem"entuk struktur linear keratin ram"ut dan "ulu# "erupa sera"ut# dan tersusun mem"entuk struktur linear atau struktur seperti
atau struktur seperti lem"arlem"aran an dengdengan an pola lipatan "erulang ang pola lipatan "erulang ang teraturteratur. Protein. Protein lainna# seperti ke"anakan en+im# terlipat mem"entuk konformasi glo"ular ang lainna# seperti ke"anakan en+im# terlipat mem"entuk konformasi glo"ular ang padat
padat dan dan hampir hampir menerupai menerupai "entuk "entuk "ola. "ola. ,onformasi ,onformasi akhir akhir "ergantung "ergantung padapada "er"agai ma-am interaksi ang terjadi (,u-hel dan Ralston# ').
"er"agai ma-am interaksi ang terjadi (,u-hel dan Ralston# ').
Dalam ilmu ,imia# pen-ampuran atau penam"ahan suatu sena!a dengan Dalam ilmu ,imia# pen-ampuran atau penam"ahan suatu sena!a dengan sena!a ang lain dikatakan "ereaksi "ila menunjukkan adana tanda terjadina sena!a ang lain dikatakan "ereaksi "ila menunjukkan adana tanda terjadina reaksi# aitu: adana peru"ahan !arna# tim"ul gas# "au# peru"ahan suhu# dan reaksi# aitu: adana peru"ahan !arna# tim"ul gas# "au# peru"ahan suhu# dan ada
adana na endendapaapan. n. PenPen-am-ampurpuran an anang g tidtidak ak disdisertaertai i dendengan gan tantanda da demdemikiikian#an# dikatakan tidak terjadi reaksi kimia. $da "e"erapa reaksi khas dari protein ang dikatakan tidak terjadi reaksi kimia. $da "e"erapa reaksi khas dari protein ang men
menunjunjukkukkan an efekefektatanda nda terterjadjadinina a reakreaksi si kimkimia# ia# aang ng "er"er"ed"eda/"ea/"eda da antantaraara pereaksi
pereaksi ang ang satu satu dengan dengan pereaksi pereaksi ang ang lainna. lainna. 0emisal 0emisal reaksi reaksi uji uji proteinprotein (al"umin) dengan *iuret test ang menunjukkan peru"ahan !arna# "elum tentu (al"umin) dengan *iuret test ang menunjukkan peru"ahan !arna# "elum tentu sama dengan pereaksi uj
sama dengan pereaksi uji lainna ($ri!ulan# '11).i lainna ($ri!ulan# '11). Uji
Uji proprotein tein dendengan gan metmetode ode ideidentintifikafikasi si proproteitein n se-ase-ara ra kuakualitalitatif tif dapdapatat menggunakan prinsif (,hoiriah# '1') :
menggunakan prinsif (,hoiriah# '1') :
•
• Uji Uji *iuret *iuret : : pem"epem"entukantukan n sensena!a a!a kompkompleks leks koorkoordinat dinat ang "er!arnaang "er!arna
ang di"entuk oleh 2u3
ang di"entuk oleh 2u344 dengan gugus 526 dan 57& pada ikatan peptida dengan gugus 526 dan 57& pada ikatan peptida
dalam larutan suasana "asa. dalam larutan suasana "asa.
•
• PengePengendapandapan dengan lon dengan logam gam : pem"en: pem"entukan sentukan sena!a tak laa!a tak larut antararut antara
protein dan logam "erat. protein dan logam "erat.
• Pengendapan dengan garam : pem"entukan sena!a tak larut antara
protein dan ammonium sulfat.
• Pengendapan dengan alkohol : pem"entukan sena!a tak larut antara
protein dan alkohol.
• Uji koagulasi : peru"ahan "entuk ang ire8ersi"el dari protein aki"at dari
pengaruh pemanasan.
• Denaturasi protein : peru"ahan pada suatu protein aki"at dari kondisi
lingkungan ang sangat ekstrim.
*er"agai protein glo"ular mempunai daa kelarutan ang "er"eda dalam air. 9aria"el ang mempengaruhi kelarutan ini adalah p&# kekuatan ion# sifat dielektrik pelarut# dan temperatur. Pemusahan protein dari -ampuran dengan pengaturan p& didasarkan pada harga p& isoelektrik ang "er"eda/"eda untuk
tiap ma-am protein. Pada umumna molekul protein mempunai daa kelarutan minimum pada p& isoelektrikna. Pada p& isoelektrikna "e"erapa protein akan mengendap dari larutan# sehingga dengan -ara pengaturan p& larutan# masing/ masing protein dalam -ampuran dapat dipisahkan satu dari ang lainna dengan teknik ang dise"ut pengendapan isoelektrik (Patong# dkk.# '1').
Protein ang ter-ampur oleh sena!a logam "erat akan terdenaturasi. &al ini terjadi pada al"umin ang terkoagulasi setelah ditam"ahkan $g76 dan
(2&266)'P". 0ena!a/sena!a logam terse"ut akan memutuskan jem"atan
garam dan "erikatan dengan protein mem"entuk endapan logam proteinat. Protein juga mengendap "ila terdapat garam/garam anorganik dengan konsentrasi ang
tinggi dalam larutan protein. *er"eda dengan logam "erat# garam/garam anorganik mengendapkan protein karena kemampuan ion garam terhidrasi sehingga "erkompetisi dengan protein untuk mengikat air. Pada per-o"aan# endapan ang direaksikan dengan pereaksi millon mem"erikan !arna merah muda# dan filtrat ang direaksikan dengan "iuret "er!arna "iru muda. &al ini "erarti ada se"agian protein ang mengendap setelah ditam"ahkan garam (0ri#
'1').
Protein dapat diendapkan oleh ion/ion logam "erat. Pengendapan ini terjadi karena ion/ion logam "erat mem"entuk garam proteinat ang tidak larut dalam air.
Pengendapan ini terjadi karena adana reaksi penetralan muatan antara ion logam "erat dengan anion dari protein.
Larutan al"umin ditam"ahkan dengan larutan &g2l' dan larutan P"/asetat.
0etelah larutan al"umin ditam"ahkan dengan larutan &g2l' dan larutan P"/asetat#
ter"entuk endapan "er!arna putih dari garam proteinat.
Larutan protein pada titik isoelektrikna memiliki kutu" negatif dan positif dengan per"andingan sama. ;ndapan putih ang dihasilkan merupakan hasil dari reaksi penetralan muatan antara ion logam "erat se"agai kation dengan molekul protein se"agai anion. Pada penam"ahan larutan protein dengan &g2l'dan P"/
asetat# anion/anion dari &g2l'dan P"/asetat akan mene"a"kan suasana larutan
menjadi sedikit asam# sehingga protein akan mengkondisikan diri se"agai "asa dan se"agian terdapat se"agai anion. $nion dari protein inilah ang "ereaksi dengan ion logam "erat mem"entuk garam proteinat ang tidak larut dalam air .
Pada p& di atas titik isoelektrik protein "ermuatan negati8e# sedangkan di "a!ah titik isoelektrik protein "ermuatan positif. 6lehkarena itu untuk
mengendapkan protein dengan ion logam diperlukan p& larutan di atas titik isoelektrik# sedangkan untuk pengendapan protein dengan ion negati8e memerlukan p& larutan di "a!ah titik isoelektrik. Ion/ ion positif ang dapat mengendapkan protein adalah $g4# 2a'4# <n'4# &g'4#P"'4#2u'4#%e'4. 0edangkan
ion/ion negati8e ang dapat mengendapkan protein adalah ion salisilat# trikloroasetat# pikrat# tanat dan sulfosalisilat(Ria!an# 1==).
I9. $lat dan *ahan $lat :
1. Pipet tetes '. >elas ukur . *eker gelas ?. Ta"ung reaksi @. Rak ta"ung reaksi
*ahan:
1. &g2l' #' A
'. Tim"al asetat #' A . $l"umin
?. Larutan Putih telur 1/@B @. 0usu 1/@B
9. Prosedur
,e dalam mL larutan protein tam"ahkan @ tetes &g2l' #' A. Ulangi
per-o"aan dengan menggunakan P" $setat #' A
9I. &asil Pengamatan
Ta"el &asil Pengamatan
7 o
0ampel Penam"ahan
&g2l' P"/$setat
1 $l"umin Larutan putih 4
endapan putih
Larutan "ening 4 endapan putih ' Putih telur 1B Larutan "ening Larutan "ening
4 endapan putih Putih telur 'B Larutan "ening Larutan "ening
4 endapan putih ? Putih telur B Larutan "ening Larutan "ening
4 endapan putih @ Putih telur ?B Larutan keruh Larutan keruh 4 endapan putih Putih telur @B Larutan keruh Larutan keruh 4
endapan putih C Larutan 0usu ' B Larutan putih Larutan putih 4
endapan 9II. Persamaan Reaksi
9III. Pem"ahasan
Pada per-o"aan ini# aitu reaksi uji protein dengan uji pengendapan dengan logam. Pada Uji pengendapan dengan logam sa mpel ang digunakan aitu larutan putih telur 1B/@B#susu 'B dan al"umin. Prinsip dari Pengendapan dengan logam ini adalah pem"entukan sena!a tak larut antara protein dan logam "erat.
Pada reaksi ini# putih telur 1B/@B#susu 'B dan al"umin ditam"ahkan dengan &g2l'dan P"/$setat . Pada penam"ahan &g2l' larutan al"umin "eru"ah
dari "ening menjadi putih dan terdapat endapan putih#pada larutan putih telur 1B/ B larutan "ening#pada putih telur ?/@B larutan keruh sedangkan pada susu larutan putih. Pada penam"ahan P" asetat#Larutan putih telur 1B/B "ening#putih telur ?/@B keruh#semua sampel larutan putih telur hana terjadi gumpalan "ukan endapan. 0edangkan pada al"umin larutan "ening dan ada endapan putih pada susu larutan putih dan ada endapan.
Dari sampel ang ada putihh telur hal ini menunjukkan uji negatif terhadap pengendapan logam#susu positif terhadap P"/$setat dan al"umin menunjukkan uji positif terhadap pengendapan logam (&g2l' dan P"/$setat)#al"umin ter"entuk
endapan saat "ereaksi dengan &g2l' dan P"/$setat. 0eharusna semua sampel
menunjukkan hasil positif#menurut teori "ah!a logam "erat dapat mengendapkan protein dengan -ara menaikkan p& diatas titik isoelektrik (Rid!an# 1==) . Pada penam"ahan larutan protein dengan &g2l' dan P"/asetat# anion/anion dari &g2l'
dan P"/asetat akan mene"a"kan suasana larutan menjadi sedikit asam# sehingga protein akan mengkondisikan diri se"agai "asa dan se"agian terdapat se"agai
anion. $nion dari protein inilah ang "ereaksi dengan ion logam "erat mem"entuk garam proteinat ang tidak larut dalam air. Protein ang ter-ampur oleh sena!a logam "erat akan terdenaturasi. &al ini terjadi pada al"umin ang terkoagulasi setelah ditam"ahkan &g2l' maupun tim"al asetat &al ini dise"a"kan karena
adana kemampuan protein untuk "erikatan dengan ion logam di atas titik isoelektrikna. ,emampuan ini dise"a"kan karena pada saat p& "erada di atas titik isoelektrik protein# maka ia akan "ermuatan negatif sehingga mampu mengikat ion logam ang "ermuatan positif. $dana pertam"ahan ion logam mene"a"kan putusna jem"atan disulfida dan ikatan ko8alen 0/0 pada protein ang mengandung gugus sulfuhidril.
*anakna gumpalan dan endapan ang terjadi pada penam"ahan &g2l'dan
P"/$setat "er"eda karena dipengaruhi oleh tetapan disosiasi dan ,sp. Tetapan disosiasi dari &g2l' le"ih "esar di"andingkan dengan P" asetat dan ,sp P" le"ih
"esar dari ,sp &g.. 0emakin "esar harga ,sp suatu sena!a# maka semakin mudah larut sena!a terse"ut#maka seharusna endapan pada &g2l'le"ih "anak
daripada endapan pada P"/$setat#namun pada per-o"aan ini terjadi kesalahan dimana endapan pada P"/$setat le"ih "anak dari endapan pada &g2l'.
Dengan adana endapan saat protein "eereaksi dengan &g2l' dan P"/
$setat menunjukkan "ah!a protein dapat "ertindak se"agai antidotumpena!ar ra-un pada kera-unan logam "erat seperti &g dan P". 0alah satu sum"er protein adalah susu.
*anak faktor ang harus diperhatikan selama praktikum#seperti 8olume larutan#degradasi !arna serta endapan ang terjadi. ,esalahan ang terjadi "isa dise"a"kan oleh kurang telitina praktikan saat praktikum#"isa juga karena alat atau "ahan ang digunakan pada saat praktikum.
I. ,esimpulan
1. Pada reaksi uji protein dengan penam"ahan logam "erat seperti logam &g dan P" "ereaksi positif dengan adana pengendapan
'. Pada pengendapan protein dengan ion logam "erat# pengendapan terjadi karena ion logam "erat dengan protein mem"entuk garam proteinat ang tidak larut dalam air
. Larutan protein pada titik isoelektrikna memiliki kutu" negatif dan positif dengan per"andingan sama. ;ndapan putih ang dihasilkan merupakan hasil dari reaksi penetralan muatan antara ion logam "erat se"agai kation dengan molekul protein se"agai anion
4. 0ampel ang menunjukkan hasil positif terhadap uji pengendapan logam adalah al"umin
