PENGAMATAN DAYA ANTI MIKROBA ANTISEPTIK TERHADAP BAKTERI
LAPORAN
UNTUK MEMENUHI TUGAS MATAKULIAH Mikrobiologi
yang dibina oleh Ibu Sitoresmi Prabaningtyas, S.Si, M.Si
Oleh Kelompok 6 :
Laily Rahmawati 140342600476 Listia Ningrum 140342601711 Siti Hartina P. 140342603933 Achmad Fais 120342422457
UNIVERSITAS NEGERI MALANG
FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM JURUSAN BIOLOGI
A. Topik
Pengamatan Daya Anti Mikroba Antiseptik Terhadap Bakteri B. Tujuan
Untuk mengetahui daya antimikroba dari beberapa macam antiseptikdan hand wash.
C. Hari, Tanggal Pelaksanaan Senin, 28 Maret 2016
D. Dasar Teori
Mikroorganisme adalah makhluk hidup yang memiliki aktivitas yang berupa tumbuh dan berkembang. Kadang kala pertumbuhan dan perkembangan mikroorganisme ini terganggu. Hal ini dapat dipengaruhi baik dari mikroba itu sendiri ataupun dari luar. Salah satu pengaruh yang paling berkompoten adalah antimikroba (Gobel, 2008). Antimikroba adalah senyawa yang dapat menghambat atau membunuh mikroorganisme hidup. Senyawa yang dapat menghambat pertumbuhan bakteri disebut bakteriostatik dan yang dapat membunuh bakteri disebut bakterisida. Atau dengan kata lain disebut juga antibiotika yaitu bahan-bahan yang bersumber hayati yang pada kadar rendah sudah menghambat pertumbuhan mikroorganisme hidup (Gobel, 2008).
Antibiotik adalah bahan yang dihasilkan oleh mikroorganisme atau sintetis yang dalam jumlah kecil mampu menekan menghambat atau membunuh mikroorganisme lainnya. Antibiotik memiliki spektrum aktivitas antibiosis yang beragam. Antiseptik adalah zat yang biasa digunakan untuk menghambat pertumbuhan dan membunuh mikroorganisme berbahaya (patogenik) yang terdapat pada permukaan tubuh luar mahluk hidup seperti pada permukaan kulit dan membran mukosa. Secara umum, antiseptik berbeda dengan obat-obatan maupun disinfektan. Misalnya obat-obat-obatan seperti antibiotik dapat membunuh mikroorganisme secara internal, sedangkan disinfektan berfungsi sebagai zat untuk membunuh mikroorganisme
yang terdapat pada benda yang tidak bernyawa (Ayumi,2011). Disinfektan yaitu suatu senyawa kimia yang dapat menekan pertumbuhan mikroorganisme pada permukaan benda mati seperti meja, lantai dan pisau bedah sedangkan antiseptik digunakan untuk menekan pertumbuhan mikroorganisme pada jaringan tubuh, misalnya kulit.
Kekuatan masing-masing zat antiseptik tersebut berbeda-beda. Ada yang memiliki kekuatan yang sangat tinggi, ada pula yang bereaksi dengan cepat ketika membunuh mikroorganisme dan sebaliknya. Sebagai contoh merkuri klorida, zat antiseptik yang sangat kuat, akan tetapi dapat menyebabkan iritasi bila digunakan pada bagian tubuh atau jaringan lembut. Perak nitrat memiliki kekuatan membunuh yang lebih rendah, tetapi aman digunakan pada jaringan yang lembut, seperti mata atau tenggorokan. Iodium dapat memusnahkan mikroorganisme dalam waktu kurang dari 30 detik. Antiseptik lain bekerja lebih lambat, tetapi memiliki efek yang cukup lama. Kekuatan suatu zat antiseptik biasanya dinyatakan sebagai perbandingan antara kekuatan zat antiseptik tertentu terhadap kekuatan antiseptik dari fenol (pada kondisi dan mikroorganisme yang sama), atau yang lebih dikenal sebagai koefisien fenol (coefficient of phenol). Fenol sendiri, pertama kali digunakan sebagai zat antiseptik oleh Joseph Lister pada proses pembedahan (Dwidjoseputro, 1994).
Mekanisme kerja antiseptik terhadap mikroorganisme berbeda-beda, misalnya saja dengan mendehidrasi (mengeringkan) bakteri, mengoksidasi sel bakteri, mengkoagulasi (menggumpalkan) cairan di sekitar bakteri, atau meracuni sel bakteri. Beberapa contoh antiseptik diantaranya adalah yodium (povidene iodine 10%), hydrogen peroksida, etakridin laktat (rivanol), dan alkohol (Ayumi,2011).
Aktivitas antibakteri diuji dengan metode difusi agar menggunakan cakram kertas dan dengan metode pengenceran agar. Metode difusi agar dilakukan dengan cara mencampur sebanyak 50 ml
masing-masing suspense Bakteri ke dalam 15 ml media agar yang telah dicairkan dalam cawan petri dan kemudian dibiarkan menjadi padat. Cakram kertas dengan diameter 6 mm diletakkan pada permukaan media padat. Dibiarkan selama 3 menit pada suhu kamar sebelum dimasukkan ke incubator 370 C (Adryana, et al,,2009 dalam Putra, 2011).
Zat antimikroba adalah senyawa yang dapat membunuh atau menghambat pertumbuhan mikroorganisme. Zat antimikroba dapat bersifat membunuh mikroorganisme (microbicidal) atau menghambat pertumbuhan mikroorganisme (microbiostatic). Disinfektan yaitu suatu senyawa kimia yang dapat menekan pertumbuhan mikroorganisme pada permukaan benda mati seperti meja, lantai dan pisau bedah. Adapun antiseptik adalah senyawa kimia yang digunakan untuk menekan pertumbuhan mikroorganisme pada jaringan tubuh, misalnya kulit. Efisiensi dan efektivitas disinfektan dipengaruhi oleh beberapa faktor yaitu konsentrasi, waktu terpapar, jenis mikroba, kondisi lingkungan: temperatur, pH dan jenis tempat hidup.
E. Alat dan Bahan Alat: 1. Cawan petri 2. Cotton bud 3. Jarum inokulasi berkolong 4. Pemanas bunsen 5. Paper disk 6. Inkubator
7. Laminar air flow 8. Kompor gas 9. Beaker glass 10. Tabung reaksi 11. Otoklaf
12. Rak tabung reaksi 13. Pengaduk kaca
14. Scaple 15. Pinset
Bahan :
1. Biakan murni bakteri dalam media nutrien cair yang berumur 1 x 24 jam (E. coli dan S. Aureus) 2. Media lempeng nutrien
agar (NA) steril
3. Berbagai zat anti septik : iodine, bettadine, dettol
F. Prosedur Kerja
Disediakan dua media NA steril dan masing-masing diberi kode sesuai dengan bakteri yang diuji
Diinokulasikan secara merata masing-masing biakan murni bakteri kepermukaan medium NA sesuai dengan kodenya. Dengan cara aseptik dicelupkan ujung cotton bud ke dalam medium nutrien cair, kemudian nutrien cair, kemudian dioleskan pada permukaan lempeng
NA sampa merata
Dibuat modifikasi paper disk dan disiapkan sejumlah antiseptik yang diuji. Caranya dapat dibuat dari kertas hisap yang berbentuk bulat digunakan perforator. direndam paper disk di dalam zat antiseptik
selama 15 menit
Disiapkan media lempeng NA steril sementara itu membagi 4 sektor dibagian luar cawan dan berilah kode masing-masing sektor sesuai zat
antiseptik.
Diletakkan paper disk yang sudah direndam dalam aseptik menggunakan pinset steril pada permukaan media NA yang sudah diinokulasikan bakteri. Diatur jarak antara paper disk agar tidak terlalu
rapat, sesuai dengan kode sektornya
Diinkubasi kedua sediaan yang sudah diperlakukan ini pada suhu 37ᴼC selama 1 x 24 jam
Diukur diameter zona hambatan dari pertumbuhan bakteri pada masing-masing perlakuan.
G. Data Hasil Pengamatan Nama bakteri
Diameter zona hambat (mm) Pada Perlakuan dengan Shampo Dove Shamp o Sunslik Shamp o Emero Sham po Pente Shamp o Rejoice Sham po Clear
n ne
E.coli 2,4 2,2 1,7 1,5 1,6 2,6
S.aureus 2,8 2,5 1,8 2,2 2,4 2,8
H. Analisis Data
Untuk mengetahui daya antimikroba dari beberapa macam antiseptik berupa sahampo dengan merk yang berbeda terhadap bakteri, menggunakan paper disk yang dipotong sehingga berbentuk lingkaran, kemudian memasukkan potongan paper disk ke dalam antiseptik yang digunakan dalam percobaan ini (dove, pentene, rejoice, sunslik, clear, dan emeron), lalu membiarakannya terendam ± 15 menit. Disisi lain menyediakan 2 medium lempeng NA steril dan diberi kode yang berbeda, kemudian menginokulasikan secara merata masing-masing jenis biakan murni bakteri yaitu dengan menggunakan bakteri S. aureus dan E. coli ke medium NA yang berbeda dengan cara mencelupkan ujung cotton bud dalam medium nutrien cair, kemudian mengoleskan pada permukaan medium lempeng NA sampai rata secara aseptik. Kemudian meletakkan guntingan kertas penghisap tersebut pada permukaan medium yang sudah diinokulasi bakteri di atas secara aseptik, kemudian menginkubasikan kedua perlakuan bakteri pada suhu 370C selama 1x24 jam.
Setelah diinkubasi, biakan bakteri yang diberi paper disk yang sudah direndam dengan 6 jenis antibiotik. Ada daerah bening disekitar paper disk yang tidak di tumbuhi bakteri. Masing masing antiseptik memiliki ukuran zona hambat yang berbeda, clear memiliki diameter zona hambat paling besar dari pada antibiotik yang lain untuk kedua bakteri yang digunakan (E. coli dan S. aureus) yaitu pada bakteri E. coli sebesar 2,6 cm. Pada bakteri S. aureus diameternya sebesar 2,8 cm. Untuk antiseptik betadine pada bakteri E. coli diameter pada
ulangan 1 sebesar 1,9 cm, ulangan 2 sebesar 2 cm dan ulangan ke 3 sebesar 2,5 cm dengan rata-rata 2,13 cm. Pada bakteri S. aureus diameternya ulangan 1 sebesar 1,6 cm, ulangan 2 sebesar 1,5 cm dan ulangan 3 sebesar 1,7 cm dengan rata-rata 1,6 cm. Dalam percobaan ini, data yang didapat merupakan data hasil kompilasi semua kelompok biologi offering H.
I. Pembahasan
Pada pengamatan uji antimikroba beberapa jenis antiseptik, antiseptik yang digunakan adalah dari 6 jenis merk yang berbeda, yaitu dove, pentene, rejoice, sunslik, clear, dan emeron. Digunakannya 6 jenis merk berbeda tersebut dimaksudkan untuk mengetahui merk antiseptik manakah yang paling bagus antimikrobanya terhadap 2 jenis bakteri, yaitu Staphylococcos aureus dan Escherichia coli. Bahan aktif dari shampoo clear adalah Chloroxyfenol 4,8%. Digunakannya 2 jenis bakteri tersebut dikarenakan keduanya merupakan bakteri patogen. Menurut sumber Jawetz (2005), Staphylococcus merupakan bakteri gram positif berbentuk bola dengan diameter 1μm yang tersusun dalam bentuk kluster seperti anggur, bersifat patogen, non motil, dan memproduksi katalase. Sedangkan E.coli merupakan bakteri gram negatif yang berbentuk batang pendek dengan ukuran 0,4-0,7 μm x 1.4 μm, beberapa strainnya mempunyai kapsula, dan mampu memfermentasikan laktosa (Levinson, 2004).
Metode yang digunakan pada praktikum ini adalah menggunakan paper-disk yang direndam dalam larutan antibiotik selama 15 menit. Metode paper-disk ini biasa digunakan untuk menguji aktivitas antimikroba suatu antibiotik terhadap mikroorgansme patogen. Kepekaan dari mikroorganisme patogen terhadap antibiotik dilihat dari ukuran zona bening yang terbentuk di sekitar paperdisk (Cappuccino, 2001). Antimikroba yang berbeda akan memiliki laju difusi yang berbeda-beda pula, sehingga keampuhan dari tiap antimikroba satu sama lain tidak sama (Wilson, 1982). Widjayanti (1996) juga
menyatakan bahwa bahan antimkroba berfungsi untuk mematikan, merusak, dan menghambat pertumbuhan dari mikroba. Antimikroba akan bekerja dengan cara merusak dinding sel atau protein dari mikroba sehingga bakteri tersebut mati (Widjayanti, 1996).
Berdasarkan hasil pengamatan yang telah dilakukan setelah bakteri diinkubasi selama 1x24 jam, terdapat perbedaan yang cukup signifikan antara shampoo satu dengan shampo yang lain. Shampo dengan merk clear menujukkan hasil yang paling baik antimikrobanya, dimana merk clear saat diukur zona bening yang terbentuk di sekitar paper-disk adalah yang paling luas diantara 5 jenis merk antiseptik lainnya. Untuk perhitungan dari diameter zona bening, digunakan 3 kali ulangan dan kemudian dirata-rata agar diperoleh hasil yang lebih akurat. Rata-rata diameter dari zona bening yang terbentuk dengan menggunakan clear adalah sebesar 2,8 cm untuk bakteri S.aureus dan 2,6 cm untuk banteri E.coli, yang menunjukkan bahwa bakteri S.aureus lebih resisten daripada bakteri E.coli karena zona hambatnya lebih kecil pada S.aureus walaupun hanya selisih 0,2.
Dari diameter tersebut dapat diketahui bahwa uji antimikroba yang terbesar dimiliki oleh antiseptik merk clear. Hal ini disebabkan karena adanya kandungan Poloxamer, Citric Acid, Sodium Polynap, Lysine HCL, dan Dimethicone. Hal ini didukung pernyataan Agung (2009) bahwa bahan-bahan seperti Poloxamer, Lysine HCL, Citric Acid, Sodium Polynap, dan Dimethicone dapat membunuh bakteri dengan mengganggu membran sel bakteri yang akan menurunkan kemampuan membran sel memproduksi ATP sebagai sumber energi.
J. Kesimpulan
Dari praktikum yang telah dilakukan, diperoleh hasil bahwa antiseptik yang paling baik membunuh kuman adalah Clear, karena adanya kandungan Poloxamer, Citric Acid, Sodium Polynap, Lysine HCL, dan Dimethicone dapat membunuh bakteri dengan mengganggu membran
sel bakteri yang akan menurunkan kemampuan membran sel memproduksi ATP sebagai sumber energi.
Daftar Rujukan
Agung, Sri. 2009. Pemeriksaan Bilangan Bakteri dan Pengaruh Beberapa Perlakuan terhadap Penurunan Bilangan Bakteri pada Mouthpiece Alat Musik Tiup Maching Band di Jatinago. Farmaka, Volume 7 Nomor 1 April 2009, (online). http://farmasi.unpad.ac.id, diakses tanggal 25 Oktober 2014.
Cappuccino, J.G & Natalie, S. 2001. Microbiology a Laboratory Manual. Addison Weasley Publishing Company: New York.
Dwijoseputro. 1994. Dasar-dasar Mikrobiologi. Jakarta : Djambatan. Gobel, Risco, B., dkk., 2008, Mikrobiologi Umum Dalam Praktek.
Makassar: Universitas Hasanuddin.
Jawetz, E. Joseph M., and Edward A. 2005. Mikrobiologi Kedokteran. Penerbit EGC: Jakarta.
Levinson, W. 2004. Review of Medical Microbiology and Immunology, 9th ed. Mc. Graw
Pratiwi, Sylvia T. 2008. Mikrobiologi Farmasi. Erlangga: Bandung.
Putra, 2011. Metode Cakram. (Online),
(http://kesehatan.kompasiana.com/makanan/2011/06/03/metode-cakram/, diakses 23 November 2011).
Widjayanti, U. 1996. Obat-obatan. Kanisius: Yogyakarta.
Wilson, Gisvold. 1982. Kimia Farmasi dan Medisinal Organik. Semarang Press: Semarang.
LAMPIRAN Bakteri E.coli
