i
ISOLASI DAN IDENTIFIKASI BAKTERI TOLERAN
PESTISIDA DENGAN BAHAN AKTIF KLORANTRANILIPROL
ASAL TANAH PERTANIAN BATURITI TABANAN BALI
Skripsi
Sebagai tugas akhir untuk memenuhi syarat mencapai derajat Sarjana S-1 Program Studi Biologi FMIPA Universitas Udayana
Oleh
Ni Kadek Wiwik Sinta Dewi 1208305001
PROGRAM STUDI BIOLOGI
FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM
UNIVERSITAS UDAYANA
ii
SKRIPSI
ISOLASI DAN IDENTIFIKASI BAKTERI TOLERAN
PESTISIDA DENGAN BAHAN AKTIF KLORANTRANILIPROL
ASAL TANAH PERTANIAN BATURITI TABANAN BALI
Oleh :
Ni Kadek Wiwik Sinta Dewi 1208305001
Telah dipertahankan di depan Tim Penguji dan telah dinyatakan lulus pada Kamis, 11 Agustus 2016
Menyetujui
Pembimbing I Pembimbing II
Dr. Drs. Ida Bagus Gede Darmayasa, M.Si Drs. I Ketut Sundra, M.Si NIP. 19671203 199303 1 002 NIP. 19590623 198903 1 001
Mengesahkan
Ketua Program Studi Biologi FMIPA Universitas Udayana
iii KATA PENGANTAR
Puji syukur penulis panjatkan ke hadirat Ida Sang Hyang Widhi Wasa/Tuhan Yang Maha Esa, karena berkat rahmat-Nyalah penulis dapat menyelesaikan skripsi yang berjudul “Isolasi dan Identifikasi Bakteri Toleran Pestisida dengan Bahan Aktif Klorantraniliprol Asal Tanah Pertanian
Baturiti Tabanan Bali”. Pada kesempatan ini tidak lupa penulis menyampaikan
ucapan terima kasih kepada:
1. Yth. Bapak Dr. Drs. Ida Bagus Gede Darmayasa, M.Si., selaku dosen pembimbing I yang telah memberikan dukungan, ide-ide, masukan, bimbingan dan semangat selama penyusunan skripsi ini.
2. Yth. Bapak Drs. I Ketut Sundra, M.Si., selaku dosen pembimbing II yang telah memberikan ide-ide, masukan, bimbingan dan dukungan selama penyusunan skripsi ini.
3. Yth. Bapak Drs. Yan Ramona, M.App.Sc, Ph.D., Ibu Dr. Dra. Ni Putu Adriani Astiti, M.Si., Bapak Prof. Dr. Ir. I Putu Gede Ardhana, M.Agr.Sc, SH., selaku penguji I, II, dan III atas saran-saran, masukan dan kritik yang membangun untuk perbaikan dan penyempurnaan penulisan skripsi ini. 4. Bapak Dr. I Ketut Ginantra, S.Pd, M.Si, selaku Ketua Program Studi
Biologi FMIPA Universitas Udayana atas dukungan dan sarannya selama penulisan skripsi ini.
5. Ibu Dr. Dra. Eniek Kriswiyanti, M.Si, selaku Pembimbing Akademik yang telah memberikan dukungan, semangat dan nasehat untuk penulis selama penyusunan skripsi.
6. Ibu Dr. Retno Kawuri, M.Phil, selaku kepala Laboratorium Mikrobiologi Program Studi Biologi atas izin, bantuan dan sarannya selama penyusunan skripsi ini.
iv
8. Teman-teman dan sahabat penulis Herry Wahyu Pratama dan keluarga, Ni Made Ayu Brahmiyani, Gusti Ayu Suntarini, Ruth Ellisa, Putri Arnila, Dewi Yuliani, Eka Safitri, Desi Damayanti, Diah Djereng, Mas Suratniasih, Losiani, Kayika, Febri, Yayus, Arius, Reza, Arya, Kak Desi Bintari, Kak Sang Ayu, Kak Desi Kartika, Maya Sari, Vita, Yulia, Nanda, dan tidak lupa kepada Pak Koncreng seorang petani gigih dari Baturiti Tabanan yang sangat menginspirasi penulis selama penelitian atas keramahan dan masukan-masukannya, serta semua pihak yang memberikan dukungan selama penyusunan skripsi ini yang tidak dapat penulis sebutkan satu persatu.
Dalam penyusunan skripsi ini penulis merasa masih banyak kekurangan baik pada teknis penulisan maupun materi, mengingat akan kemampuan yang penulis miliki. Untuk itu, saran dan kritik yang bersifat membangun sangat penulis harapkan dari seluruh pembaca. Akhir kata penulis berharap semoga skripsi ini dapat diterima dan bermanfaat bagi pembaca.
Bukit Jimbaran, 12 Agustus 2016
v ABSTRAK
Pertanian di Indonesia umumnya masih banyak menggunakan pestisida kimia baik berupa insektisida, herbisida, dan fungisida, yang memiliki toksisitas tinggi dan persistensi lama dalam tanah sehingga berpotensi mencemari lingkungan. Salah satu jenis insektisida yang digunakan pada salah satu pertanian di Baturiti Tabanan adalah Prevathon yang memiliki bahan aktif Klorantraniliprol. Di dalam tanah terdapat bakteri-bakteri yang berperan dalam mendegradasi senyawa-senyawa kimia berbahaya menjadi senyawa-senyawa yang lebih sederhana, sehingga bakteri tersebut dimanfaatkan sebagai agen bioremediasi tanah. Tujuan penelitian ini adalah untuk mengetahui pengaruh perlakuan media mineral dengan penambahan pestisida berbahan aktif Klorantraniliprol, untuk mengetahui bakteri yang toleran terhadap pestisida dan karakteristik bakteri yang toleran terhadap pestisida dengan bahan aktif Klorantraniliprol. Penelitian dilakukan di Laboratorium Mikrobiologi Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Udayana, dengan 3 analisis, yaitu (1) uji bakteri toleran pestisida pada media mineral dengan pestisida Prevathon, (2) karakterisasi bakteri, (3) Identifikasi bakteri toleran pestisida dengan BD BBL Crystal Enteric/Non Fermenter ID Kit. Hasil menunjukkan bahwa perlakuan media mineral dengan penambahan pestisida Prevathon (0, 5, 10, 15 ppm) mampu memberikan pengaruh yang berbeda nyata pada pengkayaan 1, 2 dan 3 (P<0,05), serta terdapat 5 isolat bakteri yang diisolasi dari tanah pertanian Baturiti Tabanan yaitu BSP 1, BSP 2, BSP 3 yang merupakan bakteri gram negatif, BSP 4 dan BSP 5 adalah bakteri gram positif. Bakteri yang toleran terhadap pestisida dengan bahan aktif Klorantraniliprol adalah BSP 2 dan teridentifikasi sebagai bakteri Serratia
marcescens.
vi ABSTRACT
In Indonesia of agriculture the practice often used the large scale pesticide application such as insecticide, herbicide, and fungicide. The wide use of toxic pesticide has created numerous problem in increasing environtmental hazard to human and to other animals. Many of soil bacteria had important role to degrading chemical compounds into simpler compounds as a bioremediation agent. The aim of this study was to determine the effect of Prevathon pesticide addition on mineral medium treatment, to determine the potential bacteria which are able to survive on pesticide condition and characteristics of bacteria, to identificate tolerant bacteria which are able to survive on pesticide condition. This research was conducted at Microbiology Laboratory, Faculty of Mathematics and Natural Sciences, Udayana University. The research was done in three analysis, (1) bacteria test on Prevathon pesticide addition to mineral medium treatment, (2) characterization of bacteria, (3) Identification of pesticide tolerant bacteria with BD BBL Crystal Enteric/Non Fermenter ID Kit. The results showed that mineral medium with the addition of pesticides Prevathon treatment able to provide a significant different effect on the enrichment stage 1, stage 2 and stage 3 (P<0.05), there were 5 isolates pesticide tolerant bacteria that were isolated from Baturiti Tabanan cultivated soil that is BSP 1, BSP 2, BSP 3 known as gram negative bacteria, and BSP 4, BSP 5 known as gram positive bacteria, pesticide tolerant bacteria identified as Serratia marcescens which is a Gram negative bacteria group and may cause pathogenic.
vii
2.4. Identitas Bahan Prevathon 50 SC Insektisida ... 9
viii
3.3.1. Sterilisasi alat dan bahan ... 16
3.3.2. Pengenceran sampel tanah ... 16
3.3.3. Uji bakteri toleran pestisida pada media mineral dengan pestisida Prevathon ... 16
3.3.4. Penghitungan total bakteri dengan metode Turbidimetri ... 17
3.3.5. Pemurnian isolat bakteri ... 17
3.3.6. Karakterisasi bakteri ... 18
3.4. Uji Konfirmasi ... 22
3.5. Analisis Data ... 22
IV. HASIL DAN PEMBAHASAN 4.1. Profil Populasi Bakteri pada Media Mineral ... 23
4.2. Karakteristik Makroskopis Bakteri yang Ditumbuhkan pada Media Mineral ... 28
4.3. Hasil Uji Konfirmasi Isolat BSP 2 pada Media Mineral Tanpa Glukosa dengan Penambahan Pestisida ... 30
4.4. Identifikasi Bakteri yang Toleran terhadap Pestisida ... 32
V. PENUTUP 5.1. Kesimpulan ... 36
5.2. Saran ... 36
DAFTAR PUSTAKA ... 37
ix DAFTAR TABEL
Tabel Halaman
1. Hasil uji positif dan negatif pada BD BBL Crystal E/NF ... 19
2. Morfologi makroskopis isolat ... 29
3. Hasil uji konfirmasi isolat ... 30
x DAFTAR GAMBAR
Gambar Halaman
1. Rumus bangun senyawa Klorantraniliprol ... 10
2. Tahap pengambilan sampel tanah ... 15
3. Contoh pencatatan nomor profil pada BD BBL Crystal Report Pad ... 19
4. Grafik jumlah total bakteri pada pengkayaan 1 masa inkubasi 5 hari ... 23
5. Grafik jumlah total bakteri pada pengkayaan 2 ... 25
6. Grafik jumlah total bakteri pada pengkayaan 3 ... 27
7. Morfologi makroskopis 5 isolat ... 30
8. Isolat yang ditumbuhkan pada media NA diperkaya 15 ppm Pestisida .... 31
xi DAFTAR LAMPIRAN
Lampiran Halaman
1. Pembuatan media ... 43
2. Pembuatan dan pengenceran larutan stok ... 44
3. Hasil isolasi bakteri pada perlakuan media mineral ... 46
4. Data Nilai Absorbansi pada media mineral ... 47
5. Standar Media mineral dan nilai absorbansi untuk menghitung jumlah total bakteri pada media mineral ... 48
6. Hasil uji statistik dengan One-Way Anova pada jumlah total bakteri ... 51
7. Hasil uji statistik jumlah total bakteri pada perlakuan ... 56
8. Inkubasi media dan pengamatan hasil uji konfirmasi ... 57
