VALIDASI METODE ANALISIS METOPROLOL DALAM PLASMA MANUSIA SECARA KROMATOGRAFI LAPIS TIPIS
(KLT)-DENSITOMETRI
SKRIPSI
LUTFI ALFIYAH 1308010095
PROGRAM STUDI FARMASI FAKULTAS FARMASI
VALIDASI METODE ANALISIS METOPROLOL DALAM PLASMA MANUSIA SECARA KROMATOGRAFI LAPIS TIPIS
(KLT)-DENSITOMETRI
SKRIPSI
Diajukan sebagai salah satu syarat memperoleh gelar Sarjana Farmasi (S. Farm)
LUTFI ALFIYAH 1308010095
PROGRAM STUDI FARMASI FAKULTAS FARMASI
MOTTO
“Berikanlah kebaikan, kesuksesan, dan kebahagiaan untuk orang lain. Maka kebaikan, kesuksesan, dan kebahagiaan itu akan datang kepadamu. Jika belum
datang, bersabarlah. Karena kesabaran yang indah itu adalah kesabaran yang dipenuhi oleh rasa syukur”
“Jika kamu tahu sedikit yang telah ibumu lakukan demi kamu, maka sejatinya bahkan belum sepersepuluh dari pengorbanan, rasa cinta, serta rasa sayangnya
kepadamu”
PERSEMBAHAN
Ucapan terima kasih dan sujud syukur atas kehadirat Allah SWT, atas segala rahmat, nikmat dan karinia dan hidayahNya dengan kerendan hati dan ketulusan hati, saya persembahkan karya ini kepada:
Bapak dan Ibu
Sobri dan Solikha yang selalu mendo’akanku, terima kasih atas dukungan, bekal dan kasih sayang yang tulus dan selalu memberiku semangat baik moral, spiritual dan materi. Dan do’a kalian berdua yang tak akan pernah putus untuk anakmu ini.
Adik-adikku
Untuk Mochammad Fuad Bawazier dan Fadhil Muhammad Adi Nugraha, terima kasih atas dukungan motivasi dan perhatiannya selama ini, semoga kakamu ini dapat menjadi contoh yang baik untuk kalian dan bisa membanggakan keluarga.
Pembimbing
Dr. Pri Iswati Utami, M.Si.,Apt selaku pembimbing saya selama proses skripsi ini. Terima kasih atas segala hal dan arahan yang diberikan kepada saya.
Teman seperjuangan
Terima kasih selalu menemani saya, memberi arahan, menegur jika saya salah, teruntuk Qurrotul Aen dan Denilla, terima kasih atas kesabarannya membantu saya dan terima kasih atas kerja sama dan do’a nya dalam menyelesaikan skripsi ini. Serta untuk Tri Suliatin dan Wasriah yang telah menyumbangkan darahnya untuk penelitian ini.
Sahabat
Rizka Meiliyana, kak Naela Nur Saikinah, kak Isralinia Vercidyar Rizka, dan kak Hidayatul Istiqomah terima kasih sudah menjadi sahabat yang baik selama di Purwokerto. Untuk Amel dan Aen terima kasih telah mendengarkan segala keluh kesah saya selama 4 tahun ini, terima kasih atas kesabarannya menghadapi sikapku yang kadang cepat emosi dan lama memahami suatu hal.
Teman-teman Farmasi Angkatan 2013
KATA PENGANTAR
Assalaamu’alaikuum Warohmatullah Wabarokatuh
Puji syukur kepada Tuhan Yang Maha Esa, karena atas berkat dan rahmat-Nya dapat menyelesaikan skripsi ini dengan judul Validasi Metode Analisis Metoprolol Dalam Plasma Manusia Secara Kromatografi Lapis Tipis-Densitometri. Penulisan skripsi ini dilakukan dalam rangka memenuhi salah satu syarat untuk mencapai gelar Sarjana Farmasi pada Program Studi S1 Farmasi Fakultas Farmasi Universitas Muhammadiyah Purwokerto.
Penulis menyadari bahwa tanpa bantuan dan bimbingan dari berbagai pihak, dari masa perkuliahan sampai pada penyusunan skripsi ini, sangatlah sulit untuk menyelesaikan skripsi ini. Oleh karena itu, pada kesempatan ini penulis mengucapkan terima kasih kepada yang terhormat:
1. Dr. H. Syamsuhadi Irsyad., SH., MH., selaku Rektor Universitas Muhammadiyah Purwokerto.
2. Dr. Agus Siswanto M.Si., Apt. Selaku Dekan Fakultas Farmasi yang telah memberi berbagai informasi dan bimbingan tentang tata laksana penyusunan skripsi.
3. Wahyu Utaminingrum, M.Sc.,Apt selaku Ketua Program Studi S1 Farmasi yang telah memberi berbagai informasi dan bimbingan tentang tata laksana penyusunan skripsi.
4. Dr. Pri Iswati Utami, M.Si.,Apt selaku dosen pembimbing yang telah menyediakan waktu, tenaga dan pikiran untuk mengarahkan dalam penyusunan skripsi ini.
5. Seluruh Dosen Fakultas Farmasi yang telah membimbing dan memberikan ilmunya dengan penuh kesabaran dan keikhlasan.
6. Laboran Biologi Farmasi Mas Mamat yang telah memberikan waktu dan arahan serta bimbingan dalam menyelesaikan skripsi ini.
7. Bapak dan ibu yang senantiasa mendoakan, memberikan motivasi, nasihat, bimbingan, dan kasih sayang dengan ikhlas sepanjang masa.
Akhir kata, semoga Allah SWT memberikan balasan atas segala kebaikan semua pihak yang telah membantu. Semoga skripsi ini membawa manfaat bagi pengembangan ilmu. Aamiin.
Purwokerto, Juli 2017 Penulis
RIWAYAT HIDUP
Nama : Lutfi Alfiyah
NIM / Angkatan : 1308010095 / 2013 Tempat, tanggal Lahir : Tegal, 25 Januari 1995
Jenis Kelamin : Perempuan
Agama : Islam
Alamat : Jl. Palopo No.35 Rt 06/02 Kel.Tunon Kec.Tegal Selatan Kota Tegal
Validasi Metode Analisis Metoprolol dalam Plasma Manusia Secara Kromatografi Lapis Tipis (KLT)-Densitometri
Lutfi Alfiyah1, Pri Iswati Utami2
ABSTRAK
Metoprolol merupakan obat antihipertensi golongan beta-bloker yang diwajibkan oleh
BPOM (Badan Pengawas Obat dan Makanan) untuk diteliti bioekivalensinya. Metode analisis yang tepat dibutuhkan untuk pengujian bioekivalensi. Penelitian ini bertujuan untuk validasi metode kromatografi lapis tipis (KLT)-densitometri untuk analisis metoprolol dalam plasma. Sebagai langkah awal dilakukan penelitian metode analisis
metoprolol dengan menggunakan plasma darah manusia secara in vitro. Pemisahan
dilakukan menggunakan fase diam berupa lempeng KLT silica gel 60 F254, fase gerak
campuran metanol, kloroform dan amoniak (6 : 4 : 0,2 v/v), deteksi dilakukan dengan densitometer pada panjang gelombang 282 nm. Hasil validasi menunjukkan bahwa metode tersebut mempunyai linearitas yang baik (r = 0,990 pada kadar 15 - 35 µg), batas deteksi 4,60 µg dan batas kuantitasi 15,34 µg. Akurasi ditunjukkan dengan rata-rata % recovery 99,52% serta presisi ditunjukkan RSD (Relative Standard Deviation) sebesar 5,29%.
Validation of Analytical Method for Analysis Metoprolol in Human Plasma by Thin Layer Chromatographic-Densitometry
Lutfi Alfiyah1, Pri Iswati Utami2
ABSTRACT
Metoprolol is a β-blocker medications that are often prescribed into groups of cardiovascular drugs, such as hypertension, angina pectoris due to coronary arteriosclerosis and that should be studied for its bioequivalence. A valid method is needed to bioequivalence study. The purpose of this study was to prove that the Thin Layer Chromatographic (TLC) Densitometry method meet validation parameters including linearity, accuracy, precision, selectivity and range, so that it can be used for plasma metoprolol analysis. TLC plate silica gel 60 F254 (20 cm x 20 cm) as stationary phase and chloroform : methanol : ammonia (4 : 6 : 0,2 v/v) as mobile phase. Detection was done with wavelength 282 nm. The result showed that value of linearity rcount > rtable that is 0.990 > 0.811, limit of detection (LOD) 4.60 µg, limit of quantitation (LOQ) 15.34 µg, relative standard deviation (RSD) 5.29%, and recovery 99.53%. The result showed that thin TLC-Densitometry method could be used for the analysis of metoprolol in human plasma in vitro.
DAFTAR ISI
Halaman
HALAMAN JUDUL ... i
HALAMAN PERSETUJUAN ... ii
LEMBAR PENGESAHAN ... iii
KATA PERNYATAAN ORISINALITAS ... iv
MOTTO... v
PERSEMBAHAN ... vi
KATA PENGANTAR ... vii
RIWAYAT HIDUP ... ix
DAFTAR LAMPIRAN ... xvi
BAB I PENDAHULUAN A. Latar Belakang ... 1
B. Perumusan Masalah ... 2
C. Tujuan Penelitian ... 2
D. Manfaat Penelitian ... 2
BAB II TINJAUAN PUSTAKA A. Hasil Penelitian Terdahulu ... 4
B. Landasan Teori ... 4
1. Metoprolol ... 4
2. Analisis Cairan Biologis Dalam Darah ... 5
3. Kromatografi Lapis Tipis (KLT) ... 6
4. Densitometri ... 9
BAB III METODE PENELITIAN
A. Jenis dan Rancangan Penelitian ... 13
B. Definisi Variabel Operasional ... 13
C. Waktu dan Tempat Penelitian ... 13
D. Alat dan Bahan ... 13
E. Cara Penelitian ... 14
F. Analisis Hasil ... 20
BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN A. Optimasi Fase Gerak ... 21
B. Penentuan Panjang Gelombang Maksimum ... 23
C. Hasil Validasi Metode ... 24
1. Selektivitas ... 24
2. Linearitas ... 26
DAFTAR PUSTAKA ... 32
DAFTAR TABEL
Tabel 2.1 Fase Diam yang Sering Digunakan Dalam KLT ...8
Tabel 3.1 Definisi Variabel Operasional ...13
Tabel 4.1 Data Hasil Penentuan Kurva Baku Metoprolol...26
Tabel 4.2 Data Kurva Baku Khusus untuk Penentuan LOD & LOQ ...28
Tabel 4.3 Data Uji Ketelitian (Precision) ...29
DAFTAR GAMBAR
Gambar 2.1 Struktur Metoprolol ... 5
Gambar 4.1 Densitogram Hasil Pemisahan Metoprolol Baku dengan Fase Gerak (kloroform : metanol : amonia) dengan Perbandingan 4:6:0,2 ... 22
Gambar 4.2 Densitogram Hasil Pemisahan Metoprolol Baku dengan Fase Gerak (kloroform : metanol : amonia) dengan Perbandingan 1:9:0,2 ... 22
Gambar 4.3 Densitogram Hasil Pemisahan Metoprolol Baku dengan Fase Gerak (kloroform : metanol : amonia) dengan Perbandingan 5:5:0,2 ... 23
Gambar 4.4 Penentuan Panjang Gelombang Maksimum Metoprolol ... 24
Gambar 4.5 Hasil Densitogram Selektivitas Metoprolol Baku ... 25
Gambar 4.6 Hasil Densitogram Selektivitas Plasma ... 25
Gambar 4.7 Hasil Densitogram Selektivitas Plasma+Baku ... 25
Gambar 4.8 Kurva Hubungan Antara Kadar Metoprolol Dengan Luas Area .... 27
DAFTAR LAMPIRAN
Lampiran 1. Data Perhitungan LOD dan LOQ ... 35
Lampiran 2. Data Perhitungan Kurva Kalibrasi ... 37
Lampiran 3. Tabel Koefisien Sederhana, r tabel pada taraf nyata 5% dan 1% ... 38
Lampiran 4. Data Perhitungan Uji Perolehan Kembali ... 39
Lampiran 5. Data Perhitungan Uji Presisi... 41
Lampiran 6. Densitogram LOD dan LOQ ... 42
Lampiran 7. Densitogram Kurva Baku Metoprolol ... 44
Lampiran 8. Densitogram Presisi 2500 µg/ml ... 46
