Lampiran 1: Skema Alur Pengujian Efek Antifungal

(1)

Lampiran 1: Skema Alur Pengujian Efek Antifungal

• Pembuatan media

Luria Berthani Agar 12 gr

Aquadest 240 ml

Dipanaskan hingga mendidih

Dimasukkan ke dalam 10 tabung reaksi (20ml/tabung)

Disterilkan di dalam autoklaf selama 2 jam

Dipanaskan kembali

Dituangkan ke dalam 10 petri (20 ml/petri)

Ditunggu hingga dingin

(2)

• Pengenceran bahan

4ml m.atsiri+

100ml Luria Berthani Broth

2ml m.atsiri + 100ml Luria Berthani Broth

1ml m.atsiri+

0,5ml m.atsiri+

100 ml Luria Berthani Broth

0,25ml m.atsiri+

Minyak atsiri 0,5%

Minyak atsiri 0,25%

Minyak atsiri 2%

Minyak atsiri 4%

Minyak atsiri 1%

Kelompok I: minyak atsiri kayu manis (kontrol)

4% m.atsiri + Ca(OH)2

2%m.atsiri + Ca(OH)2

1% m.atsiri + Ca(OH)2

0,5% m.atsiri + Ca(OH)2

0,25% m.atsiri + Ca(OH)2

Kelompok III: minyak atsiri +Ca(OH)2

Kelompok II : 0,3 gr Ca(OH)2

0,3 ml air

Kontrol ( 1:1)

(3)

• Pembiakan spesimen

Peletakan masing-masing bahan coba pada petri yang berisi Candida albicans.

Pengukuran diameter zona hambat pada masing-masing perlakuan dengan menggunakan kaliper setelah 24 jam pembiakan di inkubator

Biakan murni Candida albicans diencerkan dengan NaCl 0,9 % (MC 1 x 10⁸CFU/ml)

Disebarkan pada media Luria Berthani Agar dengan menggunakan kapas lidi

Dibiarkan selama 24 jam

(4)

Lampiran 2: Skema Alur Pengukuran pH

•

Beberapa tetes

Perubahan warna kertas dibandingkan dengan warna indikator. Warna yang mendekati warna indikator dicatat sebagai nilai pH

Minyak atsiri 2% Minyak atsiri 1%

Minyak atsiri 4% Minyak atsiri 0,5% Minyak atsiri

0,25%

Minyak atsiri

(5)

Beberapa

Beberapa mg

Kombinasi minyak atsiri dengan Ca(OH)2

0,3 ml minyak atsiri 2%+

Ca(OH)2 0,3 gr

0,3 ml minyak atsiri 1%+

Ca(OH)2 0,3 gr 0,3 ml minyak

atsiri 4%+

Ca(OH)2 0,3 gr

0,3 ml minyak atsiri 0,5%+

Ca(OH)2 0,3 gr

0,3 ml minyak atsiri 0,25%+

Ca(OH)2 0,3 gr

(6)

Beberapa mg

Lampiran 3 : Data hasil pengukuran zona hambat minyak atsiri, Ca(OH)2. Dan kombinasinya

Minyak atsiri

Konsentrasi Diameter Zona Hambat

Rata-rata

I II III

4% 45 45 45 45

2 % 41,4 46,2 45,26 44,28

1 % 44,6 40,04 42,83 42,49

0,5% 39,42 40,42 41,12 40,32

0,25 % 30,08 30,35 33,12 31,18

Ca(OH)₂

Rata-rata

I II III

0,3 gr/ml 22,84 15,14 21,92 19,96

0,3 gr Ca(OH)2

0,3 ml air

(7)

Kombinasi

Rata-rata

I II III

Minyak

atsiri4%+Ca(O H)2

16,74 19,18 17,52 17,81

Minyak

atsiri2%+Ca(O H)2

14,58 17,38 14,14 15,36

Minyak

atsiri1%+Ca(O H)2

13,64 15,28 13,78 14,23

Minyak

atsiri0,5%+Ca(

OH)2

16,6 16,06 14,02 15,5

Minyak

atsiri0,25%+Ca (OH)2

16,34 16,8 15,26 16,13

Lampiran 4 : : Data hasil pengukuran pH minyak atsiri, Ca(OH)2. dan kombinasinya

4% 2% 1% 0,5% 0,25% 0,3gr/ml

Minyak atsiri 7 6 7 7 7

Minyak atsiri+Ca(OH)2

12 13 14 14 11

Ca(OH)2 12

(8)

Lampiran 5 :UJI STATISTIK

Oneway

[DataSet1] D:\skripsi\statistik gabungan nilai dan pH\konsentrasi dan kombinasi.sav

Descriptives nilai hasil uji

3 45.0000 .00000 .00000 45.0000 45.0000 45.00 45.00

3 44.2867 2.54372 1.46862 37.9677 50.6056 41.40 46.20

3 42.4900 2.29893 1.32729 36.7791 48.2009 40.04 44.60

3 40.3200 .85440 .49329 38.1976 42.4424 39.42 41.12

3 31.1833 1.68263 .97147 27.0035 35.3632 30.08 33.12

3 19.9667 4.20525 2.42790 9.5202 30.4131 15.14 22.84

18 37.2078 9.43056 2.22280 32.5181 41.8975 15.14 46.20

Minyak atsiri 4%

Minyak atsiri 2%

Minyak atsiri 1%

Minyak atsiri 0,5%

Minyak atsiri 0,25%

CaOH Total

N Mean Std. Deviation Std. Error Lower Bound Upper Bound 95% Confidence Interval for

Mean

Minimum Maximum

Test of Homogeneity of Variances nilai hasil uji

4.606 5 12 .014

Levene

Statistic df1 df2 Sig.

ANOVA nilai hasil uji

1445.901 5 289.180 52.577 .000

66.002 12 5.500

1511.903 17

Between Groups W ithin Groups Total

Sum of

Squares df Mean S quare F Sig.

(9)

Post Hoc Tests

Multiple Comparisons Dependent Variable: nilai has il uji

LSD

.71333 1.91488 .716 -3.4588 4.8855

2.51000 1.91488 .214 -1.6622 6.6822

4.68000* 1.91488 .031 .5078 8.8522

13.81667* 1.91488 .000 9.6445 17.9888

25.03333* 1.91488 .000 20.8612 29.2055

-.71333 1.91488 .716 -4.8855 3.4588

1.79667 1.91488 .367 -2.3755 5.9688

3.96667 1.91488 .061 -.2055 8.1388

13.10333* 1.91488 .000 8.9312 17.2755

24.32000* 1.91488 .000 20.1478 28.4922

-2.51000 1.91488 .214 -6.6822 1.6622

-1.79667 1.91488 .367 -5.9688 2.3755

2.17000 1.91488 .279 -2.0022 6.3422

11.30667* 1.91488 .000 7.1345 15.4788

22.52333* 1.91488 .000 18.3512 26.6955

-4.68000* 1.91488 .031 -8.8522 -.5078

-3.96667 1.91488 .061 -8.1388 .2055

-2.17000 1.91488 .279 -6.3422 2.0022

9.13667* 1.91488 .000 4.9645 13.3088

20.35333* 1.91488 .000 16.1812 24.5255

-13.81667* 1.91488 .000 -17.9888 -9.6445

-13.10333* 1.91488 .000 -17.2755 -8.9312

-11.30667* 1.91488 .000 -15.4788 -7.1345

-9.13667* 1.91488 .000 -13.3088 -4.9645

11.21667* 1.91488 .000 7.0445 15.3888

-25.03333* 1.91488 .000 -29.2055 -20.8612

-24.32000* 1.91488 .000 -28.4922 -20.1478

-22.52333* 1.91488 .000 -26.6955 -18.3512

-20.35333* 1.91488 .000 -24.5255 -16.1812

-11.21667* 1.91488 .000 -15.3888 -7.0445

(J) Minyak atsiri Minyak atsiri 2%

Minyak atsiri 1%

Minyak atsiri 0,5%

Minyak atsiri 0,25%

CaOH

Minyak atsiri 4%

Minyak atsiri 1%

Minyak atsiri 0,5%

Minyak atsiri 0,25%

CaOH

Minyak atsiri 4%

Minyak atsiri 2%

Minyak atsiri 0,5%

Minyak atsiri 0,25%

CaOH

Minyak atsiri 4%

Minyak atsiri 2%

Minyak atsiri 1%

Minyak atsiri 0,25%

CaOH

Minyak atsiri 4%

Minyak atsiri 2%

Minyak atsiri 1%

Minyak atsiri 0,5%

CaOH

Minyak atsiri 4%

Minyak atsiri 2%

Minyak atsiri 1%

Minyak atsiri 0,5%

Minyak atsiri 0,25%

(I) Minyak atsiri Minyak atsiri 4%

Minyak atsiri 2%

Minyak atsiri 1%

Minyak atsiri 0,5%

Minyak atsiri 0,25%

CaOH

Mean Difference

(I-J) Std. Error Sig. Lower Bound Upper Bound 95% Confidence Interval

(10)

Oneway

[DataSet0]

Descriptives nilai

3 17.8133 1.24617 .71948 14.7177 20.9090 16.74 19.18

3 15.3667 1.75742 1.01465 11.0010 19.7323 14.14 17.38

3 14.2333 .90914 .52489 11.9749 16.4918 13.64 15.28

3 15.5600 1.36074 .78562 12.1797 18.9403 14.02 16.60

3 16.1333 .79053 .45641 14.1696 18.0971 15.26 16.80

3 19.9667 4.20525 2.42790 9.5202 30.4131 15.14 22.84

18 16.5122 2.59868 .61251 15.2199 17.8045 13.64 22.84

minyak atsiri 4%+CaOH minyak atsiri 2%+CaOH minyak atsiri 1%+CaOH minyak atsiri 0,5%+CaOH minyak atsiri

0,25%+CaOH CaOH Total

N Mean Std. Deviation Std. Error Lower Bound Upper Bound 95% Confidence Interval for

Mean

Minimum Maximum

Test of Homogeneity of Variances nilai

5.171 5 12 .009

Levene

Statistic df1 df2 Sig.

ANOVA nilai

63.546 5 12.709 2.975 .057

51.257 12 4.271

114.803 17

Between Groups W ithin Groups Total

Sum of

Squares df Mean S quare F Sig.

(11)

Post Hoc Tests

Multiple Comparisons Dependent Variable: nilai

LSD

2.44667 1.68749 .173 -1.2301 6.1234

3.58000 1.68749 .055 -.0967 7.2567

2.25333 1.68749 .207 -1.4234 5.9301

1.68000 1.68749 .339 -1.9967 5.3567

-2.15333 1.68749 .226 -5.8301 1.5234

-2.44667 1.68749 .173 -6.1234 1.2301

1.13333 1.68749 .515 -2.5434 4.8101

-.19333 1.68749 .911 -3.8701 3.4834

-.76667 1.68749 .658 -4.4434 2.9101

-4.60000* 1.68749 .018 -8.2767 -.9233

-3.58000 1.68749 .055 -7.2567 .0967

-1.13333 1.68749 .515 -4.8101 2.5434

-1.32667 1.68749 .447 -5.0034 2.3501

-1.90000 1.68749 .282 -5.5767 1.7767

-5.73333* 1.68749 .005 -9.4101 -2.0566

-2.25333 1.68749 .207 -5.9301 1.4234

.19333 1.68749 .911 -3.4834 3.8701

1.32667 1.68749 .447 -2.3501 5.0034

-.57333 1.68749 .740 -4.2501 3.1034

-4.40667* 1.68749 .023 -8.0834 -.7299

-1.68000 1.68749 .339 -5.3567 1.9967

.76667 1.68749 .658 -2.9101 4.4434

1.90000 1.68749 .282 -1.7767 5.5767

.57333 1.68749 .740 -3.1034 4.2501

-3.83333* 1.68749 .042 -7.5101 -.1566

2.15333 1.68749 .226 -1.5234 5.8301

4.60000* 1.68749 .018 .9233 8.2767

5.73333* 1.68749 .005 2.0566 9.4101

(J) kons

minyak atsiri 2%+CaOH minyak atsiri 1%+CaOH minyak atsiri 0,5%+CaOH minyak atsiri

0,25%+CaOH CaOH

minyak atsiri 4%+CaOH minyak atsiri 2%+CaOH minyak atsiri 1%+CaOH minyak atsiri

0,25%+CaOH CaOH

minyak atsiri 4%+CaOH minyak atsiri 2%+CaOH minyak atsiri 1%+CaOH minyak atsiri 0,5%+CaOH CaOH

minyak atsiri 4%+CaOH minyak atsiri 2%+CaOH minyak atsiri 1%+CaOH (I) kons

minyak atsiri 4%+CaOH

minyak atsiri 0,5%+CaOH

minyak atsiri 0,25%+CaOH

CaOH

Mean Difference

(I-J) Std. Error Sig. Lower Bound Upper Bound 95% Confidence Interval

(12)

Lampiran 6 : Alur pikir

Alur pikir

a

Mikrobiologi Endodontik

• C.albicans salah satu mikroorganisme penyebab kegagalan endodonti

• Siquera dan Senn C.albicans prevalensi jamur yang paling banyak

• Candida albicans ditemukan 5-20%

dari saluran akar yang terinfeksi.

(Waltimo, 2003)

• C. albicans resisten terhadap Ca(OH)_2.(Ballal et al 2007, Waltimo et al 1999)

• Kunci virulensi C. albicans sekresi enzim aspartil protease. (Waltimo, 2003)

• Faktor virulensi C.albicans Pembentukan hifa, tigmotropism, sekresi protease dan fenomena phenotypic switching (Waltimo, 2003)

Antifungal

• Ca(OH)2 sifat antimikrobial yang sangat baik,mengeliminasi

mikroorganisme setelah cleaning dan shaping,menetralkan sisa2 toxin

• Antimikroba Ca(OH)2 aksi OH^- lingkungan alkalin tidak sesuai bagi perkembangan mikroorganisme.

(Athanassiadis et al, 2007)

• pH>9 reversible maupun

irreversible mo kehilangan aktivitas biologi

• Minyak astiri antifungal,antibakteri

• Komponen terbesar antifungal minyak atsiri sinamaldehid dan eugenol

• Minyak atsiri kayu manis efektif membunuh C.albicans

• Menurut Guenther minyak atsiri bersifat asam lemah dan netral

Dari uraian diatas terlihat bahwa minyak atsiri kayu manis memiliki efek antimikroba dan bersifat asam lemah atau netral, tetapi sejauh ini belum ada penelitian mengenai efek antifungal dan pH minyak atsiri kayu manis dan kombinasinya dengan kalsium hidroksida terhadap Candida albicans.

(13)

Timbul permasalahan :

1) Apakah minyak atsiri kayu manis memberikan perubahan pH terhadap kalsium hidroksida?

2) Apakah penambahan minyak atsiri kayu manis akan menambah daya antifungal Ca(OH)2 terhadap Candida albicans?

Tujuan Penelitian :

1. Untuk mengetahui perubahan pH akibat penambahan minyak atsiri kayu manis terhadap kalsium hidroksida.

2. Untuk mengetahui daya antifungal minyak atsiri kayu manis ketika dikombinasikan dengan kalsium hidroksida terhadap Candida albicans.

Judul Penelitian :

Efek antifungal dan pH kombinasi minyak atsiri kayu manis dengan kalsium hidroksida terhadap Candida albicans secara in vitro