Lampiran 1. Karakteristik Metode GC-AOAC dan Liquid Chromatography AOAC (Wood et al., 2004)

(1)

Performance characteristics for benzoic acid in almond paste, fish homogenate and apple juice (GC method)

Samples Almond paste Fish homogenate Apple juice No. of laboratories 8 8 8 8 8 8 Units mg/kg mg/kg mg/kg mg/kg mg/kg mg/kg Mean value 982 1987 501 2044 41 1001 Sr 36 62 14 40 2.6 9.4 RSDr 3.7 % 3.2 % 2.8 % 2.0 % 6.1 % 2.7 % SR 33 83 27 76 5.8 32 RSDR 4.7 % 5.3 % 6.1 % 4.3 % 14.7 % 3.5 % HoR 0.83 1.04 0.97 0.85 1.62 0.61 Av recovery 100.4 % 98.8 % 100.1 % 98.3 % 105.9 % 94.4 %

Performance characteristics for benzoic acid in orange juice (liquid chromatography method)

Samples (spike level) 0.5 1 3 4 10

No. of laboratories 9 9 9 9 9 Units µg/ml µg/ml µg/ml µg/ml µg/ml Mean 0.57 1.01 3.01 3.78 9.61 Mean recovery % 114.0 101.0 100.3 94.5 96.1 Sr 0.113 0.084 0.159 0.184 0.461 RSDr 19.91 % 8.27 % 5.28 % 4.87 % 4.79 % r 0.316 0.235 0.445 0.515 0.714 SR 0.159 0.161 0.276 0.255 0.665 RSDR 27.90 % 15.97 % 9.16 % 6.74 % 6.92 % HoR 1.60 1.00 0.68 0.52 0.61 R 0.445 0.451 0.773 0.714 1.862 Key

Mean The observed mean. The mean obtained from the collaborative trial data. r Repeatability (within laboratory variation). The value below which the

absolute difference between two single test results obtained with the same method on identical test material under the same conditions may be expected to lie with 95 % probability.

(2)

50

RSDr The relative standard deviation of the repeatability (Sr × 100/mean). R Reproducibility (between-lab variation). The value below which the

absolute difference between two single test results obtained with the same method on the identical test material under different conditions may be expected to lie with 95 % probability.

SR The standard deviation of the reproducibility.

RSDR The relative standard deviation of the reproducibility (SR × 100/mean). HoR The HORRAT value for the reproducibility is the observed RSDR value

(3)

L a m p ir a n 2 . D ia g ra m A li r P en e n tu an V al id as i d a n V er if ik as i

(4)

52

(5)

L a m p ir a n 4 . T a b el F

(6)

54

Lampiran 5. Diagram Alir Analisis Kualitatif Natrium Benzoat (AOAC 910.02B 1999)

Persiapan Sampel

b. Padatan atau semi padatan :

50-100 g bahan + 300-400 ml air

Dihancurkan dalam waring blender

Ditambah NaOH 10 % sampai alkalis

Dibiarkan 2 jam, kemudian disaring b. Cairan :

50-100 ml sampel

Ditambah NaOH 10 % sampai alkalis

Disaring dengan kapas

(jika kadar gula tinggi, encerkan sampai TPT 10-15 %)

Pengujian

Dipipet 100 ml atau lebih filtrat

Dimasukkan ke labu pemisah

Ditambah HCl (1+3) sampai asam, ditambah lagi 5-10 ml HCl (1+3)

Diekstrak dengan 75-100 ml eter

Dicuci ekstrak eter tiga kali dengan masing-masing 5 ml air

(7)

@

Dimasukkan ekstrak eter ke pinggan porselin, diuapkan dalam penangas air

Dilarutkan residu dalam air (jika perlu, panaskan sampai 80-85oC,10 menit)

Ditambah beberapa tetes NH3 sampai basa

Diuapkan untuk menghilangkan kelebihan NH3

Dilarutkan residu dengan air panas (saring jika perlu)

Ditambah beberapa tetes FeCl3 0.5 %

(8)

56

Lampiran 6. Diagram Alir Analisis Kuantitatif Natrium Benzoat Secara Titrimetri (AOAC 963.19 1999)

Persiapan Sampel a. Prosedur Umum

Dihomogenkan sampel

Dimasukkan 150 ml atau 150 gram sampel ke labu takar 500 ml

Ditambahkan NaCl powder

Ditambahkan NaOH 10 % hingga alkalis

Ditepatkan sampai tanda tera dengan larutan NaCl jenuh

Dibiarkan + 2 jam, dikocok berulang kali, disaring

f. Sampel Saus Tomat

100 gram sampel + 15 gram NaCl powder

Dipindahkan campuran ke labu takar 500 ml

Dicuci wadah semula dengan + 150 ml larutan NaCl jenuh

Ditambahkan NaOH 10 % hingga alkalis

Ditepatkan sampai tanda tera dengan larutan NaCl jenuh

Dibiarkan + 2 jam, dikocok berulang kali (sentrifuse bila perlu)

(9)

Penetapan Sampel

Dipipet 100-200 ml filtrat sampel

Dimasukkan ke dalam labu pemisah

Dinetralkan dengan HCl (1 + 3) dan tambahkan lagi 5 ml HCl sesudah netral

Diekstrak dengan kloroform beberapa kali (70, 50, 40, 30 ml)

Diambil bagian jernih kloroform (Jika kloroform yang diperoleh kurang jernih, perlu dicuci dengan akuades sampai jernih)

Dibilas labu pemisah dengan 5-10 ml CHCl3 tiga kali.

Didistilasi dengan lambat pada suhu rendah sampai volume ekstrak seperempat dari volume semula

Diuapkan sampai kering pada suhu kamar di atas penangas air sampai tinggal beberapa tetes cairan saja yang tinggal.

Dikeringkan residu semalaman (atau sampai bau asam asetat hilang jika sampelnya adalah saus tomat) dalam desikator yang mengandung H2SO4 pekat

Dilarutkan residu asam benzoat dalam 30-50 ml alkohol

Ditambahkan 12-15 ml air dan 1 atau 2 tetes indikator PP

(10)

5 8 L a m p ir a n 7 . D at a P en g u k u ra n K o n se n tr as i N at ri u m B e n zo at p a d a B e rb ag ai P er la k u an K E T E R A N G A N P E R L A K U A N 1 P E R L A K U A N 2 P E R L A K U A N 3 U la n g a n 1 U la n g a n 2 U la n g a n 1 U la n g a n 2 U la n g a n 1 U la n g a n 2 b e ra t b e n z o a t (g ) 0 .2 4 9 3 0 .2 4 9 3 0 .2 5 0 7 0 .2 5 0 7 0 .2 5 0 7 0 .2 5 0 7 V o lu m e b e n z o a t (m l) 2 5 0 2 5 0 2 5 0 2 5 0 2 5 0 2 5 0 p p m b e n z o a t s ta n d a r 9 9 7 .2 9 9 7 .2 1 0 0 2 .8 1 0 0 2 .8 1 0 0 2 .8 1 0 0 2 .8 p p m b e n z o a t d ik a li k e m u rn ia n 9 9 % 9 8 7 .2 2 8 9 8 7 .2 2 8 9 9 2 .7 7 2 9 9 2 .7 7 2 9 9 2 .7 7 2 9 9 2 .7 7 2 V o lu m e s a m p e l (m l) 2 5 0 2 5 0 2 5 0 2 5 0 2 5 0 2 5 0 B e ra t s a m p e l (g ) 7 5 .0 1 7 5 .0 1 7 5 .3 0 7 5 .3 0 7 5 .0 9 7 9 7 5 .0 9 7 9 B e ra t K H P ( g ) 0 .2 2 1 7 0 .1 6 3 9 0 .1 6 9 2 0 .1 6 9 2 0 .0 9 5 7 0 .0 9 5 7 m l N a O H u tk s ta n d a ri s a s i 2 4 .2 0 1 7 .8 0 1 8 .4 5 1 8 .4 5 1 0 .4 0 1 0 .4 0 N N a O H 0 .0 4 4 8 0 .0 4 5 0 9 0 .0 4 4 9 0 .0 4 4 9 0 .0 4 5 0 0 .0 4 5 0 m l N a O H 4 .6 0 4 .4 0 4 .3 5 4 .4 5 4 .4 0 4 .4 5 p p m b e n z o a t 9 8 9 .0 5 2 1 9 5 2 .1 7 3 8 9 3 3 .7 7 6 9 9 5 5 .2 4 3 0 9 4 9 .1 6 1 0 9 5 9 .9 4 6 9 R a ta -r a ta b e n z o a t (p p m ) 9 7 0 .6 1 9 4 4 .5 1 9 5 4 .5 5 S ta n d ar d ev ia si ( p p m ) 2 6 .0 8 1 5 .1 8 7 .6 3 R S D ( % ) 2 .6 9 1 .6 1 0 .8 0 P e rs e n r ec o ve ry ( % ) 9 8 .3 2 9 5 .1 4 9 6 .1 5

(11)

Lampiran 8. Contoh Perhitungan Konsentrasi Natrium Benzoat, SD, RSD, dan Persen Recovery

Konsentrasi natrium benzoat pada perlakuan 1, ulangan 1

(L) NaOH V 228 . 204 (g) KHP berat standard NaOH N × = 0.0242 228 . 204 0.2217 standard NaOH N × = = 0.0448 N Volume larutan ppm Na Titer x N NaOH x 144 x yang dibuat pada x 106 benzoat = persiapan sampel anhidrat Volume yang diambil x berat sampel x 1000

untuk penetapan = 4.60 x 0.0448 x 144 x 250 x 106

100 x 75.01 x 1000

= 989.0521 ppm

Dengan cara yang sama, didapat konsentrasi natrium benzoat pada ulangan 2 sebesar 952.1738 ppm.

Rata-rata konsentrasi benzoat sebesar = 970.61 ppm

1 -n ) x x ( SD 2 i

∑

− = = 1 2 970.61295) -(952.1738 970.61295) -0521 . 989 ( 2 2 − + = 26.08 ppm % 100 x SD RSD= × = 100% 61295 . 970 0769 . 26 × = 2.69 % % 100 × standar benzoat i konsentras rukur benzoat te i konsentras = Recovery Persen = ×100% 228 . 987 61295 . 970 = 98.32 %

(12)

60

Lampiran 9. Uji t dan F Untuk Perlakuan 1 dan Perlakuan 2

Uji t

1. Hipotesis

H0 : µ1 = µ2 H1 : µ1 ≠ µ2 2. Hipotesis uji = uji t

) (1/n ) (1/n sp x x hitung t 2 1 2 1 + = 2 n n s 1) -(n 1)s (n sp 2 1 2 2 2 2 1 1 − + + − = 2 -2 2 15.18 1) -(2 26.08 1) -(2 sp 2 2 + + = = 21.34 (1/2) (1/2) 21.34 944.51 -61 . 970 hitung t + = = 1.223

3. Wilayah kritik pada α = 0.01

H0 diterima bila t hitung < tα/2 (v) atau >- tα/2 (v) t tabel = 9.925 dan -9.925

4. Keputusan H0 diterima

5. Kesimpulan: rataan perlakuan 1 tidak berbeda nyata dengan rataan perlakuan 2 Uji F 1. Hipotesis H0 : s1 2 = s2 2 H1 : s12 ≠ s22 2. Hipotesis uji = uji F

₂ 2 2 2 2 1 18 . 15 26.08 s s hitung F = = = 2.952

H0 diterima bila F hitung < Fα (v1,v2) F tabel = 4052.185

(13)

Lampiran 10. Uji t dan F Untuk Perlakuan 2 dan Perlakuan 3 Uji t

1. Hipotesis

) (1/n + ) (1/n sp x x = hitung t 3 2 3 2 2 -n n s 1) -(n )s 1 -(n sp 3 2 2 3 3 2 2 2 + + = 2 -2 2 7.63 1) -(2 15.18 1) -(2 sp 2 2 + + = = 12.01 (1/2) (1/2) 12.01 954.55 -51 . 944 hitung t + = = -0.836

5. Kesimpulan: rataan perlakuan 2 tidak berbeda nyata dengan rataan perlakuan 3 Uji F

1. Hipotesis

H0 : s22 = s32 H1 : s22 ≠ s32 2. Hipotesis uji = uji F

₂ 2 2 3 2 2 63 . 7 15.18 s s hitung F = = = 3.958

(14)

62

Lampiran 11. Uji t dan F Untuk Perlakuan 1 dan Perlakuan 3

Uji t

1. Hipotesis

) (1/n + ) (1/n sp x x = hitung t 3 1 3 1 2 -n + n s 1) -(n + 1)s -(n = sp 3 1 2 3 3 2 1 1 2 -2 2 7.63 1) -(2 26.08 1) -(2 sp 2 2 + + = = 19.21 (1/2) (1/2) 19.21 954.55 -61 . 970 hitung t + = = 0.836

5. Kesimpulan: rataan perlakuan 1 tidak berbeda nyata dengan rataan perlakuan 3 Uji F

1. Hipotesis

₂ 2 2 3 2 1 63 . 7 26.08 s s hitung F = = = 11.683

(15)

(16)

64

Lampiran 13. Rincian Biaya pada Berbagai Perlakuan (satu kali ulangan, duplo)

Jenis

Perlakuan Bahan Kimia Harga Kebutuhan Biaya NaCl powder p.a Rp 353,600/500 g 100 g Rp 70,720 NaOH p.a Rp 708,900/500 g 1 g Rp 1,418 Perlakuan 1 HCl pekat p.a Rp 222,700/L 5 ml Rp 1,114 Kloroform p.a Rp 344,250/2.5 L 500 ml Rp 68,850 Alkohol p.a Rp 272,850/2.5 L 100 ml Rp 10,914 TOTAL BIAYA Rp153,016 NaCl powder p.a Rp 353,600/500 g 100 g Rp 70,720 NaOH p.a Rp 708,900/500 g 1 g Rp 1,418 Perlakuan 2 HCl pekat p.a Rp 222,700/L 5 ml Rp 1,114 Kloroform teknis Rp 130,000/L 500 ml Rp 65,000 Alkohol teknis Rp 35,000/L 100 ml Rp 3,500 TOTAL BIAYA Rp141,752 NaCl powder teknis Rp 14,000/kg 100 g Rp 1,400 NaOH p.a Rp 708,900/500 g 1 g Rp 1,418 Perlakuan 3 HCl pekat p.a Rp 222,700/L 5 ml Rp 1,114 Kloroform teknis Rp 130,000/L 500 ml Rp 65,000 Alkohol teknis Rp 35,000/L 100 ml Rp 3,500 TOTAL BIAYA Rp 72,032

(17)

L a m p ir a n 1 4 . D at a A n al is is N at ri u m B en zo a t p a d a S a u s S a m b al d e n g an M et o d e L ab u P e m is ah K E T E R A N G A N U la n g a n 1 U la n g a n 2 U la n g a n 3 U la n g a n 4 U la n g a n 5 U la n g a n 6 U la n g a n 7 V o lu m e sa m p el ( m l) 2 5 0 2 5 0 2 5 0 2 5 0 2 5 0 2 5 0 2 5 0 V o lu m e y g d ia m b il ( m l) 1 0 0 1 0 0 8 5 1 0 0 1 0 0 1 0 0 1 0 0 B er at s am p el ( g ) 6 8 .1 8 3 2 6 3 .1 7 9 2 6 5 .8 9 7 7 6 5 .5 0 0 8 6 5 .9 4 0 1 7 4 .6 5 8 3 7 9 .8 2 3 9 B er at K H P ( g ) 0 .0 9 3 2 0 .0 7 4 6 0 .0 8 2 3 0 .0 8 3 2 0 .0 7 3 8 0 .0 7 2 6 0 .0 8 0 3 m l N aO H u tk s td r 8 .2 5 6 .5 5 7 .2 0 7 .4 0 6 .6 5 6 .5 5 7 .0 0 N N aO H 0 .0 5 5 3 0 .0 5 5 8 0 .0 5 6 0 0 .0 5 5 0 0 .0 5 4 3 0 .0 5 4 3 0 .0 5 6 2 m l N aO H 2 .7 5 2 .6 5 2 .1 5 2 .6 0 2 .6 5 2 .9 5 3 .2 0 p p m b en zo at 8 0 2 .9 3 9 7 8 4 2 .5 7 4 8 7 7 3 .8 1 9 7 7 8 5 .9 4 4 6 7 8 5 .5 9 4 8 7 7 2 .4 0 7 1 8 1 1 .0 6 5 4 R at a -r at a p p m b en zo at 7 9 6 .3 4 S ta n d ar D ev ia si 2 4 .8 4 R S D ( % ) 3 .1 2

(18)

6 6 L a m p ir a n 1 5 . D at a A n al is is N at ri u m B en zo a t p a d a S a u s S a m b al d e n g an M et o d e S h a k er K E T E R A N G A N U la n g a n 1 U la n g a n 2 U la n g a n 3 U la n g a n 4 U la n g a n 5 U la n g a n 6 U la n g a n 7 V o lu m e sa m p el ( m l) 2 5 0 2 5 0 2 5 0 2 5 0 2 5 0 2 5 0 2 5 0 V o lu m e y g d ia m b il ( m l) 1 0 0 1 0 0 1 0 0 9 0 1 0 0 1 0 0 1 0 0 B er at s am p el ( g ) 6 6 .5 2 6 0 6 6 .7 1 7 8 6 6 .3 7 8 9 7 0 .1 9 9 9 6 7 .5 4 1 6 6 6 .7 4 0 7 6 6 .8 4 1 9 B er at K H P ( g ) 0 .0 7 7 0 0 .0 7 6 1 0 .0 7 7 4 0 .0 7 6 5 0 .0 7 3 9 0 .0 8 7 2 0 .0 7 5 4 m l N aO H u tk s td r 6 .7 5 6 .6 0 6 .7 5 6 .6 0 6 .4 0 7 .5 0 7 .6 0 N N aO H 0 .0 5 5 8 0 .0 5 6 4 0 .0 5 6 1 0 .0 5 6 8 0 .0 5 6 5 0 .0 5 6 9 0 .0 4 8 6 m l N aO H 2 .6 5 2 .6 5 2 .6 0 2 .6 0 2 .8 5 2 .6 5 3 .1 0 p p m b en zo at 8 0 0 .1 8 6 4 8 0 6 .4 6 5 4 7 9 1 .0 5 8 6 8 4 1 .4 8 2 7 8 5 8 .2 7 1 8 1 3 .3 3 5 8 8 1 1 .4 3 1 2 R at a -r at a p p m b en zo at 8 1 7 .4 6 S ta n d ar D ev ia si 2 3 .8 5 R S D ( % ) 2 .9 2

(19)

(20)

(21)

(22)

(23)

(24)

72

Lampiran 18. Uji t dan F Untuk Metode Labu Pemisah (1) dan Shaker (2) Uji t

1. Hipotesis

) (1/n ) (1/n sp x x hitung t 2 1 2 1 + = 2 n n s 1) -(n 1)s (n sp 2 1 2 2 2 2 1 1 − + + − = 2 -7 7 23.85 1) -(7 24.84 1) -(7 sp 2 2 + + = = 24.35 (1/7) (1/7) 24.35 817.46 -34 . 796 hitung t + = = -1.623

5. Kesimpulan: rataan metode 1 tidak berbeda nyata dengan rataan metode 2. Uji F

1. Hipotesis

₂ 2 2 2 2 1 85 . 23 24.84 s s hitung F = = = 1.085

(25)

Lampiran 19. Uji t dan F Untuk Metode Labu Pemisah (1) dan Laboratorium Terakreditasi (2) Uji t 1. Hipotesis H0 : µ1 = µ2 H1 : µ1 ≠ µ2 2. Hipotesis uji = uji t

5. Kesimpulan: rataan metode 1 tidak berbeda nyata dengan rataan metode 2. Uji F

1. Hipotesis

₂ 2 2 2 2 1 40 . 14 24.84 s s hitung F = = = 2.976

(26)

74

5. Kesimpulan : SD metode 1 tidak berbeda nyata dengan SD metode 2

Lampiran 20. Uji t dan F Untuk Metode Shaker (1) dan Laboratorium Terakreditasi (2)

Uji t

1. Hipotesis

5. Kesimpulan: rataan metode 1 tidak berbeda nyata dengan rataan metode 2 Uji F

1. Hipotesis

₂ 2 2 2 2 1 40 . 14 23.85 s s hitung F = = = 2.743

(27)

5. Kesimpulan : SD metode 1 tidak berbeda nyata dengan SD metode 2

Lampiran 21. Hasil Uji ANOVA pada Metode Labu Pemisah, Metode Shaker, dan Metode Laboratorium Terakreditasi