ISOLASI DAN IDENTIFIKASI BAKTERI SALURAN
REPRODUKSI IMAGO BETINA ULAT SUTERA LIAR
Attacus atlas L. (Lepidoptera: Saturniidae)
ANDRA ADI ESNAWAN
FAKULTAS KEDOKTERAN HEWAN INSTITUT PERTANIAN BOGOR
BOGOR 2015
PERNYATAAN MENGENAI SKRIPSI DAN SUMBER
INFORMASI SERTA PELIMPAHAN HAK CIPTA
Dengan ini saya menyatakan bahwa skripsi berjudul Isolasi dan Identifikasi Bakteri Saluran Reproduksi Imago Betina Ulat Sutera Liar Attacus atlas L. (Lepidoptera: Saturniidae) adalah benar karya saya dengan arahan dari komisi pembimbing dan belum diajukan dalam bentuk apa pun kepada perguruan tinggi mana pun. Sumber informasi yang berasal atau dikutip dari karya yang diterbitkan maupun tidak diterbitkan dari penulis lain telah disebutkan dalam teks dan dicantumkan dalam Daftar Pustaka di bagian akhir skripsi ini.
Dengan ini saya melimpahkan hak cipta dari karya tulis saya kepada Institut Pertanian Bogor.
Bogor, Januari 2015
Andra Adi Esnawan
ABSTRAK
ANDRA ADI ESNAWAN. Isolasi dan Identifikasi Bakteri Saluran Reproduksi Imago Betina Ulat Sutera Liar Attacus atlas L. (Lepidoptera: Saturniidae). Dibimbing oleh USAMAH AFIFF dan DAMIANA RITA EKASTUTI.
Penelitian ini bertujuan mengidentifikasi bakteri yang terdapat dalam saluran reproduksi imago betina ulat sutera liar Attacus atlas. Sampel diambil dari saluran telur pada empat ekor imago betina A. atlas. Sampel tersebut dibiakkan pada agar darah dan agar MacConkey. Identifikasi bakteri yang dilakukan berdasarkan pada ciri koloni, morfologi bakteri, sifat Gram, dan uji biokimiawi. Terdapat tiga genus bakteri yang teridentifikasi yakni Aeromonas sp.,
Pseudomonas sp., dan Bacillus sp..
Kata kunci : Attacus atlas, bakteri, imago, saluran reproduksi, ulat sutera
ABSTRACT
ANDRA ADI ESNAWAN. Isolation and Identification Bacteria of Female Reproduction Tract of Wild Silkworm Attacus atlas L. Imagoes (Lepidoptera: Saturniidae). Supervised by USAMAH AFIFF and DAMIANA RITA EKASTUTI.
The purpose of this research was to identify the bacteria that colonized the reproductive tract of female imago wild silkworms Attacus atlas. The sample taken from eggs tract from four female imagoes A. atlas. The samples were cultured on blood agar and MacConkey agar. The identification of the bacteria that was done based on the characteristics of the colony, bacterial morphology, Gram staining, and the biochemical test. The result showed that there were three genera of the bacteria isolated namely Aeromonas sp., Pseudomonas sp., and Bacillus sp..
Skripsi
sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar Sarjana Kedokteran Hewan
pada
Fakultas Kedokteran Hewan
ISOLASI DAN IDENTIFIKASI BAKTERI SALURAN
REPRODUKSI IMAGO BETINA ULAT SUTERA LIAR
Attacus atlas L. (Lepidoptera: Saturniidae)
ANDRA ADI ESNAWAN
FAKULTAS KEDOKTERAN HEWAN INSTITUT PERTANIAN BOGOR
BOGOR 2015
Judul Skripsi: Isolasi dan Identifikasi Bakteri Saluran Reproduksi Imago Betina Ulat Sutera Liar Attacus Atlas L. (Lepidoptera: Sa_turniidae)
Nama NIM
: Andra Adi Esnawan : 804090010
Disetujui oleh
Drh Usamah Afiff, MSc Pembimbing I
Tanggal Lulus:
l.1
4 JAN 2015
'-
Dr Drh Damiana Rita Ekastuti, MS, AIF
PRAKATA
Puji dan syukur penulis panjatkan kepada Allah subhanahu wa ta’ala atas segala karunia-Nya sehingga tugas akhir ini berhasil diselesaikan, dengan judul Identifikasi Bakteri Saluran Reproduksi Imago Ulat Sutera Liar Attacus atlas L. (Lepidoptera Saturniidae).
Terima kasih penulis ucapkan kepada Bapak Drh Usamah Afiff, MSc dan Ibu Dr Drh Damiana Rita Ekastuti, MS selaku pembimbing yang telah memberikan banyak arahan, saran, serta bimbingan selama tugas akhir ini. Ibu Dr Drh Hj Sri Murtini, MSi selaku dosen pembimbing akademik yang telah memberikan nasihat, motivasi, dan bimbingan moral selama ini. Orangtua tercinta Bapak Drs H Sumariyono dan Ibu Hj Lilik Wahyuni atas doa, dukungan dan kasih sayang selama ini. Di samping itu, terimakasih penulis sampaikan kepada Rahmad Arsy dan Muhammad Fajar selaku rekan penelitian yang banyak membantu, memberi semangat dan memotivasi dalam tugas akhir ini. Ungkapan terima kasih juga disampaikan kepada Ika Septiana Anggun Puspita atas semangat, doa dan dukungannya selama ini, tak lupa teman-teman yang banyak membantu dan memberikan semangat, Adik-adikku serta seluruh keluarga besar yang selalu menjadi motivasi bagi penulis.
Semoga tugas akhir ini dapat bermanfaat.
Bogor, Januari 2015
DAFTAR ISI
DAFTAR TABEL viii
DAFTAR GAMBAR viii
PENDAHULUAN 1
Latar Belakang 1
Tujuan Penelitian 2
Manfaat Penelitian 2
TINJAUAN PUSTAKA 2
Taksonomi Ulat Sutera Liar Attacus atlas 2
Morfologi Imago 4
Bakteri pada Ulat Sutera 4
MATERI DAN METODE 6
Lokasi dan Waktu Penelitian 6
Materi 7
Prosedur Penelitian 7
HASIL DAN PEMBAHASAN 10
SIMPULAN DAN SARAN 15
Simpulan 15
Saran 15
DAFTAR PUSTAKA 15
DAFTAR TABEL
1 Identifikasi bakteri pada ulat sutera B. mori 5 2 Hasil isolasi bakteri saluran reproduksi imago betina A. atlas dengan
media agar darah 10
3 Hasil isolasi bakteri saluran reproduksi imago betina A. atlas dengan
media Mac Conkey Agar 10
4 Hasil pewarnaan Gram bakteri pada saluran reproduksi imago betina
A. atlas dari media agar darah 11
5 Hasil pewarnaan Gram bakteri pada saluran reproduksi imago betina
A. atlas dari media Mac Conkey Agar 11
6 Hasil pengujian biokimia bakteri pada saluran reproduksi reproduksi
imago betina A. atlas dari media agar darah 12
7 Hasil pengujian biokimia bakteri pada saluran reproduksi imago
betina A. atlas dari media Mac Conkey Agar 12
DAFTAR GAMBAR
1 Siklus hidup Attacus atlas dari telur sampai imago 3 2 Diagram alir identifikasi bakteri Gram positif 8 3 Diagram alir identifikasi bakteri Gram negatif 9 4 Koloni bakteri yang tumbuh pada media agar darah dan MCA 11 5 Hasil pewarnaan Gram bakteri pada media agar darah dan MCA 11
PENDAHULUAN
Latar BelakangIndonesia sebagai negara yang beriklim tropis dan tepat dilalui jalur khatulistiwa dengan curah hujan turun sepanjang tahun menjadikan Indonesia kaya akan biodiversitas yang memiliki potensi untuk dikembangkan. Salah satu serangga yang memiliki potensi adalah ulat sutera liar Attacus atlas (A. atlas) merupakan ulat sutera yang memiliki beberapa keistimewaan antara lain; serangga asli Indonesia, dapat hidup sepanjang tahun tidak memiliki musim tertentu (selalu ada sepanjang tahun) (Peigler 1989), dapat hidup dalam beberapa generasi dalam setahun (polivoltin) serta hidup dan makan pada berbagai inang tanaman (polifagus) (Awan 2007; Mulyani 2008).
Permintaan pasar dunia terhadap sutera dalam beberapa tahun terakhir meningkat. Menurut data yang dikeluarkan International Silk Association (ISA 2000), China merupakan konsumen terbesar sutera yaitu membutuhkan kokon dan benang sutera mentah mencapai 37.441 ton, diikuti India sebanyak 1.529 ton, Madagaskar 40 ton dan Nepal sebanyak 2 ton setiap tahun. Kebutuhan benang sutera di dalam negeri untuk industri belum pernah tercukupi. Persediaan yang terbatas menyebabkan pembelian benang sutera harus memesan terlebih dahulu (Ekastuti 2012). Kondisi tersebut menyebabkan pengambilan kokon dari alam meningkat yang dalam jangka waktu panjang dapat mengakibatkan kepunahan A.
atlas di alam. Tingkat keberhasilan budidaya A. atlas masih rendah, hal ini
berkaitan dengan perubahan lingkungan yang tidak menentu (anomali cuaca) disamping pengaruh predator, parasit dan faktor penyebab lainnya (Rianto 2009).
Organ reproduksi betina A. atlas adalah sepasang ovari yang terdapat di dalam kulit dorsal segmen ke-8 dan tidak nampak dari luar. Bentuk organ tetap dari mulai menetas sampai larva tumbuh maksimal. Organ ini berkembang pesat pada stadia pupa, terutama ovari betinanya, dan akhirnya merupakan bagian utama dari tubuh. Hal ini menunjukkan pentingnya saluran reproduksi betina dalam kelangsungan populasi A. atlas di alam dan proses budidaya yang akan dilakukan.
Menurut Situmorang (1996) dalam Awan (2007), selama ini tingkat keberhasilan proses budidaya di lapangan baru sekitar 10% saja, agar A. atlas dapat dibudidayakan secara besar-besaran diperlukan pengetahuan yang lebih mendalam tentang bioekologi A. atlas tersebut. Belum banyak penelitian mengenai flora normal, mikroorganisme patogen, dan mikroorganisme yang bersifat zoonotik pada imago A. atlas di Indonesia. Informasi tersebut dapat membantu dalam pencegahan penyakit zoonotik antara individu yang terlibat dalam upaya tersebut, sehingga perlu diadakan penelitian terkait dalam rangka membantu upaya budidaya A. atlas.
Tujuan Penelitian
Tujuan dari penelitian ini adalah mengetahui bakteri yang terdapat dalam saluran reproduksi imago betina ulat sutera liar A. atlas.
2
Manfaat Penelitian
Penelitian ini bermanfaat untuk memberikan informasi mengenai bakteri yang bersifat sebagai flora normal atau berperan sebagai patogen yang terdapat pada saluran reproduksi imago betina A. atlas.
TINJAUAN PUSTAKA
Taksonomi Ulat Sutera Liar (Attacus atlas)
Ulat sutera liar A. atlas adalah serangga yang berukuran besar dan banyak ditemukan di hutan-hutan tropis dan subtropis seperti di Asia Tenggara, Asia bagian Selatan, Asia Timur, daerah selatan China, melintasi kepulauan Malaysia, Thailand, dan Indonesia (Peigler 1989). Penyebaran A. atlas hampir di seluruh wilayah Indonesia, diantaranya pulau Sumatera, Jawa, Bali, Kalimantan, Sulawesi, Maluku, dan Papua. Ulat sutera A. atlas termasuk hewan polivoltin yang berarti hewan ini memiliki siklus lebih dari satu kali dalam setahun dan termasuk serangga polifagus yang dapat hidup pada 90 golongan tumbuhan dari 48 famili yang bisa dimakan oleh larva A. atlas (Peigler 1989). Klasifikasi A. atlas menurut Peigler (1989) adalah sebagai berikut:
Kelas : Insecta Ordo : Lepidoptera Super family : Bombycoidea Famili : Saturniidae Sub family : Saturniinae Genus : Attacus Spesies : Attacus atlas
Attacus atlas memakan daun teh (Camellia sinensis), sirsak (Annona muricata), rambutan (Nephelium lappaceum), cengkeh (Syzygium aromaticum),
dadap (Erythrina spp), mangga (Mangifera indica), jambu biji (Psidium guajava L), dan tanaman dikotil lainnya (Kalshoven 1981). Imago A. atlas dapat ditemui sepanjang tahun (Peigler 1989).
Siklus Hidup
Attacus atlas merupakan serangga yang mengalami metamorfosis
sempurna yaitu mengalami siklus kehidupan mulai dari fase telur – larva – pupa – imago (Chapman 1998 dalam Awan 2007). Hasil penelitian Awan (2007) yang menjelaskan tentang siklus hidup ulat sutera A. atlas dengan pakan daun sirsak dapat dilihat pada Gambar 1.
3
(Sumber : http://www.arbec.com.my/moths/plate20.php dan Awan 2007) Gambar 1 Siklus hidup Attacus atlas dari telur sampai imago
4
Morfologi Imago
Menurut Atmosoedarjo et al. (2000), tubuh imago terbagi menjadi tiga bagian yaitu kepala, toraks dan abdomen, yang semuanya ditutupi oleh sisik bertumpuk. Abdomen terdiri dari delapan segmen untuk jantan dan tujuh segmen untuk betina. Awan (2007), menjelaskan bahwa imago keluar melalui lubang di ujung anterior kokon yang telah terbentuk saat pembuatan kokon. Imago yang baru keluar dari kokon biasanya masih basah oleh suatu cairan yang berwarna putih keruh, sayap belum terbentuk sempurna. Attacus atlas adalah ngengat terbesar di dunia dengan rentangan sayap terbesar diantara anggota Lepidoptera lainnya (Peigler 1989). Imago yang baru keluar ini akan segera mencari ranting atau dahan dan akan mengambil posisi menggantung dengan abdomen berada di bawah sehingga mudah mengembangkan sayapnya. Kondisi sayap yang baru mengembang ini masih lemah dan belum dapat digunakan untuk terbang. Sayap yang telah mengembang sempurna beberapa jam kemudian akan segera mengeras dan cukup kuat digunakan terbang (Awan 2007). Mulyani (2008) menambahkan warna dan pola sayap pada A. atlas memberikan kesan suatu tatanan mekanisme pertahanan dari serangan predator.
Secara keseluruhan ukuran betina lebih besar daripada jantan (Mulyani 2008). Ngengat betina memiliki abdomen yang besar yang berisi telur-telur dan ukuran tubuhnya lebih besar daripada ngengat jantan. Ngengat jantan dan betina dapat dibedakan dengan melihat ciri-ciri antenanya, dimana antena jantan lebih besar daripada antena betina. Ngengat betina memiliki panjang antena 17 – 21 mm dan lebar 3 mm sedangkan panjang antena yang dimiliki ngengat jantan adalah 23 – 30 mm dan lebar 10 – 13 mm (Peigler 1989). Ngengat jantan memiliki sayap dengan ujung yang lebih meruncing.
Ngengat betina biasanya lebih pasif dan mengeluarkan zat pemikat atau feromon yang bisa dideteksi oleh kemoreseptor yang ada di antena ngengat jantan. Beberapa jam setelah melakukan perkawinan, ngengat betina akan segera bertelur dan mampu menghasilkan telur sebanyak 100 sampai 360 butir. Umur imago jantan adalah 2 – 4 hari dan umur imago betina adalah 2 – 10 hari (Awan 2007).
Awan (2007) menyatakan bahwa variasi waktu keluar ngengat disebabkan adanya perbedaan tingkah laku tiap individu pupa yang telah ada. Ngengat betina membutuhkan waktu yang cukup lama bila dibandingkan dengan jantan, hal ini disebabkan pada betina terjadi pembentukan telur (oogenesis).
Bakteri Pada Ulat Sutera
Menurut Solihin et al. (2010), Bacillus thuringiensis lazim menyerang serangga pada fase larva sehingga sering dijadikan sebagai insektisida hayati dalam upaya pengendalian berbagai hama ulat pengganggu tanaman budidaya. Gejala penyakit pada A. atlas pada fase larva yang terserang di antaranya larva akan terlihat lemas dan mengeluarkan cairan atau lendir.
Beberapa koloni bakteri dari ulat sutera Bombyx mori yang berhasil diisolasi dan diidentifikasi ditabulasi dalam Tabel 1.
5 Tabel 1 Identifikasi bakteri pada ulat sutera B. mori yang sakit
(Sakthivel et al. 2012) No Bakteri 1 Bacillus subtilis 2 Streptococcus pneumoniae 3 Staphylococcus aureus 4 Escherichia coli 5 Pseudomonas fluorescence 6 Bacillus cereus 7 Klebsiella cloacae Bacillus subtilis
Bacillus subtilis adalah bakteri Gram positif yang biasanya ditemukan di
dalam tanah. Bakteri ini mempunyai kemampuan membentuk pertahanan diri yang kuat, dengan membentuk endospora yang bersifat melindungi sehingga dapat tahan pada kondisi lingkungan yang ekstrim (Nakano dan Zuber 1998).
Bacillus subtilis tidak secara langsung termasuk sebagai patogen pada
manusia, bagaimanapun Bacillus subtilis dapat mengkontaminasi makanan tetapi tidak sampai menyebabkan makanan menjadi beracun (Ryan dan Ray 2004). Sporanya dapat bertahan hidup pada pemanasan ekstrim yang seringkali digunakan untuk memasak makanan dan juga mampu membuat produk pangan roti menjadi busuk atau rusak (Gielen et al. 2004).
Streptococcus pneumoniae
Streptococcus pneumoniae adalah mikroflora normal saluran pernafasan
bagian atas (nasofaringeal) manusia (Todar 2011). Mikroflora normal mempunyai peranan penting dalam mencegah penyakit infeksi (Bogaert et al. 2004). Daya tahan tubuh yang tidak seimbang, menyebabkan bakteri patogen ini mampu berkembang biak lebih cepat dan mengakibatkan infeksi (PDPI 2005).
Streptococcus pneumoniae merupakan bakteri Gram-positif, berbentuk bulat telur
atau seperti bola. Secara khas bakteri Streptococcus pneumoniae terlihat sebagai kokus yang berpasangan (diplokokus atau rantai pendek. Bagian ujung belakang tiap pasangan sel secara khas berbentuk tombak (runcing tumpul) (Todar 2011).
Staphylococcus aureus
Staphylococcus aureus adalah bakteri berbentuk bulat, bersifat Gram
positif, biasanya tersusun dalam rangkaian tidak beraturan seperti buah anggur. Beberapa diantaranya tergolong flora normal pada kulit dan selaput mukosa manusia, menyebabkan penanahan, abses, berbagai infeksi pyogenik dan bahkan septisemia yang fatal. Staphylococcus aureus mengandung polisakarida dan protein yang berfungsi sebagai antigen dan merupakan substansi penting di dalam struktur dinding sel, tidak membentuk spora, dan tidak membentuk flagel (Jawetz
et al. 2005)
Escherichia coli
Escherichia coli adalah bakteri Gram negatif yang berbentuk batang pendek
lurus (kokobasil), dengan ukuran 1,1 – 1,5 µm x 2,0 – 6,0 µm. Escherichia coli tidak memiliki kapsul dan spora. Bersifat anaerob fakultatif, tumbuh dengan
6
mudah pada medium nutrien sederhana (Pelczar dan Chan 1988). Escherichia
coli bersifat motil atau non-motil dengan kisaran suhu pertumbuhannya adalah
10-40 oC, dengan suhu pertumbuhan optimum adalah 37 oC (Reapina 2007). Tempat yang paling sering terkena infeksi Escherichia coli adalah saluran kemih, saluran empedu, dan tempat-tempat lain di rongga perut. Bakteri ini juga menghasilkan enterotoksin yang tahan panas dapat menyebabkan diare yang ringan, sedangkan enterotoksin yang tidak tahan panas dapat menyebabkan sekresi air dan klorida ke dalam lumen usus, dan menghambat reabsorbsi natrium (Jawetz et al. 2005).
Pseudomonas fluorescence
Pseudomonas fluorescens merupakan bakteri aerob yang bersifat Gram
negatif, berbentuk batang dengan ukuran 0,5 – 1 x 1,5 – 4 µm serta mampu membentuk siderofor (pigmen kuning kehijauan) pada media yang kekurangan ion Fe seperti King’s B. Koloni bakteri ini berbentuk bulat, rata dan fluidal. Tumbuh baik pada kisaran suhu 20 – 41 oC, dengan pH optimum pada kisaran 6 –
7 dan suhu optimum pada 30 oC. Bakteri P. fluorescens juga tidak bersifat patogen terhadap tumbuhan sehingga dapat digunakan sebagai pemacu pertumbuhan tanaman atau plant growth promoting rhizobacteria (PGPR) dan sebagai agen antagonis terhadap patogen tanaman (Arwiyanto et al. 2007).
Bacillus cereus
Bacillus cereus merupakan bakteri Gram positif berbentuk batang besar
(>0,9 μm) dengan ukuran panjang sel 3 – 5 mikron dan lebarnya 1 mikron. Bakteri ini menghasilkan spora yang berbentuk elips dan terletak di tengah-tengah sel. Spora hanya terbentuk bila terdapat oksigen di lingkungan sekitar (aerob fakultatif). Bacillus cereus termasuk salah satu organisme mesofilik yaitu dapat tumbuh pada suhu optimal 30 – 35◦C (Blackburn dan McClure 2002).
Klebsiella cloacae (Enterobacter cloacae)
Enterobacter cloacae merupakan bakteri Gram negatif, tidak membentuk
spora, anaerob fakultatif, dan motil dengan flagela peritrikus (Buchanan 2006).
Enterobacter cloacae dapat diisolasi dari buah-buahan, usus hewan, tanah, dan
perairan (Pelczar dan Chan 1999). Liu et al. (2009) menyatakan bahwa bakteri ini mampu menghasilkan β-galaktosidase dengan suhu optimum 35°C dan aktif pada kisaran pH 6.5 – 10.5. Enzim β-galaktosidase yang dihasilkan dari bakteri ini mampu mengkatalisis reaksi hidrolisis dan transglikosilasi.
MATERI DAN METODE
Lokasi dan Waktu PenelitianPenelitian dilakukan pada bulan Januari sampai dengan Juli 2014 di Laboratorium Metabolisme Departemen Anatomi, Fisiologi dan Farmakologi dan Laboratorium Riset Mikrobiologi, Bagian Mikrobiologi Medik, Departemen Ilmu Penyakit Hewan dan Kesehatan Masyarakat Veteriner, Fakultas Kedokteran Hewan Institut Pertanian Bogor.
7 Materi
Hewan yang digunakan pada penelitian ini adalah imago betina ulat sutera liar A. atlas sebanyak empat ekor yang berasal dari perkebunan teh PTPN VIII Purwakarta, Jawa Barat. Alat-alat yang digunakan pinset, gunting bedah, tabung sampel steril, mikroskop cahaya, ose, gelas objek, tabung reaksi, cawan Petri, pipet, rak tabung reaksi, pembakar Bunsen, spidol, label nama, inkubator, lemari es, dan camera digital. Bahan-bahan yang digunakan adalah sampel penggantung telur A. atlas, aquades steril sebagai bahan pengencer sampel, media untuk mengisolasi seperti agar darah, MacConkey Agar (MCA), dan trypticasein soy
agar (TSA), media untuk mengidentifikasi bakteri seperti Triple Sugar Iron Agar
(TSIA), Indol, Simmon’s citrate agar, urea, kaldu gula-gula (glukosa, sukrosa, laktosa, manitol, dan maltosa), zat warna Gram (kristal violet, lugol, aseton alkohol, safranin), alkohol 70%, reagent Erhlich, H2O2 3% dan KOH 3%.
Prosedur Penelitian Pengambilan dan Pemeliharaan Kokon
Kokon ulat sutera A. atlas diambil dari perkebunan teh PTPN VIII Purwakarta, Jawa Barat. Kokon selanjutnya dipelihara dalam kandang kasa berukuran 50 cm x 50 cm x 50 cm. Kokon dipisahkan antara kokon betina dan jantan dengan sedikit menggunting kulit kokon untuk melihat bakal imago betina dan jantan ulat sutera A. atlas. Pupa dengan antena kecil akan menjadi imago betina, pupa dengan antena besar akan menjadi imago jantan.
Pengambilan Sampel
Imago betina A. atlas terlebih dahulu dimatikan dengan cara memasukkan hewan ke dalam freezer selama 1 jam. Pengambilan sampel dilakukan pada empat ekor imago betina ulat sutera liar A. atlas dengan melakukan pembedahan bagian medial abdomen menggunakan pinset dan gunting bedah steril. Sampel saluran telur kemudian dimasukkan ke dalam tabung sampel steril dan ditambahkan aquades sebagai pengencer sebanyak 2-3 ml. Sampel ditanam pada media agar darah dan MCA, lalu diinkubasi pada suhu ruang selama 24 jam.
Isolasi Bakteri
Sampel dibiakkan ke dalam agar darah dan MCA dengan teknik goresan T, lalu diinkubasi selama 24 jam dalam inkubator dengan suhu 37 oC. Setelah 24 jam, koloni bakteri terpisah yang tumbuh pada agar darah dan MCA dicatat ciri koloninya. Koloni yang berbeda kemudian dipindahkan ke dalam agar miring TSA dan dilakukan pelabelan sistematis untuk masing-masing koloni.
Identifikasi Bakteri
Koloni yang tumbuh pada media TSA diwarnai dengan pewarnaan Gram untuk dilihat morfologi, sifat Gram, dan kemurniannya. Menurut Lay (1994), cara melakukan pewarnaan Gram diawali dengan pembuatan preparat ulas, kemudian difiksasi di atas pembakar Bunsen. Preparat ulas ditetesi larutan kristal violet ke seluruh bagian ulasan bakteri dan didiamkan selama satu menit lalu dicuci dengan aquades. Selanjutnya, preparat diberi larutan lugol dan didiamkan selama satu menit lalu dicuci dengan aquades hingga bersih. Berikutnya, preparat diberi
8
larutan pemucat (aseton alkohol) kurang lebih 10 detik dan dicuci kembali dengan aquades hingga bersih. Terakhir, preparat ditetesi larutan safranin selama 15-20 detik lalu dicuci dengan aquades hingga bersih kemudian dikeringkan dengan kertas saring. Lalu diamati di bawah mikroskop menggunakan perbesaran objektif 100x dengan bantuan minyak emersi. Hasil pewarnaan Gram, bakteri Gram positif berwarna ungu sedangkan bakteri Gram negatif berwarna merah. Apabila terdapat koloni bakteri yang belum murni, maka dilakukan kembali iisolasi pada agar darah maupun MCA dengan teknik goresan T. Apabila hasil dari pewarnaan Gram kurang meyakinkan, maka dilakukan uji KOH 3% untuk menentukan sifat Gram bakteri. Bakteri Gram negatif akan memberikan hasil adanya masa gelatin yang membentuk benang-benang halus saat diangkat menggunakan ose.
Analisis Data
Analisis data disajikan secara deskriptif.
Secara ringkas alur identifikasi bakteri Gram positif dan negatif dapat dilihat pada Gambar 2 dan 3. Identifikasi akhir mengacu pada Jang et al. (1976), Barrow dan Feltham (1993), dan Bergey dan Breed (1994).
9
Gambar 2 Diagram alir identifikasi bakteri Gram positif (Bergey dan Breed 1994; Lay 1994)
10
Gambar 3 Diagram alir identifikasi bakteri Gram negatif (Bergey dan Breed 1994; Lay 1994)
11
HASIL DAN PEMBAHASAN
Berdasarkan isolasi dan identifikasi bakteri pada saluran reproduksi A.
atlas didapatkan hasil seperti tersaji pada Tabel 2 sampai Tabel 7 berikut ini.
Dari sampel yang diisolasi pada agar darah (Tabel 2) didapatkan dua jenis koloni bakteri berbeda. Koloni A yang berukuran sedang, berbentuk bulat, permukaan halus, aspek tidak mengkilat, tepi rata, elevasi cembung, berwarna krem, dan tanpa adanya hemolisis pada agar darah. Koloni B yang berukuran sedang, berbentuk bulat, permukaan halus, aspek tidak mengkilat, tepi tidak rata, elevasi cembung, berwarna krem, dan menghasilkan beta-hemolisis. Hal ini menunjukkan bahwa koloni B mampu melisiskan butir darah merah yang terlihat sebagai wilayah jernih di sekitar koloni. Bila proses lisis sempurna akan terlihat wilayah yang benar-benar jernih dan jenis hemolisisnya disebut beta-hemolisis (Lay 1994).
Dari media MCA (Tabel 3) didapatkan satu jenis koloni yang berukuran kecil, berbentuk bulat, permukaan halus, aspek mengkilat, tepi rata, elevasi cembung, berwarna krem. Warna koloni yang sama dengan warna media atau tidak memperlihatkan perubahan pada media menunjukkan bakteri yang tidak memfermentasikan laktosa. Bakteri yang tidak memfermentasikan laktosa biasanya bersifat patogen (Lay 1994).
Tabel 2 Hasil isolasi bakteri saluran reproduksi imago betina A. atlas dengan media agar darah
Sampel Agar Darah
1A 1B 2A 2B 3A 3B 4A 4B
Ukuran Sedang Sedang Sedang Sedang Sedang Sedang Sedang Sedang
Bentuk Bulat Bulat Bulat Bulat Bulat Bulat Bulat Bulat
Permukaan Halus Halus Halus Halus Halus Halus Halus Halus
Aspek Tidak mengkilat Tidak mengkilat Tidak mengkilat Tidak mengkilat Tidak mengkilat Tidak mengkilat Tidak mengkilat Tidak mengkilat
Tepi Rata Tidak rata Rata Tidak rata Rata Tidak rata Rata Tidak rata
Elevasi Cembung Cembung Cembung Cembung Cembung Cembung Cembung Cembung
Sifat tembus
- - - -
Warna Krem Krem Krem Krem Krem Krem Krem Krem
Hemolisis - β - β - β - β
Tabel 3 Hasil isolasi bakteri saluran reproduksi imago betina A. atlas dengan media Mac Conkey Agar
Sampel Mac Conkey Agar
1 2 3 4
Ukuran Kecil Kecil Kecil Kecil
Bentuk Bulat Bulat Bulat Bulat
Permukaan Halus Halus Halus Halus
Aspek Mengkilat Mengkilat Mengkilat Mengkilat
Tepi Rata Rata Rata Rata
Elevasi Cembung Cembung Cembung Cembung
Sifat tembus - - - -
12
Gambar 4 Koloni bakteri yang tumbuh pada media agar darah dan MCA. (A) koloni bakteri pada agar darah non-hemolitik, (B) koloni bakteri pada agar darah β-hemolitik, (C) koloni bakteri pada MCA.
Koloni bakteri terpisah yang didapatkan selanjutnya dibiakkan ke dalam media agar miring trypticasesoy agar (TSA) yang merupakan media agar yang
digunakan untuk kegiatan pengisolasian berbagai macam mikroorganisme yang bersifat aerobik. Biakan murni yang tumbuh pada media agar darah (Tabel 4) dan MacConkey Agar (Tabel 5) diuji dengan pewarnaan Gram untuk melihat bakteri tersebut merupakan bakteri Gram positif atau negatif. Biakan murni adalah biakan yang hanya berisi satu jenis bakteri (Pelczar dan Chan 1988). Koloni A yang berasal dari media agar darah berbentuk batang halus, susunan tunggal, dan berwarna merah yang menunjukkan bakteri Gram negatif. Koloni B yang berasal dari media agar darah berbentuk batang, susunan berantai, berwarna ungu dan memiliki spora yang menunjukkan bakteri Gram positif. Koloni yang berasal dari media MCA berbentuk batang, susunan tunggal, berwarna merah yang menunjukkan bakteri Gram negatif.
Tabel 4 Hasil pewarnaan Gram bakteri pada saluran reproduksi imago betina A. atlas dari media agar darah
Sampel Pewarnaan Gram
1A 1B 2A 2B 3A 3B 4A 4B
Morfologi Batang halus Batang Batang halus Batang Batang halus Batang Batang halus Batang
Susunan Tunggal Berantai Tunggal Berantai Tunggal Berantai Tunggal Berantai
Warna Merah Ungu Merah Ungu Merah Ungu Merah Ungu
Spora - Ada - Ada - Ada - Ada
Gram Negatif Positif Negatif Positif Negatif Positif Negatif Positif
Tabel 5 Hasil pewarnaan Gram bakteri pada saluran reproduksi imago betina A. atlas dari media Mac Conkey Agar
Sampel Pewarnaan Gram
1 2 3 4
Morfologi Batang Batang Batang Batang
Susunan Tunggal Tunggal Tunggal Tunggal
Warna Merah Merah Merah Merah
Gram Negatif Negatif Negatif Negatif
13
Gambar 5 Hasil pewarnaan Gram bakteri pada media agar darah dan MCA. (A) koloni bakteri pada agar darah non-hemolitik, (B) koloni bakteri pada agar darah β-hemolitik, (C) koloni bakteri pada MCA.
Tabel 6 Hasil pengujian biokimia bakteri pada saluran reproduksi reproduksi imago betina A. atlas dari media agar darah
Sampel Pengujian Biokimia
1A 1B 2A 2B 3A 3B 4A 4B
Oksidase + + + +
TSIA Slant Basa Basa Basa Basa
Butt Asam Asam Basa Basa
Gas + + + + H2S - - - - Indol + + - - Urea - - + + Sitrat + + + + Voges Proskauer + + - -
Glukosa +/Gas (+) +/Gas (+) -/Gas (-) -/Gas (-)
Sukrosa +/Gas (+) +/Gas (+) -/Gas (-) -/Gas (-)
Laktosa +/Gas (+) +/Gas (+) -/Gas (-) -/Gas (-)
Manitol +/Gas (+) +/Gas (+) +/Gas (+) +/Gas (+)
Maltosa +/Gas (+) +/Gas (+) -/Gas (-) -/Gas (-)
Hasil identifikasi Aeromonas
sp. Bacillus sp. Aeromonas sp. Bacillus sp. Pseudomonas sp. Bacillus sp. Pseudomonas sp Bacillus sp.
Tabel 7 Hasil pengujian biokimia bakteri pada saluran reproduksi imago betina A. atlas dari media MacConkey Agar
Sampel Pengujian Biokimia
1 2 3 4
Oksidase + + + +
TSIA Slant Basa Basa Basa Basa
Butt Asam Asam Asam Asam
Gas + + + + H2S - - - - Indol + + - - Motilitas - - - - Urea - - - - - Sitrat + + + + Voges Proskauer + + + +
Glukosa +/Gas (+) +/Gas (+) +/Gas (+) +/Gas (+)
Sukrosa +/Gas (+) +/Gas (+) +/Gas (+) +/Gas (+)
Laktosa +/Gas (+) +/Gas (+) +/Gas (+) +/Gas (+)
Manitol +/Gas (+) +/Gas (+) +/Gas (+) +/Gas (+)
Maltosa +/Gas (+) +/Gas (+) +/Gas (+) +/Gas (+)
Hasil identifikasi Aeromonas
sp. Aeromonas sp. Aeromonas schubertii Aeromonas schubertii A B C A B C
14
Gambar 6 Hasil uji oksidase. (A) kontrol negatif oksidase menggunakan Escherichia coli dan Salmonella sp., (B) hasil positif dari koloni bakteri gram negatif pada agar darah, (C) hasil positif dari koloni bakteri Gram negatif pada MCA.
Isolat bakteri yang berasal dari media agar darah (Tabel 6) dan MacConkey Agar (Tabel 7) selanjutnya dilakukan pengujian biokimia dengan menggunakan media Triple Sugar Iron Agar (TSIA), Indol, Simmon’s citrate agar, Voges-Proskauer (VP), urea, dan kaldu gula-gula (glukosa, sukrosa, laktosa, manitol, dan maltosa).
Hasil uji menggunakan media TSIA pada bagian slant dan butt bersifat basa-asam (merah-kuning) dengan gas, serta tidak memproduksi H2S mengarah
pada genus Morganella, Providencia, Salmonella, Plesiomonas, Hafnia, Serratia,
Shigella, Yersinia, Aeromonas, Escherichia dan Enterobacter. Pada bagian slant
dan butt bersifat basa-basa (merah) mengarah pada Pseudomonas (Mahon et al. 2007). Hasil positif didapatkan pada uji oksidase terhadap semua isolat bakteri, hal ini menunjukkan bahwa bakteri tersebut merupakan famili
non-Enterobacteriaceae yang terdiri dari genus Campylobacter sp., Helicobacter sp., Aeromonas sp., Pseudomonas sp., Vibrio sp., Neisseria sp., dan Alcaligenes sp..
(Bergey dan Breed 1994). Tidak ditemukannya bakteri famili Enterobacteriaceae disebabkan imago A. atlas yang sebelumnya sudah tidak melakukan aktivitas makan setelah menjadi pupa.
Hasil positif pada uji indol mengarah pada Aeromonas sp., Edwardsiella sp., Escherichia coli, Flavobacterium sp., Haemophilus influenza, Klebsiella
oxytoca, Proteus sp., Plesiomonas shigelloides, Pasteurella multocida, Pasteurella pneumotropica dan Vibrio sp.. Hasil negatif mengarah pada Actinobacillus sp., Aeromonas schubertii, Alcaligenes sp., Bordetella sp., Enterobacter sp., Haemophillus sp., Klebsiella sp., Neisseria sp., Pasteurella haemolytica, Pasteurella ureae, Proteus mirabilis, Proteus penneri, Pseudomonas
sp., Salmonella sp., Serratia sp., dan Yersinia sp. (MacFaddin 1980). Hasil uji indol positif yang didapatkan sesuai pernyataan Abbot et al. (2003) yang menyatakan sembilan spesies anggota Aeromonas (A. hydrophila, A. bestiarum, A.
salmonicida, A. caviae, A. media, A. eucrenophila, A. sobria, A. veronii, dan A. veronii bv. sobria) semuanya memberikan hasil positif untuk uji indol. Hasil
negatif hanya ditunjukkan satu spesies yaitu A. schubertii (Awan et al. 2005). Hasil uji urea mendapatkan hasil positif yang menunjukkan bahwa bakteri mampu menghasilkan enzim urease yang mengurai urea menjadi ammonium dan CO2, hidrolisis urea ditunjukkan dengan perubahan warna media dari
merah-jingga menjadi merah ungu (Lay 1994). Hasil negatif menunjukkan tidak ada perubahan warna pada media. Hasil uji sitrat positif pada semua isolat bakteri hal ini menunjukkan bahwa bakteri dapat menggunakan sitrat sebagai satu-satunya sumber karbon dan energi (Lay 1994).
A
15 Hasil uji Voges-Proskauer positif mengarah pada Enterobacter sp.,
Klebsiella sp., Serratia marcescens, Hafnia alvei, Vibrio damsela, dan Vibrio alginolyticus. Hasil negatif mengarah pada Citrobacter sp., Shigella sp., Yersinia
sp., Edwardsiella sp., Salmonella sp., Vibrio furnissii, Vibrio fluvialis, Vibrio
vulnificus, dan Vibrio parahaemolyticus (Bergey dan Breed 1994).
Hasil uji kaldu gula-gula berupa glukosa, sukrosa, laktosa, manitol, dan maltosa menunjukkan hasil positif dan menghasilkan gas mengarah pada genus
Aeromonas sp. dan Vibrio sp. (Bergey dan Breed 1994). Hasil negatif pada semua
kaldu gula kecuali manitol mengarah pada genus Pseudomonas sp (Bergey dan Breed 1994). Menurut Woo dan Bruno (2011), Aeromonas sp. mampu memfermentasi fruktosa, galaktosa, maltosa, trehalosa, manitol, sukrosa, glukosa, dextrin dan glikogen, memberikan hasil uji positif pada uji indol, memproduksi gas dari glukosa.
Dari hasil isolasi dan identifikasi yang telah dilakukan, didapatkan hasil Gram positif, dengan bentuk morfologi batang, diisolasi pada kondisi aerob, dan memiliki spora mengarah pada genus Bacillus sp. (Bergey dan Breed 1994; Lay 1994). Bakteri Gram negatif dengan bentuk morfologi batang dan hasil positif pada uji oksidase mengarah pada Aeromonas sp., Pseudomonas sp., dan Vibrio sp. hal ini sesuai dalam Bergey’s Manual of Determinative Bacteriology (Bergey dan Breed 1994). Dari hasil pengujian secara biokimia isolat bakteri didapatkan hasil bakteri Gram positif berupa Bacillus sp., Gram negatif berupa Aeromonas sp.,
Aeromonas schubertii, dan Pseudomonas sp..
Hasil penelitian ini sesuai dengan Anand et al. (2010) yang berhasil mengisolasi Bacillus circulans, Aeromonas sp. dan Pseudomonas aeruginosa pada saluran pencernaan B. mori. Ditemukannya bakteri tersebut berguna sebagai pendegradasi polisakarida dalam proses pencernaan B. mori terhadap daun murbei. Bakteri ini diisolasi dari saluran reproduksi imago betina A. atlas diduga berasal dari fase larva sebagai mikroflora normal yang kemudian bertahan sampai fase imago. Hasil ini juga sesuai dengan Sakthivel et al. (2012) yang berhasil mengidentifikasi Pseudomonas fluorescence, Bacillus subtilis dan Bacillus cereus pada larva ulat sutera B. mori yang sakit. Hal ini dikuatkan dengan pernyataan Cappellozza et al. (2011) dan Manimegalai (2009) dalam buku Silk Biomaterials
for Tissue Engineering and Regenerative Medicine (Kundu 2014), yang
menyatakan bahwa bakteri yang paling umum yang menginfeksi B. mori adalah
Streptococcus sp., Pseudomononas aeruginosa, Bacillus cereus, Bacillus thuringiensis, Bacillus bombyseptiseus, Staphylococcus aureus, Serratia marcescens dan Enterococcus mundtii.
Hasil penelitian ini juga sesuai dengan pernyataan Badan Karantina Ikan, Pengendalian Mutu dan Keamanan Hasil Perikanan (BKIPM 2011) yang melakukan pemantauan daerah sebar Hama dan Penyakit Ikan Karantina (HPIK) di wilayah Purwakarta yang mengidentifikasi Aeromonas hydrophila, Yersinia
enterocolitica, Aeromonas schubertii, Aeromonas media, Citrobacter freundii, Bacillus sp., dan Aeromonas popoffii. Hal ini membuktikan bahwa bakteri yang
berhasil diidentifikasi berasal dari penyebaran Aeromonas sp. Aeromonas
schubertii, dan Bacillus sp. pada lingkungan di wilayah Purwakarta.
Bacillus sp. secara alami terdapat dimana-mana, dan termasuk spesies
yang hidup bebas atau bersifat patogen. Beberapa spesies Bacillus menghasilkan enzim ekstraseluler seperti protease, lipase, amilase, dan selulase yang bisa
16
membantu pencernaan dalam tubuh hewan (Wongsa dan Werukhamkul, 2007).
Aeromonas hydrophila dan Aeromonas schubertii dapat ditemukan diberbagai
lingkungan perairan seperti air tanah, air permukaan, air payau, air laut, dan air limbah (EPA 2006) termasuk di air kolam ikan (Wulandari 2012). Bakteri ini biasanya patogenik pada hewan seperti ikan, reptil, dan jarang pada mamalia (Quinn et al. 2002).
Aeromonas sp. merupakan patogen, baik pada manusia maupun hewan
(ikan, amfibi, reptil) (EPA 2006). Pseudomonas sp. secara luas dapat ditemukan di alam, contohnya di tanah, air, tanaman, dan hewan. Pseudomonas sp. adalah patogen oportunistik yaitu memanfaatkan kerusakan pada mekanisme pertahanan inang untuk memulai suatu infeksi (Boel 2004). Bakteri ini merupakan salah satu jenis mikroflora normal pada saluran pencernaan dan kulit manusia, namun terkadang bakteri ini juga dapat berubah menjadi patogen oportunistik yang menyebabkan bronkopneumonia kronis pada manusia saat kondisi imun tubuh menurun (Tellez et al. 2010).
SIMPULAN DAN SARAN
SimpulanBerdasarkan hasil penelitian telah diidentifikasi tiga genus bakteri, terdiri dari Bacillus sp., Aeromonas sp., dan Pseudomonas sp. dengan satu spesies bakteri Gram negatif yakni Aeromonas schubertii dari saluran reproduksi imago betina ulat sutera liar A. atlas yang berasal dari perkebunan teh PTPN VIII Purwakarta, Jawa Barat. Semua bakteri yang berhasil diidentifikasi merupakan bakteri patogen dan patogen oportunistik.
Saran
Diperlukan studi lanjutan untuk mengidentifikasi bakteri sampai tingkatan spesies dengan memperbanyak jenis uji biokimiawi dan atau menggunakan
polymerase chain reaction (PCR). Selain itu perlu penelitian lain untuk
mengidentifikasi mikroorganisme selain bakteri yang hidup dalam saluran reproduksi imago betina ulat sutera liar A.atlas atau organ yang lain.
DAFTAR PUSTAKA
Abbot SL, Sharon W, Cheung KW, Janda JM. 2003. The genus Aeromonas : biochemical characteristics, atypical reaction, and phenotypic identification schemes. J. Clin. Microbiol 41: 2348.
Anand AAP, Vennison SJ, Sankar SG, Prabhu DIG, Vasan PT, Raghuraman T, Geoffrey CJ, Vendan SE. 2010. Isolation and characterization of bacteria from the gut of Bombyx mori that degrade cellulose, xylan, pectin, and starch and their impact on digestion. Journal of Insect Science 10: 107.
17 Arwiyanto T, Maryudani YMS, Azizah NA. 2007. Sifat-sifat fenotipik
Pseudomonas fluoresen, agensia pengendalian hayati penyakit lincat pada
tembakau temanggung. Biodiversitas 8:147-151.
Atmosoedarjo H, Kartasubrata J, Kaomini M, Saleh W, Moerdoko W. 2000.
Sutera Alam Indonesia. Jakarta (ID): Yayasan Sarana Wana Jaya.
Awan A. 2007. Domestikasi ulat sutera liar Attacus atlas (Lepidoptera: Saturniidae) dalam usaha meningkatkan persuteraan nasional. Disertasi. Bogor (ID): Program Studi Sains Veteriner. Sekolah Pasca Sarjana. Fakultas Kedokteran Hewan, Institut Pertanian Bogor.
Awan BM, Ahmed MM, Barii A, Saad AM. 2005. Biochemical characterization of the Aeromonas species isolated from food and environment. Pak J
Physiol 1:1-2.
Barrow GI, Feltham RKA, editor. 1993. Cowan and Steel’s Manual for the
Identification of Medical Bacteria. Ed ke-3. Cambridge (UK): Cambridge
Univ Press.
Bergey DH, Breed RS. 1994. Identification flow charts Bergey’s manual of determinativebacteriology. [internet]. [diunduh 2014 Juni 30]; http://www.uiweb.uidaho.edu/micro_biology/250/IDFlowcharts.pdf. [BKIPM] Badan Karantina Ikan, Pengendalian Mutu dan Keamanan Hasil
Perikanan. 2011. Stasiun karantina ikan pengendalian mutu dan keamanan hasil perikanan kelas II Cirebon. [internet]. [diunduh 2014 November 11]; http://www.bkipm.kkp.go.id/bkipm/profil/upt/37.0/Stasiun%20Karantina %20Ikan%20Kelas%20II%20Cirebon.html.
Blackburn CDW, McClure PJ. 2002. Foodborne pathogens: Hazards, Risk
Analysis and Control. New York (US): CRC Press.
Boel T. 2004. Infeksi Saluran Kemih dan Kelamin. Sumatra Utara (ID): Fakultas Kedokteran Gigi USU.
Bogaert D, De Groot R, Hermans PW. 2004. Streptococcus pneumoniae colonization: the key to pneumococcal disease. Lancet Infect Dis 4: (144-154)
Buchanan RE, Gibbons. 2006. Bergey’s Manual of Determinative Bacteriology. Baltimore (US): Woverly.
Chapman RF. 1998. The Insect Structure and Function. Ed ke-4. London (UK): The English Universities Press Ltd.
Cappellozza S, Saviane A, Tettamanti G, Squadrin M, Vendramin E, Paolucci P, Franzetti E, Squartini A. 2011. Identification of Enterococcus mundtii as a pathogenic agent involved in the “flacherie” disease in Bombyx mori L. larvae reared on artificial diet. J Inverterbr Pathol 106:386-393.
Ekastuti DR. 2012. Tinjauan fisiologis domestikasi ulat sutera liar (Lepidoptera: Saturniidae). Berita Biologi 11: 139-147.
[EPA] Enviromental Protection Agency. 2006. Aeromonas: Human Health
Criteria Document. Washington (US): Health and Ecological Criteria
Division Office of Science and Technology Office of Water. US Enviromental Protection Agency.
Gielen S, Aerts R, dan Seels B. 2004. Biocontrol agents of Botrytis cinerea tested in climate chambers by making artificial infection on tomato leafs,
18
[ISA] International Silk Association. 2000. Sericologia (40). Japan International Coorperation Agency.
Jang SS, Biberstein EL, Hirsh DC. 1976. A Manual of Veterinary Clinical
Bacteriology and Micology. California (US): Univ California.
Jawetz E, Melnick JL, Adelberg E. 2005. Mikrobiologi Kesehatan. Jakarta (ID): Penerbit Buku Kesehatan.
Kundu S. 2014. Silk Biomaterials for Tissue Engineering and Regenerative
Medicine. Cambridge (UK): Woodhead Publishing.
Lay BW. 1994. Analisis Mikroba di Laboratorium. Jakarta (ID): Raja Grafindo Persada.
Liu LL, Xiao M, Li ZY, Li YM, Wang FS. 2009. A novel transglycosylating β-galactosidase from Enterobacter cloacae B5. Process Biochemistry 44: 232-236.
MacFaddin JF. 1980. Biochemical Tests for Identification of Medical Bacteria. Baltimore (US): Williams & Wilkins.
Madigan MT, Martinko JM, Parker J. 2003. Brock Biology of Microorganisms. Ed. ke-10. Amerika (US): Prentice Hall Inc.
Mahon CR, Lehman DC, Manuselis G. 2007. Textbook of Diagnostic
Microbiology Third Edition. Philadelphia (US): Saunders Elsevier.
Manimegalai S. 2009. Bacterial pathogens of mulberry silkworm Bombyx mori L and their management strategies. Sericologia 49:401-420.
Mulyani N. 2008. Biologi Attacus atlas L. (Lepidoptera : Saturniidae) dengan pakan daun kaliki (Ricinus communis L.) dan jarak pagar (Jatropha curcas L.) di laboratorium. Tesis. Bogor (ID): Sekolah Pasca Sarjana. Institut Pertanian Bogor.
Nakano MM, Zuber P. 1998. Anaerobic growth of a "strict aerobe" (Bacillus
subtilis). Annu Rev Microbiol 52: 165-90.
PDPI [Persatuan Dokter Paru Indonesia]. 2005. Pneumonia Komuniti. Jakarta (ID). Hal : 1-7.
Peigler R. 1989. A Revision of Indo Australian Genus Attacus. California (US): The Lepidoptera Research Foundation, Inc. Beverly Hills.
Pelczar MJ, Chan ECS. 1988. Dasar-Dasar Mikrobiologi 2. Alih bahasa: Hadioetomo RS, Imas T, Tjitrosomo SS dan Angka SL. Jakarta (ID): UI Press.
Pelczar MJJr, Chan ECS. 1999. Dasar-Dasar Mikrobiologi. Vol ke-1. Terjemahan dari: Element of Microbiology Hadioetomo RS, Imas T, Tjitrosomo SS, Angka SL, penerjemah. Jakarta (ID): UI Pr.
Prescott LM, Harley JP, Klein DA. 2005. Microbiology. Ed. Ke-6. New York (US): McGraw-Hill Co Inc.
Quinn PJ, Markey BK, Carter ME, Donnelly WJ, Leonard FC. 2002. Veterinary
Microbiology and Microbial Disease. London (UK): Blackwell Science.
Reapina ME. 2007. Kajian Aktivitas Antimikroba Ekstrak Kulit Kayu Mesoyi (Cryptocaria massoia) Terhadap Bakteri Patogen Dan Pembusukan Pangan. Skripsi. Bogor (ID): IPB Press.
Rianto F. 2009. Performa reproduksi imago Attacus atlas L. yang berasal dari perkebunan teh Purwakarta. Skripsi. Bogor (ID): Program Studi Ilmu Produksi dan Teknologi Peternakan, Fakultas Peternakan, Institut Pertanian Bogor.
19 Ryan KJ, Ray CG. 2004, Sherris Medical Microbiology. Ed ke-4. New York
(US): McGraw Hill Book Company Inc.
Sakthivel S, Angaleswari C, Mahalingam PU. 2012. Isolation and identification of bacteria responsible for flacherie in silkworms. Adv Appl. Sci. Res. 3: 4066-4068.
Situmorang J. 1996. An attempt to produce Attacus atlas L using Barringtonia leaves as plant fooder. Int. J. of Wild Silkmoth and Silk 1: 25-29.
Solihin DD, Fuah AM. 2010. Budi Daya Ulat Sutera Alam Attacus atlas. Jakarta (ID): Penebar Swadaya.
Tellez RA, Guemes FS, Casas EMC, Castro RH. 2010. Bacteria and yeast normal microbiota from respiratory tract and genital area of bottlenose dolphins (Tursiops truncatus). J. Microbiol and Microb Biotech 1:666-673.
Todar K. 2011. Streptococcus pneumoniae. [internet]. [diunduh 2014 November 11]; Todar’s Online Textbook of Bacteriology.
Toni dan Paul Shears. 1997. Mikrobiologi kedokteran. Jakarta (ID): Hiprokrates. Wongsa P, P Werukhamkul. 2007. Product Development and Technical Service,
Biosolution International. Thailand : Bangkadi Industrial Park 134/4.
Woo PTK, Bruno DW. 2011. Fish Disease and Disorders. Vol 3. Ed. ke-2. Inggris (UK): CABI Publishing.
Wulandari R. 2012. Deteksi gen virulen dan uji patogenitas bakteri Aeromonas
hydrophila isolat air Sukabumi pada ikan gurami (Osphronemus gourami).
Skripsi. Bandung (ID): Jurusan Pendidikan Biologi FMIPA. Universitas Pendidikan Indonesia
20
RIWAYAT HIDUP
Penulis dilahirkan pada tanggal 20 Januari 1991 di Lamongan, Jawa Timur. Penulis adalah anak pertama dari pasangan Bapak Drs. H. Sumariyono dan Ibu Lilik Wahyuni. Pendidikan di Taman Kanak-kanak diselesaikan pada tahun 1997 di TK Muhammadiyah. Pendidikan dasar dimulai tahun 1997-2003 di MI Mazraatul Ulum 2 Paciran. Pendidikan menengah pertama diselesaikan pada tahun 2006 di MTs Mazraatul Ulum Paciran dan pendidikan menengah atas diselesaikan pada tahun 2009 di SMAU BPPT Al-Fattah Lamongan. Pada tahun yang sama penulis diterima sebagai mahasiswa Tingkat Persiapan Bersama, Institut Pertanian Bogor melalui jalur Ujian Seleksi Masuk IPB (USMI) sebagai mahasiswa pada Fakultas Kedokteran Hewan, Institut Pertanian Bogor. Selama mengikuti pendidikan di Fakultas Kedokteran Hewan Institut Pertanian Bogor penulis aktif dalam kegiatan Himpunan Profesi Satwaliar.
