Lampiran 1. Denah percobaan di lapangan S0.P1 S3.P1 S4.P1 S3.P2 S1.P2 S4.P2

(1)

Lampiran 1. Denah percobaan di lapangan

Keterangan:

Rancangan petak terbagi (Split Plot Design)

Faktor pertama adalah periode simpan sebagai petak utama

Faktor kedua adalah insersi bakteri Rhizobium sp. sebagai anak petak. Faktor pertama terdiri dari 5 taraf, yaitu:

S0 = 0 bulan; S1 = 1 bulan; S2 = 2 bulan;S3 = 3 bulan; S4 = 4 bulan.

Faktor kedua terdiri dari 2 taraf, yaitu:

P1 = benih tanpa perlakuan insersi bakteri Rhizobium sp. (kontrol)

P2 = benih yang diberi perlakuan insersi bakteri Rhizobium sp.

Penelitian ini terdiri dari 2 kombinasi perlakuan dengan ulangan sebanyak empat kali, masing-masing satuan ulangan percobaan terdiri dari 10 unit tanaman sehingga secara keseluruhan terdapat 80 unit satuan percobaan.

S0.P1 S0.P2 S2.P2 S2.P1 S1.P1 S1.P2 S3.P1 S3.P2 S4.P2 S4.P1

(2)

Lampiran 2. Jadwal kegiatan penelitian

Kegiatan

Bulan

Peb Mar Apr Mei Jun Jul Agt Okt 1 2 3 4 1 2 3 4 1 2 3 4 1 2 3 4 1 2 3 4 1 2 3 4 1 2 3 4 1 2 3 4

Persiapan Media Larutan

Isolat bakteri Rhizobium sp Benih kedelai

Pelaksanaan

Insersi bakteri Rhizobium sp pada benih kedelai Irisan benih kedelai Penyimpanan benih yang diinsersi selama 4 bulan

Penanaman Panen Pengamatan Analisis

Jumlah bakteri Rhizobium sp dalam benih kedelai

Pengamatan benih yang diinsersi (sampel preparat) Viabilitas dan vigor benih kedelai yang disimpan Pengamatan perakaran yang terinfeksi bakteri Rhizobium sp Pengamatan berat kering tanaman kedelai yang ditanam pada kondisi rumah kaca

(3)

Lampiran 3. Komposisi media YEM Broth/ YEMA

Bahan kimia Jumlah (g)

Manitol K2HPO4

MgSO4.7H2O

NaCl

Ekstrak ragi (“yeast”) Agar Akuades 0.5 0.025 0.01 0.005 0.025 7.5 50 ml

Cara pembuatan media YEM Broth / YEMA adalah:

Semua bahan dimasukkan didalam erlenmeyer, kemudian dilarutkan hingga homogen. Media YEM Broth dibuat tanpa menggunakan agar sedangkan media YEMA dibuat dengan menggunakan agar. Media kemudian dituang ke dalam tabung reaksi ± 5 ml dan ditutup dengan sumbat kapas atau disesuaikan dengan kebutuhan dalam penelitian.

Sterilisasi media dan alat a. Sterilisasi media

Media padat atau cair yang telah ditempatkan dalam wadah pembenihan dimasukkan ke dalam autoklaf. Media tersebut kemudian disterilisasi pada suhu 1210C dengan tekanan 1 atm selama 15 menit.

b. Sterilisasi alat

Alat-alat yang telah dicuci bersih dikeringkan. Untuk selanjutnya disterilisasi dalam oven pada suhu 1600C selama 2 jam atau disterilisasi dalam autoklaf pada suhu 1210C dengan tekanan 1 atm selama 15 menit.

Lampiran 4. Komposisi media selektif Merah Kongo (MK)

Larutan stok 0.25 g merah kongo/100 ml akuades. 10 ml larutan stok dimasukkan ke dalam media YEMA steril 1 l.

(4)

Biru bromtimol (BTB)

Larutan stok 0.5 g biru bromtimol/100 ml etanol. 5 ml larutan stok steril dimasukkan kedalam media YEMA steril 1 l.

Agar glukosa pepton (PGA)

Bahan Jumlah (g) Pepton 5

Agar 10 Akuades 1 l.

Lampiran 5. Bahan kimia untuk penelitian

 Proanalysi Calsium Sulfat Gefalt, CaSO4.2H2O, E. Merck, Darmstadt.

 Proanalysi Magnesium Sulfat Heptahydrat, MgSO4.7H2O, E. Merck,

Darmstadt

 Proanalysi Di-Kaliumhydrogen-Phosfat-Trihydrat, KH2PO4.3H2O, E.

Merck, Darmstadt

 Proanalysi Gliserol, C3H11O3, , E. Merck, Darmstadt

 Proanalysi D(-) Fructose, General Purpose Reagent, BDH Chemical Ltd. Poole England.

 Proanalysi D(+) Glucosio Monodrato Premicrobiologia (C6H12O6H2O)

General Purpose Reagent, BDH Chemical Ltd. Poole England.  Yeast exctract (ekstrak ragi), code L. 21, Unipath Ltd., Basingstoke

Hampshire, England.

 Agar Bacteriological (Agar 1) Code L.11.  Parafin

 Larutan xylene

(5)

Lampiran 6. Alat-alat penelitian

 Prototipe alat vakum insersi benih kedelai.  Laminar air flow type CLP 460 Ec, Nederlands.  Spektrofotometer model 635, Varian Techtron, USA

 Controlled Enviroment Incubator Shaker series 25, New Brunswisk Scientific Co. Inc. USA.

 Freezer dan Refrigerator “GR”-292 CDP.  Autoklaf type vertikal model TA- 630, Taiwan.  Inkubator merek Memmert, Germany.

 Digital Ph meter, T.P.S. pty., Brisbane – Australia  Mikroskop

 Timbangan analitik “ Ohaus“ GT 4100, USA.

 Vortex Mixer, VF2, Boom B. V. Meppel, K. Jahke & Kunkel, germany  Mikro pipet “ Eppendorf“, 50 – 250 µl, Germany, dan tip

 Indikator Universal, E. Merck, Darmstadt, Germany.  Labu erlenmeyer 100 ml, 250 ml

 Gelas ukur 100 ml  Tabung reaksi  Rak tabung reaksi  Beker glas  Objek glas  Jarum ose  Lampu bunsen  Alat pengaduk

(6)

(7)

Lampiran 8. Deskripsi kedelai varietas Anjasmoro

Kategori : Benih Bina Bersertifikat (Benih Dasar)

Tahun : 2008

Produksi : Balai Benih, Pemerintah Propinsi JawaTimur Dinas Pertanian

Potensi hasil : 2.2 – 2.03 ton/ha.

Jenis tanaman : Kedelai

Varietas : Anjasmoro

Warna hipokotil : Ungu

Warna epikotil : Ungu

Warna daun : Hijau

Warna bunga : Ungu

Warna bulu : Putih

Warna kulit biji : Kuning Warna polong masak : Coklat muda

Bentuk daun : Oval

Ukuran daun : Lebar

Tipe tumbuh : Determinate

Umur berbunga (hari) : 35-39 hari Umur masak(hari) : 82-92

Percabangan : 3-5

(8)

Lampiran 9. Analisis keragaman pengaruh insersi bakteri Rhizobium sp. dan periode simpan terhadap populasi sel bakteri

Sumber db JK KT F Hit Pr>F Ulangan Periode Simpan Insersi Bakteri Simpan*Insersi Galat Total 4 10 1 4 10 29 0.5333333 7.3333333 313.6333333 0.5333333 7.3333333 329.3666667 0.1333333 0.7333333 313.6333333 0.1333333 0.7333333 0.18 1.00 427.68 0.18 0.9426 0.5000 <.0001 0.9426 KK 26.48

Lampiran 10. Analisis keragaman pengaruh insersi bakteri Rhizobium sp. dan periode simpan terhadap kadar air sebelum tanam

Sumber db JK KT F Hit Pr>F Ulangan Periode Simpan Insersi Bakteri Simpan*Insersi Galat Total 2 4 1 4 18 29 0.00287120 0.00992533 0.03110520 0.00279147 0.04966880 0.09636200 0.00143560 0.00248133 0.03110520 0.00069787 0.00275938 0.52 0.90 11.27 0.25 0.6030 0.4849 0.0035 0.9041 KK 2.48

Lampiran 11. Analisis keragaman pengaruh insersi bakteri Rhizobium sp. dan periode simpan terhadap potensi tumbuh maksimum sebelum tanam Sumber db JK KT F Hit Pr>F Ulangan Periode Simpan Insersi Bakteri Simpan*Insersi Galat Total 2 4 1 4 18 29 39.46666667 7.46666667 4.80000000 67.20000000 120.5333333 239.4666667 19.73333333 1.86666667 4.80000000 16.80000000 6.6962963 2.95 0.28 0.72 2.51 0.0781 0.8879 0.4083 0.0783 CV 2.59

Lampiran 12. Analisis keragaman pengaruh insersi bakteri Rhizobium sp. dan periode simpan terhadap daya berkecambah sebelum tanam

(9)

Lampiran 13. Analisis keragaman pengaruh insersi bakteri Rhizobium sp. dan periode simpan terhadap indeks vigor sebelum tanam

Sumber db JK KT F Hit Pr>F Ulangan Periode Simpan Insersi Bakteri Simpan*Insersi Galat Total 2 4 1 4 18 29 51.200000 5431.466667 192.533333 119.466667 1186.133333 6980.800000 25.600000 1357.866667 192.533333 29.866667 65.896296 0.39 20.61 2.92 0.45 0.6836 <.0001 0.1046 0.7688 KK 9.53

Lampiran 14. Analisis keragaman pengaruh insersi bakteri Rhizobium sp. dan periode simpan terhadap kecepatan tumbuh sebelum tanam

Lampiran 15. Analisis keragaman pengaruh insersi bakteri Rhizobium sp. dan periode simpan terhadap tinggi tanaman pada kedelai 6 MST

Lampian 16. Analisis keragaman pengaruh insersi bakteri Rhizobium sp. dan periode simpan terhadap jumlah daun pada kedelai 6 MST

(10)

Lampian 17. Analisis keragaman pengaruh insersi bakteri Rhizobium sp. dan periode simpan terhadap jumlah bintil akar pada kedelai 6 MST

Lampian 18. Analisis keragaman pengaruh insersi bakteri Rhizobium sp. dan periode simpan terhadap bobot basah bintil akar pada kedelai 6 MST

Lampian 19. Analisis keragaman pengaruh insersi bakteri Rhizobium sp. dan periode simpan terhadap bobot kering bintil akar pada kedelai 6 MST

Lampian 20. Analisis keragaman pengaruh insersi bakteri Rhizobium sp. dan periode simpan terhadap bobot kering bagian atas pada kedelai 12 MST Sumber db JK KT F Hit Pr>F Ulangan Periode Simpan Insersi Bakteri Simpan*Insersi Galat Total 3 4 1 4 27 39 1.12998868 30.06397475 61.35281303 21.44313485 12.4214401 126.4113514 0.37666289 7.51599369 61.35281303 5.36078371 0.4600533 0.82 16.34 133.36 11.65 0.4949 <.0001 <.0001 <.0001 KK 14.46

(11)

Lampian 21. Analisis keragaman pengaruh insersi bakteri Rhizobium sp. dan periode simpan terhadap bobot kering bagian bawah pada kedelai 12 MST Sumber db JK KT F Hit Pr>F Ulangan Periode Simpan Insersi Bakteri Simpan*Insersi Galat Total 3 4 1 4 27 39 2.66902388 45.75543215 10.748505562 13,33159025 84.32380778 0.88967463 11.43885804 10.74850562 3.33289756 0.43775022 2.03 26.13 24.55 7.61 0.1330 <.0001 <.0001 0.0003 KK 18.01

Lampian 22. Analisis keragaman pengaruh insersi bakteri Rhizobium sp. dan periode simpan terhadap panjang akar pada kedelai 12 MST

Lampian 23. Analisis keragaman pengaruh insersi bakteri Rhizobium sp. dan periode simpan terhadap tinggi tanaman pada kedelai 12 MST

Sumber db JK KT F Hit Pr>F Ulangan Periode Simpan Insersi Bakteri Simpan*Insersi Galat Total 3 4 1 4 27 39 57.6059789 724.4777637 41.0427081 81.5494886 323.251373 1227.927312 19.2019930 181.1194409 41.0427081 20.3873722 11.972273 1.60 15.13 3.43 1.70 0.2116 <.0001 0.0751 0.1785 KK 7.78

Lampian 24. Analisis keragaman pengaruh insersi bakteri dan periode simpan terhadap jumlah polong pada kedelai 12 MST

Sumber db JK KT F Hit Pr>F Ulangan Periode Simpan Insersi Bakteri Simpan*Insersi Galat Total 3 4 1 4 27 39 46.428119 3075.176192 1711.661973 941.209267 594.243572 6368.719123 15.476040 768.794048 1711.661973 235.302317 22.009021 0.70 34.93 77.77 10.69 0.5584 <.0001 <.0001 <.0001 KK 12.04

(12)

Lampian 25. Analisis keragaman pengaruh insersi bakteri Rhizobium sp. dan periode simpan terhadap bobot kering polong pada kedelai 12 MST Sumber db JK KT F Hit Pr>F Ulangan Periode Simpan Insersi Bakteri Simpan*Insersi Galat Total 3 4 1 4 27 39 5.2873149 69.1824306 104.7201960 20.0878313 27.8992839 227.1770568 1.7624383 17.2956077 104.7201960 5.0219578 1.0333068 1.71 16.74 101.34 4.86 0.1894 <.0001 <.0001 0.044 KK 11.77

Lampian 26. Analisis keragaman pengaruh insersi bakteri Rhizobium sp. dan periode simpan terhadap bobot kering benih pada kedelai 12 MST

Sumber db JK KT F Hit Pr>F Ulangan Periode Simpan Insersi Bakteri Simpan*Insersi Galat Total 3 4 1 4 27 39 0.36764508 2.56275460 7.82428703 0.19272160 1.01353768 11.96094598 0.12254836 0.64068865 7.82428703 0.04818040 3.26 17.07 208.43 1.28 0.0367 <.0001 <.0001 0.3011 KK 18.23

Lampian 27. Analisis keragaman pengaruh insersi bakteri Rhizobium sp. dan periode simpan terhadap kadar air

Lampian 28. Analisis keragaman pengaruh insersi bakteri Rhizobium sp. terhadap potensi tumbuh maksimum

(13)

Lampian 29. Analisis keragaman pengaruh insersi bakteri Rhizobium sp. dan periode simpan terhadap daya berkecambah

Lampiran 30. Analisis keragaman pengaruh insersi bakteri Rhizobium sp. dan periode simpan terhadap indeks vigor

Sumber db JK KT F Hit Pr>F Ulangan Periode Simpan Insersi Bakteri Simpan*Insersi Galat Total 3 4 1 4 27 39 310.400000 1549.600000 462.400000 949.600000 657.600000 3929.600000 103.466667 387.400000 462.400000 237.400000 24.355556 4.25 15.91 18.99 9.75 0.0139 <.0001 0.0002 <.0001 KK 5.63

Lampian 31. Analisis keragaman pengaruh insersi bakteri Rhizobium sp. dan periode simpan terhadap kecepatan tumbuh

Lampiran 32. Hasil analisis contoh tanah

No. Contoh tanah Kjeldahl N pH tanah

1.1 Sebelum tanam 0.03 6 1.2 0.04 1.3 0.04 2.1 KO 0.04 6 2.2 0.05 2.3 0.05 3.1 K+ 0.06 6.2 3.2 0.05 3.3 0.06