SKRIPSI SINTESIS SENYAWA ASAM O-(3',4'-DIKLOROBENZOIL)-5-NITROSALISILAT DAN UJI AKTIVITAS ANALGESIK TERHADAP MENCIT (Mus musculus)

(1)

SKRIPSI

SINTESIS SENYAWA

ASAM O-(3',4'-DIKLOROBENZOIL)-5-NITROSALISILAT DAN UJI AKTIVITAS ANALGESIK TERHADAP MENCIT

(Mus musculus)

ALEAYA AISHAH

FAKULTAS FARMASI UNIVERSITAS AIRLANGGA

DEPARTEMEN KIMIA FARMASI

SURABAYA

(2)

(3)

ii

LEMBAR PERSETUJUAN

PUBLIKASI KARYA ILMIAH

Demi perkembangan ilmu pengetahuan, saya menyetujui skripsi / karya ilmiah saya, dengan judul:

SINTESIS SENYAWA ASAM O-(3’,4’-DIKLOROBENZOIL)-5-NITROSALISILAT DAN UJI AKTIVITAS ANALGESIKNYA PADA MENCIT (Mus musculus)

Untuk dipublikasikan atau ditampilkan di internet atau media lain yaitu Digital Library Perpustakaan Universitas Airlangga untuk kepentingan akademik sebatas sesuai dengan Undang-Undang Hak Cipta.

Demikian pernyataan persetujuan publikasi karya ilmiah ini saya buat dengan sebenarnya.

Surabaya, 5 Februari 2016

Aleaya Aishah

(4)

iii

SURAT PERNYATAAN

Saya yang bertanda tangan di bawah ini,

Nama : Aleaya Aishah

Nim : 051111163

Fakultas : Farmasi

Menyatakan dengan sesungguhnya bahwa hasil tugas akhir yang saya

tulis dengan judul:

SINTESIS SENYAWA ASAM O-(3’,4’-DIKLOROBENZOIL)-5-NITROSALISILAT DAN UJI AKTIVITAS ANALGESIKNYA

PADA MENCIT (Mus musculus)

adalah benar-benar merupakan hasil karya saya sendiri. Apabila dikemudian hari diketahui bahwa skripsi ini merupakan hasil plagiarisme, maka saya bersedia menerima sangsi berupa pembatalan kelulusan dan atau pencabutan gelar yang saya peroleh.

Demikian surat pernyataan ini saya buat untuk dipergunakan sebagaimana mestinya.

Aleaya Aishah

(5)

iv

KATA PENGANTAR

Segala puji syukur saya panjatkan kepada Tuhan Yang Maha Esa, atas rahmat dan karuniaNya sehingga penulis dapat menyelesaikan skripsi yang merupakan salah satu persyaratan untuk mencapai gelar Sarjana Farmasi pada Fakultas Farmasi Universitas Airlangga.

Skripsi yang berjudul “SINTESIS SENYAWA ASAM O

-(3’,4’-DIKLOROBENZOIL)-5-NITROSALISILAT DAN UJI AKTIVITAS

ANALGESIK TERHADAP MENCIT (Mus musculus)” ini dapat

diselesaikan atas bantuan serta dukungan banyak pihak, maka oleh karena itu penulis ingin menyampaikan ucapan terima kasih kepada :

a. Dr. Bambang Tri Purwanto, M.S., Apt selaku pembimbing utama yang

telah banyak memberikan bimbingan dan pengarahan dalam menyelesaikan skripsi ini

b. Dra. Nuzul Wahyuning Diyah, Msi. Apt. selaku pembimbing serta atas

perhatiannya selama penelitian untuk memberikan bimbingan, dan saran dalam menyelesaikan skripsi ini.

c. Dr. Juni Ekowati, M.si., Apt. selaku dosen penguji atas kritik dan saran

yang diberikan kepada penulis dalam perbaikan skripsi ini.

d. Febri Annuryanti, SFarm., MSc, Apt. selaku dosen penguji atas kritik dan

saran yang diberikan kepada penulis dalam perbaikan skripsi ini.

e. Seluruh dosen di departemen Kimia Farmasi dan Kimia Medisinal atas

segala bantuan, saran dan dorongan sehingga terselesaikan skripsi ini.

f. Bu Ana Yudha, SSi., Apt. M. Pharm selaku dosen wali yang telah

memberikan motivasi serta dorongan selama perkuliahan di Fakultas Farmasi Universitas Airlangga.

g. Bapak Tukidjo dan Bapak Tanto, Laboran Ruang Praktikum Kimia

(6)

v

h. Para dosen yang telah mendidik dan membimbing selama perkuliahan di

Fakultas Farmasi Universitas Airlangga.

i. Kedua orang tua (Mohamed Fadli dan Hasidah Hamzah) dan keluarga

besar yang selalu mendoakan, memberikan dukungan dan semangat sehingga skripsi ini bisa selesai.

j. Teman-teman Skripsi Nor Azrene Elena, Ivon Loretta, Alfiyah

Sefyaningtiyas, Asyraf Solahudin dan semua teman-teman seperjuangan penelitian skripsi di Kimia Medisinal. Terima kasih atas kerja samanya.

k. Terima kasih kepada teman-teman yang tidak bisa disebut satu persatu,

karena telah membantu penulis dalam menyelesaikan skripsi ini.

Pihak-pihak lain yang belum disebutkan, terima kasih semuanya. Penulis menyadari bahwa masih banyak terdapat kekurangan dalam menyusun skripsi ini. Untuk itu segala kritik dan saran dari semua pihak sangat diharapkan demi perbaikan pada nantinya. Semoga skripsi ini dapat bermanfaat bagi perkembangan ilmu pengetahuan, khususnya dalam pengembangan obat.

(7)

vi

RINGKASAN

SINTESIS SENYAWA ASAM O -(3’,4’-DIKLOROBENZOIL)-5-NITROSALISILAT

DAN UJI AKTIVITAS ANALGESIKNYA PADA MENCIT

(Mus musculus) Aleaya Aishah

Modifikasi stuktur asam salisilat bertujuan untuk mendapatkan senyawa turunannya yang memiliki aktivitas analgesik lebih tinggi

dibanding asam salisilat. Senyawa asam O

-(3’,4’-diklorobenzoil)-5-nitrosalisilat telah berhasil disintesis dan diuji aktivitas analgesiknya

pada mencit (Mus musculus).

Sintesis dalam penelitian ini adalah melakukan reaksi antara asam 5-nitrosalisilat dan 3,4-diklorobenzoil klorida. Pada struktur asam 5-nitrosalisilat, terdapat gugus -OH yang dapat bereaksi dengan 3,4-diklorobenzoil klorida. Reaksi esterifikasi akan terjadi melalui substitusi nukleofilik dan 5-nitrosalisilat akan bertindak sebagai nukleofil. Pada reaksi ini, gugus OH pada senyawa asam 5-nitrosalisilat akan bertindak sebagai nukleofil yang akan menyerang gugus karbonil pada 3,4-diklorobenzoil klorida. Pada metode ini digunakan basa piridin sebagai katalisator untuk mengikat HCl hasil reaksi sekaligus dapat berfungsi sebagai katalis supaya lebih reaktif. Hasil sintesis yang diperoleh sebesar 60 % yang berupa serbuk padatan berwarna kuning kecoklatan.

(8)

vii

sintesis berbeda dengan senyawa aspirin. Begitu juga uji KLT dengan

menggunakan 3 eluen yang berbeda, yaitu etil asetat : n-heksan (7 : 3),

etil asetat : n-heksan: metanol (5 : 3 : 2), dan Etil asetat : metanol (6 : 4),

sedangkan untuk konfirmasi struktur dilakukan dengan metode

spekrofotometri ultraviolet, spektrofotometri inframerah dan

spektrometri magnet inti (1_{H-NMR). Hasil spektrum UV menunjukkan}

bahwa ada perbedaan λmaks antara senyawa hasil sintesis dan aspirin. Hasil spektrum IR pula menunjukkan bahwa senyawa hasil sintesis telah

memiliki gugus fungsi yang berbeda dari aspirin, dan hasil spektrum (1

H-NMR) menunjukkan bahwa ada perbedaan jumlah H pada senyawa hasil sintesis dan aspirin. Uji aktivitas analgesik dilakukan dengan memberikan senyawa uji dan senyawa penginduksi nyeri pada mencit

secara intraperitoneal dengan metode Writhing test. Senyawa uji asam O

-(3’,4’-diklorobenzoil)-5-nitrosalisilat dengan dosis 25, 50, dan 100 mg/kg BB diinjeksi 20 menit sebelum induksi nyeri oleh larutan asam asetat 0,6 % dengan volume 0,01 ml/g BB. Setelah 5 menit pemberian induksi nyeri,diamati respon nyeri selama 30 menit. Aktivitas analgesik dapat dihitung dari frekuensi geliat berdasarkan persentase hambatan nyeri.

Hasil penelitian menunjukkan bahwa senyawa asam O

-(3’,4’-diklorobenzoil)-5-nitrosalisilat pada dosis 25 mg/kg BB mempunyai persentase hambatan nyeri sebesar 38,68 %, pada dosis 50 mg/kg BB sebesar 68,68 %, dan pada dosis 100 mg/kg BB sebesar 78,79 %. Untuk senyawa pembanding aspirin pula, pada dosis 25 mg/kg BB mempunyai persentase hambatan nyeri sebesar 32,42 %, pada dosis 50 mg/kg BB sebesar 60,99 %, dan pada dosis 100 mg/kg BB sebesar 76,92 %.

(9)

-(3’,4’-viii

diklorobenzoil)-5-nitrosalisilat mempunyai aktivitas analgesik yang lebih tinggi dibanding aspirin.

Didapatkan hasil ED50 untuk O

-(3’,4’-diklorobenzoil)-5-nitrosalisilat sebanyak 32,93 mg/kg dan untuk asam 5--(3’,4’-diklorobenzoil)-5-nitrosalisilat didapatkan hasil sebanyak 40,52 mg/kg. Dari hasil ini menunjukkan ED50

untuk O-(3’,4’-diklorobenzoil)-5-nitrosalisilat lebih rendah dibandingkan

dengan ED50 untuk 5-nitrosalisilat. Dapat disimpulkan bahwa O

-(3’,4’-diklorobenzoil)-5-nitrosalisilat memiliki aktivitas analgesik lebih besar dibanding aspirin

Sebagai saran, perlu dilakukan penelitian lebih lanjut mengenai

toksisitas senyawa hasil sentesis asam O

(10)

ix

ABSTRACT

Synthesis and analgesic activity test of O -(3’,4’-dichlorobenzoyl)-5-nitrosalicylic acid in mice (Mus musculus)

Aleaya Aishah

The aim of this research is to synthesize O

-(3’,4’-dichlorobenzoyl)-5-nitrosalicylic as an aspirin derivate and to examine its

analgesic activity in mice. O-(3’,4’-dichlorobenzoyl)-5-nitrosalicylic was

synthesized with esterification method by reacting 5-nitrosalicylic acid with 3,4-dichlorobenzoyl chloride. Tetrahydrofuran (THF) and pyridin was used as a solvent and respective catalyst. The result obtained for the synthesize of 60% in the form of yellowish/tawny powder. The resulted compound was recrystallized by using ethanol and its purity was tested by thin layer chromatography and melting point test. The structure was confirmed by UV spectrophotometry method, infrared spectrophotometry method, and HNMR spectrometry method.

Its analgesic activity was tested with Writhing test method. The

percentages of pain-inhibition for O

-(3’,4’-dichlorobenzoyl)-5-nitrosalicylic for the dose 25mg/kg body-weight was 38,68%, for 50 mg/kg body-weight was 68,68% and for 100 mg/kg body-weight was 78,79%. On the other hand, the percentages of pain-inhibition for the standard compound aspirin for the dose 25mg/kg body-weight was 32,42%, for 50 mg/kg weight was 60,99% and for 100 mg/kg body-weight was 76,92%. In conclusion, the aspirin derivate that was

synthesized which is O-(3’,4’-dichlorobenzoyl)-5-nitrosalicylic have

(11)

x

The ED50 for O-(3’,4’-dichlorobenzoyl)-5-nitrosalicylic is 32,93

mg/kg and for 5-nitrosalicylic acid is 40,52 mg/kg. The ED50 of O

-(3’,4’-dichlorobenzoyl)-5-nitrosalicylic is lower than ED50 of 5-nitrosalicylic

acid. This showed that O-(3’,4’-dichlorobenzoyl)-5-nitrosalicylic have

higher analgesic activity than aspirin.

Keyword: synthesis, O-(3’,4’-dichlorobenzoyl)-5-nitrosalicylic, analgesic

(12)

xi

DAFTAR ISI

Halaman

HALAMAN SAMPUL………... i

LEMBAR PENGESAHAN………... ii

HALAMAN PERSETUJUAN PUBLIKASI ILMIAH…... iii

HALAMAN PERNYATAAN BUKAN HASIL PLAGIARISME……….. ... iv

KATA PENGANTAR………... v

1.1 Latar Belakang...1

1.2 RumusanMasalah...4

1.3 Tujuan Penelitian ...5

1.4 Manfaat Penelitian ...5

BAB 2 TINJAUAN PUSTAKA...6

(13)

xii

2.2 Tinjauan Tentang Analgesik...6

2.3 Tinjauan Tentang Turunan Asam Salisilat...7

2.4 Tinjauan Tentang Aspirin...8

2.5 Tinjauan Tentang Reaksi Asilasi...11

2.6 Tinjauan Tentang Bahan Reagen Untuk Sintesis...10

2.6.1 Tinjauan tentang Asam 5-nitrosalisilat...10

2.6.2 Tinjauan tentang 3,4-diklorobenzoil klorida...10

2.6.3 Tinjauan Tentang Tetrahidrofuran...10

2.6.4 Tinjauan Tentang Piridin...10

2.7 Tinjauan Tentang Kemurnian Senyawa Hasil Sintesis...11

2.7.1 Tinjauan Tentang Jarak Lebur...11

2.7.2 Tinjauan Tentang Kromatografi Lapis Tipis...11

2.8 Tinjauan Tentang Identifikasi Struktur...12

2.8.1 Tinjauan Tentang Spektrofotometer UV-Vis...12

2.8.2 Tinjauan Tentang Spektrofotometer Inframerah...12

2.8.3 Tinjauan Tentang Spektrometer Resonansi Magnet Inti...12

(14)

xiii

2.9.1 Metode Stimulasi Panas...13

2.9.2 Metode Stimulasi Listrik...13

2.9.3 Metode Stimulasi Mekanikal...14

2.9.4 Metode Stimulasi Kimiawi...14

BAB 3 KERANGKA KONSEPTUAL...15

3.1 Kerangka Konseptual...15

BAB 4 METODE PENELITIAN...18

4.1 Alat dan Bahan Penelitian...18

4.1.1 Bahan Kimia...18

4.1.2 Alat...18

4.2 Hewan Coba...18

4.3 Kerangka Operasional Sintesis...19

4.4 Prosedur Sintesis Senyawa Asam O-(3',4'-diklorobenzoil)-5-nitrosalisilat...20

4.5 Analisis Senyawa Asam O-(3',4'-diklorobenzoil)-5-nitrosalisilat...21

4.5.1 Pemeriksaan Organoleptis...21

4.6 Uji Kemurnian Senyawa Hasil Sintesis...21

4.6.1 Uji Jarak Lebur...21

(15)

xiv

4.7 Pemeriksaan Identifikasi Struktur ...21

4.7.1 Analisis Dengan Spektrofotometer UV-Vis...21

4.7.2 Analisis Dengan Spektrofotometer Inframerah...22

4.7.3 Identifikasi Senyawa Dengan Spektrometer Resonansi Magnet Inti...22

4.8 Prosedur Uji Aktivitas Analgesik...22

4.8.1 Persiapan Hewan Coba...22

4.8.2 Pembuatan Larutan Asam Asetat 0,6% dan Musilago CMC Na 0,5%...23

4.8.3 Perhitungan Dosis...23

4.8.4 Pembuatan Sediaan suspensi Senyawa Uji...24

4.8.5 Pemberian Senyawa Uji...25

4.8.6 Pelaksanaan Uji Aktivitas...25

4.9 Analisis Data...28

4.9.1 Penentuan Persen Hambatan Nyeri...28

4.9.2 Uji Anova...28

4.9.3 Penentuan ED50... 29

BAB 5 HASIL PENELITIAN………...30

(16)

xv

5.1.1 Hasil Sintesis Senyawa Asam

O-(3',4'-diklorobenzoil)-5-nitrosalisilat...30

5.2 Analisis Senyawa Hasil Sintesis…………...…30

5.2.1 Pemeriksaan Organoleptis……….…...30

5.2.2 Uji Kemurnian dengan Penentuan jarak Lebur…………...30

5.2.3 Uji Kemurnian dengan Kromatografi Lapis Tipis…... 31

5.3 Identifikasi Struktur Hasil Sintesis……….31

5.3.1 Identifikasi Struktur dengan Metode Spektrofotometri UV-Vis………... 31

5.3.2 Identifikasi Struktur dengan Metode Spektrofotometri Infra Merah (IR)………... 33

5.3.3 Identifikasi Struktur dengan Metode Spektrometer Resonansi Magnet Inti……….…..34

5.4 Uji Aktivitas Analgesik………...37

5.4.1 Penentuan Frekuensi Geliat…………...37

5.4.2 Analisis Data dengan Uji ANOVA……...38

(17)

xvi

BAB 6 PEMBAHASAN………... 40

BAB 7 KESIMPULAN DAN SARAN……….. 44

7.1 Kesimpulan………... 45

7.2 Saran……….45

(18)

xvii

DAFTAR TABEL

Halaman

4.1 Konversi Dosis Hewan Coba ke HED

berdasarkan BSA ...23

5.1 Hasil Pemeriksaan Organoleptis...30

5.2 Hasil Pemeriksaan Jarak Lebur...30

5.3 Nilai Rf Senyawa Hasil Sintesis...….37

5.4 Karakteristik Spektrum IR Senyawa Asam 5-nitrosalisilat dan senyawa hasil sintesis……….. 34

5.5 Karakteristik Spektrum 1_H-NMR Senyawa Asam 5-nitrosalisilat ... 35

5.6 Karakteristik Spektrum 1_H-NMR Senyawa Hasil Sintesis…………...…... 36

5.7 Frekuensi Geliat Pada Kelompok Uji O-(3’,4’-diklorobenzoil)-5-nitrosalisilat, Kelompok Senyawa Pembanding aspirin, dan Kelompok Kontrol CMC Na 0,05%... 37

5.8 Persentase Hambatan Nyeri Kelompok Senyawa Uji O-(3’,4’-diklorobenzoil)-5-nitrosalisilat dan Kelompok Senyawa Pembanding Aspirin...………... 38

(19)

xviii

DAFTAR GAMBAR

Halaman 1.1 Struktur Turunan Asam Salisilat...2 2.1 Mekanisme Reaksi Asilasi... 9

3.1 Skema Kerangka

Konseptual...17 4.1 Kerangka Operasional Sintesis... 19

4.2 Reaksi Sintesis Senyawa

O-(3’,4’-diklorobenzoil)-5-nitrosalisilat... 20

4.1 Bagan Uji

Aktivitas...27 5.1 Spektrum UV-Vis Senyawa Asam 5-nitrosalisilat Dalam

Etanol………... 32

5.2 Spektrum UV-Vis Senyawa Asam O-(3’,4’-diklorobenzoil)-5

-nitrosalisilat Dalam Etanol………... 32 5.3 Spektrum Inframerah Senyawa Asam 5-nitrosalisilat Dalam

Plat KBr………...… 33 5.4 Spektrum Inframerah Senyawa

Asam O-(3’,4’-diklorobenzoil)-5-nitrosalisilat Dalam

Plat KBr………...………...…....33

5.5 Spektrum 1_{H-NMR Senyawa Asam 5-nitrosalisilat}

(20)

xix

5.6 Spektrum 1_{H-NMR Senyawa}

Asam O-(3’,4’-diklorobenzoil)-5-nitrosalisilat Dalam

Pelarut DMSO-D6……..………...…...…. 36 5.7 Grafik Hubungan Antara log Dosis dan % Hambatan Nyeri

Untuk Senyawa Aspirin...………... 39 5.8 Grafik Hubungan Antara log Dosis dan % Hambatan Nyeri

(21)

xx

DAFTAR LAMPIRAN

Halaman Lampiran 1 Perhitungan Persentase

Hasil Sintesis...48 Lampiran 2 Perhitungan Persentase Hambatan Nyeri...49 Lampiran 3 Tabel Statistika...…. 50 Lampiran 4 Hasil Perhitungan ANOVA dan LSD

antara Kelompok Dosis Senyawa Uji

Asam O-(3’,4’-diklorobenzoil)-5-nitrosalisilat, Senyawa Pembanding Aspirin dan Kelompok Kontrol

CMC-Na 0,5 %………...…... 51 Lampiran 5 Sebelum dan Sesudah Perlakuan Hewan Coba... 55 Lampiran 6 Penyuntikan Pada Mencit Secara Intraperitoneal.. 56

Lampiran 7 Prediksi 1_{H-NMR berdasarkan}