EKTRAKSI DAN PARTIAL PURIFI KATION
EKTRAKSI DAN PARTIAL PURIFI KATION
DARI ENZIM PEROKSIDASE DARI TANAMAN
DARI ENZIM PEROKSIDASE DARI TANAMAN
UNTUK PELABELAN ANTIBODI
UNTUK PELABELAN ANTIBODI
Dosen : Fathin Hamida,M.Si
Dosen : Fathin Hamida,M.Si
Kelompok 3:
Kelompok 3:
Rina
Rina Sinaga
Sinaga
(17334018)
(17334018)
Tri
Tri Yuniati
Yuniati
(17334019)
(17334019)
Vidya
Vidya Retno
Retno Prabandari
Prabandari
(17334020)
(17334020)
Anisa
LANDASAN TEORI
LANDASAN TEORI
E
En
nzziim
m a
ad
da
alla
ah
h m
mo
olle
ekku
ull b
biio
op
po
olliim
me
err yya
an
ng
g tte
errssu
ussu
un
n
d
da
arrii sse
erra
an
ng
gkka
aiia
an
n a
assa
am
m a
am
miin
no
o d
da
alla
am
m kko
om
mp
po
ossiissii d
da
an
n
ssu
ussu
un
na
an
n rra
an
ntta
aii yya
an
ng
g tte
erra
attu
urr d
da
an
n tte
etta
ap
p.. E
En
nzziim
m
m
me
em
me
eg
ga
an
ng
g p
pe
erra
an
na
an
n p
pe
en
nttiin
ng
g d
da
alla
am
m b
be
errb
ba
ag
ga
aii rre
ea
akkssii
d
dii d
da
alla
am
m sse
ell..
S
Se
eb
ba
ag
ga
aii p
prro
otte
eiin
n,, e
en
nzziim
m d
diip
prro
od
du
ukkssii d
da
an
n d
diig
gu
un
na
akka
an
n
o
olle
eh
h sse
ell h
hiid
du
up
p u
un
nttu
ukk m
me
en
ng
gkka
atta
alliissiiss rre
ea
akkssii,, a
an
ntta
arra
a
lla
aiin
n kko
on
nvve
errssii e
en
ne
errg
gii d
da
an
n m
me
etta
ab
bo
olliissm
me
e p
pe
errtta
ah
ha
an
na
an
n
sse
ell..
A
Am
miilla
asse
e
m
me
em
mp
pu
un
nyya
aii
kke
em
ma
am
mp
pu
ua
an
n
un
u
nttu
ukk
me
ENZIM PEROKIDASE
ENZIM PEROKIDASE
•
•
En
E
nzziim
m p
pe
erro
okkssiid
da
a a
ad
da
alla
ah
h e
en
nzziim
m g
go
ollo
on
ng
ga
an
n
o
okkssiid
do
orre
ed
du
ukktta
asse
e yya
aiittu
u e
en
nzziim
m yya
an
ng
g m
ma
am
mp
pu
u
m
me
en
ng
gkka
atta
alliissiiss rre
ea
akkssii o
okkssiid
da
assii a
atta
au
u rre
ed
du
ukkssii
ssu
ua
attu
u b
ba
ah
ha
an
n.. G
Go
ollo
on
ng
ga
an
n iin
nii d
diib
ba
ag
gii lla
ag
gii m
me
en
njja
ad
dii
2
2 ssu
ub
b g
go
ollo
on
ng
ga
an
n yya
aiittu
u e
en
nzziim
m o
okkssiid
da
asse
e d
da
an
n
dehidrogenase.
dehidrogenase.
•
•
P
Pe
erro
okkssiid
da
asse
e m
me
erru
up
pa
akka
an
n e
en
nzziim
m o
okkssiid
da
asse
e yya
aiittu
u
e
en
nzziim
m yya
an
ng
g d
da
ap
pa
att m
me
en
ng
gkka
atta
alliissiiss rre
ea
akkssii a
an
ntta
arra
a
su
Ekstr
Ekstraksi dan Partial Purifi
aksi dan Partial Purifi kation dari Enzim
kation dari Enzim
peroksidase dari sumber tanaman untuk Pelabelan
peroksidase dari sumber tanaman untuk Pelabelan
antibodi
antibodi
Penelitian ini dilakukan dari November 2016 h
Penelitian ini dilakukan dari November 2016 hingga
ingga
Mei 2017 di
Mei 2017 di Mek
Mekelle untuk
elle untuk mengekstr
mengekstrak dan
ak dan
memurnikan sebagian enzim peroksidase dari
memurnikan sebagian enzim peroksidase dari
Ipomoea batatas
Ipomoea batatas
,,
Solanum tuberosum
Solanum tuberosum
,,
Solanum
Solanum
lycopersicum
lycopersicum
,,
Daucus carota
Daucus carota
dan
dan
Schinus molle
Schinus molle
untuk
untuk
digunakan dalam pelabelan antibodi.
S
Se
eb
ba
ag
giia
an
n
p
pe
em
mu
urrn
niia
an
n
d
diilla
akku
ukka
an
n
d
de
en
ng
ga
an
n
p
prre
essiip
piitta
assii a
am
mo
on
niiu
um
m ssu
ullffa
att b
be
errssa
am
ma
a d
de
en
ng
ga
an
n d
diia
alliissiiss
ttu
ub
biin
ng
g d
da
an
n a
akkttiivviitta
ass e
en
nzziim
m tta
an
na
am
ma
an
n e
ekkssttrra
akkssii a
ad
da
alla
ah
h
dit
ditent
entuk
ukan
an sec
secar
ara
a spek
spektr
trof
ofot
otome
ometri
tri..
S
Sttu
ud
dii lle
eb
biih
h lla
an
njju
utt tte
en
ntta
an
ng
g ttu
um
mb
bu
uh
ha
an
n kka
ayya
a
p
pe
erro
okkssiid
da
asse
e
a
alla
am
mii
d
de
en
ng
ga
an
n
tte
ekkn
niikk
cca
an
ng
gg
giih
h
d
da
an
n
p
pe
errcco
ob
ba
aa
an
n kko
on
njju
ug
ga
assii p
pe
erro
okkssiid
da
asse
e tta
an
na
am
ma
an
n iin
niiu
un
nttu
ukk
a
an
nttiib
bo
od
dii sse
eb
ba
ag
ga
aii lla
ab
be
ell u
un
nttu
ukk E
ELLIIS
SA
A ((E
En
nzzyym
me
e--lliin
nkke
ed
d
iim
mm
mu
un
no
osso
orrb
be
en
ntt
a
assssa
ayy
a
atta
au
u
p
pe
en
ne
etta
ap
pa
an
n
kka
ad
da
arr
im
T
Ta
an
na
am
ma
an
n a
ad
da
alla
ah
h ssu
um
mb
be
err p
pe
erro
okkssiid
da
asse
e yya
an
ng
g kka
ayya
a
d
da
an
n tte
erru
utta
am
ma
a d
diitte
em
mu
ukka
an
nd
dii a
akka
arr d
da
an
n kke
ecca
am
mb
ba
ah
h d
da
arrii
ttu
um
mb
bu
uha
han
n yya
an
ng
g lle
eb
bih
ih ttiin
ngg
ggi.
i.
T
Ta
an
na
am
ma
an
n P
Pe
erro
okkssiid
da
asse
e ((P
PO
OD
D)) ssu
up
pe
errffa
am
miillii tte
errd
diirrii
d
da
arrii g
glliikko
op
prro
otte
eiin
n yya
an
ng
g m
me
en
ng
ga
an
nd
du
un
ng
g h
he
em
me
e yya
an
ng
g
be
berb
rbed
eda
a da
dala
lam
m sstr
tru
ukt
ktur
ur da
dan
n si
siffa
att kka
attal
alit
itik
ikn
nyya.
a.
E
En
nzziim
mn
nyya
a h
ha
ad
diirr sse
ecca
arra
a a
alla
am
mii p
pa
ad
da
a tta
an
na
am
ma
an
n
sse
ep
pe
errttii u
um
mb
bii kke
en
ntta
an
ng
g,, llo
ob
ba
akk kku
ud
da
a,, b
biitt,, kke
ed
de
ella
aii,,tto
om
ma
att,,
p
piissa
an
ng
g,, p
pe
ep
pa
ayya
a,, w
wo
orrtte
ell,, llo
ob
ba
akk,, g
ga
an
nd
du
um
m,, kku
urrm
ma
a,, b
be
ea
attss
da
E
En
nzziim
m yya
an
ng
g p
pa
alliin
ng
g p
po
op
pu
ulle
err iittu
u tte
ella
ah
h d
diig
gu
un
na
akka
an
n
d
da
alla
am
m kkiitt a
assssa
ayy iim
mm
mu
un
no
osso
orrb
be
en
ntt E
En
nzzyym
me
e--lliin
nkke
ed
d
a
allkka
alliin
n
ffo
ossffa
atta
asse
e,,
llo
ob
ba
akk
pe
p
erro
okkssiid
da
asse
e
d
da
an
n
β
β
--g
ga
alla
akktto
ossiid
da
asse
e.. D
Dii a
an
ntta
arra
an
nyya
a p
pe
erro
okkssiid
da
asse
e b
ba
an
nyya
akk
di
digu
guna
nakkan
an un
untu
tukk me
men
nyi
yiap
apkkan
an an
anti
tibo
bodi
di-e
-enz
nzim
im
at
atau
au kkonj
onjug
ugat
at an
anti
ti-an
-anti
tibo
bodi
di-en
-enzi
zim
m
P
Pe
erro
okkssiid
da
asse
e,, e
en
nzziim
m b
biio
otte
ekkn
no
ollo
og
giikk yya
an
ng
g p
pe
en
nttiin
ng
g
a
ad
da
alla
ah
h d
dii m
ma
an
na
a--m
ma
an
na
a e
en
nzziim
m yya
an
ng
g tte
errm
ma
assu
ukk kke
ella
ass
en
enzi
zim
m ok
oksi
sido
dorred
eduk
ukttas
ase
e da
dan
n um
umum
umn
nyya
a me
meng
ngkkat
atal
alis
isis
is
rre
ea
akkssii
a
an
ntta
arra
a
h
hiid
drro
og
ge
en
n
p
pe
erro
okkssiid
da
a
sse
eb
ba
ag
ga
aii
e
elle
ekkttrro
on
na
akksse
ep
ptto
orr d
da
an
n b
be
errb
ba
ag
ga
aii m
ma
acca
am
m ssu
ub
bssttrra
att
me
ELISA
ELISA
•
•
En
E
nzziim
m--LLiin
nkke
ed
d IIm
mm
mu
un
no
osso
orrb
be
en
ntt A
Assssa
ayy ((E
ELLIIS
SA
A))
a
ad
da
alla
ah
h ssu
ua
attu
u tte
ekkn
niikk b
biio
okkiim
miia
a yya
an
ng
g tte
erru
utta
am
ma
a
d
diig
gu
un
na
akka
an
n d
da
alla
am
m b
biid
da
an
ng
g iim
mu
un
no
ollo
og
gii u
un
nttu
ukk
m
me
en
nd
de
ette
ekkssii kke
eh
ha
ad
diirra
an
n a
an
nttiib
bo
od
dii a
atta
au
u a
an
nttiig
ge
en
n
da
dalla
am
m ssu
ua
attu
u sa
sam
mpe
pell
•
•
Te
T
ess E
ELLIIS
SA
A d
diig
gu
un
na
akka
an
n u
un
nttu
ukk m
me
en
nd
de
ette
ekkssii zza
att
Pengumpulan tanaman dan persiapan
Pengumpulan tanaman dan persiapan
ekstrak enzim
ekstrak enzim
Masing masing EktrakMasing masing Ektrak
enzim kasar 100 gr dari
enzim kasar 100 gr dari
setiap tanaman + 400 ml setiap tanaman + 400 ml 6000 RPM selama 15 6000 RPM selama 15 menit menit Supernatan Supernatan disaring dan disaring dan endapannya endapannya dibuang dibuang
ekstrak enzim kasar
ekstrak enzim kasar
dipanaskan pada
dipanaskan pada
65°C selama 3 menit
65°C selama 3 menit
dalam bak air
dalam bak air
didinginkan segera didinginkan segera (tempatkan dalam (tempatkan dalam ember es untuk 30 ember es untuk 30 menit) menit) Mulai dari
Mulai dari inaktivasiinaktivasi
termal, aktivitas enzim,
termal, aktivitas enzim,
proteinisi dan aktivitas
proteinisi dan aktivitas
enzim spesifik dari
enzim spesifik dari
ekstrak akhir ditentukan
ekstrak akhir ditentukan
dan diawetkan pada
dan diawetkan pada
-20°C
Pemurnian par
Pemurnian parsial dan dial
sial dan dialisis
isis
peroksidase
peroksidase
Amonium sulfat
Amonium sulfat Ekstrak enzimEkstrak enzim
kasar
kasar
Supernat dibuang dan
Supernat dibuang dan
sedimentasi dilarutkan
sedimentasi dilarutkan
dalam
dalam jumlah jumlah kecil kecil daridari
fosfat burd ered salin
fosfat burd ered salin
5000 RPM 30 menit
Estimasi protein dari ekstrak enzim
Estimasi protein dari ekstrak enzim
T
Tototalal isisii prprototeieinn dadariri ekekssttrrakak didiukukurur dedengnganan bibiurureett memettododee m
meenngggguunnaakkaann aallbbuummiinn sseerruumm BBoovviinnee sseebbaaggaaii ssttaannddaarr u
unnttuukk kkaalliibbrraassii.. KKoonnsseennttrraassii yyaanngg bbeerrbbeeddaa ddaarrii BBoovviinnee S
Seerruumm AAllbbuummiinn ((BBSSAA)) ((00,, 00,,44,, 00,,88,,11,,22,, 11,,66 ddaann 22 mmgg // mmll)) d
daann eekkssttrraakk ttaannaammaann ddiittuuaannggkkaann kkee ddaallaamm ttaabbuunngg rreeaakkssii d
daann ppeemmbbaaccaaaann mmeerreekkaa ddiiaammbbiill sseetteellaahh ppeennaammbbaahhaann rreaeaggeenn bbiiuurreett.. SSeemmuuaa ttaabbuunngg ddiiiinnkkuubbaassii ppaaddaa ssuuhhuu kkaammaarr sseellaammaa 2200 mmeenniitt ddaann mmeemmbbaaccaa aaddaallaahh ddiiaammbbiill ppaaddaa 554400 n
nmm.. KKoonnsseennttrraassii pprrootteeiinn ddaarrii eekkssttrraakk ddiippeerrkkiirraakkaann ddaarrii p
peemmbbaaccaaaann aabbssoorrbbaannssii mmeerreekkaa ddeennggaann mmeennggggaammbbaarr p
pooiinn ddeennggaann pprrootteeiinnkkoonnsseennttrraassii BBSSAA sseebbaaggaaii nniillaaii xx ''ddaann a
abbssoorrbbaannssii rraattaa--rraattaa mmeerreekkaa sseebbaaggaaii yy ’nilai ’nilai ppaaddaa kkererttaass grafik.
UJI ENZIM PEROKSIDASE
UJI ENZIM PEROKSIDASE
P
Peennggeenncceerraann sseerruumm eekkssttrraakk eennzziimm ddiippeerriikkssaa uunnttuukk p
pererookksisiddasasee uujjii akakttivivititasas.. TTeses ddililakakuukkanan ddenengganan memennggggununakakanan O
Orrtthhoo--PPhheennyylleenneeddiiaammiinnee DDiihhyyddrroocchhlloorriiddee ((OOPPDD)) sseebbaaggaaii S
Suubbssttrraatt ppaaddaa ssuuhhuu kkaammaarr.. OOPPDD,, ddii kkeehhaaddiirraann eennzziimm p
peerrookksisiddaassee,, bbeerreeaakkssii ddeennggaann hhididrrooggeenn ppeerrookkssiiddaa ddaallaamm ssaattuu kkee ssaattuu ssttooiikkiioommeettrrii uunnttuukk mmeenngghhaassiillkkaann 22,, 3 3--d
diiaammiinnoopphheennaazziinnee,, kkuunniinngg.. SSeennyyaawwaa oorraannyyee yyaanngg mmeemmiilliikkii da
dayyaa seserrapap mamaksksimimalal 494922 nananonomemetterer.. F
Foorrmmaassii wwaarrnnaa sseeppeerrttii iittuu bbeerrssaammaa ddeennggaann iinntteennssiittaassnnyyaa ddiigguunnaakkaann uunnttuukk mmeennuunnjjuukkkkaann kkeetteerrsseeddiiaaaann e
ennzziimm ttaarrggeett ddeennggaann kkoonnsseennttrraassiinnyyaa.. PPeerruubbaahhaann ddaallaamm a
abbssoorrbbaannssii ppaaddaa 449922 nnmm kkaarreennaa ookkssiiddaassii OOPPDD ddii hhaaddaappaannnnyyaa h
hiiddrrooggeenn ppeerrookkssiiddaa ddaann eekkssttrraakk eennzziimm ppaaddaa ssuuhhuu kkaammaarr dimo
2H
2H22OO22 Plant Peroxidase 2HPlant Peroxidase 2H22O + OO + O22 OPD + O
OPD + O22 Oxidized OPD (colored)Oxidized OPD (colored)
LLaarruuttaann uujjii ssttaannddaarr mmeennggaanndduunngg 00,,44 mmgg // mmll OOPPDD,, 00,,0011 mmll 3
3%% hhiiddrrooggeenn ppeerrookkssiiddaa,, 00,,0099 mmll aaiirr ssuulliinngg ddaann 00,,11 mmll eekkssttrraakk e
ennzziimm ttoottaall 00,,22 mmll.. KKoonnttrrooll tteess ddii mmaannaa eennzziimm ekekssttrraakk aattaauu ssuubbssttrraatt d
diiggaannttiikkaann oolleehh bbuuffff eerr yyaanngg ddiillaakkuukkaann.. PPeerruubbaahhaann ddaallaamm a
abbssoorrbbaannssii ddiiccaattaatt uunnttuukk sseettiiaapp 3300 ddeettiikk sseellaammaa 55 mmeenniitt sseellaammaa rreeaakkssii.. SSaattuu uunniitt aakkttiivviittaass ppeerrookkssiiddaassee ((uu)) mmeewwaakkiillii jjuummllaahh eennzziimm yyaanngg mmeennggkkaattaalliissiiss ookkssiiddaassii 11 μmol μmol OOPPDD ddii 11 mmeenniitt ddii bbaawwaahh kkoonnddiissii ppeenngguujjiiaann..TToottaall aakkttiivviittaass eennzziimm ddaarrii TTaannaammaann ddiihhiittuunngg me
menunururutt sesebabaggaiai beberirikukut:t: U
Unniitt // mmll == ppeerruubbaahhaann aabbssoorrbbaannssii ppeerr mmeenniitt xx ffaakkttoorr p
peennggeenncceerraann xx 11000000 mmll eennzziimm yyaanngg d
diigguunnaakkaann ddaallaamm ppeenngguujjiiaann.. A
Akkttiivviittaass ppeerrookkssiiddaassee ssppeessiiffiikk aaddaallaahh rraassiioo aakkttiivviittaass eennzziimm ((uu // mmll)) u
unnttuukk kkoonnsseennttrraassii pprrootteeiinn ((mmgg // mmll)) yyaanngg ddiinnyyaattaakkaann ddaallaamm uu // mmgg p
Analisis data
Analisis data
D
Da
atta
a p
pa
ad
da
a n
niilla
aii a
ab
bsso
orrb
ba
an
nssii u
un
nttu
ukk sse
ettiia
ap
p m
me
en
ntta
ah
h d
da
an
n
sse
eb
ba
ag
giia
an
n
d
diim
mu
urrn
niikka
an
n
e
ekkssttrra
akk
e
en
nzziim
m
tta
an
na
am
ma
an
n
d
diissiim
mp
pa
an
n d
da
alla
am
m ssp
prre
ea
ad
dssh
he
ee
ett e
exxcce
ell.. S
Se
ed
de
errh
ha
an
na
a
S
Stta
attiissttiikk d
de
esskkrriip
pttiiff d
diig
gu
un
na
akka
an
n u
un
nttu
ukk m
me
en
ne
en
nttu
ukka
an
n
m
me
ea
an
n d
diiffff d
diiffff h
ha
assiill.. S
Se
em
mu
ua
a tte
ess p
pe
em
mb
ba
acca
aa
an
n
d
diilla
akku
ukka
an
n
m
me
en
ng
gg
gu
un
na
akka
an
n
M
Mu
ullttii
sscca
an
n
ssp
pe
ekkttrro
offo
otto
om
me
ettrrii d
diig
ga
ab
bu
un
ng
gkka
an
n kke
e kko
om
mp
pu
utte
err d
da
an
n
pr
prin
intte
err.. N
Nil
ilai
ai d
dil
ilap
apor
orkkan
an ad
adal
alah
ah rra
atta
a-r
-ra
atta
a se
seti
tid
dak
akn
nyya
a
ttiig
ga
a p
pe
en
ne
en
nttu
ua
an
n iin
nd
de
ep
pe
en
nd
de
en
n.. S
Se
em
mu
ua
a iin
nii d
diilla
akku
ukka
an
n
d
de
en
ng
ga
an
n m
me
en
ng
gg
gu
un
na
akka
an
n p
pa
akke
ett sstta
attiissttiikk u
un
nttu
ukk iillm
mu
u
sso
ossiia
all vve
errssii sso
offtt w
wa
arre
e 2
20
0..
HASIL
HASIL
D
Daarrii lliimmaa ppaabbrriikk yyaanngg ddiigguunnaakkaann ddaallaamm ppeenneelliittiiaann iinnii,, hhaassiill mmaakkssiimmuumm ddaarrii en
enzizimm peperrokoksisidadasese dadalalamm ekeksstrtrakak kkasasarar didipeperrololeheh dadariri Ipomoea batatas Ipomoea batatas yyaanngg 447799 uu** // m
mll didiikikututii ololeehh Solanum lycopersicum, Solanum tuberosum, Daucus carota Solanum lycopersicum, Solanum tuberosum, Daucus carota dandan Schinus Schinus molle
molle ddeennggaann hhaassiill 335555,,4422 uu**// mmll,, 227788,,0055 uu**//mmll,, 119922,,9911 uu**// mmll ddaann 44,,8899 uu**// mmll ma
masisingng-m-masasining.g. SeSetitidadaknknyyaa hahasisill akaktitivivittasas enenzizimm diditetemumukkanan dadariri ekeksstrtrakak kkasasarar ScSchihinunuss molle.
D
Diiaammaattii bbaahhwwaa sseetteellaahh ppeemmuurrnniiaann ppaarrssiiaall,, eennzziimm aakkttiivviittaass So
Solalanunumm tutubeberorosusumm dadann SoSolalanunumm lylycocopepersrsicicumum adadalalahah nnyyaatata memeniningngkkatat d
diibbaannddiinnggkkaann ddeennggaann eekkssttrraakk eennzziimm memennttaahh.. EEkksstrtraakk ttaannaammaann llaaiinn jjuuggaa m
meenniinnggkkaatt ddaallaamm aakkttiivviittaass sseetteellaahh aammoonniiuumm pprreessiippiittaassii ssuullffaatt.. K
Kaanndduunnggaann pprrootteeiinn ddaarrii mmaassiinngg--mmaassiinngg eekkssttrraakk eennzziimm bbeerrkkuurraanngg kkee ttiinnggkkaatt yyaanngg lleebbiihh ttiinnggggii ddaarrii ppeemmuurrnniiaann ppaarrssiiaall oolleehh aammoonniiuumm pr
presesiipipittasasii ssululffaatt yyanangg mmenenununjujukkkkanan babahhwwaa prprototeieinn yyanangg titiddakak peperlrluu asasiinn kkeelluuaarr.. PPeennuurruunnaann kkaaddaarr pprrootteeiinn ddiiaammaattii ddaarrii eekkssttrraakk SScchhiinnuuss mmoollllee..
P
Pe
en
ng
ge
en
ncce
erra
an
n sse
erru
um
m d
da
arrii sse
ettiia
ap
p e
ekkssttrra
akk e
en
nzziim
m d
diilla
akku
ukka
an
n,, d
dii
m
ma
an
na
a kke
en
ntta
an
ng
g p
pe
erro
okkssiid
da
asse
e m
me
en
nu
un
njju
ukkkka
an
n p
pe
erru
ub
ba
ah
ha
an
n w
wa
arrn
na
a
yya
an
ng
g d
da
ap
pa
att d
diid
de
ette
ekkssii d
de
en
ng
ga
an
n u
up
ptto
o m
ma
atta
a tta
an
np
pa
a b
ba
an
nttu
ua
an
n 1
10
0--7
7
p
pe
en
ng
ge
en
ncce
erra
an
n d
da
an
n kke
erra
ap
pa
atta
an
n o
op
pttiikk d
da
arrii 1
1,,0
01
1 a
ab
bsso
orrb
ba
an
nssii.. U
Ub
bii
d
da
an
n tto
om
ma
att p
pe
erro
okkssiid
da
asse
e jju
ug
ga
a m
me
en
ng
gh
ha
assiillkka
an
n 0
0,,9
93
3 d
da
an
n 0
0,,9
97
7
ab
S
Se
ed
diim
me
en
n
d
da
an
n
ssu
up
pe
errn
na
atta
an
n
e
ekkssttrra
akk
en
e
nzziim
m
p
pa
arrssiia
all
yya
an
ng
g
d
diim
mu
urrn
niikka
an
n kke
ed
du
ua
an
nyya
a m
me
en
nu
un
njju
ukkkka
an
n a
akkttiivviitta
ass p
pe
erro
okkssiid
da
asse
e
d
de
en
ng
ga
an
n n
niilla
aii tte
errttiin
ng
gg
gii d
diia
am
ma
attii d
da
arrii sse
ed
diim
me
en
n sse
em
mu
ua
a e
ekkssttrra
akk
ttu
um
mbu
buh
han
an.. N
Na
am
mu
un
n,, it
itu
u su
sup
pe
ern
rna
atta
an
n m
me
en
nun
unjju
ukkkkan
an kka
and
ndu
un
ng
ga
an
n
e
en
nzziim
m tte
erre
en
nd
da
ah
h b
ba
ah
hkka
an
n d
dii b
ba
aw
wa
ah
h m
miin
nyya
akk m
me
en
ntta
ah
h e
ekkssttrra
akk
tumbuhan.
D
Diiuukkuurr sseeccaarraa ssppeekkttrrooffoottoommeettrrii,, ddeennggaann ppeenniinnggkkaattaann rreeaakkssii p
peerriiooddee,, ttrreenn kkoonnssttaann ppeenniinnggkkaattaann nniillaaii aabbssoorrbbaannssii ddaallaamm PPOODD d
dii sseemmuuaa ssuummbbeerr ddiiaammaattii.. UUnnttuukk mmeemmuurrnniikkaann eennzziimm yyaanngg d
diiiinnggiinnkkaann,, eekkssttrraakk iittuu mmeennggaallaammii ssaattuurraassii 8800%% ddeennggaann (NH
(NH44)2SO)2SO44.. IIttuu aaddaallaahh yyaanngg ppaalliinngg uummuumm ddiigguunnaakkaann rreeaaggeenn u
unnttuukk mmeennggaarraammkkaann pprrootteeiinn kkaarreennaa kkeellaarruuttaannnnyyaa yyaanngg ttiinnggggii m
meemmuunnggkkiinnkkaann ppeennccaappaaiiaann ssoolluussii ddeennggaann kkeekkuuaattaann iioonniikk yyaanngg ttiinnggggii [[2266]].. PPeenniinnggkkaattaann bbeerraarrttii ddaallaamm ppeennyyeerraappaann mmiinnyyaakk m
meennttaahh kkeennttaanngg,, uubbii jjaallaarr,, ttoommaatt,, wwoorrtteell ddaann mmeerriiccaa PPeerruu a
addaallaahh 11,,1111,, 00,,7744,, 11,,0011,, 00,,11,, ddaann 00,,2255,, mmaassiinngg--mmaassiinngg sseetteellaahh llaannggkkaahh ppeemmuurrnniiaann ppaarrssiiaall ppaarr.. DDeemmiikkiiaann ppuullaa aakkttiivviittaass PPOODD p
paaddaa bbeerrbbaaggaaii ppeennggeenncceerraann ddaann ppaaddaa sseellaanngg wwaakkttuu yyaanngg b
beerrbbeeddaa bbeerrvvaarriiaassii sseeccaarraa ssiiggnniiffiikkaann,, yyaanngg mmeennyyeettuujjuuii bbaahhwwaa sseemmuuaa ssuummbbeerr ttaannaammaann bbeerrbbeeddaa ssaattuu ssaammaa llaaiinn sseeccaarraa ssiiggnniiffiikkaann.. IInnii aaddaallaahh ppeerrbbeeddaaaann yyaanngg lluuaarr bbiiaassaa aannttaarraa ddeennssiittaass o
oppttiikk nniillaaii--nniillaaii yyaanngg ddiikkaaiittkkaann ddeennggaann vvaarriiaassii ddaallaamm aakkttiivviittaass P
POODD ppaaddaa ttaannaammaann ddii hhuubbuunnggaann ddeennggaann llookkaassii aannaattoommii,, uussiiaa jaringan
jaringan // tanaman,tanaman, fisiologisfisiologis aktivitasaktivitas dandan kkeadaaneadaan menjadimenjadi se
D
Daallaamm ppeenneelliittiiaann iinnii,, sseemmuuaa eekkssttrraakk ttaannaammaann yyaanngg ddiiuujjii m
meennuunnjjuukkkkaann hhaarraappaann kkeetteerrsseeddiiaaaann akkttiivviittaa ass eennzziimm p
peerrookkssiiddaassee ddii ddaallaammnnyyaa.. HHaall tteerrsseebbuutt mmeennyyiirraattkkaann ttaannaammaann u
ujjii bbeerrppootteennssii mmeennjjaaddii ssuummbberer kkoommeerrssiiaall eennzziimm ppeerrookkssiiddaasese ddii m
maassaa ddeeppaann.. PPooiinn ppeennttiinngg llaaiinnnnyyaa aaddaallaahh ppeerrbbeeddaaaann uuttaammaa d
daallaamm aakkttiivviittaass eennzziimm ddaarrii sseeddiimmeenn ddaann ssuuppeerrnnaattaann ddaarrii e
ekkssttrraakk.. HHaassiill ddaarrii ppeenneelliittiiaann iinnii sseessuuaaii ddeennggaann [[44]] aaddaallaahh iinnvveessttiiggaassii mmeerreekkaa mmeenngghhaassiillkkaann aakkttiivviittaass eennzziimm uuttaammaa yyaanngg d
diippeerroolleehh ddaarrii sseeddiimmeenn ddii bbeellaakkaanngg sseennttrriiffuuggaassii.. PPeerrookkssiiddaassee G
Grraattiiss mmeennggeennddaapp ssaaaatt ddiittaammbbaahhkkaann ggaarraamm yyaanngg bbeerrssaaiinngg u
unnttuukk mmoolleekkuull aaiirr dadallaamm ppeemmbbeennttuukkaann iikkaattaann.. IInnii m
meemmbbuukkttiikkaann bbaahhwwaa ppeennggeennddaappaann oolleehh ggaarraamm uunnttuukk p
pememuurrnniiaann pprrootteeiinn aaddaallaahh bbaaiikk uunnttuukk mmeennggiissololasasii mmeerreekkaa ddaarrii la
laruruttanan enencecerr dadarrii beberbrbagagaiai ccamampupurranan.. JuJumlmlahah mimininimumumm enenzzimim yyaanngg ddiitteemmuukkaann ddaallaamm ssuuppeerrnnaattaann aaddaallaahh mmuunnggkkiinn kkaarreennaa se
P
Pe
en
ne
elliittiia
an
n
sse
eb
be
ellu
um
mn
nyya
a
me
m
en
nu
un
njju
ukkkka
an
n
p
pe
en
ng
ga
arru
uh
h
p
pe
ella
arru
utt d
da
alla
am
m e
ekkssttrra
akkssii e
en
nzziim
m d
da
arrii b
ba
ah
ha
an
n tta
an
na
am
ma
an
n..
M
Me
ella
ap
po
orrkka
an
n iittu
u,, p
pe
ella
arru
utt o
orrg
ga
an
niikk lle
eb
biih
h b
ba
aiikk d
da
alla
am
m
m
me
en
ng
ge
ekkssttrra
akkssii
p
pe
erro
okkssiid
da
asse
e
d
da
arrii
a
alla
am
m
ssu
um
mb
be
err
tta
an
na
am
ma
an
n.. H
Ha
all yya
an
ng
g m
me
en
na
arriikk d
da
alla
am
m p
pe
en
ne
elliittiia
an
n iin
nii
a
ad
da
alla
ah
h e
effe
ekk d
da
arrii kko
on
nsse
en
nttrra
assii ssu
ub
bssttrra
att ((h
hiid
drro
og
ge
en
n
p
pe
erro
okkssiid
da
a
d
da
an
n
O
OP
PD
D))
a
akkttiivviitta
ass
p
pe
erro
okkssiid
da
asse
e
m
me
en
nu
unj
njuk
ukkka
an
n b
ba
ahw
hwa
a a
akkti
tivviitta
ass pe
perro
okksi
sida
dasse
e m
me
en
niing
ngkka
att
d
de
en
ng
ga
an
n p
pe
en
niin
ng
gkka
atta
an
n kko
on
nsse
en
nttrra
assii ssu
ub
bssttrra
att yya
an
ng
g sse
essu
ua
aii
d
de
en
ng
ga
an
n ttiittiikk ssa
attu
urra
assii m
ma
akkssiim
mu
um
m sse
ekkiitta
arr 3
3%
% u
un
nttu
ukk
h
hiid
drro
og
ge
en
n p
pe
erro
okkssiid
da
a d
da
an
n 0
0,,4
4 m
mg
g // m
mll u
un
nttu
ukk O
OP
PD
D,,
m
pH dari pelarut, suhu, jenis dan konsentrasi substrat juga
pH dari pelarut, suhu, jenis dan konsentrasi substrat juga
dapat memiliki pengaruh pada aktivitas peroksidase
dapat memiliki pengaruh pada aktivitas peroksidase
tanaman [29]. Dilaporkan bahwa pemurnian peroksidase
tanaman [29]. Dilaporkan bahwa pemurnian peroksidase
dari Gongronema latifolium menggunakan Guiacol
dari Gongronema latifolium menggunakan Guiacol
sebagai substrat menghasilkan pemurnian yang lebih
sebagai substrat menghasilkan pemurnian yang lebih
tinggi lipat bila
tinggi lipat bila dibandingk
dibandingkan dengan OPD pada
an dengan OPD pada suhu
suhu
optimum 30
optimum 30
ooC dan pH
C dan pH 7 masing-masing. Pada penelitian
7 masing-masing. Pada penelitian
ini 80% saturasi (NH4)
ini 80% saturasi (NH4)
22SO
SO
44adalah menemukan yang
adalah menemukan yang
terbaik di mana semua ekstrak menunjukkan aktivitas
terbaik di mana semua ekstrak menunjukkan aktivitas
enzimatik yang baik di belakang pemurnian [21].
enzimatik yang baik di belakang pemurnian [21].
Standarisasi nilai saturasi (NH4)
Standarisasi nilai saturasi (NH4)
22SO
SO
44sebagai 50-85%,
sebagai 50-85%,
sementara [30] memurnikan peroksidase dari biji yang
sementara [30] memurnikan peroksidase dari biji yang
berbeda seperti lobak dengan presipitasi 35-90%. Temuan
berbeda seperti lobak dengan presipitasi 35-90%. Temuan
dari [7] adalah 1,21 kali lipat pemurnian untuk kedelai
dari [7] adalah 1,21 kali lipat pemurnian untuk kedelai
peroksidase menggunakan 85% yang sama nilai saturasi.
peroksidase menggunakan 85% yang sama nilai saturasi.
Perbedaannya mungkin karena kadar garam yang
Perbedaannya mungkin karena kadar garam yang
digunakan untuk pemurnian atau konsentrasi garam dan
digunakan untuk pemurnian atau konsentrasi garam dan
durasi kejenuhan untuk pemurnian.
Secara umum konsentrasi OPD (0,4 mg / ml) digunakan Secara umum konsentrasi OPD (0,4 mg / ml) digunakan dalam hal ini
dalam hal ini studi adalah sama dengan nilai yangstudi adalah sama dengan nilai yang digunakan dalam tes
digunakan dalam tes enzim lainnya. Peroksidenzim lainnya. Peroksidase aktivitasase aktivitas yang ditunjukkan pada konsentrasi 0,25 g / ml ekstrak
yang ditunjukkan pada konsentrasi 0,25 g / ml ekstrak tanaman adalah ditemukan sebanding dengan studi tanaman adalah ditemukan sebanding dengan studi canggih. PBS juga digunakan di tempat air suling
canggih. PBS juga digunakan di tempat air suling dandan tidak menunjukkan perbedaan pada
tidak menunjukkan perbedaan pada peroksidaseperoksidase aktivitas. Campur
aktivitas. Campuran air suling an air suling dan ekstrdan ekstrak enzim adalahak enzim adalah digunakan sebagai kontrol negatif dengan tidak adanya digunakan sebagai kontrol negatif dengan tidak adanya substr
substrat dan tidak at dan tidak ada aktivitas peroksidase dan hasilada aktivitas peroksidase dan hasil yang diperoleh dari penelitian ini adalah
yang diperoleh dari penelitian ini adalah murni terkaitmurni terkait dengan kandung
dengan kandungan enzim an enzim peroksidase dari setiapperoksidase dari setiap tanaman.
Perubahan dalam pembacaan panjang gelombang Perubahan dalam pembacaan panjang gelombang spektrof
spektrofotometer adalah diuji otometer adalah diuji pada semua pada semua ekstrekstrak ak enzimenzim tanaman untuk mendapatkan hasil maksimum, adalah tanaman untuk mendapatkan hasil maksimum, adalah 492 nm menghasilkan pembacaan tertinggi. Th tidak 492 nm menghasilkan pembacaan tertinggi. Th tidak sesuai dengan Temuan [31] yang mendapat hasil
sesuai dengan Temuan [31] yang mendapat hasil
maksimum dengan membaca pada 460 nm dan [4] pada maksimum dengan membaca pada 460 nm dan [4] pada panjang gelombang 470 nm.
panjang gelombang 470 nm. Ini menunjukkan bahwaIni menunjukkan bahwa lingkung
lingkungan kondisi mungkin an kondisi mungkin memiliki memiliki pengaruh pada sifatpengaruh pada sifat dan konsentrasi tanaman peroksidase. Ekstrak dari semua dan konsentrasi tanaman peroksidase. Ekstrak dari semua tanaman pada konsentrasi 0,25 g / ml menunjukkan
tanaman pada konsentrasi 0,25 g / ml menunjukkan aktivitas perok
aktivitas peroksidase sebelum sidase sebelum dan sesudah langkahdan sesudah langkah pemurnian parsial.
Aktivitas enzim maksimum diperoleh dari Ipomoea batatas setelah Aktivitas enzim maksimum diperoleh dari Ipomoea batatas setelah evaluasi ekstrak
evaluasi ekstrak kasar 479 u kasar 479 u / mg protein / mg protein yang diikuti yang diikuti oleh Solanumoleh Solanum lycopersicum dengan 355,42 u / mg. Hasilnya ada di perjanjian dengan lycopersicum dengan 355,42 u / mg. Hasilnya ada di perjanjian dengan POD ekstraksi dari limbah jeruk yang mengakibatkan 734,1 u / mg
POD ekstraksi dari limbah jeruk yang mengakibatkan 734,1 u / mg protein [32], tetapi berbeda dari hasil [33] (14 u / mg). Ekstraksi protein [32], tetapi berbeda dari hasil [33] (14 u / mg). Ekstraksi tanaman pada 0,1 mg
tanaman pada 0,1 mg / ml / ml memang menunjukkan aktivitas enzimmemang menunjukkan aktivitas enzim minimum dengan kerapatan optik minimum. Pemurnian sebagian minimum dengan kerapatan optik minimum. Pemurnian sebagian parsial dengan 80% saturasi amonium sulfat, Solanum tuberosum parsial dengan 80% saturasi amonium sulfat, Solanum tuberosum menunjukkan tinggi aktivitas enzim peroksidase dengan 2567,81 u / menunjukkan tinggi aktivitas enzim peroksidase dengan 2567,81 u / mg protein yang menunjukkan bahwa langkah dialisis menghilangkan mg protein yang menunjukkan bahwa langkah dialisis menghilangkan banyak protein dan yang tidak diinginkan memperbaiki jalan menuju banyak protein dan yang tidak diinginkan memperbaiki jalan menuju produk enzim yang jernih. Hasilnya menunjukkan peroksidase yang produk enzim yang jernih. Hasilnya menunjukkan peroksidase yang baru diekstrak ini sama aktifnya dengan yang paling umum
baru diekstrak ini sama aktifnya dengan yang paling umum
menggunakan enzim dalam konjugasi antibodi, Horseradish Peroxidase menggunakan enzim dalam konjugasi antibodi, Horseradish Peroxidase Enzim (HRP), menuju substrat yang paling umum,
Enzim (HRP), menuju substrat yang paling umum, Orthophenylenediamine Dihidroklorida.
Dalam penelitian ini Solanum
Dalam penelitian ini Solanum tuberosum telahtuberosum telah
menunjukkan enzim peroksidase yang menjanjikan menunjukkan enzim peroksidase yang menjanjikan aktivitas setelah beberapa dimurnik
aktivitas setelah beberapa dimurnikan oleh an oleh amoniumamonium sulfat dan ini bisa
sulfat dan ini bisa menjadi sumber menjadi sumber kakaya peroksidaseya peroksidase untuk immunoassays enzim. Ipomoea
untuk immunoassays enzim. Ipomoea batabatatas dantas dan solanum lycopersicum juga menunjukkan moderat solanum lycopersicum juga menunjukkan moderat
aktivitas enzim peroksidase. Peroksidase kentang dan ubi aktivitas enzim peroksidase. Peroksidase kentang dan ubi jalar bisa disarank
jalar bisa disarankan sebagai an sebagai kandidakandidat penggant penggantiti peroksidase lobak, terut
peroksidase lobak, terutama di Ethiopia di ama di Ethiopia di mana tanamanmana tanaman ini bisa diperoleh murah dan cukup segar. Namun, Daucus ini bisa diperoleh murah dan cukup segar. Namun, Daucus carota dan Schinus molle hanya menunjukkan
carota dan Schinus molle hanya menunjukkan ketersediaan enzim sedikit.
