BAB III
METODE PENELITIAN
3.1 Ruang Lingkup Penelitian 3.1.1 Ruang Lingkup Ilmu
Disiplin ilmu yang terkait dengan penelitian ini adalah Mikrobiologi dan Ilmu Kesehatan Anak.
3.1.2. Ruang Lingkup Lokasi 3.1.2.1. Pengambilan Data
Pengmbilan data berupa sampel swab nasofaring dan kuesioner di Balai Kesehatan Paru Masyarakat (BKPM) Semarang.
3.1.2.2. Identifikasi Mikrobiologi
Identifikasi Mikrobiologi dilakukan di laboratorium Mikrobiologi Fakultas Kedokteran Universitas Diponegoro
3.1.3. Ruang Lingkup Waktu
Penelitian dilakukan sepanjang bulan Maret hingga April 2016.
3.2 Rancangan Penelitian
3.3 Variabel Penelitian Variabel bebas:
1. Riwayat ISPA berulang dalam 3 bulan terakhir 2. Riwayat pemberian ASI
3. Paparan asap rokok 4. Kepadatan hunian
Variabel tergantung:
Kolonisasi S. pneumoniae pada nasofaring balita dengan ISPA
3.4 Definisi Operasional Variabel Jenis
Variabel
Nama Variabel
Definisi Operasional Skala data Nilai
Bebas Riwayat ISPA berulang
Riwayat kejadian ISPA dengan enam kali onset dalam setahun atau dua kali onset dalam tiga bulan.
Nominal 0= tidak ada ISPA berulang 1= ada ISPA berulang
Bebas Riwayat ASI Riwayat ASI eksklusif, yaitu pemberian ASI dalam enam bulan pertama kehidupan.
Nominal 0= ASI eksklusif 1= tidak ASI eksklusif Bebas Paparan asap
rokok
Terdapat perokok yang tinggal serumah dengan balita.
Nominal 0= tidak terdapat 1= terdapat Bebas Kepadatan
hunian
Kriteria padat adalah luas ruang tidur
maksimal 8 m2 dengan dihuni dua orang dewasa dan satu anak.
Tergantung Kolonisasi S. pneumoniae
Pemeriksaan spesimen swab nasofaring didapatkan kuman alfa-hemolitik dengan tes optokin (+)
Nominal 0=negatif 1=positif
3.5 Populasi dan Sampel 3.5.1. Populasi
Populasi penelitian ini meliputi penduduk kota Semarang yang berusia 6 bulan hingga 5 tahun dan sedang mengalami ISPA. Populasi terjangkau adalah bagian dari populasi penelitian yang direkrut dari BKPM Semarang.
3.5.2. Sampel
Sampel adalah bagian dari populasi terjangkau yang memenuhi kriteria sebagai berikut:
a. Kriteria inklusi:
- Anak-anak yang mengalami ISPA non-pneumonia dengan
gejala rhinofaringitis, batuk, dan demam.
- Anak-anak yang berusia 6 bulan hingga 5 tahun. - Tidak mempunyai lesi pada mukosa hidung.
- Tidak sedang mendapat antibiotik dalam 2 hari terakhir.
b. Kriteria eksklusi:
- Gejala yang timbul diakibatkan oleh alergi. - Subyek tidak bersedia menjadi subyek penelitian. - Subyek tidak kooperatif.
3.5.3 Besar Sampel
Besar sampel ditentukan dengan rumus sampel untuk uji hipotesis satu populasi, sebagai berikut
� = √ � × � +− � √2 × 2
� = , √ , × , + ,, − , 2 √ , × ,
2
� = , ≈
Keterangan:
N = besar sampel yang diperlukan. Zα = derivat baku alfa = 1,645
Zβ = derivat baku beta = 0,842
Po = proporsi kolonisasi S. pneumoniae pada nasofaring anak = 0,43.9 Pa = clinical judgement (0,43 + 0,15 = 0,58)
Qo = 1-Po Qa = 1-Pa
Jadi jumlah sampel yang dibutuhkan adalah 62 anak.
Identifikasi faktor risiko menggunakan kuesioner. 3.6.2. Cara kerja pengambilan swab nasofaring
- Cuci tangan dengan air mengalir atau alkohol 70% - Siapkan swab dakron atau nilon steril.
- Posisikan kepala pasien pada posisi tengadah kurang lebih dengan sudut
70o, fiksasi dengan satu tangan.
- Masukkan alat swab ke dalam hidung dengan arah mendatar dengan
kedalaman sama dengan jarak antara nostril ke meatus akustikus eksterna. - Putar swab beberapa kali dan keluarkan swab.
- Letakkan sampel pada skim milk-tryptone-glucose-glycerol (STGG),
kemudian diberi kode nama dan tanggal pengambilan spesimen. 3.6.3. Isolasi Primer
Isolasi primer dilakukan dengan streak-plate technique, sebagai berikut - Membuat 3 daerah dengan spidol di bawah cawan petri.
- Lakukan goresan swab pada permukaan media agar darah + gentamycin
5%
- Sterilkan ose, kemudian goreskan pada media di daerah 1 secara berulang. - Sterilkan ose, kemudian goreskan pada media di daerah 2 dengan jarak
goresan lebih renggang secara berulang.
- Sterilkan ose, kemudian goreskan pada media di daerah 3 degan jarak
goresan lebih renggang secara berulang.
- Sterilkan ose, tutup cawan petri dan diberi label. Kemudian diinkubasi
3.6.4. Inkubasi
- Inkubator diatur pada suhu 37o dengan CO2.
- Media diletakkan pada rak pertama, amati 1x24 jam.
- Jika kolonisasi belum tampak, media dipindah ke rak kedua, amati 1x24
jam kemudian. 3.6.5. Identifikasi Koloni
- Pengamatan dilakukan setiap 24 jam dan diamati ukuran, warna, bentuk,
tepi, peninggian, dan adanya hemolisis. - Lakukan tes optokin
o Letakkan disk P pada area streak isolasi sekunder, lalu diinkubasi
24 jam.
o Ukur diameter zona inhibisi.
3.7 Pengumpulan Data 3.7.1. Data yang Dikumpulkan
Data yang dikumpulkan dalam penelitian ini adalah data primer berupa wawancara dan hasil pemeriksaan di laboratorium mikrobiologi.
3.7.2. Cara Pengambilan Data
3.7.3. Bahan dan Alat
3.7.3.1. Pengambilan Sampel dan Identifikasi Faktor Risiko - Swab kit
- Alat tulis - Kuesioner
3.7.3.2. Isolasi Primer
- Media agar darah + gentamycin 5%
- Ose
- Bunsen - Alat tulis
3.7.3.3. Inkubasi - Inkubator
3.7.3.4. Identifikasi Koloni
- Disk P yang mengandung 5µg etahylhydrocupreine hydrochloride
3.8 Alur Penelitian
3.9 Pengolahan dan Analisis Data
Pengolahan data meliputi cleaning, coding, dan tabulasi data. Kemudian memasukkan data ke dalam komputer menggunakan program penghitungan SPSS for Windows. Pengujian hipotesis menggunakan analisis bivariat chi square, dilanjutkan dengan analisis multivariat regresi logistik.
3.10 Etika Penelitian
Penelitian ini dilaksanakan setelah mendapatkan Ethical Clearance dari Komisi Etik Penelitian Kesehatan (KEPK) Fakultas Kedokteran Universitas Diponegoro / RS. Dr. Karyadi Semarang.
Subyek diberi penjelasan tentang maksud, tujuan, manfaat, protokol penelitian dan efek samping yang mungkin terjadi. Subyek berhak menolak untuk diikutsertakan tanpa ada konsekuensi apapun dan tetap mendapat pelayanan
Swab
Kultur
Identifikasi
Kuesioner
kesehatan yang sesuai dengan prosedur untuk penyakit yang dideritanya. Subyek berhak untuk keluar dari penelitian sesuai dengan keinginannya.
3.11 Jadwal Penelitian
Jadwal Februari Maret April Mei Juni
Pengurusan proposal dan Ethical Clearance Pengambilan sampel Pengolahan data dan penyusunan hasil penelitian
