LAPORAN PRAKTIKUM FISIOLOGI II
OLEH :
KELOMPOK 3
1. AININ ARSYILINI O111 10 106 6. MUH. ASRAF AS.
O111 10
2. DARMA O111 10 135 7. FACHIRA ULFA
M. O111 10
3. HASTIRA MAYHARAH O111 10 280 8. MUHTADIN W.
O111 10
4. DENY FAJAR BAYU O111 10 283
5. NANA JUNITA O111 10 105
PROGRAM STUDI KEDOKTERAN HEWAN FAKULTAS KEDOKTERAN
UNIVERSITAS HASANUDDIN MAKASSAR
A. Tujuan
1. Mempelajari, mengamati, mengetahui dan memahami cara membuat sediaan apus darah dan mengamati bentuk-bentuk sel darah merah dan sel-sel darah putih yang terdapat dalam preparat ulas darah perifer.
2. Mahasiswa dapat mempelajari dan memahami prinsip kerja bilik hitung improved neubauer yang digunakan dalam perhitungan jumlah eritrosit / leukosit.
3. Untuk mengetahui kadar hemoglobin dalam darah dengan metode Sahli
B. Pendahuluan
1. Latar belakang
Pada dasarnya darah merupakan cairan yang berada dalam tubuh manusia maupunhewan yang berfungsi sebagai alat transportasi zat-zat dalam tubuh, seperti O2, CO2,hormon, dan lain sebagainya. Selain itu darah juga meupakan suatu faktor kehidupan.Tanpa darah didalam tubuh mahluk hidup (manusia maupun hewan), maka mahluk hidup tersebut tidak akan mendapatkan energi yang berasal dari Oksigen.
Hemoglobin merupakan suatu zat organik yang terdapat dalam sel darah merahyang berfungsi untuk mengikat oksigen dalam darah. Hemoglobin merupakan zat yangmenentukan warna pada darah yang berhubungan dengan nilai hematokrit, sel darah merah,dan sel darah putih. Darah yang merupakan cairan dengan volume yang berbeda-beda tergantung pada jenis kelamin, ukuran tubuh, dan umur yang setiap saat beredar ke seluruhbagian tubuh.
2. Tinjauan pustaka A. Darah
Darah merupakan cairan tubuh yang terdapat dalam jantung dan pembuluh darah. Darah terdiri dari dua bagian, yaitu sel-sel darah (butir-butir darah) dancairan darah (plasma darah). Sel-sel darah merupakan bagian yang mempunyai bentuk. Ada 3 macam sel darah yaitu, sel darah merah (eritrosit), sel darah putih(leukosit), dan keping darah (trombosit). (Wulangi, 1993)
Fungsi utama dari darah adalah mengangkut oksigen yang diperlukan oleh sel-sel diseluruh tubuh. Darah juga menyuplai jaringan tubuh dengan nutrisi, mengangkut zat-zat sisametabolisme, dan mengandung berbagai bahan penyusun sistem imun yang bertujuan mempertahankan tubuh dari berbagai penyakit.Darah manusia berwarna merah, antara merah terang apabila kaya oksigen sampai merah tua apabila kekurangan oksigen. Warna merah pada darah disebabkan oleh hemoglobin, protein pernapasan (respiratory protein), yang terdapat dalam eritrosit dan mengandung besi dalam bentuk heme, yang merupakan tempat terikatnya molekul-molekul oksigen. Darah juga mengangkut bahan bahan sisa metabolisme, obat-obatan dan bahan kimia asing ke hati untuk diuraikan dan ke ginjal untuk dibuang sebagai air seni. Untuk dapat melihat perbedaan dari sel darah dengan plasma dapat dilakukan dengan carasentrifugasi tabung hematokrit berisi darah yang telah diberi bahan anti pembekuan. Eritrosit,Leukosit, Plasma Dapat dilihat untuk bagian yang berwarna merah merupakan eritrosit, selapis tipis warna putih merupakan kumpulan sel-sel darah putih ( leukosit) can cairan kuning merupakan plasma.(widayati,2010)
a. Eritrosit
Pada umumnya sel darah merah yang tidak berinti mempunyai ukuran lebih kecil dibandingkan dengan sel darah merah yang berinti. Sel darah merahyang ukurannya paling besar terdapat pada hewan amfibia. (Eckert, 1978)
Dalam setiap 1 mm3 darah terdapat sekitar 5 juta eritrosit atau sekitar 99%, oleh karena itu setiap pada sediaan darah yang paling banyak menonjol adalah sel-sel tersebut. Dalam keadaan normal,eritrosit manusia berbentuk bikonkaf dengan diameter sekitar 7 -8 mikrometer, tebal ± 2.6 mikrometer dan tebaltengah ± 0.8 mikrometer dan tanpa memiliki inti.
normal. Jika dalam sediaan apus darah terdapat berbagai bentuk yangabnormal dinamakan poikilosit, sedangkan sel-selnya cukup banyak maka keadaan tersebut dinamakan poikilositosis. Eritrosit yang berukuran kurang dari normalnya dinamakan mikrositdan yang berukuran lebih dari normalnya dinamakan makrosit.Warna eritrosit tidak merata seluruh bagian, melainkan bagian tengah yang lebih pucat, karena bagian tengah lebih tipis daripada bagian pinggirnya.
Pada keadaan normal bagian tengah tidak melebihi 1/3 dari diameternya sehingga selnya dinamakan eritrosit normokhromatik.Apabila bagian tengah yang pucat melebar disertai bagian pinggir yang kurang terwarna maka eritrosittersebut dinamakan eritrosit hipokromatik. Sebaliknya apabila bagian tengah yang memucat menyempit selnya dimanakan eritrosit hiperkhromatik. (Widayati, 2010)
b. Leukosit
Leukosit adalah sel darah yang mengendung inti, disebut juga sel darah putih. Leukositmempunyai peranan dalam pertahanan seluler dan humoral organisme terhadap zat-zat asingan. Sebenarnya leukosit merupakan kelompok sel dari beberapa jenis.
Untuk klasifikasinya didasarkan pada morfologi inti adanya struktur khusus dalam sitoplasmanya.Dilihat dalam mikroskop cahaya maka sel darah putih dapat dibedakan yaitu :
1. Granulosit
Neutrofil, Basofil, dan Asidofil (atau eosinofil)yang dapat dibedakan dengan afinitas granula terhadap zat warna netral, basa dan asam. 2. Agranulosit
Yang tidak mempunyai granula spesifik, sitoplasmanya homogen dengan inti bentuk bulat atau bentuk ginjal. Terdapat dua jenis leukosit agranuler yaitu : limfosit (sel kecil, sitoplasma sedikit) dan monosit (sel agak besar mengandung sitoplasma lebih banyak).
c. Neutrofil
karena padatnya inti, maka sukar untuk untuk memastikan adanya nukleolus.Dalam netrofil terdapat adanya bangunan pemukul genderang pada inti netrofil yang tidal lainsesuai dengan Barr Bodies yang terdapat pada inti sel wanita. Barr Bodies dalam inti netrofil tidak seperti sel biasa melainkan menyendiri sebagai benjolan kecil. Hal ini dapat digunakanuntuk menentukan apakah jenis kelamin seseorang wanita.Dalam sitoplasma terdapat 2 jenis butir-butir ata granul yang berbeda dalam penampilannyadengan ukuran antara (0.3-0.8 mikrometer).Granul pada neutrofil tersebut yaitu : Azurofilik yang mengandung enzym lisozom dan peroksidase, dimana sudah mulai tampak sejak masih dalam sumsum tulang yang makin dewasa makin berkurang jumlahnya.
Ukurannya lebih besar dari pada jenis butir yang kedua dan kebanyakan telah kehilangan kemampuanmengikat warna. Dengan pewarnaan Romanovsky butiran ini tampak ungu kemerah-merahan. Granul spesifik lebih kecil mengandung fosfatase alkali dan zat-zat bakterisidal(protein Kationik) yang dinamakan fagositin. Dinamakan butir spesifik karena hanya terdapat
dapat membunuh bakteri dan membantu membersihkandebris pada jaringan nekrotik.
d. Eosinofil
Jumlah sel eosinofil sebesar 1-3% dari seluruh lekosit atau 150-450 buah per mm3 darah.Ukurannya berdiameter 10-15 mikrometer, sedikit lebih besar dari netrofil. Intinya biasanya hanya terdiriatas 2 lobi yang dipisahkan oleh bahan inti yang sebagai benang. Butir-butir khromatinnya tidak begitu padat kalau dibandingkan dengan inti netrofil.Eosinofil berkaitan erat dengan peristiwa alergi, karena sel-sel ini ditemukan dalam jaringanyaang mengalami reaksi alergi. Eosinofil mempunyai kemampuan melakukan fagositosis, lebih lambat tapi lebih selektif dibanding neutrofil. Eosinofil memfagositosis komplek antigen danantibodi, ini merupakan fungsi eosinofil untuk melakukan fagositosis selektif terhadap komplek antigen dan antibodi. Eosinofil mengandung profibrinolisin, diduga berperan mempertahankandarah dari pembekuan, khususnya bila keadaan cairnya diubah oleh proses-proses Patologi.
e. Limfosit
tulang belum dapat berfungsi secara penuh oleh karena hars mengalami differensiasilebih lanjut.
Apabila sudah masak sehingga mampu berperan dalam respon immunologik, makasel-sel tersebut dinamakan sebagai sel imunokompeten. Sel limfosit imunokompeten dibedakanmenjadi limfosit B dan limfosit T, walaupun dalam sediaan apus kita tidak dapatmembedakannya. Limfosit T sebelumnya mengalami diferensiasi di dalam kelenjar thymus,sedangkan limfosit B dalam jaringan yang dinamakan Bursa ekivalen yang diduga keras jaringansumsum tulang sendiri. Kedua jenis limfosit ini berbeda dalam fngsi immunologiknya.Sel-sel limfosit T bertanggung jawab terhadap reaksi immune immunologiknya.Sel-seluler dan mempunyai reseptor permukaan yang spesifik untuk mengenal antigen asing. Sel limfosit B bertugas untuk memproduksi antibody humoral antibody response yang beredar dalam peredaran darah danmengikat secara khusus dengan antigen asing yang menyebabkan antigen asing tersalut antibody,kompleks ini mempertinggi fagositosis, lisis sel dan sel pembunuh (killer sel atau sel K) dariorganisme yang menyerang. Sel T dan sel B secara marfologis hanya dapat dibedakan ketikadiaktifkan oleh antigen.
f. Monosit
Selain berfungsifagositosis makrofag dapat berperan menyampaikan antigen kepada limfosit untuk bekerjasamadalam sistem imun.
B. Trombosit (Keping Darah)
Trombosit atau disebut juga keping darah merupakan sel yang berbentuk agak bulat, tidak mengandung inti, tidak berwarna, berat jenisnyarendah dan berukuran kecil dengan diameter antara 1 sampai 4 mikron. Volumesetiap trombosit antara 7 sampai 8 mikron3 dan jumlahnya bervariasai antara150000 sampai 400000 per mm, tetapi jumlahnya rata-ratanya adalah 250000 per mm3. dinding trombosit bersifat sangat rapuh dan cenderung untuk melekat pada permukaan kasar seperti pada pembuluh darah yang robek. Setelah banyak yangmelekat pada permukaan kasar, trombosit kemudian mengalami aglutinasi.(Wulangi, 1993)
B. Pemeriksaan Darah Rutin
Pemeriksaan darah rutin bertujuan untuk menghitung jumlah sel-sel dalam darah. Pemeriksaan darah rutin meliputi 6 jenis pemeriksaan, yaitu:
1. Hemoglobin / Haemoglobin (Hb) 2. Hematokrit (Ht)
3. Leukosit: hitung leukosit (leukocyte count) dan hitung jenis (differential count) 4. Hitung trombosit / platelet count
6. Hitung eritrosit (di beberapa instansi)
A. Hemoglobin (Hb)
Menurut Sonjaya (2010) bahwa hemoglobin adalah gabungan antara hemo danglobin yang mempunyai berat molekul 65.000. Hemo mempunyai 4% dari berathemoglobin yang memberikan derajat kemerahan eritrosit. Hemoglobin disebut juga sebagai pigmen respirasi karena mempunyai peranan dalam mengangkut gas yang terlibatdalam proses respirasi yaitu O2 dan CO2. Hemoglobin adalah pigmen respirasi yangterdapat dalam eritrosit yang terdiri atas Hem dan Globin yang berperan dalam mengikatO2 untuk warna darah merah.
Nilai normal dewasa pria 13.5-18.0 gram/dL, wanita 12-16 gram/dL, wanita hamil 10-15 gram/dL. Nilai normal anak 11-16 gram/dL, batita 9-15 gram/ dL, bayi 10-17 gram/dL, neonatus 14-27 gram/dL
Hb rendah (<10 gram/dL) biasanya dikaitkan dengan anemia defisiensi besi. Sebab lainnya dari rendahnya Hb antara lain pendarahan berat, hemolisis, leukemia leukemik, lupus eritematosus sistemik, dan diet vegetarian ketat (vegan). Dari obat-obatan: obat antikanker, asam asetilsalisilat, rifampisin, primakuin, dan sulfonamid. Ambang bahaya adalah Hb < 5 gram/dL.
Hb tinggi (>18 gram/dL) berkaitan dengan luka bakar, gagal jantung, COPD (bronkitis kronik dengan cor pulmonale), dehidrasi / diare, eritrositosis, polisitemia vera, dan pada penduduk pegunungan tinggi yang normal. Dari obat-obatan: metildopa dan gentamisin. (Anonimb, 2011)
sekitar 5 gr per ml darah. Selain dipengaruhi oleh diferensiasi zat besi gizi tekanankurang baik, kekurangan asam folat, vitamin C yang kurang, kekurangan vitamin B12 danhemolisa sel darah merah dapat menyebabkan anemia.
B. Hematokrit
Hematokrit merupakan persentase konsentrasi eritrosit dalam plasma darah. Secara kasar, hematokrit biasanya sama dengan tiga kali hemoglobin.
Menurut Sadikin (2001) bahwa hematokrid adalah persentase volume seluruh SDMyang ada di dalam darah yang diambil dalam volume tertentu. Untuk tujuan ini, darahdiambil dengan semperit dalam suatu volume yang telah ditetapkan dan dipindahkan kedalam suatu tabung khusus berskala hematokrit. Untuk pengukuran hematokrit ini, darahtidak boleh dibiarkan menggumpal sehingga harus diberi antikoagulan.setelah tabungtersebut dipusingi dengan kecepatan dan waktu tertentu, maka SDM akan mengendap.Hematokrid berfungsi untuk memberikan gambaran umum, apakah konsentrasi SDMseseorang cukup atau tidak. Akan tetapi, bila terjadi anemia, kerap kali diperlukaninformasi lebih lanjut, bagaimana konsentrasi rata-rata hemoglobin/SDM, bagaimanavolume SDM, apak kecil (makrositik), biasa (normatik) atau lebih besar dari biasa(makrositik).
Nilai normal dewasa pria 40-54%, wanita 37-47%, wanita hamil 30-46%. Nilai normal anak 31-45%, batita 35-44%, bayi 29-54%, neonatus 40-68%
Ht tinggi (> 55 %) dapat ditemukan pada berbagai kasus yang menyebabkan kenaikan Hb; antara lain penyakit Addison, luka bakar, dehidrasi / diare, diabetes melitus, dan polisitemia. Ambang bahaya adalah Ht >60%.
Ht rendah (< 30 %) dapat ditemukan pada anemia, sirosis hati, gagal jantung, perlemakan hati, hemolisis, pneumonia, dan overhidrasi. Ambang bahaya adalah Ht <15%. (Anonimb, 2011)
C. Leukosit (Hitung total)
yang terdiri dari bermacam-macam batalyon, ada batalyon tempur, perbekalan, pengolah data dll. Saat ada sel jahat maka sel lekosit akan mendeteksi apakah sel jahat ini sudah pernah datang sebelumnya , jika sel jahat tersebut pernah datang maka lekosit tahu pasukan mana yang bisa menghancurkannya. Jika sel jahat baru pertama kali masuk maka lekosit akan menandainya dan membentuk pasukan khusus untuk menghadapinya, sehingga jika suatu saat sel jahat ini kembali maka lekosit akan tahu pasukan mana cocok untuk menghancurkannya. (Anonima, 2011) Nilai normal dari leukosit pada tubuh orang dewasa sekitar 4500-10000 sel/mm3. Neonatus 9000-30000 sel/mm3, Bayi sampai balita rata-rata 5700-18000 sel/mm3, Anak 10 tahun 4500-13500/mm3, ibu hamil rata-rata 6000-17000 sel/mm3, postpartum 9700-25700 sel/mm3 . (Anonimb, 2011)
Segala macam infeksi menyebabkan leukosit naik; baik infeksi bakteri, virus, parasit, dan sebagainya. Kondisi lain yang dapat menyebabkan leukositosis yaitu:
Anemia hemolitik
Sirosis hati dengan nekrosis
Stres emosional dan fisik (termasuk trauma dan habis berolahraga) Keracunan berbagai macam zat
Obat: allopurinol, atropin sulfat, barbiturat, eritromisin, streptomisin, dan sulfonamid.
Leukosit rendah (disebut juga leukopenia) dapat disebabkan oleh agranulositosis, anemia aplastik, AIDS, infeksi atau sepsis hebat, infeksi virus (misalnya dengue), keracunan kimiawi, dan postkemoterapi. Penyebab dari segi obat antara lain antiepilepsi, sulfonamid, kina, kloramfenikol, diuretik, arsenik (terapi leishmaniasis), dan beberapa antibiotik lainnya. (Anonimb, 2011)
Berbeda dengan hewan mencit, Menurut Arrington (1972), jumlah butir darah putih normal pada mencit berkisar 6,0 -12,6 x 103/mm3.
benda asing yang masuk ke dalam tubuh dan jaringan mati yang meningkatkan permeabilitas sinusoid sumsum tulang sehingga sumsum tulang akan mengeluarkan granulosit dan monosit kedalam peredaran darah.
D. Leukosit (hitung jenis)
Nilai normal pada hitung jenis, diantaranya: Basofil 0-1% (absolut 20-100 sel/mm3) Eosinofil 1-3% (absolut 50-300 sel/mm3)
Netrofil batang 3-5% (absolut 150-500 sel/mm3) Netrofil segmen 50-70% (absolut 2500-7000 sel/mm3) Limfosit 25-35% (absolut 1750-3500 sel/mm3)
Monosit 4-6% (absolut 200-600 sel/mm3)
Penilaian hitung jenis tunggal jarang memberi nilai diagnostik, kecuali untuk penyakit alergi di mana eosinofil sering ditemukan meningkat.
Peningkatan jumlah netrofil (baik batang maupun segmen) relatif dibanding limfosit dan monosit dikenal juga dengan sebutan shift to the left. Infeksi yang disertai shift to the left biasanya merupakan infeksi bakteri dan malaria. Kondisi noninfeksi yang dapat menyebabkan shift to the left antara lain asma dan penyakit-penyakit alergi lainnya, luka bakar, anemia perniciosa, keracunan merkuri (raksa), dan polisitemia vera.
Sedangkan peningkatan jumlah limfosit dan monosit relatif dibanding netrofil disebut shift to the right. Infeksi yang disertai shift to the rightbiasanya merupakan infeksi virus. Kondisi noninfeksi yang dapat menyebabkan shift to the right antara lain keracunan timbal, fenitoin, dan aspirin. (Anonimb, 2011)
E. Trombosit
Nilai normal dewasa 150.000-400.000 sel/mm3, anak 150.000-450.000 sel/ mm3.
Peningkatan trombosit (trombositosis) dapat ditemukan pada penyakit keganasan, sirosis, polisitemia, ibu hamil, habis berolahraga, penyakit imunologis, pemakaian kontrasepsi oral, dan penyakit jantung. Biasanya trombositosis tidak berbahaya, kecuali jika >1.000.000 sel/mm3. (Anonimb, 2011)
F. Laju endap darah
1. Nilai normal dewasa pria <15 mm/jam pertama, wanita <20 mm/jam pertama.
2. Nilai normal lansia pria <20 mm/jam pertama, wanita <30-40 mm/jam pertama.
3. Nilai normal wanita hamil 18-70 mm/jam pertama. 4. Nilai normal anak <10 mm/jam pertama
LED yang meningkat menandakan adanya infeksi atau inflamasi, penyakit imunologis, gangguan nyeri, anemia hemolitik, dan penyakit keganasan. Sedangkan LED yang sangat rendah menandakan gagal jantung dan poikilositosis.
G. Hitung eritrosit
Menurut Frandson (1992) bahwa faktor-faktor yang menyebabkan peningkatan dan penurunan jumlah sel darah merah pada seseorang dapat terjadi karena orang tersebutmenderita anemia atau hemokonsentrasi. Hemokonsentrasi disebabkan oleh penurunan jumlah air yang diminum atau banyaknya jumlah air yang diminum. Sedangkan anemiadisebabkan oleh karena sel darah yang fungsional atau hemoglobin jauh di bawah normal.
Nilai normal dewasa wanita 4.0-5.5 juta sel/mm3, pria 4.5-6.2 juta sel/mm3. Sedangkan Nilai normal bayi 3.8-6.1 juta sel/mm3, anak 3.6-4.8 juta sel/ mm3.
Peningkatan jumlah eritrosit ditemukan pada dehidrasi berat, diare, luka bakar, perdarahan berat, setelah beraktivitas berat, polisitemia, anemiasickle cell.
konsumsi obat (kloramfenikol, parasetamol, metildopa, tetrasiklin, INH, asam mefenamat). (Anonimb,2011)
Berbeda dengan hewan mencit, Menurut Arrington (1972), jumlah butir darah merah normal pada mencit berkisar 7,7-12,5 x 106/mm3.
Penurunan jumlah butir darah merah pada hewan dikarenakan oleh besarnya aktivitas hewan tersebut. Hewan yang sangat aktih bergerak atau beraktivitas akan memiliki butir darah merah dalam jumlah yang banyak pula, karena hewan yang aktif banyak mengkonsumsi banyak oksigen, dimana butir darah merah mempunyai fungsi sebagai transport oksigen dalam darah.
C. Materi dan Metode
2. Satu tetes darah diletakkan kira-kira 2 cm dari tepi kanan objek glass pertama. 3. Dengan tangan kanan, letakkan object glass kedua di kiri tetesan darah, lalu
gerakkan ke kana sampai menyentuh darah
4. Biarkan darah tersebut menyebar / merembes sepanjang garis pertemuan kedua objek glass tersebut.
5. Geser objek glass kedua dengan sudut 30 - 45° dan doronglah objek glass kedua untuk menghasilkan apusan darah tipis.
6. Keringkan di udara.
Teknik Pewarnaan Giemsa :
1. Preparat apus darah difiksasi dengan metil alcohol selama 3 -5 menit, 2. Preparat diambil dan dibiarkan kering di udara.
3. Setelah kering preparat direndam dengan pewarna Giemsa yang baru selama 30 menit.
4. Buanglah sisa cairan Giemsa pada preparat tadi dan cuci dengan air mengalir lalu biarkan mongering di udara.
5. Amati di bawah mikroskop dengan pembesaran 1000x (tetesi dengan emersi oil). Teknik Pewarnaan Wright
1. Genangi preparat dengan zat warna Wright selama 2 menit 2. Buang sisa zat warna dan cuci dengan air mengalir
3. Genangi kembali dengan zat warna Giemsa selama 2 menit 4. Buang sisa zat warna dan bilas dengan air mengalir
5. Keringkan pada suhu ruangan
6. Amati di bawah mikroskop dengan pembesaran 1000x (tetesi dengan emersi oil) Identifikasi Sel Darah Putih
Menentukan salah satu leukosit dan mengamati secara seksama ciri –ciri sel tersebut yaitu :
- Neutrofil : Granula netral, inti berlekuk/bersegmen (tua), seperti batang (muda)
- Basofil : Granula biru tua, inti berlekuk/bersegmen. 2. Praktikum 2
Materi
Alat dan Bahan :
a. Darah kapiler / intra cardiac
b. Larutan Hayem (mengandung HgCl2 = 0,25 g; NaCl = 0,5 g; Na2SO4 = 2,5 g; aquades = 100 ml)
c. Larutan Turk (mengandung asam asetat glacial = 3 ml; Gentian violet 1% = 1 ml; aquades = 100 ml)---larutan Turk dapat digantikan dengan asam asetat 3 %.
d. Alkohol 70 % dan kapas
e. Jarum, disposable syringe ukuiran 1 ml dan 2,5 ml
f. Hemocytometer untuk menghitung eritrosit, leukosit dan trombosit. Alat ini terdiri atas :
1. Kamar Hitung. Kamar hitung yang banyak digunakan adalah improved Neubauer.
2. Kaca Penutup. Kaca penutup dibuat benar-benar datar, agak lebih tebal dari kaca obyek.
3. Pipet. Pipet yang digunakan adalah pipet Thoma untuk mengencerkan eritrosit, terdiri atas kapiler pipa kapiler yang bergaris bagi dan membesar pada salah satu ujung membentuk bola. Di dalam bola terdapat sebutir kaca merah. Pipet Thoma untuk mengencerkan leukosit sama dengan pipet eritrosit, namun di dalam bola terdapat sebutir kaca putih.
g. Hemoglobinometer (hemometer)
h. Pipet pencampur 1-101 (pengenceran 100 kali, untuk eritrosit) i. Pipet pencampur 1-11 (pengenceran 10 kali untuk leukosit) j. Mikroskop
l. Hand counter dan kertas saring
Metode a. Perhitungan Eritrosit
Untuk menghitung eritrosit, darah diencerkan dalam pipa eritrosit lalu dimasukkan ke dalam kamar hitung, Pengencer yang digunakan adalah larutan Hayem. Langkah – Langkah pemeriksaan yang diterapkan adalah :
1. Hisap darah kapiler, darah EDTA atau darah oksalat sampai tanda 0,5 2. Hapus kelebihan darah di ujung pipet
3. Masukkan ujung pipet ke dalam larutan Hayem dengan sudut 450, tahan agar tetap di tanda 0,5. Isap larutan Hayem hingga mencapai tanda 101. Jangan sampai ada gelembung udara.
4. Tutup ujung pipet dengan ujung jari lalu lepaskan karet penghisap 5. Kocok selama 15-30 detik
6. Letakkan kamar hitung dengan penutup terpasang secara horizontal di atas meja 7. Kocok pipet selama 3 menit, jaga agar cairan tak terbuang dari pipet.
8. Buang semua cairan di batang kapiler (3-4 tetes) dan cepat sentuhkan ujung pipet ke kamar hitung dengan menyinggung pinggir kaca penutup dengan sudut 30 0. Biarkan kamar hitung terisi cairan dengan daya kapilaritas
9. Biarkan 2-3 menit supaya eritrosit mengendap
10. Gunakan lensa obyektif mikroskop dengan pembesaran 40 kali, focus diarahkakn ke garis-garis bagi dalam bidang besar yang tengah
11. Hitunglah eritrosit di 5 bidang sedang yang masing-masing tersusun atas 16 bidang kecil, dari kiri atas ke kanan, ke bawah lalu ke kiri, ke bawah lalu ke kiri dan seterusnya. Untuk sel-sel pada garis, yang dihitung adalah pada garis kiri dan atas.
12. Jumlah leukosit per µL darah adalah : Jumlah sel x 10000.
b. Penghitungan Leukosit
Untuk menghitung leukosit, darah diencerkan dalam pipa leukosit lalu dimasukkan ke dalam kamar hitung. Pengencer yang digunakan adalah larutan Turk.
2. Hapus kelebihan darah di ujung pipet
3. Masukkan ujung pipet ke dalam larutan Turk dengan sudut 450, tahan agar tetap di tanda 0,5. Isap larutan Turk hingga mencapai tanda 11. Jangan sampai ada gelembung udara. 4. Tutup ujung pipet dengan ujung jari lalu lepaskan karet penghisap
5. Kocok selama 15-30 detik
6. Letakkan kamar hitung dengan penutup terpasang secara horizontal di atas meja 7. Kocok pipet selama 3 menit, jaga agar cairan tak terbuang dari pipet.
8. Buang semua cairan di batang kapiler (3-4 tetes) dan cepat sentuhkan ujung pipet ke kamar hitung dengan menyinggung pinggir kaca penutup dengan sudut 30 0. Biarkan kamar hitung terisi cairan dengan daya kapilaritas
9. Biarkan 2-3 menit supaya eritrosit mengendap
10. Gunakan lensa obyektif mikroskop dengan pembesaran 10 kali, focus diarahkakn ke garis-garis bagi
11. Hitunglah leukosit di empat bidang besar dari kiri atas ke kanan, ke bawah lalu ke kiri, ke bawah lalu ke kiri dan seterusnya. Untuk sel-sel pada garis, yang dihitung adalah pada garis kiri dan atas.
12. Jumlah leukosit per µL darah adalah : Jumlah sel x 50
Materi
Alat dan Bahan : Reagensia :
1. Hcl 0,1 N 2. Aquades Alat / Sarana :
1. Pipet Hemoglobin 2. Alat Sahli :
a. Sepasang cylinder glass berisi larutan standart warna atau disebut juga pembanding warna.
b. Tabung pengukur (tabung pengencer) yang mempunyai garis-garis skala yang menunjukkan kadar Hb. Skala yang terendah adalah angka 2.
c. Pipet darah kapiler (Pipet Hemoglobin) seukuran yang mempunyai volume 20 mm3 pada garis batasnya.
d. Pipet Pateur e. Pengaduk Metode
Prinsip : Hemoglobin diubah menjadi hematin clorida yang berwarna coklat tua. Kemudian warna ini dibandingkan dengan warna standar secara visual.
Langkah – Langkah pemeriksaan dengan cara Sahli yaitu :
1. Masukkan HCl 0,1 N ke dalam tabung Sahli sampai angka 2.
2. Bersihkan ujung jari yang akan diambil darahnya dengan larutan desinfektan ( alcohol 70 %, betadin dan sebagainya ), kemudian tusuk dengan lancet atau alat lain.
3. Isap dengan pipet hemoglobin sampai melewati batas, bersihkan ujung pipet, kemudian teteskan darah sampai ke tanda batas dengan cara menggeserkan ujung pipet ke kertas saring / kertas tisu.
4. Masukkan pipet yang berisi darah ke dalam tabung hemoglobin, sampai ujung pipet menempel pada dasar tabung, kemudian tiup pelan-pelan. Usahakan agar tidak timbul gelembung udara.
5. Bilas sisa darah yang menempel pada dinding pipet dengan cara menghisap HCl dan meniupnya lagi sebanyak 3-4 kali.
6. Campur sampai rata dan diamkan selama kurang lebih 10 menit.
7. Masukkan Ke dalam alat pembanding, encerkan dengan aquades tetes demi tetes sampai warna larutan (setelah diaduk sampai homogeny) sama dengan warna gelas dari alat pembanding. Bila sudah sama, baca kadar hemoglobin pada skala tabung.
D. Hasil dan pembahasan 1. Praktikum 1
Sedangkan sel darah putihnya (leukosit) tidak berwarna dan meiliki inti.
Adapun diferensial dari leukosit (gambar) yaitu: 1. Eosiniofil
Ukuran dan bentuknya hampir sama dengan neutrofil tetapi granula dansitoplasmanya lebih besar, banyaknya kira-kira 24%.
2. Basofil
Sel ini kecil dari eusinofil tetapi mempunyai inti yang bentuknya teratur, didalam
protoplasmanya terdapat granula-granula besar.
3. Limfosit
bentuknya ada yang besar dan kecil, di dalam sitoplasmanya tidakterdapat glandula dan intinya besar
4. Monosit
mempunyai bintik-bintik sedikit kemerahan. Inti selnya bulat dan panjang, warnanya lembayung muda
5. Neutrofil
mempunyai inti sel yang kadang -kadang seperti terpisah-pisah, protoplasmanya banyak bintik-bintik halus /glandula,
2. Praktikum 2
Menghitung Jumlah eritrosit
Pada penghitungan jumlah eritrosit darah mencit tidak dapat di hitung karena batas pada kamar hitungnya tidak jelas yang dimungkinkan karena alat yang digunakan sudah tidak sensitive. Namun dari referensi yang kami dapatkan, menurut Arrington (1972), jumlah butir darah merah normal pada mencit berkisar 7,7-12,5 x 106/mm3.
Menghitung jumlah leukosit
Begitu pun halnya pada penghitungan jumlah leukosit darah mencit juga tidak dapat dihitung karena batas pada kamar hitungnya tidak jelas yang dimungkinkan karena alat yang digunakan sudah tidak sensitive. Namun dari referensi yang kami dapatkan, menurut Arrington (1972), jumlah butir darah putih normal pada mencit berkisar 6,0 -12,6 x 103/mm3.
3. Praktikum 3
Menghitung kadar hemoglobin darah
lain pendarahan berat, hemolisis, leukemia leukemik, lupus eritematosus sistemik, dan diet vegetarian ketat (vegan). Dari obat-obatan: obat antikanker, asam asetilsalisilat, rifampisin, primakuin, dan sulfonamid. Ambang bahaya adalah Hb < 5 gram/dL. Sedangkan Hb tinggi (>18 gram/dL) berkaitan dengan luka bakar, gagal jantung, COPD (bronkitis kronik dengan cor pulmonale), dehidrasi / diare, eritrositosis, polisitemia vera, dan pada penduduk pegunungan tinggi yang normal. Dari obat-obatan: metildopa dan gentamisin. (Anonimb, 2011)
E. Kesimpulan
Berdasarkan hasil pengamatan, disimpulkan bahwa darah terdiri dari beberapa elemen yakni bagian cair dan padat, bagian padat sendiri terdiri dari eritrosit, leukosit, dan keping darah. Untuk megetahui jumlah eritrosit dapat dilakukan penghitungan eritrosit dengan menggunakan hemasitometer. Agar leukosit tidak mengganggu dalam proses penghitungan, maka dihancurkan dengan menambahkan larutan Hayem. Dengan pengenceran darah 200X menggunakan pipa toma, kemudian sel dihitung setiap 1ml darah. dibawah mikroskop dengan glass neaubauer.
Warna merah darah dikarenakan adanya hemoglobin yang berada dalam cairan eritrosit, senyawa ini merupakan suatu protein yang terdiri dari protoporfirin, globin, dan besi bervalensi 2 (Fe++ = Ferro). Kadar hemoglobin dalam darah dapat diukur dengan
beberapa cara antara lain cara Sahli, kertas Talquist Adam ataupun metode Sianmethemoglobin (spektrofotometri).
Pada metode Sahli darah ditambahkan senyawa HCl 0.1 N sehingga ertrosit akan hemolisis, dan hemoglobin yang keluar keplasma akan tereduksi oleh HCl membentuk asam-hematin yang berwarna coklat. Kemudian dengan menambahkan aquades hingga warna asam-hemati sama dengan warna standar, maka diperolehlah kadar hb dam gr%.
DAFTAR PUSTAKA
Anonima. 2011. Pemeriksaan Hematologi. (online)
http://ndiel2.wordpress.com/2011/05/19/pemeriksaan-hematologi/ (diakses tanggal 1 Juni 2012, pukul 22.27).
Anonimb. 2012. Pemeriksaan Darah Rutin. (online) http://ahmadalfikri.blogspot.com/
2010/12/pemeriksaan-darah-rutin.html (diakses tanggal 1 Juni 2012, pukul 22.15).
Anonimc. 2011. Hematologi Mencit. (online) http://patklinvet.com/mencit/ (diakses tanggal 3 Juni, pukul 12.51).
Anonimd. 2012. Struktur dan Morfologi Sel. (Online)
http://www.scribd.com/doc/51154263/STRUKTUR-DAN-MORFOLOGI-SEL
(diakses tanggal 3 Juni 2012, pukul 18.16).
Anonime.2011. Penetapan Kadar Hemoglobin. (online)
http://spiritofveteriner.blogspot.com/2011/04/penetapan-kadar-hemoglobin.html (diakses tanggal 1 Juni 2012, pukul 19.28)
Agus. 2012. Bagian-Bagian Darah dan Fungsinya. (online)
http://agustocom.blogspot.com/2010_07_01_archive.html (diakses tanggal 2 Juni 2012, pukul 00.36).
Alfiansyah, M. 2012. Fungsi, Jenis dan Jumlah Leukosit (sel darah putih). (online)
http://www.sentra-edukasi.com/2011/07/fungsi-jenis-jumlah-leukosit.html
(diakses tanggal 2 Juni 2012, 21.00).
Arisanto, mico. 2010 Struktur Sel Darah. (online)
file:///C:/Users/Ainin/Downloads/refrensi%20lap.%20fisiologi%202/struktur-sel-darah.htm (diakses tanggal 30 Mei 2012, pukul 20.00).
Ochan.2012. Laporan Hemoglobin. (online)
http://ochenbiofisiologi.blogspot.com/2012/01/laporan-hemoglobin.html
(diakses tanggal 28 Mei 2012, pukul 17.00).
Shalehah, 2010. Menghitung JumlahEritrosit dan Leukosit. (Online)
Sri.2010. Leukosit.(online) http://gekrik.blogspot.com/2010/12/leukosit.html (diakses tanggal 2 Juni 2012, pukul 00.25).
Widayati, opik. 2010. Sediaan Apus Darah. Fakultas matematika dan ilmu pengetahuan alam universitas Muhammadiyah Prof. DR. Hamka; Jakarta.
1. Kadar normal leukosit, eritrosit dan hemoglobin Manusia
Jumlah leukosit normal manusia sekitar 4.500 sampai 10.000 jumlah butir. Jumlah eritrosit normal manusia dewasa wanita 4.0-5.5 juta sel/mm3, pria
4.5-6.2 juta sel/mm3. Sedangkan Nilai normal bayi 3.8-6.1 juta sel/mm3, anak 3.6-4.8 juta sel/mm3.
Nilai normal hemoglobin dewasa pria 13.5-18.0 gram/dL, wanita 12-16 gram/dL.
2. Kadar normal Leukosit, eritrosit dan hemoglobin Mencit
