i
PENENTUAN AKTIVITAS ESTROGENIK FRAKSI AIR DAN FRAKSI
ETIL ASETAT BATANG JERUJU (Acanthus ilicifolius) MENGGUNAKAN
METODE YES-ASSAY
SKRIPSI
Untuk memenuhi sebagian persyaratan Mencapai Derajat Sarjana S-1
Diajukan Oleh :
Meisty Aulia Karimah
1008010072
Fakultas Farmasi
Universitas Muhammadiyah Purwokerto Purwokerto
PENENTUAN AKTIVITAS ESTROGENIK FRAKSI AIR DAN FRAKSI
ETIL ASETAT BATANG JERUJU (Acanthus ilicifolius) MENGGUNAKAN
METODE YES-ASSAY
SKRIPSI
Untuk memenuhi sebagian persyaratan Mencapai Derajat Sarjana S-1
Diajukan Oleh :
Meisty Aulia Karimah
1008010072
Fakultas Farmasi
Universitas Muhammadiyah Purwokerto Purwokerto
INTISARI
MEISTY AULIA KARIMAH. Penentuan Aktivitas Estrogenik Fraksi Air dan Fraksi Etil Asetat Batang Jeruju (Acanthus ilicifolius) Menggunakan Metode YES-ASSAY.
Dibawah Bimbingan BINAR ASRINING DHIANI dan SUSANTI.
Latar Belakang : Tanaman jeruju termasuk tanaman semi mangrove yang oleh masyarakat pesisir pantai dianggap sebagai gulma. Beberapa penelitian menunjukkan ekstrak jeruju (Acanthus ilicifolius) memiliki aktivitas antimikroba, antikanker, antioksidan, hepatoprotektif, antiinflamasi, dan hemolitik. Senyawa metabolit sekunder yang terdapat dalam batang tanaman jeruju salah satunya berupa senyawa lignan glukosida yang digolongkan sebagai senyawa fitoestrogen. Sehingga menarik untuk diteliti tentang aktivitas estrogenik pada batang tanaman jeruju menggunkan metode YES-assay.
Tujuan Penelitian : Penelitian ini bertujuan untuk menentukan aktivitas estrogenik dari fraksi air dan fraksi etil asetat batang jeruju (Acanthus ilicifolius) serta untuk mengetahui profil KLT nya.
Metode Penelitian : Fraksinasi dilakukan dengan Fraksinasi Cair-Cair. Uji Estrogenik pada fraksi air dan fraksi etil asetat batang jeruju dibuat dengan seri konsentrasi 50µl, 100µl, 200µl, 400µl, 800µl, 1200µl, 1600µl, 2000µl. Data dianalisis dengan program Graphad prism versi 4. Uji identifikasi senyawa fraksi ekstrak batang jeruju dilakukan dengan metode kromatografi lapis tipis (KLT).
Hasil : Fraksi air memiliki aktivitas estrogenik paling besar baik yang ditentukan menggunakan YES-hERα maupun YES-hERβ, sedangkan fraksi etil asetat kemungkinan memiliki aktivitas estrogenik paling rendah baik yang ditentukan menggunakan YES-hERα maupun YES-hERβ. Nilai EC50 dari fraksi air dan fraksi etil asetat yang ditentukan YES-hERα sebesar 360,2 µg/ml dan 4,369x1030 µg/ml. Nilai EC50 pada fraksi air dan fraksi etil asetat yang ditentukan YES-hERβ sebesar 1083 µg/ml, dan 1,34x106 µg/ml. Dari identifikasi senyawa menggunakan KLT menunjukkan pada fraksi air positif terdapat senyawa flavonoid. Pada fraksi etil asetat positif terdapat senyawa flavonoid, alkaloid, saponin, tannin, dan terpenoid.
Kesimpulan : Fraksi air memiliki aktivitas estrogenik yang rendah baik yang ditentukan menggunakan YES-hERα maupun YES-hERβ dengan hubungan
terbalik antara konsentrasi dengan unit β-galaktosidase yang dihasilkan.
Sedangkan fraksi etil asetat batang jeruju (Acanthus ilicifolius) tidak memiliki aktivitas estrogenik baik yang ditentukan menggunakan YES-hERα maupun YES
-hERβ. Identifikasi senyawa menggunakan KLT untuk mengetahui kandungan
vii
Kata Kunci : Fraksi batang Jeruju, Estrogenik, YES-assay, Kromatografi Lapis
ABSTRACT
MEISTY AULIA KARIMAH. Estrogenic Activity Determination of Water and Ethyl Acetate Fraction of Jeruju Stem (Acanthus ilicifolius) Using YES-Assay Method.
Under supervision of BINAR ASRINING DHIANI and SUSANTI.
Background : Jeruju belongs to semi-mangrove plants which is considered as weeds by the people in coastal area. Several researches reported that extract of jeruju (Acanthus ilicifolius) exhibited antimicrobial activity, anticancer, antioxidant, hepatoprotective, antiinflamation, and hemolytic. One of secondary metabolite compound which exists in jeruju stem is lignan glucosides which is categorized as phytoestrogens. Thus, it is interested to observe about estrogenic activity in jeruju stem using YES-assay method.
Aims of The Research : This research was aimed to determine estrogenic activity of water and ethyl acetate fraction of jeruju stem (Acanthus ilicifolius) and to determine its TLC profile.
Research Methodology : Fractionation was done by using liquid-liquid fractionation. Estrogenic assay on water and ethyl acetate fraction of jeruju stem was done with concentration series of 50µl, 100µl, 200µl, 400µl, 800µl, 1200µl, 1600µl, 2000µl. The data was analyzed by using Graphad prism 4th version. Identification of fraction from extract of jeruju stem was done by using Thin Layer Chromatogram method (TLC).
Result : Water fraction exhibited the highest estrogenic activity either determined by using YES-hERα or YES-hERβ, while ethyl acetate fraction showed the lowest estrogenic activity either determined by YES-hERα or YES-hERβ. The value of EC50 from water and ethyl acetate fraction determined by YES-hERα was 360,2 µg/ml and 4,369x1030 µg/ml. The value of EC50 from water and ethyl acetate fraction determined by YES-hERβ was 1083 µg/ml, and 1,34x106 µg/ml. From compound identification using TLC, it showed that water fraction contained flavonoid. While within ethyl acetate fraction contained flavonoid, alkaloid, saponin, tannin, and terpenoid.
Conclusion : Water fraction exhibited low estrogenic activity either determined by using YES-hERα or YES-hERβ with negative relation between consentration
and β-galaktosidase unit that was produced. Whereas ethyl acetate fraction of
ix
PERSEMBAHAN
Alhamdulillahi robbil ‘alamin, segala puji syukur atas segala nikmat dan anugrah Allah SWT yang senantiasa memberikan pertolongan dalam setiap langkahku. Dengan rasa syukur skripsi ini kupersembahkan untuk yang tercinta, tersayang:
Bapak dan ibu, yang senantiasa mendoakanku, memberikan motivasi, kasih sayang dan dukungan yang tiada tara.
Kakakku (Mba Wiwit dan Mas Heru), yang selalu memberikan dukungan dan motivasi. Adekku Si Kembar (Ana dan Ani) yang telah menghibur dikala duka
dan memberikan keceriaan. Keluarga besarku (Bude dan Pak De) yang selalu memberikan doa dan dukungan dalam setiap langkahku.
Untuk guru, dosen yang senantiasa mengajariku dengan tulus hati, memberikan banyak ilmu dan pengetahuan, terutama untuk dosen pembimbing ibu Binar dan
Ibu Susanti yang telah bersabar dalam membimbing hinggak skripsi ini dapat terselesaikan
Special thanks to : Titi, Ica, Ii, Rany, Group Acanthus : Dian Kartika Sari, Dina
Febrina, Desy, Adang, Hari jo, Personil baru: Grah, Ruru, Ayu Sunda, Tika, Sally, Ratna, Anis, Pendukung : Mba Rahma, Mba Damar, Mba Sandya, Mas Fuad, Mba
xi
PRA KATA
Alhamdulilah, segala puji dan syukur penulis panjatkan kehadirat Allah SWT, yang telah melimpahkan rahmat dan hidayah-Nya sehingga penulis mampu menyelesaikan skripsi ini yang berjudul ”Penentuan Aktivitas Estrogenik Fraksi Air dan Fraksi Etil Asetat Batang Jeruju (Acanthus ilicifolius) Menggunakan Metode YES-Assay”. Skripsi ini disusun guna memenuhi persyaratan untuk mencapai derajat Sarjana Farmasi di Fakultas Farmasi Universitas Muhammadiyah Purwokerto.
Dalam kesempatan ini penulis mengucapkan terima kasih kepada Ibu Binar Asrining Dhiani, M.Sc., Apt dan Ibu Susanti, M.Phil., Apt yang telah berkenan membimbing dan mengarahkan penulis dalam menyelesaikan skripsi ini. Ucapan terima kasih dan penghargaan juga penulis sampaikan kepada :
1. Bapak Drs. H. Syamsuhadi Irsyad, S.H., M.H selaku Rektor Universitas Muhammadiyah Purwokerto.
2. Ibu Dr. Nunuk Aries Nurulita, M.Si., Apt sebagai dekan dari Fakultas Farmasi Universitas Muhammadiyah Purwokerto.
3. Semua dosen dan karyawan Fakultas Farmasi Universitas Muhammadiyah Purwokerto yang telah memberikan bekal bagi kehidupan.
4. Teman-teman Farmasi Angkatan 2010 terima kasih dukungannya. 5. Semua pihak yang telah membantu penulis dalam menulis skripsi ini.
Besar harapan penulis, penulisan skripsi ini dapat bermanfaat. Penulis menyadari sepenuhnya bahwa tanpa bantuan dari berbagai pihak penyusunan skripsi ini tidak akan berjalan baik. Semoga skripsi ini dapat berguna untuk setiap orang yang membacanya. Aamiin.
Purwokerto, Agustus 2014
RIWAYAT HIDUP
Nama : Meisty Aulia Karimah NIM/ Angkatan : 1008010072/ 2010 Tempat/ Tanggal Lahir : Cilacap / 29 Mei 1991 Jenis Kelamin : Perempuan
Agama : Islam
Alamat : Jl. Raya Karangtengah RT 02/ RW 06 Kecamatan Sampang, Cilacap
Riwayat Pendidikan:
1. Perguruan Tinggi : Fakultas Farmasi Universitas Muhammadiyah Purwokerto (Angkatan 2010)
2. SMA/ Tahun Lulus : SMA Negeri 1 Sampang/ Tahun 2010 3. SMP/Tahun Lulus : SMP Negeri 1 Sampang/ Tahun 2007 4. SD/ Tahun Lulus : SD Negeri Tambakreja 7/ Tahun 2004 5. TK / Tahun Lulus : TK Aysiah/Tahun1998
Prestasi :
xiii
DAFTAR ISI
halaman
HALAMAN JUDUL ... ii
HALAMAN PERSETUJUAN ... iii
HALAMAN PENGESAHAN. ... iv A. Tumbuhan Acanthus ilicifolius ... 4
B. Uji Aktivitas Estrogenik ... 6
C. Hormon Estrogen ... 8
D. Kromatografi Lapis Tipis ... 8
BAB III METODE PENELITIAN A. Jenis dan Rancangan Penelitian ... 10
B. Variabel Penelitian ... 10
C. Definisi Variabel Operasional ... 10
E. Alat dan Bahan……… ... 11
F. Cara Penelitian………. ... 12
G. Analisis Hasil………. ... 14
BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN
A. Pembuatan Fraksi air dan Fraksi Etil Asetat Batang Jeruju Acanthus ilicifolius ... ... 15
B. Uji Aktivitas Estrogenik………. .... 16
C. Penentuan profil KLT senyawa ……….. ... 25
BAB V KESIMPULAN DAN SARAN
A. Kesimpulan ... 32 B. Saran ... 32
DAFTAR PUSTAKA
xv
DAFTAR TABEL
halaman Tabel 1. Hasil identifikasi golongan senyawa yang terkandung dalam
fraksi etil asetat batang jeruju dengan menggunakan KLT ... 26 Tabel 2. Hasil identifikasi golongan senyawa yang terkandung dalam
DAFTAR GAMBAR
halaman
Gambar 1. Prinsip Metode YES ... 7
Gambar 2. Kurva hubungan antara log konsentrasi estradiol (M) dengan unit β-galaktosidase (Miller Unit) ... 19
Gambar 3. Kurva hubungan antara log konsentrasi genistein (M) dengan unit β-galaktosidase (Miller Unit) ... 20
Gambar 4. Kurva hubungan antara log konsentrasi fraksi air dan fraksi etil asetat dengan unit β-galaktosidase (miller unit) pada YES-hERα ... 23
Gambar 5. Kurva hubungan antara log konsentrasi fraksi air dan fraksi etil asetat dengan unit β-galaktosidase (miller unit) pada YES-hERβ ... 24
Gambar 6. Identifikasi senyawa fraksi etil asetat dengan KLT ... 25
Gambar 7. Identifikasi senyawa fraksi air dengan KLT ... 28
Gambar 8. KLT-preparatif fraksi etil asetat ... 31
xvii
DAFTAR LAMPIRAN
Lampiran 1. Proses fraksinasi ... 36
Lampiran 2. Perhitungan rendemen estrak... 37
Lampiran 3. Perhitungan rendemen fraksi ... 37
Lampiran 4. Perhitungan Rf hasil KLT... 38
Lampiran 5. Uji Aktivitas estrogenik ... 39
Lampiran 6. Hasil Absorbansi Fraksi Air dan Fraksi Etil Asetat Batang Jeruju ... 42
Lampiran 7. Hasil perhitungan EC50 dengan menggunakan graphad prism versi 4 ... 45
Lampiran 8. Perhitungan pembuatan buffer fosfat. ... 47
Lampiran 9. Perhitungan Pembuatan Z-buffer... 48
Lampiran 10. Perhitungan Pembuatan Na2CO3. ... 49
Lampiran 11. Perhitungan Pembuatan Larutan Stok Estradiol. ... 50
Lampiran 12. Perhitungan Pembuatan Larutan Stok Genistein. ... 51
