adenoirusubekuta o mochiita gikaku heno GDNF idenshi donyu ni yoru undo nyuron datsuraku boshi koka no kento

Title Sub Title Author Publisher Publication year Jtitle Abstract Notes Genre URL. Powered by TCPDF (www.tcpdf.org). アデノウイルスベクターを用いた疑核へのGDNF遺伝子導入による運動ニューロン脱落防止効果の 検討 齋藤, 康一郎(Saito, Koichiro) 小川, 郁(Ogawa, Kaoru) 慶應医学会 2003 慶應医学 (Journal of the Keio Medical Society). Vol.80, No.4 (2003. 12) ,p.T337- T346 学位論文 Journal Article http://koara.lib.keio.ac.jp/xoonips/modules/xoonips/detail.php?koara_id=AN00069296-20031201 -0337.

慶 感 医 学 ・80(4);T337∼T3A6,2003. 学位論文. ア デ ノ ウ イ ル ス ベ ク タ ー を 用 い た 疑 核 へ のGDNF遺. 伝 子導入 によ る. 運 動 ニ ュー ロ ン脱 落 防 止効 果 の検 討 慶晒 義熟 大学 医学 部耳 犀咽 曝 科学教 室 (指導:小 川. 郁教 授). さい. とう. こうい らろ う. 齋. 藤. 康一郎. (馳1こ 成15年6月23B受. Key. Word:adenovirus,. GDNF,. nucleus. ambiguus,. 付). laryngeal. ;FMIa腫瘍 に 対 す る頭 頸 部 手 術 の 際 な ど,症 例 に よ って. paralysis,. motoneuron. 主 症 状 の 場 合,必. 要 と あ れ ば 気 管 切 開 施 行 の 後,. は迷 遣 神経 あ るい は反 回 神 経 の損 傷 が 避 け られ な い.ま. Woodman手. た,食 道癌,肺 癌,甲 状 腺 癌 の 手 術 巾 の 損 傷 や腫 瘍 の 直. どの 声 門 開 大 術 が 行 わ れ て い る が,ど の 術 式 も気 道 を広. 接 の 浸 潤,大 動 脈 瘤 の手 術 中 の 損 暢,あ. げ る代 償 と して,音iv. る い は気 管 内 挿. 術7」 やCO:レ. ー ザ ー に よ る 声帯 切 除 術"'な. l3xi.[.tYlが強 くな る こ と は避 け ら. 管 な ど様 々な 原因 で迷 走 神 経 あ る いは 反 回 神 経 の損 傷 。. れ な い.唄 声 が 主 症 状 の 場 合,前 述 の よ うな 片 側 反 回 神. 麻 輝 が 生 じる1・si.麻痺 が 片 側 の場 合,患. 経 麻痺 に 準 じた 治 療 が 選 択 され るが,こ. 者 は,u門 閉 鎖. の場 合,気 道 が. 不 全 に起 因 す る喧 声 や嚥 下 障害 と い った症 状 に悩 ま され.. さ らに 挟 くな る とい う危 険 を伴 う.っ ま り,患 者 は良 好. QOLの. な 音 声 を犠 牲 に して 気 道 を確 保 し,気 管 切開 孔 を 閉 鎖 す. 低 下 した 生 活 を 強 い ら れ る こ と に な る.し か し. なが ら現 在,片 側 反 回 神 経 麻 痺 に 対 す る外 科 的 治 療 は,. るか,あ. 神 経 吻 合術 や神 経 筋 弁 の 甲 状 披 裂 筋 へ の 移 櫃 術 を 除 き,. 窄 と い う危 険 に さ ら され,時. 声 帯 油 入術,甲 状 軟 骨 形 成 術,波 裂 軟骨 内 転 術1jど.い. い状 況 を受 け 入 れ るか,い ず れ か の 選 択 を しな け れ ば な. るい は 良 好 な 音 声 をi14得す る代 わ りに 気 道 の 狭 に気 管 切 開 孔 を 閉鎖 で きな. ず れ も声 帯 を静 的 に内 転 させ る術式 で あ り,j;:帯 の 再 運. らず,そ の ど ち らを も両 立 す る治 療 法 は 存在 しな い 状 況. 動 化 を 目的 と は して いな いW、 さ らに注 入 術 に関 して は,. に あ る.現 状 で は この よ う な患 者 の 症 状 や要 求 に あ わ せ. 容 易 か つ安 全 に注 入 で き,声 帯 内 に長 期 間留 置.可能 とい. て慎 重 に 治 療 が 選 択 され て い るが2,,い ず れ に して も呼. う理想 的 な注 入 物 質 はい まだ な く,甲 状 軟骨 形 成 術 に 関. 吸 ・発声 機 能 を両 立 さ せ る ため に は,静 的 に声 帯 位 や,:;. して は声 門 後 方 の 間 隙 に 対 して は 効 果 が7+Yいとい わ れ て. 帯 の 形 態 を変 え るだ け で は 不 十 分 で あ り,患 者 のQOL. い るu.妓 裂 軟 骨 内 転 術 に関 して も,声 帯 萎 縮 の あ る 症. の改 善の ため に は,声 帯 の 再 運 動 化 が 最 も理 想 的 と 考 え. 例 に は 適 さ ず5},術 後 に 声 門 浮 腫 を 生 じる リス ク も高. られ る.ま たdas"s音wを 得 るに は,声 帯 の ポ リ3. い`〉 な ど,ど れ も決定 的 な術 式 と は いえ な い状 況 に あ る.. 弾 性,声 門 抵 抗 が 必 要 で あ り,さ ら に純 音 を 得 る た め に. ム,. ま た,こ れ らの 声 帯 を 静的 に 内転 させ る術 式 で は,術 後. は対 称 性 も必 要 と い わ れ て お り91,こ の た め に も,声 帯. も声 の 高 さ の コ ン トロ ー ル は不 良 で あ る61.一 方,両. 側. の 再運 動 化 が 目標 と な る こ とは明 らか で あ る.声 帯 運 動. 程度. の回 復 を 目的 と した術 式 と して,切 断 した反回 神 経 の端 々. 反 回 神 経 麻 痺 の 症 例 も,反 回 神 経 麻 痺 症 例 の1割 存 在 す るが,両. 側 反 回 神 経 麻 痺 の7∼8割. の患 者 はwpq. 吻Aiau'.n,頸 神 経 ワ ナ と反 回 神 経 の 端 々吻 合1劉5}や.横. 狭窄 に よ る呼 吸困 難 を訴 え,緊 急 気 菅 切開 な ど を要 す る. 隔 神経 と反 回 神 経 の 後 筋 枝 との 選 択 的 な吻 合ifrl41,頸 紳. 症 例 もあ り,慎 重 な対 応 が 必 要 と な る.呼 吸 の問 題 だ け. 経 ワ ナ と反 回 神 経 の 内 転 筋 枝 と の選 択 的 な吻 合 術91,前. で な く,患 者 の 多 くが さ ら に哩 声 も伴 う2}.呼 吸 困 難 が. 頸 筋 を 用 い た 補1経筋 弁 の 甲状 彼 裂 筋 へ の 移 埴 術1ト191も検. 本 論 文 は 。Sailo motoneuron. loss. K. in. Shiotani. the. nucleus. A,. Watabe ambiguus,. K.. Moro. Brain. K, Res. Fukuda. l.1.Ogawa. 962:61-67,2003の. 一1'337一. K. l Adenoviral. 一 部 を 含 む .. GDNF. gene. transfer. prevents.

慶慮 医 学. 討 され て い るが,神 ロ ンの 脱 落,神. 80巻4号(平. 成15年12月). 経 損傷 後 の筋 萎縮 や 疑核 の運 動 ニ ュー. Choline. 経 吻 合 後 の声 門 閉 鎖 筋 と開 大 筋 の 過誤 支. acely】transferase(ChAT)は,神. 質 に 関 連 し た 蛋 白 で あ り,神. 経 伝達物. 経 損 傷 後速 や か に免 疫 反 応. 配30.11あ る い は 吻 合 後 の モ ー タ ー ユ ニ ッ トの 減 少1411',と. 性 が 減 弱 す る こ と が わ か う て い る 鋤.ま. い っ た さ ま ざ ま な 問 題 が あ るた め,思. oxide. て お らず,現. わ し い結 果 に は 至 っ. (BDNF),. neurotrophin. rophic. (NT)一3,. factor(CNTF),そ. neurotrophic. ciliary. し てglia]cell. factor(GDNF)と. 性 は 傷 害 され た迎 動 ニ ュ ー の 脱 落 開 始 に璽 要 な役 割 を果. た す と 考 え ら れ て い る ●o一.n.さ ら に,顔. 面 神 経 引 き抜 き. 損 傷 後 のGDNF遭. 面神経 核の運動. 式 と は ま だ 認 め られ て い な い. neurotrophic(actor. (NOS)活. ロ ン に お い て 誘 導 さ れ,そ. 状 で は 喉 頭 の 動 き を 回 復 さ せ る 安 定 した 術. 一 方 こ れ ま で に,brain・derived. synthase. n則roレ. 3一. line-derived. ロ ン に お け るChATの. NOS活. い った神経栄 養因 子. 伝 子 導 入 に よ り,顔. 免 疫 反 応 性 が 改 善 し,. 性 が 抑 制 さ れ る こ と が 報 告 さ れ て い る931.損. さ れ た 迷 走 神 経 運 動 二3一. 遺 伝 子 導 入 の 効 果 を 検 証 す る た め,本. 新 生 仔 鶴 歯 類 の 神 経 切 断 に よ る 顔 面 神 経 核,脊. こ れ らChATの. 髄前角の. 免 疫 反 応 性 お よ びNOS活. 組み込ん だアデ. ノ ウ イ ル スベ ク ターの 投 与 が顔 面 神 経 の引 き抜 き損 傷 後. 1.ア. の運 動 ニ ュ ー ロ ン脱 落 防 止 に 有 効 で あ る こ と が 示 さ れ て い る32,.こ れ ま で 神 経 内 科 領 域 に お い て,こ. ソ ン病(PD),筋. れ ら神経 栄. ル ッ ハ イ マ ー 病(AD)や. す く半 減 期 が 短 い,血. ベ ク タ ー と し て は,神. か し. い"鞠㈲ と い う 特 徴 を も ち,近. 止期や分裂 入遭. 年 神経 系 へ の 遺 伝 子 導 入 に. 最 も有 効 な ベ ク タ ー の ひ と っ と さ れ て い る 非 増 殖 型 ア デ. 体 内 で は代 謝 され や. ノ ウ イ ル ス ベ ク タ ー ㈹)を使 用 し た.. 液 脳 関 門 を 効 率 よ く通 過 し な い,. そ の 全 身 投 与 で は 副 作 用 を 生 じや す く,脳. 経 細 胞 の よ う な,休. 伝 子 が 宿 主 細 胞 の 染 色 体 外 に 存 在 す るた め 安 全 性 が 高. い った. 神 経 変 性 疾 患 の 治 療 に 有 効 性 が 期 待 さ れ て き た.し. デ ノ ウ イル ス ベ ク ターの 作 製. 増 殖 の 遅 い 細 胞 に も高 率 に 遺 伝 子 導 入 が 可 能 で,導. パ ー*ン. 萎 縮 性 側 索 硬 化 症(ALS),と. な が ら,神 経 栄 養 因 子 蛋 白 で は,生. 性 の変 化 に. 材料と方法. 投 与 が 脊 髄 神 経 引 き 抜 き損 傷 後 の 運 動 ニ ュ ー ロ ン脱 落 防. 養 因 子 の 投 与 は,ア. 硫 究 で は さ ら に,. つ い て も検 討 し た.. 運 動 ニ ュ ー ロ ンの 変 性 脱 落 防 止 に 有 効 と 報 告 さ れ て い る zx-xei .成 体 超 歯 類 に お い て は 、 BDNFやGDNF蛋 白の. ら にGDNFを. 傷. ロ ンに対 す る神 経 栄 養 因 子 の. あ る い は こ れ らを 組 み 込 ん だ ア デ ノ ウ イ ル ス ペ ク タ ー が,. 止 に 有 効 で あ り 柵",さ. た,Nitric. 作 製 に は 三 宅 らの 開 発 したCOS・TPC法. 室 内 へ の 直接. を 用 い た47、49〕.. 増 殖 に 必 要 な 初 期 遺 伝 子 のE!,E3領. 域 を 欠 損 し た5. 投 与 で は十 分 量 を 神経 細 胞 へ 供 給 で き な い と い った悶 題. 型 ア デ ノ ウ イ ル ス ゲ ノ ム を 含 む コ ス ミ ドベ ク タ ー. 点 が あ っ たvi.近. (pAxCAwt)に,培. 年,こ. れ ら を 解 決 す る 治 療 法 と し て,. 脳 内 で 神 経 栄 養 因 子 を 合 成 さ せ る 遺 伝 子 治 療 が 注 目 さ れ,. た ヒ トGDNF. ADに. 伝子 を. を 挿 入 し,制. 伝子を. DNA-TPC. 対 す るnerve. growth. 用 い た治 療 製〕,PDモ. factor(NGF)遺. デ ル 動 物 に 対 す るGDNF遺. 養 さ れ た ヒ ト胎 児 星 状 細 胞 よ り得 cDNAあ. る い はp-ga且actosidase. i$伝 子. 限 酵素 消化済 みの アデ ノウイルスゲ ノム (terminal. protein. complex). と 共 に293. 用 い た治 療 細,運. 動 ニ ュ ー ロ ン脱 落 モ デ ル 動 物 に 対 す る. 細 胞 に 導 入 し た,293細. NT-3,. BDNFあ. 非 増 殖 型 組 み 換 え ア デ ノ ウ イ ル ス ベ ク タ ー(順. に. AxCAhGDNF,. て. CNTF,. る い はGDNF遺. 伝子 を用 い. た治 療S9.ST,S&981など 急 速 に 研 究 が 進 ん で い るs1. 反 回 神 経 麻 痺 に 対 す る遺 伝 子 治 療 の 可 能 性 に 関 して は,. 胞 内 で の 相 同 組 み 替 え に よ り,. AxCALac2)を. 濃 縮 し た.な. 得,さ. お,pAxCAwtは,. cloning. growth. factor. ga】ovirus・enhancer・chickenp-actin. 与 が,筋. の 萎 縮 の防 止 と運 動 神 経 終 末 の 形 態 維持 に有 効. 1(IGF-D遺. 伝子 の甲状披裂筋 への投. で あ る こ と が 報 告 さ れ て い る鳳39,.し か し,反. 回 神経 麻. site及. タ 「3'端. び,そ. E1欠. ラ ッ ト反 回 神 経 麻 痺 モ デ ル に 対 す る,Insulin-like. のrabbit. の5'端. globulin. ら にCsC1に. 損 領 域 に, SwaI. のCAG(cytome・ hybrid)プ. poly(A)sequenceが. ロモ ー 組. み 込 ま れ て い る.. 痺 に お け る大 きな問 題 点 の ひ とつ で あ る疑 核 運動 ニ ュ ー ロ ン脱 落 に 対 す る遺 伝 子 治 療 に 関 して は 報 告 が な い .本 研 究 で は,迷. 2.ア. 走神経 あ るいは反 回 神経 掘 傷後 の運動 ニ ュー. デ ノ ウ イル ス ベ ク ター の導 入. 遺 伝 子 の 導 入 は,直 接脳 幹 へ役 与 す るの で は な く,耳. ロ ン脱 落 に 対 す る遺 伝 子 治 療 の 可 能 性 を 検 討 す る た め,. 鼻 咽 喉 科 手 術 時 の 術 野 で の操 作 を想定 し,ま た逆 行 性 軸. 成 体 ラ ッ ト迷 走 神 経 抜 去 モ デ ル を 用 い て,GDNF遺. 索 輸 送 を利 用 してJ250.SDI脳 幹 で もと くに患 側 の疑 核 に 特. 伝. 子 の 導 入 に よ る 疑 核 運 動 ニ ュ ー ロ ン脱 落 防 止 効 果 に つ い. 異 的 にGDNF遺. て 検 討 し た,. 経 抜 去 断 端 よ り投 与 を 行 った, 一T338一. 伝 子 を 発現 させ る こ とを 意 図 して,神.

爾 藤=疑 咳 へ のGDNF遺. 雄Sprague. Dawleyラ7r. を,ケ4ミ. (12週. ン(100mg/kg.. mg/kg,. i.p.)に. i.p)と. 去 後 直 ち に10μ. p(u/mf),. AxCALacZ. し,処. キ シ ラ ジ ン(10. buttered. AxCAhGDNF投. Total. oio pfv/m!). saline(PBS)を. Tokyo.、. 頸 静 脈 孔 に投 与. Japan)の. 閉 創 し た 、 ラ.ン ト は,処 時 点 で,下. 、2週,4週. 召chain. reaction. に,致. 死 量 の ケ タ ミ ンを腹. ・ ン ト の 凝 該 をaむ. 脳 幹 を 摘 出 し た 、. RNAを.. RNA. iso]ation. Carlsbad,. CA)を. CDeoxyribonuclease trogen)に. 小 片 で 覆 っ た う え で. 置 篠4日,L週. 加 加 π0鷹. 与 後4目. Invitrogen,. あ る い は. 置 後 の 頸 齢 脈 孔 を ゼ ラ チ ン ス ボ ン ジ(Spongel,. Yamanouchi.. transcnptian・. 腔 内 投 与 後,ラ. のAxCAhGDNF(1XlO10 (1x. Reverse. (R第PC尺). 微 鏡 下. 血 鉗子 を用 い て迷 走 神経 を抜. 去 し た.抜. phosphate. 3,. 齢,340∼36〔}g). よ る 麻 酔 下 に 手 術 を 行'っ た.顕. に 左 頸 静 脈 孔 を 露 出 し,止. 伝子導入効果の検討. strand. の. AmpiiBcation. よ びSUPERSCRIPT 使 用. templaYe,200. 対. し,. first. らrandom. fUeverse して 作 製. DNase. Grade,1!wi-. 度 のPCRに. ngのcold且RNAか. {lnvilrogen>を cDNA. (TRIZOL,. 用 い て 抽 昌.}しl. し た.一. cDNAを380. primerお. 記 の よ う に 評 価 し た.. I,. て 処 理. reagent. transcriptase. し た.. PCR反. 応 は.. NMのdNTPs.2mMのMgCI:,. 0.2ｵMのprimerと25ｵ/mlのTaq. DNA. po【ymera肥. }. ﹁. 、 '`. ⊃. σ. . 、. ㍗り. . ・ 」噌. 1, .A. .. ・. 、. ↓. 、. 1、. ゴ. ∼. ♂. ヂ ノ. 」. 尋,. 愁鵬. ・. .. の. '-.渥. ,. 一. .. ,. L. 、.r. f. 0. L. 辱... ザ. 、. 緊畢 . ト.. 、. ,'.. rs 「.. イr. 口. ㍉. 幽号. 4. ・ ●. ・. r:. ●. 卜. '. ■. C. 一. 、. 第1図. 外 来 週1評. の 疑 核 で の 発 現.脳. AxCALacZの. 投 与 隆4日. お よ び(b)高. 倍 率(x30D)の. そ れ ぞ れ 非 蛆 置 側(の. 幹 艇職 のX・9・ 【醗. 処 即r蹴. お よ び処 置 側. 髄. 〔d)の. pm.(Saii。. K. et s]:Brain. 像 で あ る.処. 示 す,頸. 明 瞭 に 染 色 さ れ た.(a)低 置 後1週. 疑 核 組 織 楓 で あ る.迷. 疫 組 織 染Lで Res. ・. 組 織 難(・.b)を. で 疑 核 の 運 動 ヨ ユ ー ロ ンがX・galで. 処 置 側 の 疑 骸 運 動 二 凸 一 ロ ン がGDNF免 Bars=50. d・. で のGDNFの. 一T339一. 1を 許 可 粥. 迷 走 神経 を披 去 し・. 倍 率(xqO)の 免疫 繍. 遣 神 経 の 抜 去 徹 にAxCAhGDNFを. 弾 陽 性 と な っ た.〔c)と(d)は. 962:61-67,2。93のFigure. 静 脈 孔1託. 染色. 脳 幹組織 煙 く・・d)を. 示 す・. 投 与 す る と.. 同 一 切 片 で あ る.(x200} て 転 載). ..

慶 晦 医学. を 含 むPCR. buffer(TaKaRa.. て 施 行 し た.PCRに GDNF. Osaka,. cDNAに. は,ア. 80巻4号(平. Japan)を. 用 い. デ ノウ イル ス由来 の ヒ ト. 特 異 的 なoligonucleotide. primer(for・. 55℃. 且分30秒. い,こ. 用 い た.. 性 反 応 を95℃1分 間,伸. れ を40サ. 間,ア. 長 反 応 を72℃. 間行. 応 産 物 を1.5%ア bromideで. 染色. 産 物 を 検 出 したX91.ネ ガ テ ィ プ コ ン トロ ー. ル と して,RT未. 施 行 のRNAサ. の 脳 幹 組 織 にRTを. bufferで. ンプ ル お よ び非 処 置 側. 施 行 し た サ ンプ ル のPCRを. 含 むpH. 8.0の0.1M. 洗 浄 し,1mg/ml 含 むpH. nitroblue. 行 っ た.. Tris-HCI tetrazo】ium. 8.0のO,IMTris-HCI. bufferと37. 間 反 癒 さ せ た.. 運 動 ニ ュ ー ロ ン数 の 算 定 の た め,脳. ニ ー リ ングを. で 且分30秒. イ ク ル 施 行 し た.反. ガ ロ ー ス ゲ ル で 電 気 泳 動 し,ethidium して5llbpの. X・100を. ℃ で3時. 50・TCACCAGCCTTCTATTTCTG-3')を 応 は,変. O.1%Triton. (Sigma)を. ward,5'一ATGAAGTTATGGGATGTCGT-3':reverse,. PCR反. 成15fF12月). ン包 埋 し.7μm厚 (28μm悶. 幹組 織 をパ ラ フ ィ. で 連 続 切 片 を 作 成 し た.5切. 隔)の. 検 体 を 脱 パ ラ フ ィ ン の 上,ト. 片 ごと ル イジ ン. ブ ル ー で 染 色 し た.左. 右 両側 の疑 核 を 確 認 で き る切 片 に. お い て.明. 小 体 を忽 め る疑 核運 動 ニ ュー ロ ン. を20切. 瞭 な 核,核. 片 で カ ウ ン ト し た.疑. 径 が21.8±4.96 28μm間. pmsu'で,今. 核 運動 二 昌 一 ロ ンは 最 大 回 の 検 討 で は5切. 片 毎 に. 隔 で 算 定 した た め 複 数 切 片 で の 電 腹 算 定 は 無. い も の と して デ ー タ を 解 折 し た. の. 4.組. 織 学 的検 討. 酵 素 組織 染 色 の 算 定 の た め,ラ. デ ー タ は4検 免 疫 組 織 染 色 お よ び運 動 二 昌 一 ロ ン数. と4週)で. ッ トを ケ タ ミ ン と キ シ ラ ジ ンで 麻 酔 の. 較 でOne・factor. 上,4%paraformaldehydeを 液 流 固 定 し た.脳. 体 の 平 均 値 ±S.D,(そ. 含 むPBSで. 幹 組 織 を 摘 出 の 上,同. 時 間 後 固 定 を 行 っ た.酵. 経心臓 的に 固 定 液 に て2. 素 組 織 染 色 と免疫 組 織 染 色 に用. い た 検 体 は,30%sucroseを. 含 むPBSで. テ ク シ ョ ン を 行 っ た 上,16ｵmlで. 評 価 し,統. れ ぞ れ 処 皿 後2週. 計 学 的 有 意 差 の 検 討 に は3群. ANOVA. and. Scheffe. 比. test(n=4)を. 用 い た. な お,本. 研 究 は慶 懸 義 塾 大 学 医 学 部 動物 実 験 ガ イ ドラ. イ ンを 遵 守 し て 行 っ た.. ク ライ オ プ ロ. 結. 迷 続凍結切 片を作. 果. 製 し た. X・gal酵 素 組 織 染 色 の た め,ラ 流 固 定 し,凍. ッ トを 処 置 後9日. 結 切 片 を5mMのpotassium. で瀟. ferricy・. 1.疑. 核 での レポ ー ター遺 伝 子 発 現 の検 討. 迷 走 神 経 抜 去 モ デ ル に お け る,ア. デ ノウ イル スベ ク ター. snide,5mMのpotassium[errocyanide,2mMの. に よ る疑 核 へ の 外 来 遺 伝 子 導 入 の 可 否 を 検 討 す る た め,. MgCh,. 最 初 に 雄Sprague. そ し てlmg/m且. の5・bromo-4-chloro・3・. indolyl・P・D-galactopyranoside を 含 むPBSと37℃ 後,エ. (X-ga!.. AxCALacZを. Invitrosen). で 一 晩 反 応 さ せ た.切. 片を洗浄 の. ChATの. を 用 い た.. 免 疫 組 織 染 色 の た め,ラ. で 潅 流 し,凍. 結 切 片 を0.3%H:O:を. し,0.1%Triton. X・100を. した 後,3%normal し た.ABC. goal. blocking. で 処 置 し た 後,ウ (Santa ポiク. Cruz. 識 抗 ウ サ ギ1gGと reagent(Vector)と. 含 むPBSで. 問. 前 処art. 走 神 経 抜 去 モ デ ル に お い て,. 神 経 の 損 傷 断 端 か ら取 り込 ま れ た ウ イ ル ス ベ ク タ ー を, 逆 行 性 軸 索 輸 送 に よ っ て 運 動 二-一. ロ ンの 細 胞 体 ま で 運. serumを. 処置. 判 明 し た.な. お.非. め ら れ ず,発. 現 は処 置側 に選 択 的 で あ った.. kit(Vector,. Burlingame,. CA)あ. CA). 2.疑. る い は ウ サ ギ 抗ChAT Temecula,. 希 釈 率1;100で. CA)と. 希. い て ビ オ チ ン標 反 応 さ せ,. ABC. 反 応 の 後,3,3'一diaminobenzidine. 処 置 側 の 迎 動 ニ ュ ー ロ ンの 染 色 は認. solutionで. diaphorase酵. 核 で のGDNF遺. 発 色 さ せ.. 伝 子 の 発 現 を, GDNFに. で 瀟 流 し,凍 結 切 片 を 一T340一. 投 与 し,外 対 す るRT・PCRお. 来 よ. び 免 疫 組 織 染 色 で 検 討 し た, で,RT・PCRに. 脳 幹 組 織 か ら,ウ mRNAを. 素組織 染 色. 伝 子 発現 の検 討. 続 い て 岡 モ デ ル にAxCAhGDNFを GDNF遺. 処 置 後4日. ヘ マ トキ シ リ ンで 対 比 染 色 を 行 っ た.. の た めu..z',,ラ ッ ト を 処 置 後2週. 来 遺 伝子 を 発現 さ せ る こ とが可 能 で あ る こ とが. リクローナ ル抗体. で 反 応 さ せ た,続. 性 を 表 すNADPH. 瞭 に 染 色 さ れ た(第i図. 搬 し,外. 含 むT・PBSで. で,処. 状 突 起 を 含 め,. 洗浄. tetrahydrochloride(DAB)一H:O,. NOS活. の 結 果 か ら,迷. 索,樹. 置 後4日. 含 むPBS(T・PBS)で. ロ ー ナ ル抗 体(Chemicon,. 釈 率1:1000で4℃. ッ トを 処 置 後1週. サ ギ 抗GDNFポ. Biotech.,. a,b).こ. GDNFと. ・7トの 左 迷 走 神 経 抜 去 後,. 暇 側 の 疑 核 運 動 ニ ュ ー ロ ン が,軸 X・ga1酵 素 組 織 染 色 に よ り,明. オ シ ン で 対 比 染 色 を 行 っ た.. 免 疫 組 織 染 色 に は,ABC法. Dawleyラ. 頸 静 脈 孔 に 投 与 した.処. よ り処 置 側 の 疑 核 を 含 む. イ ル ス に よ り 導 入 さ れ た ヒ トGDNF. 検 出 し た(第2図).. 処 置 後1週. 間 で.処. 置 側 の 疑 核 に お い てGDNFに. す る 明 瞭 な 免 疫 染 色 が 認 め ら れ た(第1図c,d).. 対.

齋 藤;疑. 1. M b,吻. 500bp一. 核へ のGDNF遺. 伝 子 導 入効 果 の検 討. RT-PCR. 3. 2. 鰍. 枷9η. Ssよ び,免. 疫 組 織 染 色 に お い て,非. 処 置 側. へ の ウ イ ル ス ベ ク タ ー の 感 染 は認 め ら れ な か っ た.. 3,GDNF遺. 伝 子 導 入 に よ る 運 動i3一. ロ ン保 護 効 果. の検討 rL.動茅. アデ ノ ウイ ル スベ ク タ ー に よ る 外 来遺 伝 子 の 疑 核 へ の 導 入 ・発 現 が 可 能 で あ る こ と を 確 認 し た 後,左 を抜 去 した ラ ッ トにPBS, を 投 与 し てGDNF遺. 迷 走 神 経 抜 去 とAzCAhGDNF投. 幹 組 織 のRT・PCR$P}fr. lane. 1;RT(十)の. M. lサ. 処 籏 側 脳 幹 組 織,. の 処 置 側 脳 幹 組 織,lane 織,の. 与 後4日. Lane. lane. 3:RT(+)の. 解 析 結 果 を 示 す.(Saito. 6且一67,2003のFigure. K. で,PBS投. で の脳. イ ズ マ ー カ ー,. 迷走神経. AxCAhGDNF. 伝 子 導 入 に よ る 運 動 ニ ュ ー ロ ン保. 護 効 果 を 検 討 し た.迷 第2図. AxCALacZ,. 走 神 経 抜 去 後2週. 与 群 とAxCALacZ投. あ る い は4週. 与 群 で は,疑. 核 におい. て 運 動 ニ ュ ー ロ ン の 著 明 な 縮 小 と 脱 落 が 認 め ら れ た.4. 2:RT(一). 週 の時 点 で 処 置 側 の疑 核 運 動 ニ ュ ー ロ ンの数 を非 処 置 側. 非 処圖側脳幹組 et al:Hrain. Res. と 比 較 す る とPBS投. 62;. 2を 許 可 を 得 て 転 載). AxCALacZ投. 与 群 で は57.3±7.1%.. 与 群 で は56,2±3.7%と. 運 動. の 脱 落 を 認 め て い た,こ. れ に 対 し,AxCAhGDNF投. 群 で は72.0%±8.4%と. 有 意 に(pく0.05)運. 3一. ロ ン 与. 動 二s一. ロ ン脱 落 防 止 効 果 が 認 め られ た(第3図,第4図). 二-一. ロ ン のNADPH. diaphorase活. 性 は,. NOSの. 正00. 活 性 と相 関 し3}gel,ま た 運 動 ニ ュ ー ロ ン の 変 性 と と も に ゆ・Co齪701. 90. 誘 導 さ れ るio-n'55'聞1. AxCAhGDNFの. 中GONF. 置 側 の 疑 核 で のNOS活. r[L麗z. ー. 藝,。 ニ.a. NADPH. 性 の誘 導が 抑 制 され る ことが. diaphorase酵. 5図a-c).運. 投 与 に よ り,処. 素 組 織 染 色 に よ り 示 さ れ た(第. 動 ニ ュ ー ロ ン のChAT免. 疫 反 応 性 は,神. 経 損 傷 後 に 急 速 に 減 弱 す る こ と が 知 られ て い る .. 要70. 崔 ・・. がzsszs'Sl・ 謝, AxCAhGDNFの. 投 与 に よ り迷 走 神 経 抜 去. 後 の 疑 核 に お け るChAT免. 疫 反応性 が改 善 され るこ と. が 示 さ れ た(第5図d-f).PBSの. y SO. 後 のNOS活. 投 与 で は,神. 性 の 誘 導 は 抑 制 さ れ ず,. ChAT免. 経抜去 疫反応 性. も改 善 さ れ な か っ た, ao. x. a. 疑 核 に お い て,ア. 4. Week. 第3図 経 過.疑. デ ノ ウ イ ル スの 感 染 に対 す る 免疫 反. 応 を 示 す よ う な 炎 症 所 見 や 細 胞 浸 潤 は 認 め ら れ な か っ た,. 考. 迷 走 神 経 抜 去 後 の疑 核運 動 二 畠 一 ロ ン脱 落 の 時 間. 察. 核 に お い て 残 存 して い る運 動 ニ ュ ー ロ ン の 比 率. を プ ロ ッ ト し た(処. 置 側/非. 投 与 群,●:AxCAhGDNF投. 処 置 側)(n=4).■;PBS. 与 群 で あ る 、 平 均 値 ±S.D.(bars)を 討 に はOne一(actor. ANQVA. (。p〈o.os),(Saito. K. 2003のFigure. 本 研 究 に よ り,AxCALacZは. 与 群,△:AxCALacZ投. and. 示す 、統 計学的 検 Scheffe. et al:Brain. Res. testを. 迷 走 神 経 抜 去 に よ り損. 傷 され た 疑 核 運 動 ニ ュ ー ロ ンにe・galactosidase遺. 用 いた. 伝子. を 尋 入 で き る こ とが 示 され た.こ れ は頸 静脈 孔 を 通 じて. 962:61-67,. 拡 散 して い った ウ イ ル スベ ク ターが 傷 害 さ れ た 軸 索 断 端. 4を 許 可 を 得 て 転 載). に取 り込 まれ,逆 行 性 軸 索 輸 送 に乗 せ て運 動 二 ー. ロン. の 細 胞 体 ま で 運 搬 さ れ て ウ イ ル ス ベ ク タ ー に組 み 込 ま れ た 外 来 遺 伝 子 が 発 現 す る た め と思 わ れ る.ま. たRT・. PCRに. 処置側. よ り,外 来 ヒ トGDNF遺. 伝 子mRNAが. 脳 幹 組 織 に存 在 す る こ とが 確 認 され,免 疫 組 織 染 色 に よ り,AxCAhGDNF投 一T341一. 与 後 に疑 核 運 動 二s^ロ. ンに,導.

80巻.,号(平. 鰯. 慶態医学. 成15年12月). .爵. 鱒. . ﹁ ウ. ...L.. . .' の.. . .塵. ・ ,∫毛. ・・ ヤ.. モ1`≧.澗ト. 第4図. 迷 走 神 経 抜 去 後4週. 処 置 側(a;お. の 疑 核 運 動 ニ ュ ー ロ ン,PBS. よ び 処 蓋 側(b,c)の. 疑 咳 を 示 す,疑. 成 は 認 め な か 一〉た(c).(a)と(b)は et a1:Brain. Res. Ca, b)あ. 間 一 切 片 で あ る.ト. 962:61-67,2003のFigure. る い はAxCAhGDNF(c)を. 核 に お い て,ア. 8を. 」. 、o. 抜去 後 に投 与 した非. デ ノ ウ イ ル ス 感 染 を 示 す よ う な 細 胞 浸 潤 や 血[管 造. ル イ ジ ン ブ ル ー 染 色.(X200)Bars=50. Nm.(Sailo. K. 許 可 を 得 て 転 載). 糊. 鍵.. 隷慧 蟹 ㌦悪. 凱.・:ご∼:軸. 嚢難譲蓬. 雛灘総. 第5図. 迷 走 神 経 抜 去 後14日. れ ぞhAxCALac2(b.. のNADPH酵. e;あ. 投 与 後 で は 処 置 側 に お い てLosの 抜 去 鍛1こAxCAhGt}NFを お よ び(d)と(c)は,同 のFigure. 5を. 素 組 織 染 邑(a・c)お. る い はAxCAhGDHF(c,. f)が. 強 い 発 現(b)とChATの. 投 与 す る と,. NOSの. よ び 処 置 後7日. 一 切 片 で あ る.(X209)Hars. 一T3A2一. 処 置 側(a,. 免 疫 反 応 牲 の 明 らか な 減 弱(e)が. 発 現 が 抑 制 さ れ(C),. 許 可 を 得 て 転 職). のChATの. 投 与 さ れ て い る.非. ChATの. r50μm.(Sailo. 免 疫 組 織 染 邑(d-f).そ d)に. 比 べ.. AxCALac2. 観 察 され た,し. か し神 軽. 免 疫 反 応 性 が 改 善 した(`).(a)と(C) K. et al=Brain. Res. 962;61-67,2003.

面 薦:疑 核 へ のGDNF遺. 入 され たGDNF遺. 伝子導入効果の検討. ロ ン に 対 す る 保 護 効 果 を 示 し て い る と 思 わ れ た .発. 伝 子 が 発 現 して い る こ と が 示 さ れ た.. 脳 神 経 の 抜 去,切 断 あ る い は 挫 滅 と い っ た損 傷 に よ る 二-一. たGDNFは,疑. ロ ンの 広 範 な 変 性 は,処. で始 ま るこ. て お り鋤,顔. 免疫組 織染. と も わ か っ て い るGDNF・. 置 後2日. と が わ か っ て い る が59,,今. 回 のRT・PCRと. 色 の 桔 果 は,AxCAhGDNFが の 変 性 開 始 の 初 期 か ら,損 し てGDNF. か ら9日. 神経損傷後 にニ ューロ ン 傷 さ れ た 運 動 二3. はGDNF・. ロ ンに対. な お,成. 体 超 歯 類 で は.・末 梢 神 経 の 切 断 や 挫 滅 で は 運 動. 一ー. ロ ンの 脱 落 を 認 め ず,末. 運動. a一. れ. 研 究 のX-gal酵. ら れ る こ と か ら,遺 し たGDNFに. 帯 運 動 ニ ュ ー ロ ン保 護. 走 神 経 抜 去 モ デ ル が 適 当 と 考 え,こ. びparacrineでt91用. 素 組 織 染 色 の 結 果 で も決 して. も作 用 す る と 考 え. 伝 子 導 入 され た 二 ー. か し 今 後 は,神. 率 の 高 いadeno・associated. 落 を 認 め た が,こ. の 開 発,さ. ロ ンの 著 明 な 脱. れ は顔 面 神 経抜 去 後 の 顔 面 神 経 核 あ る. ら にHepatocy[e. な ど運 動 二 ー. 経 へ の導 入 効. virus(AAV)ベ. よ る 遺 伝 子 導 入56}と の 比 較 や,よ 核 迎 動 二3一. ロ ンか ら 発 現. よ り 疑 核 全 体 の 昌 ニ ー ロ ン脱 落 防 止 効 果. が 発 現 し た と 思 わ れ る.し. を 用 い た. 迷 走 神 経 抜 去 に よ り,疑. るい 介 し. した と 考 え ら. た わ け で は な か っ た が,paracrineで. こで 今 回 は神 軽 栄 養 因 子 を 組 み 込 ん だ ア. 効 果 の 検 討 に,迷. 介 して,あ. 疑 核 全 て の ニ ュ ー ロ ン に 外 来 遺 伝 子 が 導 入 ・発 現 し て い. 梢 神 経抜 去 に よ って の み. デ ノ ウ イ ル ス ベ ク タ ー に よ る,声. α 及 びRetを. α及 び 神 経 細 胞 接 着 分 子 のNCAMを. れ る.本. ロ ンの 著 明 な 脱 落 を お こ す こ と が 知 ら れ て い. る4鳳5ト6".そ. 面 神 経 核 で は 神 経 損 傷 後 に 誘 導 さ れ る衡に. て 儲'""autocrine及. aF1伝子 を 導 入 可 能 で あ る こ と を 示 し て い る.. 現 し. 核を 含む運動神 経核 で胎生期 に発現 し. クターに. り強 力 な プ ロ モ ー タ ー. growth. factor(HGF)69》. ロ ン保 護 作 用 の あ る 他 の 神 経 栄 養 因 子 と. いは脊髄 神 経抜 去 後 の脊 髄前 角 と同 様 の 変化 で あ っ. の比 較 や 複数 の神 経 栄 養 因 子 の 同 時 投 与 な ど様 々 な 条 件. た3a'9}.. を 検 討 す る 必 要 が あ ろ う.. AxCAhGDNFを. AxCALac2あ. る い はPBSを. 置 後2週,4週 れ た.加. 投 与 し た ラ ッ トに 比 べ,処. ニ ュ ー ロ ン の 脱 落 後,残 す る こ と が,喉. で 有 意 に 運 動 ニ ュ ー ロ ンの 脱 落 が 防 止 さ. え て,AxCAhGDNF投. 疑 核 運 動 二S NOS活. 投 与 し た ラ ッ ト で は,. 与 に よ り。 損 傷 さ れ た. ロ ンに お い て,NOS活. 性 は,迷. 性 が 抑 制 さ れ た.. 走 神 経 切 断 に よ り迷 走 神 経 背 側 運 動 核. と 疑 核 に お い て 湧 導 さ れ,そ. 頭 の 神 経 麻 痺 後 の 過 誤 支 配 の 一 因 と考 え. ら れ て い る20'2D.ア. デ ノ ウ イ ル ス を 用 い たGDNFに. る 遺 伝 子 治 療 は,頭. 頸 部 手 術 に際 して の反 回 神 経 あ る い. は迷 走 神 経 損 傷 時 に,損 で 運 動..y一. の 活 性 は 神 経 損 傷 後10日. 存:ニ ュ ー ロ ンで 筋 肉 を 再 支 配. よ. 傷 部 位 に ベ ク ター を 投 与 す る事. ロ ンの 脱 落 防 止 や 喉 頭 筋 の過 誤 支 配 の 防 止. 前 後 が ピ ー ク で あ る こ と が わ か っ て お り 瓢6}ひNOS活. に 有 効.とな る 可 能 性 が あ る と 思 わ れ た.反. 性 の 誘 導 は 運 動 二 昌 一 ロ ンの 脱 落 が お こ る 際 に 重 要 な 役. 吻 合 術 後,喉. 割 を 果 た し て い る と 考 え られ て い るa一.a。 NOS活. め られ な い 場 合 で あ っ て も,神 経 損 傷 後 の モ ー タ ー ユ ニ ッ. 性 は. 回 神経 の 端 々. 頭 筋 の 筋 霜 図 上 で は喉 頭 筋 に過 誤 支 配 が 認. 反 回 神経 の切 断 あ るい は挫 滅 に よ り疑 核 運 動 ニ ュー ロ ン. トの 減 少 に よ り,筋. で も 誘 導 さ れ る62'.Nitroarginineあ. 再巡 動 化 した 声帯 の 動 き も正 常 側 に 比 べ て 動 き が 小 さい. L・arginine. methyl. ester(L・NAME)と. の 阻 害 剤 に よ り 神 経 抜 去 後 のNOS活 の 後 の 運 動 二3一. ・nhro・. い っ たNOS 性 の誘 導 お よ び そ. ロ ン の 脱 落 が 防 止 さ れ る こ と も報 告 さ. れ て い る`1.691.こ れ ら の こ と か ら,今 AxCAhGDNFの. る い はNω. 投 与 に は,迷. 電 図 波 形 の,振. 幅 が 減 少 し,. こ と が 報 告 さ れ て い る10.11).GDNF遺. 伝 子 の 導 入 は,こ. の よ う な 神 経 吻 合 術 に 併 用 す れ ば,運. 動. 少 を 防 止 し て モ ー タ ー_=ッ. 回 の 結 果 に よ り,. 動 数,振. ー. ロ ンの 減. ト数 を 保 ち,よ. り理 想 的 な. 走 神 経 あ るい は反 回 神 経. 爾 帯 の 再 運 動 化 を 得 ら れ る 可 能 性 が あ る と 思 わ れ る.神 経 吻 合 術 後,筋. 竃 図 上 の 神 経 再 生 電 位 は,術. 後5∼6週. 掴 傷 後 の 疑 核 運 動 ニ ュ ー ロ ンを 保 護 す る 効 果 が あ る こ と. で 認 め ら れ る101.ま た 神 経 損 傷 後 の 運 動 二3一. が 示 唆 さ れ た.ChAT免. 疫 反 応 性 は,顔. ChAT免. は 脊 髄 神 経 抜 去 後 にL週. 間 程 度 で 急 速 に減 弱 す る こ と. 面神経 あ る い. 疫 反 応 性 は,掘. 傷 後7週. が 知 ら れ て お り 鳳3職57・50),ま た 顔 面 神 経 切 断 後 の 成 体 ラ ッ トに お い て,GDNFの. 大 変 重 要 な 期 間 と 描 察 で き る.本. さ ら に,顔 AxCAhGDNF投. 局所 あ るいは皮下 投与 に よ. AxCAhGDNFの. ル ス ベ ク タ ー の 投 与 で,少. 疫 反 応 姓 が 改 善 す る と 報 告 さ れ て い る 鮎}. 面 神 経 あ る い は 脊 髄 神 経 抜 表 後 の 与 に よ り, ChAT免. 投 与 に お い て も,疑. 用 と 思 わ れ る.ま. 核 に お け るChAT は り迎 動. ロ. 月 程 度 は,. 研 究 で は,単. な く と も処 置 後4週. 回 の ウイ まで 長. 週間の効果 を得 る. た め に 多数 回 の投 与 を 要 しな い こ と は臨 床 的 に も大 変 有. 走 神経 抜 去 後 の. 免 疫 反 応 性 を 改 善 す る効 巣 が 認 め ら れ,や. 傷 か ら2ケ. 期 に わ た り効 果 が 認 め ら れ て お り.数. 疫反応性が 改善す. る こ と も 報 告 が あ る3a49レ.今 回,迷. ま で 徐 々 に減 弱 す る. こ と も知 ら れ て い る ζ と か らsri,掘 傷 後 の 運 動3}一 ン の 減 少 を く い 止 め る の に,損. りChAT免. ロ ンで の. る ま で に は10∼11週. 3. た,神. 経 吻 合 術 後,声. 帯 運動が回復 す. か か る こ と も 報 告 が あ りfor今. 後,. 遺 伝 子 導 入 効 果 の持 続 期 悶 を さ らに 検 討 す る こ と は有 意 一T343一.

慶慮医学. 義 と考 え られ る.こ れ に俸 い,ベ. 80巻4.号. (平成1511…12月). ク ターの 長 期 的 な 投 与 文. に よ る炎 症 反 応 を含 め た免疫 応 答 に関 す る検 討 を 行 う こ と は,今 後 臨 床 応用 を考 え て い く上 で も欠 か せ な い と思. 1)齋. わ れ る.本 研究 は,反 回 神経 あ る い は迷 走 神 経 の 切 断症. 仁,池. 谷 彰 浩,大. 田 麻 子,福. の 臨 床 的 観 察,日. 例 へ の 応 用 を主 な ター ゲ ッ トと して い るが,最 近 ウ イル ス ベ ク ター の 反回 神 経 へ の注 入 に よ うて も,導 入 した 遺. 藤 縦 一 郎.塩. 2)曙. 藤 康 一 郎,塩 仁,池. 伝 子 の疑 核 で の 発 現 が 可能 な こ とが 報 告 さ れ てお りM',. 3)Isshiki. 痺 と い った 神 経非 切 断 症 例 に対 して も,本 研 究 の 応 用 ・. Acta. 田 宏 之,小. 川 郁=片 刷 中. 谷 彰 浩,大. 田 麻 子,福. 木 幸. 側 性 喉 頭 麻 璋 症 例. 呂ki久,荒. 川ax:両. 木 幸. 側 性 反 回 神 経 麻 痺. 頭,且5:23-27,2003 in. Otolaryngol DM,. 呂 和 久.荒. 久 保 啓 介,茂. 田 宏 之,小. N:Progress. 4)Hartl. 久 保 啓 介,茂. 気 食 会.轍,印. 症 例 の 臨 床 的 観 察.喉. 外 傷 あ るい は術 中操 作 に よ る神 経 の 挫 滅 症 例 や 特 発 個i麻. 献. laryngeal. framework. surgery.. 120:120-127,2000. Brasnu. DF=Recurrent. laryngeal. nerve. 発 展 の 可 能 性 が 十分 に あ る といえ る. paralysis:Current. concepts. H卜Surgical巳options.. 総. 括. ラ ッ ト迷 走 神 経抜 去 に よ る疑 核 運 動 二-一. HT,. lions. ロ ン脱 落 誘. in the. 発 モ デ ルに 対 し,非 増 殖 型 アデ ノ ウ イル ス ベ ク ターを 用. 6)Rice. 伝 子 を 疑 核 に導 入 し,そ の 効 果 を 検 討 し. Head. l。成 体 ラ ッ ト迷 走 神 経 抜 去 に よ る疑 核 運 動 二3. ロ. ン脱 落誘 発 モ デ ルに対 し,頸 静 脈 孔 の神 経 損 傷 断 端 よ り. paralysis.. Arch. 8)Demis. まで 運 動 ニ ュ ー ロ ン脱 落 防 止 効 果 を. 10)Mu. LC,. in. 防 止 す る治 療 を行 え るよ うに な る可 能 悔 が 示唆 され た、. extralaryngeal. bilateral. abductor. 43:63-65,1946. l Carbon. dioxide. treatment. of. Rhinol. Laryngol. Otol. Li. Zhou. S. Cuan. reinnervalion. Z,. roe. with. tacnd. ロ ン脱 落 を. the. laser. bilateral. poste・. vocal. cord. 98:930.934,. the. ansa. Y,. Wen. W:Update. unilateralΨoca!cord. ccrvicalis. pa『. laryngoscope且06:. 1522一]527,1996. 伝 子 導 入 に よ り,迷 走 神経 障 害 後 の,疑. に対 して 遺 伝 子 導 人 を 行 い,疑 核 述 動 二3. H for. Ann. H,. ralysis. 4.将 来 的 に,迷 走 神 経 ・反 回 神 経 の 傷 害 さ れ たrf例. of. Kashima. IarynHeal. 認 め た。. 応 性 の改 善 効 果 を認 め た.. Laryngoscope. for. Otolaryngol. cordeclomy. 9)Zheng. 疫反. reinnervation.. 1989.. 伝 子の疑核 への導入を. 性 発現 の 抑 制 お よ びChAT免. laryngeal. l8:174-157,199fi. arylenoidectomy. DP.. 疑 核 へ の 選 択 的 導 入 に 成功 した.. 核 に お け るNOS活. considera・. of unilateral. DG:Amodification to. paralysis.. 2,同 モ デ ル に 対 し,GDNF遺. Neck. approach. rior. 3,GDNF遺. J 80;i7-21,. TM:Anatomic. treatment. DH:Laryngeal. 非 増 殖 型 アデ ノ ウ イル スベ ク タ ーを 用 いて 外 来 遺 伝 子 の. 入 後4週. treatment:Part. Throat. 92:1049-1059,1982 7)Woodman. tc'm. McCulloch. surgical. paralysis.. 行 い,導. and Nose. 27-28,2001 5)Hotfman. い てGDNF遺. Ear. Yang. SL:Electromyographic. anastomosis. dogs.. 11)Rubio. oI. lhe. Laryngoscope A.. mental rpngcal. MR,. on. nerve. on. laryngeal. end nerve. 100:1009-1017.1990. Fernandez. study. study. recロrrent. Figols. J, Rama. neurorrhaphy. in. dogs.1. of. J:Experi-. the. Laryngol. recurrent. Otol. la-. I IO:748-. 753.1996 12)Crumley. 稿 を 終 え る に 当 た り,ご 指 導,ご. 高 閲 を賜 った慶慮 義 塾. 大 学 耳 鼻 咽 喉 科 学 教 室 小 川 郁 教 授 に 深 甚 な る謝 意 を 表 し ま ず.ま. た 本 研 究 の 遂 行 に 当 た り,終. 始 懇 切 に多大 な る ご指. 導 か つ 激 励 を 賜 り ま した 慶 晒 義 塾 大 学 耳 鼻 咽 喉 科 学 教 室 塩 谷 彰 浩 講 師 に 心 よ り感 謝 い た しま す.ま ご指 導,ご. た 本研究 に 貴重 な. 助 言 を い た だ き ま した 東 京 椰 神 経 科 学 総 合bJf究. RL.]zdebski. ryngcal. reinnervation. Laryngoscope. 科 学 会,第102回 Meeting gology-Head. of. お よ び 第14回. 日 本 耳 鼻 咽 喉 科 学 会 総 会,zoos the and. American Neck. Academy. Surgery,. of. Research. 日本 喉 頭 Annual Otolaryn・. laryngeal. nerve. paralysis.. Laryngoscope. 14)Green. DC,. evaluation. followin8]a・. hypoglossi. transfer.. anastomosis. Berke of. vocal. cervicalis. Graves. unilateral. MC. ce「vicalis. cord. recurrent laryngeal. 101:384-368,1991 GS,. ansa. for. to. paralysis:future. reinnervation.. Afunctional. ne「ve. t「ansfer. for. directions. Otolaryngol. Head. unト. fo「1a・. Neck. Surs. IOA:A53-466,1991 15)Olson. DE,. Goding. perceptual ansa. Forumに. ansa. RL:Update:Ansa. ryngcal. 本 研 究 の 要 旨 の 一 部 は 。 第13回. by. quality. 96:611-616,1996. 13)Crumley. lateral. 所 の 渡 部 和 彦 先 生 に 深 謝 い た し ます.. K:Voice. GS,. Michael. evaluation. cervicalis. of. transfer.. DD:Acoustic. laryngeal. and. reinnervation. Laryngoscope. by. 108:1767一. 且772,亘998. お い て 発 表 した.. 16)Mahicu Jet,. HF. de. reinnervation. 一T344一. van. Wilde. Lith・Bi餌JT, P:Selective. in. cats. using. Grcenhout. C,. laryngeal a phrenic. Tonnaer abductor. nerve. transfer.

噺 藤:疑 核 へ のGDNFiｮ伝. and. ORG. 2766.. Arch. Otolaryngol. Head. Neck. 子 導 入効.果の 検 討. Surg. from. U9:772-776,1993 且7)Tucker. HM:Reinnervation. lyzed. larynx.. of. Ann. O[ol. the. Rhinol. units【erany. Laryngol. para・. HM,. Rusnov. unila電eral. M:Laryngeal. vocal. Oyol. cord. Rhinol. 且9)GodinR. 31)Novikov. Laryngol. parclyzed. reinnervation. paralysis. :10ng一. pedide. vocal. Cor. 【erm. resu且ts.. 20)Crumley. cord.. Clin. goscope. o「. PW.. DH.. North. synkinesis.. Coltrera. following. Neuroana重omit. Am. and. Otol. Laryn-. 22)Houenou. LJ.. GDNFduring. RW. spinal. Res. 23)Lapchak. the. rat. V,Inouye. Jiao. G,. Li. and. Matheson. PJ,. CR. of. neurotrophic. using. as. a. L.. Lo. AC,. Williams. Yan. retro・. Prevette. survival. by. injury.. Cell. Cell. 373. vectors. cell. linaderived. neuroprotection J. of. targeted. vector. carrying. Revah. F.. Pradicr of. adenovirus-mediated Neurosci. spi・. Adenoviral for. the. gene. factor.. Exp. 29)Kishino. for. glial. Neurol. Noguchi motor. H:BDNF. L, Houenou. death. Neurol W,. Lin. LJ:Rescue. Palfi R,. Kennel. P,. H,. neuron. Chu. S,. Roitberg. P,. Y,. MD.. Ueglon. N,. prevented. CDNFin. by. primate. modcls. 290:767-773,2000. Pettmann. Schmalbruch. SY.. Taylor. Hantraye. of. aging.. Ma. EY,. Science. B, Kahn. Vigne. E,. A:Gene. disease. using. factors.. Nature. neurotrophic. Gene. Akli. S,. therapy. of. adenoviral. vec・. Med. therapy. diseases.. A,. creased. muscle. 3:429-. strategies. Histol. in. Histopathol. of. A.. Sendtner. ciliary. neurotrophic. 16. of. axotomized. Ieads. motor. 40)Estevez. to. AG,. Beckman. neurons.. Tatsuno. T, and. and. Nakayama. reverses induces. C, adult. axonal. rat. of. Lei adult. the. paralyzed. lar・. Coleman. ME,. factor. larynx:single. vs.. Head. FlintPR'. I gene. Neck. transfer. multiple. Surg. into. injection.. 125:555-560,. .. Spear. N,. Manuel of. formation. neurons. in. SM,. Barbcito. endogenous in. culture.. L.. the. nitric survival. Prog. Brain. Radi. oxide and. Res. mouse. Oppenheim. ou4. RW,. moloncurons. oxide. 92)Wu. RS, in. Leong facial. W:Expression in. 一T345一. R, and. death. of. l IS:269-. SK.. Yeoh. KH:T}1e. motoneuronal. death.. role Brain. of Res. nitric 698. 163-168,1995 M,. io-. insulin-like. 280,且998 41)Ruan. 144:273-288,1997 LFH,. Jr. BW,. IS:Role. peroxynilrile motor. Y,. human. into. HW,. and. 9:2039-2047,1998. growth. Otolaryngol. Alila. endplates. after. transfer. O'Malley. rat. ME.. motor. 且999 fac. factor. size. Ther. insulinlike. paralyzed. M. of. l gene. Gene A,. lr. BW,Coleman. fiber. factor Hum. Human 1. O'Malley. PW:Reinncrvation. 39)Shiotani by. factors.. neurotrophic. degeneration. Exp Wu. 1. Mallet!.. motoneuron. prevents. neuron. growth. 30)Li. Ishige. delivery. Flint. growth. 3:765-770,1497. A,. 1.. Pyzalski D,. basaI. during. Chen. disease.. YRM. Arch. transfer. survival kited. L. Loquet. Lorrain. brain-derived. long-term Nature. R.. gene. and. for. transfer on. Bloch. Trono. P.. Y:Direct gene. Neurodegeneration. vector. 38)Shiolani. 48:281-285.1997 Gotz. Z,. ncurode6enerative. transduction. neurotrophic. Res C.. Ling. motor. ynx.. A:Prevention. 26)Gravel. 床 神. Barneoud. Lamour [actor. Holden]E,. P. F,. J,. ME.. hlcBride]. WD,. G,. F.. neurons. Emborg. 37)Gimenez. Neurosci. HD:Neuroprotection. neurotrophic. YRM.. of. 1857-. 436,1997. l53:102-112,1998 ?7)Gimt:nez. death. 883-893,2001. Shinc. adenoviral. Y.. I1. adenovirus:effect. 3:76-86,1996. Parkinson's. tors. Mallet. Dis. P,. Revah. carrying. population.. following. an. prevents. growth. IH.. Brown. of. transduction. confers. F,. cholinergic. lentiviral. 286. 且,1997. with. Kawazoe. NcuroReport. nerve. Aebischer. treatins Res. Naturc. adenoviral genes. motoneurons. spinal. Y=Adenovira【vector・. transfer. recombinant. Carvey for. for. schemes.. transduced. BJ,. Eta. T,. Jazat-Poindessous. Revah. Neurobiol. derived. Tissue. HD:Targeted. with factor. 且7:6504-65且. Privat. a. BZ,. line. molecule. Shine. the. 26)Baumgarlner nal. E,. marine. exceeds. rat 79:765-774,. ー キ ン ソ ン 病 に 対 す る 遺 伝 子 治 療.臨. forebrain. 269-290.1995. neurotrophic. regeneration. Ohashi. motoneurons.. Leventha]L,. implications. saving. neurons. K,. MN.. 36)Haasc. RM:Neuron. CNS. USA. 41;1157-1159.2001. using. 179-189,199fi. BJ.. de-. Sci. adult. Neuroscience. gene. 松 憤 一:パ. Vigne. Q:Pharmacological cell. diseases.. 25)Haumgartner. axonal of. K,. Inoue. 34)Castel-Barthe. LR.Cummins. (GDNF). therapeutic. neurodegenerative. vivo.. GDNF. intracerehral. following. glial. factor. 24)Lindsay. K,. 35)Kordover. S. Miller. characterization. cell-line. Acad. JO:Brain-derived. promotes. Watabe. facial. 経.. 286:219-223,1996. PA,. GDNF. 33)村. electromyography.. motoneuron. development. Tissue. T,. adult. fOO:797-806,1991. Oppenheim of. study and. LarynBOI. D:Regulation. in. physiologic tracers. Rhynol. Kellerth. survival in. Oyanagi. MD:Laryngeal. reinnervalion. fluorescent. glial. Nall. 1860,2000. 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