UJI AKTIVITAS ANTIOKSIDAN EKSTRAK ETANOL DAUN
BANGUN-BANGUN (Plectranthus amboinicus L.) TERHADAP
KADAR SUPEROXIDE DISMUTASE (SOD) PADA TIKUS
SKRIPSI
OLEH:
NADIYA ANANDITA NASUTION NIM 121501116
PROGRAM STUDI SARJANA FARMASI
FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
MEDAN
UJI AKTIVITAS ANTIOKSIDAN EKSTRAK ETANOL DAUN
BANGUN-BANGUN (Plectranthus amboinicus L.) TERHADAP
KADAR SUPEROXIDE DISMUTASE (SOD) PADA TIKUS
SKRIPSI
Diajukan sebagai salah satu syarat untuk memperoleh Gelar Sarjana Farmasi pada Fakultas Farmasi
Universitas Sumatera Utara OLEH:
NADIYA ANANDITA NASUTION NIM 121501116
PROGRAM STUDI SARJANA FARMASI
FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
MEDAN
PENGESAHAN SKRIPSI
UJI AKTIVITAS ANTIOKSIDAN EKSTRAK ETANOL DAUN
BANGUN-BANGUN (Plectranthus amboinicus L.) TERHADAP
KADAR SUPEROXIDE DISMUTASE (SOD) PADA TIKUS
OLEH:NADIYA ANANDITA NASUTION NIM 121501116
Dipertahankan di hadapan Panitia Penguji Skripsi Fakultas Farmasi Universitas Sumatera Utara
Pada tanggal: 1 Desember 2016
Disetujui Oleh:
Dosen pembimbing I Panitia Penguji,
Dr. Poppy Anjelisa Z. Hsb, M.Si., Apt. Prof. Dr. Urip Harahap, Apt.
NIP197506102005012003 NIP195301011983031004
Dr. Poppy Anjelisa Z. Hsb, M.Si., Apt.
Dosen pembimbing II NIP 197506102005012003
Prof. Dr. Rosidah, M.Si., Apt. Dr. Aminah Dalimunthe, M.Si., Apt.
NIP195103261978022001 NIP 197806032005012004
Prof. Dr. Rosidah, M.Si., Apt. NIP 195103261978022001
Medan, Desember 2016 Fakultas Farmasi
Universitas Sumatera Utara Dekan,
KATA PENGANTAR
Puji syukur kehadirat Allah SWT yang telah memberikan karunia yang
berlimpah sehingga penulis dapat menyelesaikan penyusunan skripsi yang
berjudul“Uji Aktivitas Antioksidan Ekstrak Etanol Daun Bangun-Bangun
(Plectranthus amboinicus L.) terhadap Kadar Superoxide Dismutase (SOD) pada
Tikus”. Skripsi ini diajukan untuk melengkapi salah satu syarat untuk
memperoleh gelar Sarjana Farmasi di Fakultas Farmasi Universitas Sumatera
Utara.
Pada kesempatan ini, dengan segala kerendahan hati penulis mengucapkan
terima kasih kepada Ibu Dr. Masfria, M.S., Apt., selaku Dekan Fakultas Farmasi
yang telah menyediakan fasilitas kepada penulis selama perkuliahan di Fakultas
Farmasi. Penulis juga mengucapkan terima kasih kepada Ibu Dr. Poppy Anjelisa
Z. Hsb., M.Si., Apt., dan Ibu Prof. Dr. Rosidah, M.Si., Apt., selaku dosen
pembimbing yang telah mengarahkan penulis dengan penuh kesabaran dan
tanggung jawab, memberikan petunjuk dan saran-saran selama penelitian hingga
selesainya skripsi ini.Ucapan terima kasih juga penulis sampaikan kepada
BapakProf. Dr. Urip Harahap, Apt., selaku ketua penguji, dan Ibu Dr. Aminah
Dalimunthe, M.Si., Apt., selaku anggota penguji yang telah memberikan saran
dan arahan untuk menyempurnakan skripsi ini, Bapak Prof. Dr. rer. nat. Effendy
De Lux Putra, SU., Apt., selaku dosen penasehat akademik yang telah banyak
membimbing penulis selama masa perkuliahan hingga selesai, serta kepada Denny
Satria, S.Farm, M.Si., Apt., selaku dosen di Laboratorium Farmakognosi FF USU
Penulis mengucapkan terima kasih sebesar-besarnya kepada keluarga
tercinta, Ayahanda M. Effendi Nasution, M.M., dan Ibunda Yayan Maryantiserta
adik-adik Aulia dan Rifdah, yang telah memberikan semangat dan dukungan yang
tak ternilai. Penulis juga mengucapkan terima kasih kepada sahabat tercinta
Rendy Sadewo, sahabat sejawat Gita, Zakia, Rini, Sri Rizki, Marito, Nevi,
Hendra, para Asisten Laboratorium Farmasi Komunitas, dan teman-teman
mahasiswa/i farmasi angkatan 2012yang selalu mendoakan danmemberi
semangat.
Penulis menyadari sepenuhnya bahwa penulisan skripsi ini masih belum
sempurna. Oleh karena itu, penulis mengharapkan saran dan kritik yang
membangun demi kesempurnaan skripsi ini. Akhir kata penulis berharap semoga
skripsi ini bermanfaat bagi ilmu pengetahuan khususnya di bidang farmasi.
Medan, 21Desember 2016 Penulis,
Nadiya Anandita Nasution NIM 121501116
SURAT PERNYATAAN
Saya yang bertanda tangan di bawah ini,
Nama : Nadiya Anandita Nasution
Nomor Induk Mahasiswa : 121501116
Program Studi : S-1 Farmasi Reguler
Judul Skripsi : Uji Aktivitas Antioksidan Ekstrak Etanol Daun
Bangun-Bangun (Plectranthus amboinicus L.) Terhadap Kadar SuperOxide Dismutase pada Tikus.
Dengan ini menyatakan bahwa skripsi ini ditulis berdasarkan data dari hasil pekerjaan yang saya lakukan sendiri, dan belum pernah diajukan oleh orang lain untuk memperoleh gelar kesarjanaan di Perguruan Tinggi dan bukan plagiat karena kutipan yang ditulis telah disebutkan sumbernya di dalam daftar pustaka.
Apabila dikemudian hari ada pengaduan dari pihak lain karena di dalam skripsi ini ditemukan plagiat karena kesalahan saya sendiri, maka saya bersedia menerima sanksi apapun oleh Program Studi Farmasi Fakultas Farmasi Universitas Utara, dan bukan menjadi tanggung jawab pembimbing.
Demikianlah surat pernyataan ini saya perbuat dengan sebenarnya untuk dapat digunakan jika diperlukan sebagaimana mestinya.
Medan, 21 Desember 2016 Yang membuat pernyataan,
Nadiya Anandita Nasution NIM 121501116
UJI AKTIVITAS ANTIOKSIDAN EKSTRAK ETANOL DAUN
BANGUN-BANGUN (Plectranthus amboinicus L.) TERHADAP
KADAR SUPEROXIDE DISMUTASE(SOD) PADA TIKUS
ABSTRAKStres oksidatif yang terjadi pada organ-organ dalam tubuh seperti hati, berhubungan dengan pembentukan Reactive Oxygen Species (ROS) yang dapat diatasi oleh antioksidan endogen. SuperOxide Dismutase (SOD) merupakan salah satu antioksidan endogen yang mampu mengkatalisis reaksi dismutase radikal bebas anion superoksida menjadi senyawa yang lebih stabil yaitu hidrogen peroksida (H2O2) dan oksigen (O2). Daun bangun-bangun memiliki kandungan flavonoid berupa senyawa polifenol yang berpotensi sebagai antioksidan non-enzimatis dan penangkap radikal bebas. Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mengetahui kemampuan ekstrak etanol daun bangun-bangun (EEDBB)dalam meningkatkan enzim SOD dan mencegah kerusakan hati pada tikus yang diinduksi oleh doksorubisin.
Uji aktivitas SOD dengan EEDBB dilakukan terhadap tikus betina. Perlakuan dibagi 6 kelompok masing-masing dengan jumlah tikus sebanyak 5 ekor, yaitu: kelompok kontrol CMC Na 1% (normal), kelompok kontrol negatif (doksorubisin 20 mg/kg bb), 3 kelompok uji EEDBB dan kelompok kontrol positif (Rutin 50 mg/kg bb). Semua kelompok uji EEDBB (dosis 250, 500, 750 mg/kg bb) diinduksi dengan doksorubisin hanya pada hari ke-8 dan ke-9 saat pengujian berlangsung. Tikus dipuasakan selama 12 jam, selanjutnya pada hari ke-10 dianestesi dengan ketamin 70 mg/kg bb untuk pengambilan serum darah dari jantung. Kemudian, diukur kadar SOD melalui metode spektrofotometri dan pengambilan organ hati sebagai preparat histologi yang diamati secara mikroskopik. Data hasil pengujian kadar SOD dianalisis secara statistik menggunakan one way ANOVA dilanjutkan dengan uji Post Hoc Tukey HSD
dengan program SPSS versi 17.0.
Hasil uji aktivitas SOD ekstrak EEDBB pada serum darah tikus menunjukkan rata-rata nilai aktivitas SOD pada kelompok CMC Na adalah 4,626 ± 0,258 U/ml yang menunjukkan standar nilai aktivitas Enzim SOD pada keadaan normal, sementara kelompok Rutin memiliki aktivitas SOD tertinggi 5,594 ± 0,206 U/ml dan kelompok doksorubisin memiliki aktivitas SOD paling rendah 1,956 ± 0,088 U/ml. Aktivitas SOD terlihat mengalami peningkatan pada 3 kelompok uji EEDBB seiring dengan naiknya dosis yang diberikan. Pada kelompok EEDBB 250 mg/kg BB 2,446 + 0,152 U/ml, EEDBB 500 mg/kg BB 3,086 + 0,170 U/ml, dan EEDBB 750 mg/kg BB 4,344 + 0,421 U/ml. Hasil gambaran jaringan hati menunjukkan sel yang diberi EEDBB masih menyerupai sel normal dan sel yang diberi doksorubisin menunjukkan kerusakan hati yang parah. Dapat disimpulkan bahwa EEDBB memiliki kemampuan sebagai antioksidan dalam meningkatkan aktivitas SOD, dan dapat mencegah kerusakan jaringan hati akibat stres oksidatif.
Kata kunci :Bangun-bangun (Plectranthus amboinicus L.), SOD, Stres oksidatif, jaringan hati
ANTIOXIDANT ACTIVITY TEST OF ETHANOLIC
EXTRACT OF BANGUN-BANGUN LEAVES (Plectranthus
amboinicus L.) ON SUPEROXIDE DISMUTASE(SOD) LEVELS
IN RATS
ABSTRACTOxidative stress that occurs in organs of the body such as the liver, associated with the formation of Reactive Oxygen Species (ROS) which can be solved by endogenous antioxidant. Superoxide dismutase (SOD) is one of the endogenous antioxidants that is capable to catalyze the free radical superoxide anion into the more stable compounds are hydrogen peroxide (H2O2) and oxygen (O2). Bangun-bangun leaves contain flavonoids such as polyphenolic compounds that have the potential as a non-enzymatic antioxidants and free radicals scavenger. The purposes of the study were to determine the ability of ethanol extract of bangun-bangun (EEDBB) leavesin increasing SOD enzyme, and preventing liver damage in rats which induced by doxorubicin.
SOD activity test with EEDBB conducted in female rats. Treatment divided into 6 groups each of rats as much as 5 individuals, specifically : a CMC Na 1 % control group (normal), the negative control group ( doxorubicin 20 mg/kg bw) , 3 test groups EEDBB, and the positive control group ( Rutin 50 mg/kg bw ). All the test group EEDBB ( doses of 250 , 500 , 750 mg/kg bw) were induced by doxorubicin only on the 8th and 9th while testing in progress.Rats were fasted for 12 hours, then on day 10 they were anesthetized with ketamine 70 mg/kg bw for taking the blood serum from the heart. Then, measured SOD level through the spectrophotometric method and taking the liver as histology preparations which were observed microscopically. SOD test data were statistically analyzed using One Way ANOVA followed by Tukey HSD Post Hoc test with SPSS version 17.0.
The result of the SOD activity of EEDBB in the blood serum of rats showed average value of the SOD activity in the CMC Na group was 4.626 ± 0.258 U/ml it shows the standard value of the activity of SOD enzyme in normal circumstances, while the SOD activity of Rutin was the highest 5.594 ± 0.206 U/ml and doxorubicin group had the lowest SOD activity 1.956 ± 0.088 U/ml. SOD activity seemingly increased in three test groups EEDBB along with rising doses administered. In the group EEDBB 250 mg/kg BW 2.446 + 0.152 U/ml, EEDBB 500 mg/kg BW 3.086 +0.170 U / ml, and EEDBB 750 mg/kg BW 4.344 + 0.421 U/ml. The results showed the picturesof rat liver tissue from EEDBB still resemble normal cells and cells by doxorubicin showed severe liver damage.It can be concluded that EEDBB has the ability as antioxidant to increase the activity of SOD, preventing damage of liver tissue caused by oxidative stress.
Keywords: Bangun-bangun (Plectranthus amboinicus L.), SOD, Oxidative Stress, liver tissue
DAFTAR ISI
Halaman
JUDUL ... i
LEMBAR PENGESAHAN ... iii
KATA PENGANTAR ... iv
SURAT PERNYATAAN... vi
ABSTRAK ... vii
ABSTRACT ... viii
DAFTAR ISI ... ix
DAFTAR TABEL ... xiv
DAFTAR GAMBAR ... xv
DAFTAR LAMPIRAN ... xvi
BAB I PENDAHULUAN ... 1 1.1 Latar Belakang ... 1 1.2 Perumusan Masalah ... 3 1.3 Hipotesis ... 4 1.4 Tujuan Penelitian ... 4 1.5 Manfaat Penelitian ... 4
1.6 Kerangka Pikir Penelitian ... 5
BAB II TINJAUANPUSTAKA ... 6
2.1 Uraian Tumbuhan ... 6
2.1.1 Sistematika Tumbuhan ... 6
2.1.2 Sinonim... 6
2.1.4 Nama Asing ... 7
2.1.5 Morfologi Daun Bangun-Bangun ... 7
2.1.6 Kandungan Kimia Daun Bangun-Bangun ... 8
2.1.7 Khasiat Daun Bangun-Bangun ... 8
2.2 Uraian Kandungan Kimia Daun Bangun-Bangun ... 8
2.2.1Flavonoid ... 8 2.2.2Saponin ... 9 2.2.3 Glikosida... 9 2.2.4 Steroid/Triterpen... 9 2.3 Metode Ektraksi... 10 2.4 Radikal Bebas ... 12
2.4.1 Radikal Ion Superoksida (O2-) ... 13
2.5 Stres Oksidatif ... 14
2.6 Antioksidan... 15
2.7 Flavonoid sebagai Antioksidan Non-Enzimatis ... 17
2.8 Doksorubisin... 19
2.9 Superoksida Dismutase (SOD) ... 21
2.10 Histologi………. ... 23
BAB III METODE PENELITIAN... 25
3.1 Alat dan Bahan ... 25
3.1.1 Alat ... 25
3.1.2Bahan ... 25
3.1.3Hewan Percobaan ... 26
3.2.1 Pengambilan Bahan ... 26
3.2.2Determinasi Tumbuhan ... 26
3.2.3 Pembuatan Simplisia ... 26
3.3 Pemeriksaan Karakteristik Simplisia ... 27
3.3.1 Pemeriksaan Makroskopik dan Organoleptik ... 27
3.3.2 Pemeriksaan Mikroskopik ... 27
3.3.3 Penetapan Kadar Air Simplisia ... 27
3.3.4 Penetapan Kadar Sari Larut dalam Air ... 28
3.3.5 Penetapan Kadar Sari Larut dalam Etanol ... 28
3.3.6 Penetapan Kadar Abu Total... 28
3.3.7 Penetapan Kadar Abu Tidak Larut dalam Asam ... 29
3.4 Skrining Fitokimia Simplisia ... 29
3.4.1 Pemeriksaan Flavonoid ... 29 3.4.2 Pemeriksaan Alkaloid ... 30 3.4.3 Pemeriksaan Saponin... 30 3.4.4 Pemeriksaan Tanin ... 30 3.4.5 Pemeriksaan Glikosida ... 31 3.4.6 Pemeriksaan Steroid/Triterpenoid ... 31
3.5 Proses Pembuatan Ekstrak Etanol Daun Bangun-Bangun (EEDBB) ... 32
3.6 Karakterisasi dan Skrining Fitokimia Ekstrak Etanol Daun Bangun-Bangun (EEDBB) ... 32
3.7 Penyiapan Pereaksi dan Bahan Uji ... 32
3.7.1 Pembuatan Suspensi CMC Na 1% b/v ... 32
3.7.3 Pembuatan Suspensi Ekstrak Etanol Daun Bangun-
Bangun (EEDBB) ... 33
3.7.4 Induksi Stress pada Tikus ... 33
3.7.5 Pembuatan Larutan Buffer Formalin 10% ... 33
3.8 Uji Aktivitas Antioksidan EEDBB (Ekstrak Etanol Daun Bangun-Bangun) dengan Metode Spektrofotometri UV- Visible terhadap Kadar SOD ... 33
3.8.1 Penyiapan Hewan Percobaan ... 34
3.8.2 Pengambilan Serum darah Tikus ... 35
3.8.3 Pengukuran Kadar SOD pada Serum Darah Tikus .... 35
3.9 Pemeriksaan Histopatologi Jaringan Organ Hati Tikus dengan Pewarnaan Hematoxylin-Eosin (HE) ... 37
3.9.1 Pembuatan Preparat Blok Paraffin ... 37
3.9.2 Pewarnaan Hematoxylin-Eosin ... 37
3.10 Analisis Data ... 38
BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN ... 39
4.1 Hasil Identifikasi Tumbuhan ... 39
4.2 Hasil Karakteristik Daun Bangun-Bangun dan Simplisia ... 39
4.2.1 Pemeriksaan Makroskopik ... 39
4.2.2 Pemeriksaan Mikroskopik ... 39
4.2.3 Karakterisasi Simplisia dan EEDBB ... 40
4.3 Skrining Fitokimia Simplisia dan EEDBB ... 41
4.4 Pengaruh EEDBB pada Aktivitas SOD pada Tikus ... 42
4.5 Pemeriksaan Histologi Jaringan Hati Tikus ... 48
BAB V KESIMPULAN DAN SARAN ... 53
5.2 Saran ... 53
DAFTAR PUSTAKA ... 54
DAFTAR TABEL
Tabel Halaman
4.1 Hasil Karakteristik Simplisia dan EEDBB ... 40
4.2 Hasil Skrining Fitokimia Simplisia dan EEDBB ... 41
4.3 Absorbansi Standar SOD ... 43
4.4 Aktivitas SOD Ekstrak Etanol Daun Bangun-Bangun pada darah
DAFTAR GAMBAR
Gambar Halaman
1.1 Kerangka Pikir Penelitian ... 5
2.1 Mekanisme pertahanan antioksidan endogen Superoksida dismutase (SOD), Katalase (CAT), Glutation peroksidase (GPx) dan Glutation Reduktase (GR) terhadap radikal bebas .... 23
4.1 Kurva Standar SOD ... 43
4.2 Pengaruh Kelompok Perlakuan terhadap Aktivitas SOD ... 45
DAFTAR LAMPIRAN
Lampiran Halaman
1 Surat Rekomendasi Persutujuan Etik Penelitian Kesehatan ... 59
2 Surat Hasil Identifikasi Daun Bangun-Bangun ... 60
3 Bagan Pembuatan Ekstrak Etanol Daun Bangun-Bangun ... 61
4 Gambar Makroskopik Daun Bangun-Bangun ... 62
5 Bagan Alur Penelitian ... 63
6 Gambar Mikroskopik Serbuk Simplisia ... 65
7 Gambar Alat dan SOD Assay-Kit ... 66
8 Perhitungan Karakterisasi Simplisia dan EEDBB ... 67
9 Data Hasil Pengukuran Standar SOD dan Kurva Standar SOD 72 10 Data Hasil Pengukuran aktivitas SOD Sampel... 73
11 Perhitungan Statistik Aktivitas SOD Ekstrak Etanol Daun Bangun-Bangun ... 75
12 Contoh Perhitungan Dosis ... 81
13 Gambar Sampel yang Digunakan ... 84
14 Hasil Analisis SPSS Aktivitas SOD ... 86
15 Prosedur EnzyChrom™ SuperOxide Dismutase Assay Kit (ESOD100)….. ... 89
