Aktivitas Anti-Peradangan Alkaloid Indole yang Diisolasi dari Bebuas (Premna serratifolia)

(1)

3

1

1 2

X

Investigasi fitokimia sebelumnya telah mengungkapkan adanya beberapa glikosida termasuk glikosida iridoid dan feniletanoid seperti premnethanoside A dan B, beberapa xanthone, steroid dan saponin, flavonoid, triterpenoid dan diterpenoid (termasuk premnones A dan C) dalam daun Premna serratifolia . Investigasi pada Premna serratifolia

Premna serratifolia (bebuas) merupakan tanaman obat yang tersebar luas di daerah tropis dan subtropis dan biasa digunakan dalam pengobatan tradisional. P. serratifolia merupakan semak atau pohon kecil yang tegak dan tegak, kurang lebih berduri pada batang dan cabang besar. Daun berseberangan atau melingkar dan utuh atau bergerigi. P. serratifolia mempunyai khasiat obat yang luar biasa dan sudah diteliti. Kajian farmakologi sebelumnya antara lain laporan penyakit seperti masuk angin, mengobati cacingan, menghilangkan bau mulut, infeksi paru-paru, diare, rematik, sakit kepala, obat penurun panas, hipolipidemik, anti inflamasi, antidiabetes,

depresan SSP, aktivitas antitumor dan dapat membantu memulihkan kesehatan wanita. setelah melahirkan [1], [2].

PERKENALAN

ABSTRAK

Bebuas (Premna serratifolia)

Aktivitas Anti-Peradangan Alkaloid Indole yang Diisolasi dari

Kata Kunci: Premna serratifolia, anti inflamasi, indole, alkaloid, bufotenin Jurusan Farmasi Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan Universitas Jambi

*Penulis koresponden: [email protected]

Beranda jurnal www.jpacr.ub.ac.id

Muhaimin Muhaimin, 1,2,3* Muhammad Irhash Shalihin,

Diterima 12 Februari 2021; Diterima 20 Juli 2021

p-ISSN : 2302 – 4690 | e-ISSN : 2541 – 0733

dan Madyawati Latief1

Ini adalah artikel akses terbuka yang didistribusikan berdasarkan ketentuan Creative Commons Attribution-NonCommercial 4.0 International yang mengizinkan penggunaan, distribusi, dan reproduksi tanpa batas dalam media apa pun, asalkan karya asli dikutip dengan

benar. (http://creativecommons.org/licenses/by-nc/4.0/) DOI: 10.21776/ub.jpacr.2021.010.02.584

Premna serratifolia yang dikenal dengan nama bebuas telah lama dimanfaatkan oleh masyarakat Melayu baik untuk makanan maupun obat tradisional. Khasiat yang paling menonjol dari tanaman ini adalah menyembuhkan wanita pasca melahirkan dan meningkatkan kesadaran bahwa mengandung senyawa bioaktif anti inflamasi. Tujuan penelitian ini adalah mempelajari aktivitas antiinflamasi ekstrak etanol daun Premna serratifolia dan alkaloid indol hasil isolasi. Penelitian ini dilakukan dengan ekstraksi daun P. serratifolia menggunakan heksana dan etanol serta isolasi alkaloid indol hasil isolasi. Ekstrak dan isolat diuji aktivitas antiinflamasinya pada tikus. Pada penelitian ini ekstrak heksana daun P.

serratifolia hanya mengandung steroid.

J. Aplikasi Murni. kimia. Res., 2021, 10 (2), 84-103

Jurusan Kimia Fakultas Sains dan Teknologi Universitas Jambi

Sedangkan ekstrak etanol mengandung berbagai metabolit sekunder seperti fenolik, alkaloid, flavonoid, steroid dan saponin. Ekstrak etanol dipisahkan lebih lanjut karena isolat senyawa sasaran merupakan alkaloid. Isolat yang diperoleh berupa kristal kuning yang berubah menjadi minyak kuning setelah terkena udara. Evaluasi senyawa antiinflamasi memberikan hasil dengan aktivitas kuat dengan ED50

= 4,06 mg/kgBB. Karakterisasi dengan UV-Vis, FT-IR dan dibandingkan dengan referensi menunjukkan bahwa isolat tersebut mempunyai kemiripan dengan bufotenin. Terungkap bahwa isolat tersebut memiliki kerangka dasar yang sama dengan bufotenin, terutama kerangka indole. Bentuk fisiknya sama dengan bufotenin. Bukti-bukti ini memperkuat asumsi bahwa isolat tersebut merupakan alkaloid indol.

20 Juli 2021

Jurusan Biologi Farmasi Fakultas Farmasi Universitas Padjadjaran

(2)

J. Aplikasi Murni. kimia. Res., 2021, 10 (2), 84-103

p-ISSN : 2302 – 4690 | e-ISSN : 2541 – 0733

85 20 Juli 2021

Genus Premna terutama dicirikan oleh senyawanya. Sebuah penelitian telah mengidentifikasi fenolik. Asam fenolik dilaporkan dalam P. fulva dan P. hainanensis dan beberapa aldehida diisolasi dari P. integrifolia dan P. tomentosa. Satu asam karboksilat indol juga diisolasi dari P. microphylla. Beberapa alkaloid hanya diidentifikasi pada P. integrifolia. Lignan yang merupakan turunan fenilpropanoid

diidentifikasi pada 6 spesies Premna dan umumnya ditemukan sebagai lignan furan dan lignan furofuran dalam genus Premna. Sedangkan kandungan flavonoid dilaporkan dari 13 spesies. Kebanyakan flavonoid adalah flavonol dan flavon, walaupun cukup banyak yang merupakan flavanon, isoflavon dan satu

flavan-3-ol. Beberapa glikosida flavonoid juga dilaporkan. Selain itu, dua xanthone diisolasi dari P microphylla dan empat chalcones dilaporkan di P. yunnanensis WWSm [3], [4].

suatu tumbuhan dalam genus yang sama, mengandung senyawa kimia yang sama [8], dapat menjadi bukti kuat bahwa P. serratifolia mempunyai aktivitas yang sama. Selain itu, dari laporan tumbuhan dengan genus yang sama, secara etnobotani dikemukakan dugaan bahwa daun bebuas mengandung zat aktif anti-

Spesies premna diketahui memiliki kapasitas antioksidan yang tinggi, seperti P. cordifolia

Metabolit sekunder seperti flavonoid, xanthone, chalcone dan senyawa fenolik lainnya dengan substitusi gugus hidroksil tinggi secara hipotetis berkontribusi terhadap tingginya aktivitas antioksidan tanaman.

Aktivitas suatu senyawa sebagai antioksidan berhubungan dengan sifat antiinflamasinya [3], [4].

Roxb., P. esculenta Roxb., P. integrifolia, P. microphylla dan P. serratifolia. Distribusi luas flavonoid dan fenolat dalam genus ini tampaknya berkontribusi terhadap aktivitas ini.

kuncup bunga telah mengungkapkan adanya minyak atsiri yang terutama terdiri dari 1-okten-3-ol, (Z)-n- heksanol, 2-fenil etil alkohol, (E,Z)-2,4-nonadienal dan linalool [3], [4].

Reaksi peradangan terjadi akibat invasi patogen ke dalam tubuh atau jenis cedera tubuh lainnya yang dapat menyebabkan cedera pada jaringan atau sel juga. Secara makroskopis, peradangan ditandai dengan kemerahan, bengkak, panas, nyeri, dan hilangnya fungsi pada area yang meradang. Hilangnya fungsi biasanya mengacu pada hilangnya mobilitas sendi karena nyeri atau edema, atau penggantian jaringan fungsional oleh jaringan parut. Peristiwa inflamasi ini biasanya akan diikuti dengan pelepasan mediator dari sel atau plasma yang memodifikasi dan mengatur respon imun (respon imunologi bawaan/

nonspesifik dan spesifik). Oleh karena itu, beberapa penelitian telah dilakukan untuk mengevaluasi efek anti-inflamasi dari ekstrak spesies Premna [3], [4]. Selain itu, penelitian ekstensif mengidentifikasi beberapa senyawa dari akar P. obtusifolia yang menunjukkan aktivitas antiinflamasi yang kuat. Dari 20 senyawa yang diisolasi, empat diterpen menunjukkan inhibitor NO yang diinduksi lipopolisakarida (LPS) in vitro yang kuat (IC50 6.1, 7.8, 1.7 dan 6.2 ÿM) yang sebanding dengan kontrol positif, fenilester asam caffeic (IC50 5.6 ÿM) [3], [4 ]. Sedangkan megastigman hanya menunjukkan aktivitas anti inflamasi yang lemah. Analisis hubungan struktur-aktivitas lebih lanjut menunjukkan bahwa keberadaan gugus hidroksil dalam kerangka orto-naftokuinon memberikan aktivitas anti-inflamasi yang lebih kuat. Dipostulasikan bahwa senyawa aktif ini mungkin bertanggung jawab atas aktivitas inhibitor NO yang kuat dari ekstrak heksana dan diklorometana ( masing-masing IC50 4,3 dan 6,1 ÿg/mL). Spesies lain, P. integrifolia, juga menunjukkan aktivitas anti-inflamasi in vivo yang signifikan pada model peradangan akut dan kronis;

penelitian in vitro lebih lanjut menyarankan penghambatan sintase prostaglandin dan stabilisasi membran eritrosit plasma mungkin berperan dalam aktivitas in vivo [3,4].

X

Senyawa metabolit sekunder yang aktif sebagai anti inflamasi seperti golongan alkaloid, fenolik, dan steroid [5] telah dipastikan terdapat pada ekstrak etanol P. serratifolia [6]. Gagasan ini juga didukung oleh beberapa laporan ilmiah bahwa beberapa tanaman dalam genus yang sama menunjukkan aktivitas anti inflamasi [7]. Sejak secara kemotaksonomi,

(3)

senyawa inflamasi didukung oleh fakta bahwa mereka dapat menurunkan demam dan memulihkan kesehatan wanita setelah melahirkan.

Bahan kimia yang digunakan adalah etil asetat, etanol, n-heksana, silika gel, metanol, kloroform, amoniak, asam sulfat, reagen Mayer, asam klorida, asam asetat anhidrat, Mg, larutan besi klorida, karagenan, Na. diklofenak dan Na. CMC dibeli dari SigmaÿAldrich, Jakarta, Indonesia.

Secara alami, respon tubuh terhadap cedera atau infeksi akan menyebabkan terjadinya peradangan [9].

Ekstraksi

Daun P. serratifolia kering (500 g) diekstraksi tiga kali dengan 2 L heksana, (masing-masing 24 jam) dengan teknik maserasi. Setelah ekstraksi dengan heksana selesai, sampel (P.

Meskipun merupakan proses alami, peradangan harus segera diatasi karena peradangan yang berkepanjangan dapat menyebabkan berbagai kondisi berbahaya seperti aterosklerosis, demam, rheumatoid arthritis, dan penyakit jantung iskemik [10]. Di Indonesia, penyakit jantung iskemik akibat peradangan merupakan salah satu dari 50 penyebab kematian teratas. Kematian dicapai sebanyak 10.408 orang pada tahun 2017 [11]. Oleh karena itu, diperlukan obat anti inflamasi yang efektif.

daun serratifolia ) diekstraksi tiga kali dengan 2 L etanol, (masing-masing 24 jam). Maserat kemudian

dipekatkan, diuapkan dan dikeringkan dalam ruang hampa pada suhu 60°C menggunakan alat penguap putar (buchi rotavapor R-205). Nilai rendemen ekstrak heksana sebanyak 1,024% (b/b).

Obat anti-inflamasi tersedia secara komersial saat ini. Mereka adalah senyawa untuk

dan 6,062% (b/b) ekstrak etanol. Ekstrak kering disimpan dalam lemari es pada suhu 4°C hingga akan digunakan.

menghambat dan mengobati gejala yang disebabkan oleh peradangan. Mereka umumnya dibagi menjadi obat antiinflamasi steroid dan nonsteroid. Obat anti inflamasi steroid bekerja dengan cara menghambat pembentukan asam arakidonat. Sedangkan obat antiinflamasi nonsteroid bekerja dengan cara menghambat pembentukan prostaglandin. Namun obat anti inflamasi tersebut tetap menimbulkan beberapa efek samping jika dikonsumsi dalam jangka panjang seperti sakit maag dan gangguan perkembangan otot [12]. Oleh karena itu, pencarian senyawa antiinflamasi yang lebih baik terus dilakukan.

Skrining fitokimia Skrining

fitokimia ekstrak dan isolat dilakukan untuk memperkirakan keberadaan kandungan kimia seperti alkaloid, flavonoid, saponin, triterpenoid, steroid, tanin, glikosida dan fenolik.

PERCOBAAN

Tes Alkaloid. Sebanyak 1 mL sampel dilarutkan dalam beberapa tetes asam sulfat 2N, kemudian diuji dengan tiga pereaksi alkaloid; Reagen Dragendorff, Reagen Meyer dan Reagen Wagner. Hasil pengujian dinyatakan positif jika pereaksi Dragendorff berwarna merah

X

Bahan tanaman

Daun bebuas (P. serratifolia) dikumpulkan dari Desa Kuala Dendang, Kecamatan Dendang, Kabupaten Tanjung Jabung Timur, Provinsi Jambi, Indonesia. Spesimen tersebut diidentifikasi secara taksonomi dan dikonfirmasi oleh ahli taksonomi dari Pusat Penelitian Konservasi Tumbuhan dan Kebun Raya, Lembaga Ilmu Pengetahuan Indonesia. Spesimen voucher (No. B-338/IPH.3/KS/II/2020) telah disetorkan.

Bahan kimia dan reagen

Beranda jurnal www.jpacr.ub.ac.id 86

20 Juli 2021 J. Aplikasi Murni. kimia. Res., 2021, 10 (2), 84-103

p-ISSN : 2302 – 4690 | e-ISSN : 2541 – 0733

(4)

terbentuk endapan jingga, terbentuk pereaksi Meyer dengan endapan putih kekuningan, dan terbentuk pereaksi Wagner dengan endapan coklat [13].

Kromatografi Lapis Tipis (KLT). Disiapkan pelat KLT berukuran 1 x 5 cm dengan batas bawah 0,5 cm dan batas atas 0,5 cm. Eluen dibuat dengan membandingkan pelarut organik dengan polaritas bertingkat. Ekstrak diteteskan pada batas bawah pelat dengan tabung kapiler, lalu dielusi.

Proses elusi dihentikan setelah eluen

Tes Flavonoid. Sejumlah sampel ditambahkan beberapa tetes HCl pekat kemudian ditambahkan serbuk Mg. Hasil positif ditunjukkan dengan terbentuknya busa dan perubahan warna larutan menjadi jingga [13].

dipindahkan ke batas atas. Bentuk noda diamati langsung di bawah panjang gelombang 254 nm dan a Uji Saponin. Saponin dideteksi dengan uji busa dalam air panas. Busa yang stabil dapat bertahan lama dan tidak hilang bila ditambahkan 1 tetes HCl 2N yang menunjukkan adanya saponin.

Lampu UV 395 nm (Shimadzu, Jepang). Seluruh fraksi yang diperoleh dari kromatografi kolom juga dilakukan uji KLT untuk melihat pola nodanya. Fraksi yang mempunyai titik yang sama digabungkan dan dianalisis kembali dengan KLT.

Kromatografi Kolom. Kromatografi vakum cair (VLC) dilakukan dengan

Tes Tanin. Sejumlah sampel ditambahkan FeCl3, kemudian campuran dihomogenisasi. Reaksi positif ditunjukkan dengan terbentuknya warna hitam kehijauan pada campuran [13].

Uji Steroid dan Triterpenoid. Sejumlah sampel ditambahkan asam asetat anhidrat dan asam sulfat pekat (reagen Liebermann-Burchad). Terbentuknya warna biru atau hijau menunjukkan adanya steroid.

Sedangkan terbentuknya warna ungu atau jingga menandakan adanya triterpenoid [13].

menggunakan silika gel sebagai fasa diam dengan perbandingan sampel:silika gel (1:20). Itu Isolasi dan pemurnian

Ekstrak pekat diimpregnasi dengan silika gel, kemudian dimasukkan ke dalam kolom yang telah berisi fasa diam. Fase gerak yang digunakan adalah etil asetat:metanol dengan perbandingan bertahap.

Eluat yang diperoleh dikumpulkan dalam botol vial dan dikumpulkan berdasarkan pita masing-masing.

Eluatnya dilakukan KLT lagi. Eluat digabungkan berdasarkan nilai Rf pada kromatogram dan kesamaan pola noda. Pecahan yang masih banyak bercak adalah

X

Ekstraksi Alkaloid. Ekstrak etanol pekat dipisahkan dengan menggunakan

kemudian dipisahkan lebih lanjut dengan menggunakan kromatografi kolom gravitasi (GCC). Elusi yang dimiliki metode ekstraksi cair berbasis asam. Dilarutkan dalam 500 mL air, kemudian diasamkan dengan HCl 2 M hingga pH menjadi 3. Larutan asam dipartisi menggunakan 100 mL heksana sebanyak 5 kali pengulangan. Kedua lapisan itu dipisahkan; lapisan air asam di bawah dan lapisan heksana di atas.

Kemudian lapisan air asam dipartisi ulang menggunakan 100 mL etil asetat sebanyak 5 kali

pengulangan. Partisi tersebut menghasilkan dua lapisan; lapisan air asam di bawah dan lapisan etil asetat di atas. Setelah kedua lapisan dipisahkan, lapisan air asam dibasakan dengan menambahkan larutan amonia 2 M hingga pH larutan menjadi 9. Ekstrak air basa kemudian diekstraksi kembali menggunakan 100 mL etil asetat untuk memisahkan senyawa yang tidak larut dalam air. . Ekstraksi dilakukan sebanyak 5 kali pengulangan. Lapisan etil asetat yang diperoleh digabungkan dan dipekatkan dengan menggunakan rotary evaporator sehingga diperoleh ekstrak kasar alkaloid. Ekstrak ini

kemudian ditimbang dan selanjutnya dipisahkan menggunakan Liquid Vacuum

satu titik kemudian diuji menggunakan 3 eluen yang berbeda untuk melihat pola nodanya. Isolat dimurnikan dengan cara rekristalisasi menggunakan pelarut n-heksana, etil asetat, dan etanol.

kromatografi (VLC) [14].

20 Juli 2021 J. Aplikasi Murni. kimia. Res., 2021, 10 (2), 84-103

p-ISSN : 2302 – 4690 | e-ISSN : 2541 – 0733

87

(5)

ÿ1

0

ÿ1

2

Selanjutnya dilakukan uji fitokimia, karakterisasi dan evaluasi aktivitas anti inflamasi

Pada saat pengujian setiap tikus ditimbang dan diberi tanda pada bagian ekornya.

Setelah itu, volume telapak kaki kiri tikus diukur dengan alat pletysmometer. Volume dicatat sebagai volume awal (V0). Masing-masing telapak kaki tikus kemudian disuntik secara

subplantar dengan 0,1 ml larutan karagenan 1%. Setelah tiga puluh menit dilakukan pengukuran volume telapak kaki dan masing-masing tikus diberikan suspensi zat uji secara oral sesuai kelompoknya. Perubahan volume cairan yang terjadi dicatat sebagai volume telapak kaki tikus

pada setiap waktu pengamatan (Vt). Pengukuran dilakukan setiap 60 menit selama 300 menit [16]. Setelah

: volume edema kaki tikus setiap kali t

dilakukan. Struktur alkaloid dikonfirmasi dengan Spektrofotometer UV dan IR (Shimadzu, Jepang). Semua data dibandingkan dengan literatur dan data sebelumnya.

Pengukuran, volume edema dan AUC (Area Under the Curve) dihitung dari rata-rata edema terhadap kurva waktu dan persentase penghambatan inflamasi [17].

: volume telapak kaki tikus setelah induksi karagenan 1% pada waktu t

Satwa

Perhitungan volume edema kaki tikus, AUC dari kurva edema rata-rata waktu, dan persen efek antiinflamasi [17] adalah sebagai berikut:

: Volume awal telapak kaki tikus sebelum diinduksi karaginan 1%

Uji aktivitas anti inflamasi yang digunakan pada penelitian ini adalah tikus (Rattus

norvegicus) galur Wistar dari Jurusan Biologi Fakultas Sains dan Teknologi Universitas jambi.

Studi in vivo aktivitas anti-inflamasi dilakukan pada tikus betina dewasa dengan berat 200 hingga 250 g pada usia 2 – 3 bulan.

= ÿ

+

Uji Anti Inflamasi

Persiapan Suspensi Ekstrak. Masing-masing ekstrak, baik etanol maupun heksana,

disuspensikan dengan Na CMC dalam air suling. Na CMC ditaburkan di atas air panas dalam mortar dengan menggunakan air sebanyak 20 kali berat Na CMC dan didiamkan selama 15 menit hingga Na CMC berkembang. Kemudian ekstrak dimasukkan sedikit demi sedikit ke dalam mortar sambil digerus hingga homogen dan diisi dengan aquades hingga 10 mL.

Di mana:

( ÿ ÿ1)

Evaluasi Aktivitas Anti-inflamasi. Prosedur percobaan yang berkaitan dengan hewan

telah disahkan oleh Komite Etik, No. 589/UN21.8/PT.01.04/2021 dari Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan Universitas Jambi. Evaluasi aktivitas anti inflamasi dilakukan pada kontrol positif (Na diklofenak), kontrol negatif (Na CMC), ekstrak etanol, ekstrak heksana, fraksi VLC, dan isolat. Sebelum dilakukan pengujian, tikus dipuasakan selama 18 jam (tanpa makan namun tetap minum). Setiap kelompok terdiri dari empat ekor tikus.

=

Kategori masing-masing kelompok adalah; C0 = kontrol negatif (-) untuk Na CMC 1%; C1 = kontrol (+) sebesar 10 mg/KgBB Na diklofenak; C2 = ekstrak heksana 250 mg/kgBB; C3 = ekstrak heksana 500 mg/kgBB; C4 = ekstrak heksana 1000 mg/kgBB; C5 = ekstrak etanol 250 mg/kgBB; C6 = ekstrak etanol 500 mg/kgBB; dan C7 = ekstrak etanol 1000 mg/KgBB.

X

Evaluasi anti inflamasi juga dilakukan terhadap lima fraksi VLC dengan kode F.1; F.2; F.3; F.4;

dan F.5 dan dosis uji 10 mg/KgBB. Sedangkan aktivitas antiinflamasi isolat dinilai pada dosis 5, 10, dan 20 mg/KgBB.

Vu Vt V0

p-ISSN : 2302 – 4690 | e-ISSN : 2541 – 0733

88 20 Juli 2021

(6)

Skrining fitokimia ekstrak heksana dan etanol daun P. serratifolia mengungkapkan adanya beberapa metabolit sekunder seperti alkaloid, flavonoid, fenolik,

AUck

Ekstraksi

Massa (g) 5.12 30.31

Penghasilan sejumlah ekstrak pada penelitian ini dilakukan secara eksperimental. Serbuk kering daun bebuas (P. serratifolia) dimaserasi dengan heksana kemudian dengan etanol.

AUCk -AUCp

nilai dosisnya. Persamaan linier grafik ditentukan dengan menggunakan software Microsof Excel 2010. Dari persamaan liner dihitung nilai ED50 dengan memasukkan 5 sebagai y dan x sebagai variabel hitung. ED50 kemudian dihitung sebagai nilai anti-algoritma dari x yang diperoleh [19] .

: volume rata-rata edema di tn

individu

Menghasilkan (%)

Etanol Di mana:

AUCk : AUC kurva volume edema rata-rata waktu untuk kontrol negatif

g serbuk kering daun bebuas (P. serratifolia) dimaserasi dengan heksana kemudian dengan etanol. Hasil maserasi diperoleh ekstrak heksana pekat berwarna hijau kekuningan dan bersifat lengket-keras seperti getah. Selanjutnya daun tersebut kemudian diekstraksi menggunakan etanol. Sedangkan ekstrak etanol kering mempunyai sifat lengket seperti resin dan berwarna hijau kehitaman. Hasil penelitian menunjukkan bahwa secara persentase rendemen, ekstrak etanol lebih tinggi dibandingkan heksana. Hal ini dapat terjadi karena etanol mempunyai kemampuan melarutkan hampir seluruh senyawa organik pada daun bebuas (P.

serratifolia) [20], [21], [22]. Massa dan rendemen ekstrak kering disajikan pada Tabel 1.

Ekstrak

X

Penghasilan sejumlah ekstrak pada penelitian ini dilakukan secara eksperimental. Jumlahnya 500

Hasil maserasi diperoleh ekstrak heksana pekat dan ekstrak etanol.

Di mana:

% persentase peradangan= ×100%

Penentuan ED50 . Persentase penghambatan peradangan setiap variasi dosis diubah menjadi probit (satuan probabilitas). Sedangkan nilai dosis diubah ke dalam bentuk logaritmiknya. Probit penghambatan kemudian diplot terhadap logaritma

6.062 HASIL DAN DISKUSI

Skrining Fitokimia

: volume rata-rata edema pada tn-1

Data kemudian diuji dengan One-Way ANOVA dan uji Post Hoc LSD dengan tingkat kepercayaan 95%

dengan menggunakan software SPSS 25 [18].

1.024

AUCp : AUC volume edema versus kurva waktu untuk masing-masing kelompok perlakuan

Tabel 1. Massa dan rendemen ekstrak kasar kering

heksana Vun-1

Vun

tanin, saponin dan steroid (Tabel 2). Metabolit sekunder pada daun P. serratifolia diketahui bertanggung jawab atas beberapa aktivitas obat yang dalam penelitian ini dimuat di beranda jurnal www.jpacr.ub.ac.id

p-ISSN : 2302 – 4690 | e-ISSN : 2541 – 0733

20 Juli 2021

89

(7)

p-ISSN : 2302 – 4690 | e-ISSN : 2541 – 0733

20 Juli 2021

Dragendorff +

- +

Dalam air basa, alkaloid kembali ke bentuk molekul netral dan kelarutannya dalam etil asetat meningkat. Dari partisi tersebut diperoleh lapisan etil asetat berwarna kuning (atas) dan lapisan air basa berwarna hitam kemerahan. Partisi dilakukan beberapa kali hingga etil asetat tampak tidak berwarna yang menunjukkan tidak ada senyawa yang dapat diekstraksi lebih lanjut. Fraksi etil asetat air basa (EaBW) kemudian dipekatkan. Diperoleh 3,513 g EaBW pekat yang berwarna jingga.

Alkaloid

-

Ekstrak Etanol Tabel 2. Skrining fitokimia ekstrak daun bebuas

Steroid +

Berdasarkan hasil skrining fitokimia, ekstrak etanol positif mengandung senyawa fenolik dan flavonoid. Hasil ini sesuai dengan ciri khas gugus senyawa yang terdapat pada genus premna. Tumbuhan yang termasuk dalam genus premna memiliki beberapa karakteristik metabolit sekunder, yang terdiri dari diterpenoid, glikosida iridoid, dan flavonoid sebagai metabolit sekunder yang paling umum, diikuti oleh seskuiterpen, lignan, feniletanoid, megastigman, gliseroglikolipid, dan ceramide [4], [24] . Skrining fitokimia memastikan bahwa ekstrak tersebut mengandung alkaloid, flavonoid, dan steroid yang merupakan golongan senyawa yang memiliki aktivitas antiinflamasi. Bukti ilmiah ini mendukung fakta bahwa bebuas kiri dapat digunakan sebagai obat anti inflamasi, seperti yang sering digunakan untuk menyembuhkan berbagai penyakit yang berhubungan dengan peradangan oleh masyarakat Melayu Sumatera bagian timur.

aktivitas anti-inflamasi. Penapisan potensi sifat anti-inflamasi dari fitokimia yang ada dalam ekstrak etanol P. serratifolia akan menjadi dasar pengujian berikutnya untuk menentukan aktivitas anti-inflamasi .

Fenolik/Tanin +

-

X

+

- Flavonoid

Fraksi heksana air asam (HAW), fraksi etil asetat air asam (EaAW), dan EaBW kemudian disaring kandungan fitokimianya (Tabel 3). Itu

Meyer

Catatan: - : negatif, + : positif -

-

- Ekstrak Heksana

Terpenoid

-

Pemisahan dan Pemurnian Senyawa

Isolasi alkaloid dari ekstrak dilakukan terhadap ekstrak etanol. Senyawa target yang diisolasi adalah alkaloid karena sebagian besar senyawa aktif antiinflamasi NSAID berasal dari kelompok tersebut [25], dan juga sesuai dengan pemeriksaan fitokimia menunjukkan ekstrak etanol mengandung alkaloid.

Oleh karena itu, digunakan metode khusus untuk mengisolasi senyawa alkaloid. Ekstrak etanol kering dilarutkan dalam air suling.

Skrining fitokimia dilakukan terhadap kedua ekstrak kering yang diperoleh. Hasil skrining fitokimia (Tabel 2) memberikan hasil yang sama dengan hasil yang diperoleh Oktaviani dkk. [23].

Saponin +

Skrining fitokimia membuktikan bahwa senyawa yang diekstraksi dengan pelarut etanol lebih beragam dibandingkan dengan yang diekstraksi dengan heksana, karena heksana cenderung hanya mengekstrak senyawa golongan nonpolar seperti steroid.

(8)

20 Juli 2021

p-ISSN : 2302 – 4690 | e-ISSN : 2541 – 0733 (Dragendorff)

+ - +

pelarut seperti etil asetat [3], [8]. Sedangkan EaBW positif terkendali

diekstraksi baik di EaAW dan EaBW. Hal ini dimungkinkan karena terdapat kemungkinan senyawa yang mengandung gugus fungsi -OH aromatik (fenolik) dan nitrogen siklik (alkaloid) memberikan hasil positif pada keduanya [3], [8].

HAW EaAW EaBW -

Tabel 3. Skrining Fitokimia Fraksi

menjadi non-ionik baik dalam kondisi asam atau basa. Oleh karena itu, steroid tetap ada di dalamnya

Steroid

+

-

Pemantauan ini bertujuan untuk melihat pita pemisahan lebih jelas berdasarkan fluoresensi senyawa.

penyaringan ketiga fraksi menunjukkan bahwa ekstrak HAW hanya positif terhadap steroid.

Fenolik/Tanin

-

X

+ - Flavonoid

alkaloid dan fenolik. Dalam keadaan basa, alkaloid kembali ke muatan netral dan membuat kelarutannya dalam pelarut semipolar seperti etil asetat juga meningkat [3], [8]. Sebaliknya, alkaloid tidak diekstraksi dengan EaAW karena alkaloid berbentuk garam bermuatan dalam kondisi asam, sehingga cenderung lebih larut dalam air. Namun, fenolat memang demikian

Isolasi dilanjutkan pada EaBW dengan menggunakan kromatografi cair vakum (VLC).

Elusi gradien dilakukan dengan menggunakan 100% etil asetat hingga 100% metanol sebagai eluen.

Alkaloid

+

-

- Terpenoid

keadaan netral dan diamati di HAW.

-

Flavonoid dan fenolik diamati ada di EaAW. Hal ini karena dalam kondisi asam, kedua gugus tersebut tidak bermuatan. Gugus –OH aromatik pada flavonoid dan fenolat memberikan sifat semipolar sehingga memiliki kelarutan yang besar dalam semipolar.

Gambar 1. Proses kromatografi cair vakum

Pada awalnya ketika VLC dilakukan, diamati bahwa etil asetat tidak dapat mengelusi pita kedua dan pita tersebut tertahan pada silika. Oleh karena itu elusi gradien dilakukan untuk meningkatkan resolusi pemisahan campuran kompleks seperti sampel.

Hal ini karena steroid memiliki sifat nonpolar, sama seperti heksana. Steroid juga cenderung

Saponin

-

Kedua pelarut tersebut digunakan karena uji KLT menunjukkan bahwa EaBW hanya dapat dielusi oleh kedua pelarut tersebut. Lampu UV 395 nm digunakan untuk memantau proses elusi (Gambar 1).

(9)

p-ISSN : 2302 – 4690 | e-ISSN : 2541 – 0733

20 Juli 2021

-

164,85

(Dragendorff)

- -

- Massa (mg)

F.1 F.2 F.3 F.4 F.5 Pecahan

digabungkan. Dari uji KLT diperoleh lima fraksi dengan label F.1; F.2; F.3; F.4; dan F.5 menurut urutan waktu elusinya. Massa pecahan dirangkum dalam Tabel 4.

Hasil screening fitokimia (Tabel 5) menunjukkan bahwa seluruh fraksi positif mengandung alkaloid.

Sedangkan selain alkaloid, F.1 juga positif steroid dan F.2 dan F.3 positif fenolik. Hal ini dapat terjadi karena kemungkinan besar fraksi-fraksi tersebut merupakan campuran dari senyawa-senyawa yang berbeda atau senyawa-senyawa di dalamnya mempunyai lebih dari satu gugus fungsi, sehingga memberikan hasil yang positif pada lebih dari dua gugus senyawa.

Steroid

+ +

-

Setelah polaritas eluen ditingkatkan dengan penambahan metanol, pita tersebut dapat dielusi.

859,95

Fenolik/Tanin

-

X

Flavonoid -

18.30

- - -

-

- -

35.35

Tabel 5. Skrining Fitokimia Fraksi

+ + + + + Alkaloid

-

Tabel 2. Massa fraksi diperoleh dari VLC

F.1 F.2 F.3 F.4 F.5

Terpenoid

- -

Kelima fraksi tersebut diuji aktivitas antiinflamasinya untuk mengetahui fraksi mana yang memiliki aktivitas antiinflamasi terbaik. Dosis yang digunakan untuk mengevaluasi aktivitas antiinflamasi adalah 10 mg/KgBB, sebagai dosis kontrol positif yang digunakan. Hasil pengujian kelima fraksi dapat dilihat pada Gambar 2. Dari pengujian terlihat bahwa F.5 mempunyai aktivitas paling tinggi sebagai antiinflamasi. Oleh karena itu, isolasi dilanjutkan hingga F.5. F.5 mempunyai penampakan seperti pasta, berwarna kuning kehijauan, dan tidak larut dalam pelarut nonpolar maupun semipolar. F.5 kemudian dicuci dengan etil asetat dan heksana untuk menghilangkan pengotor yang mungkin masih tercampur. Setelah dicuci, F.5 selanjutnya diuji menggunakan KLT. Berdasarkan uji KLT, eluen metanol dan etil asetat tidak dapat mengelusi nodanya. Hal ini menunjukkan bahwa senyawa pada F.5 bersifat polar sehingga dapat berinteraksi kuat dengan silika. Hal inilah yang menyebabkan senyawa tersebut tertahan pada silika dan tidak dapat dielusi, bahkan dengan pelarut organik polar seperti metanol. Oleh karena itu, polaritas eluen ditingkatkan dengan menggunakan metanol:air 1:1. Noda yang diperoleh dari penggunaan eluen ini disajikan pada Tabel 6.

Dari VLC diperoleh sebelas vial. Setelah pelarut diuapkan, dilakukan uji KLT dengan eluen etil asetat 100%. Botol yang memiliki pola noda yang sama adalah

137.48

Saponin

+

- -

(10)

p-ISSN : 2302 – 4690 | e-ISSN : 2541 – 0733

20 Juli 2021

Dari uji KLT (Gambar 3) terlihat bahwa F.5.1 memberikan dua titik yang terpisah tidak sempurna.

Tabel 3. Noda noda yang diamati dari F.5

0,75

Sedangkan F.5.2 memberikan satu tempat. Nilai Rfnya dirangkum dalam Tabel 7.

Nilai Rf diamati di bawah lampu UV

Pengamatan ini menunjukkan bahwa F.5 masih merupakan campuran senyawa (Gambar 2).

Tabel 4. Nilai Rf pecahan yang diperoleh dari pemisahan lebih lanjut hingga F.5 395nm 294nm

Oleh karena itu, pemisahan dilanjutkan dengan menggunakan GCC.

Nilai Rf Pecahan

Gambar 2. Hasil uji KLT F.5 dengan metanol:air 1:1 dibawah 0,05 0,05

F.5.1 F.5.2

0,6

(a) UV 294 nm dan (b) UV 395 nm

0,7 0,95

0,75

Dari pemisahan lebih lanjut dengan GCC diperoleh dua fraksi yang diberi kode F.5.1 dan F.5.2. Karakter fisik F.5.1 berwarna kuning dengan butiran kristal kecil. Sedangkan F.5.2 merupakan kristal berwarna kuning yang berubah bentuk menjadi cair seperti minyak dengan viskositas yang relatif tinggi

- Sampel

setelah terkena udara.

0,98 F.5

Kedua fraksi yang diperoleh kemudian diuji dengan KLT menggunakan metanol 100% sebagai eluennya.

X

-

(11)

Evaluasi aktivitas anti inflamasi dilakukan pada tikus albino jantan (Rattus novergicus). Tikus-tikus ini digunakan sebagai hewan uji karena banyak gejala kondisi manusia yang dapat direplikasi pada tikus tersebut dan genomnya mirip dengan genom manusia (90%) [4], [26]. Sebelum diuji, tikus tidak diberi makan selama 18 jam untuk menghindari pengaruh.

Homepage jurnal www.jpacr.ub.ac.id

94 20 Juli 2021

p-ISSN : 2302 – 4690 | e-ISSN : 2541 – 0733

Gambar 3. Hasil KLT dengan eluen metanol pada (a) F.5.1 (b) F.5.2

0,14

Meskipun memberikan noda tunggal, namun hasil uji KLT F.5.2 dengan metanol 100% memberikan nilai Rf yang tinggi . Oleh karena itu uji KLT dilanjutkan ke F.5.2 dengan menurunkan polaritas eluen yang digunakan. F.5.2 kemudian dielusi pada KLT dengan menggunakan eluen dengan polaritas berbeda (Tabel 8).

0,5 Tabel 5. Nilai Rf F.5.2 dengan berbagai eluen

0,55 Sampel

Uji KLT menunjukkan bahwa F.5.2 secara konsisten menghasilkan noda tunggal (Gambar 4). Noda tunggal pada KLT menunjukkan bahwa suatu sampel kemungkinan besar merupakan senyawa tunggal atau campuran beberapa senyawa yang polaritasnya sangat dekat. Karena pola pewarnaannya yang relatif sederhana, F.5.2 ditetapkan sebagai isolat dan dievaluasi uji aktivitas anti inflamasinya.

Eluen Digunakan

F.5.2

Etil asetat

Gambar 4. Uji KLT eluen F.5.2 (a) etil asetat (b) eluen etil asetat:metanol 1:1 Etil asetat: metanol 1:1

(c) eluen etil asetat:metanol 1:3 Etil asetat: metanol 1:3

Evaluasi Aktivitas Anti-Peradangan

X

Nilai RF

(12)

C0

zat lain yang diuji. Pengujian dilakukan terhadap ekstrak kasar heksana dan etanol daun bebua kiri. Hasilnya dapat dilihat pada Gambar 5.

Sampel % Penghambatan

0,00 gram

Gambar 5. Grafik volume Edema terhadap waktu

C1 79.30 a

Dari data pada Gambar 5 terlihat bahwa ekstrak etanol dengan dosis 250, 500, 1000 mg/KgBB mampu menurunkan pembengkakan kaki tikus pada 60 menit pertama setelah induksi. Sebaliknya ekstrak heksana yang memberikan pengaruh nyata pada 60 menit pertama hanya diamati dengan

C7 68.35b

dosis 1000 mg/KgBB. Sedangkan pada dosis 250 dan 500 mg/KgBB hanya mampu

C6 45,42 c

untuk mengurangi pembengkakan secara signifikan pada menit ke-120 pertama.

C4 43,83 c

Berdasarkan data pada Gambar 5, rata-rata persen penghambatan C1, C2, C3, C4, C6, dan C7 masing- masing sebesar 79,30%; 8,37%; 22,90%; 43,83%; 25,35%, 45,42%; dan 68,35%.

C5 25.35d

X

Sedangkan C0 yang digunakan adalah Na CMC 1% dan daya hambatnya ditetapkan 0% karena merupakan kontrol negatif. Hal ini menunjukkan bahwa ekstrak heksana dan etanol memiliki aktivitas anti-inflamasi yang kuat (persen penghambatan di atas 40%). Namun aktivitas antiinflamasi ekstrak heksana lebih lemah dibandingkan ekstrak etanol. Hal ini terlihat dari persentase penghambatan diatas 40% yang hanya dicapai oleh ekstrak

heksana dengan dosis 1000 mg/KgBB. Sedangkan ekstrak etanol mampu mencapai di atas 40% pada dosis 500 mg/KgBB.

C3 22.90 e

Oleh karena itu dilakukan uji Post Hoc LSD untuk melihat kelompok mana yang mempunyai perbedaan signifikan. Tabel tabulasi hasil tes Post Hoc LSD disajikan pada Tabel 9.

C2 8.37 f

Tabel 9. Hasil Post Hoc Test LSD pada Ekstrak Daun Bebuas

95 Nilai yang diikuti notasi huruf yang berbeda menunjukkan adanya perbedaan yang signifikan secara statistik.

p-ISSN : 2302 – 4690 | e-ISSN : 2541 – 0733

Catatan:

20 Juli 2021

Nilai yang diikuti notasi huruf yang sama menunjukkan bahwa tidak terdapat perbedaan yang signifikan secara statistik.

(13)

Dimana: HE = Ekstrak Heksana; EE = Ekstrak Etanol

20 Juli 2021

96 p-ISSN : 2302 – 4690 | e-ISSN : 2541 – 0733

EaBW selanjutnya dipisahkan dengan VLC dan masing-masing fraksi dievaluasi sifat anti inflamasinya untuk mengetahui fraksi mana yang memiliki aktivitas terbaik. Dosis yang digunakan untuk seluruh fraksi adalah 10 mg/KgBB, sebagaimana dosis yang digunakan untuk kontrol positif. Hasil evaluasi antiinflamasi tiap fraksi dapat dilihat pada Gambar 7.

Senyawa antiinflamasi aktif dalam ekstrak heksana diduga merupakan steroid.

perbedaan daya hambat yang signifikan dibandingkan dengan kontrol negatif. Terlihat tidak terdapat perbedaan yang signifikan antara persen penghambatan C6 dan C4, yang berarti kedua dosis mempunyai aktivitas yang hampir sama. Namun ekstrak etanol memerlukan dosis yang lebih rendah. Hal ini menunjukkan bahwa ekstrak etanol lebih aktif dibandingkan heksana. Dibandingkan dengan kontrol negatif, seluruh dosis secara statistik mempunyai perbedaan daya hambat yang signifikan. Hal ini menunjukkan bahwa ekstrak tersebut aktif sebagai anti inflamasi

alkaloid. Oleh karena itu, metode ekstraksi dan isolasi khusus untuk alkaloid telah digunakan untuk menghasilkan EaBW.

Gambar 6. Grafik penghambatan Probit vs log dosis ekstrak.

Uji Post Hoc LSD pada Tabel 9 menunjukkan bahwa hampir semua dosis secara statistik mempunyai

Berdasarkan evaluasi antiinflamasi, ekstrak etanol memiliki persen penghambatan lebih tinggi dibandingkan ekstrak heksana pada dosis yang sama. Oleh karena itu, ekstrak etanol dilanjutkan ke isolasi dan senyawa yang ditargetkan untuk diisolasi adalah senyawa alkaloid. Pertimbangan ini adalah

dibuat karena sebagian besar senyawa aktif NSAID berasal dari alkaloid [4], [25], [27], [28], dan sesuai dengan hasil skrining fitokimia bahwa ekstrak etanol mengandung

ED50 . ED50 ekstrak etanol dan heksana masing-masing sebesar 571,56 mg/KgBB dan 1162,30 mg/KgBB . Hal ini menunjukkan bahwa ekstrak etanol mempunyai aktivitas antiinflamasi yang lebih tinggi dibandingkan ekstrak heksana.

X

Hal ini sesuai dengan hasil skrining fitokimia yang menunjukkan bahwa ekstrak heksana hanya positif mengandung steroid. Sedangkan senyawa aktif anti inflamasi pada ekstrak etanol dapat berasal dari golongan fenolik atau alkaloid [4], [5].

Persentase penghambatan setiap dosis diubah ke dalam bentuk probit dan diplot ke dalam grafik terhadap nilai logaritma dosis (Gambar 6). Dari grafik tersebut, persamaan linier penghambatan probit terhadap logaritma dosis digunakan untuk menghitung

(14)

Nilai yang diikuti notasi huruf yang berbeda menunjukkan adanya perbedaan yang signifikan secara statistik.

20 Juli 2021

p-ISSN : 2302 – 4690 | e-ISSN : 2541 – 0733

Nilai yang diikuti notasi huruf yang sama menunjukkan bahwa tidak terdapat perbedaan yang signifikan secara statistik.

97

Catatan:

Gambar 7. Kurva evaluasi anti-inflamasi fraksi.

74.54b

Data hasil uji LSD post hoc pada Tabel 10 menunjukkan bahwa seluruh fraksi aktif sebagai anti inflamasi karena secara statistik mempunyai perbedaan yang signifikan dengan C0.

Persentase penghambatan yang diperoleh dari evaluasi anti inflamasi untuk F.1; F.2; F.3; F.4; dan F.5 masing-masing sebesar 60,26%; 62,78%; 70,29%; 71,43%; dan 74,32%.

71,67 c

Terlihat pula bahwa tidak terdapat perbedaan yang signifikan antara persentase penghambatan F.1 dan F.2, serta F.3 dan F.4. Hal ini menunjukkan bahwa F.1 dan F.2 serta F.3 dan F.4 mempunyai kekuatan penghambatan inflamasi yang sama. Kesamaan kekuatan hambat ini dapat terjadi karena adanya kemungkinan adanya senyawa kimia yang sama di dalamnya. Hal ini dimungkinkan karena pecahan-pecahan tersebut berada dalam urutan yang berdekatan menurut pemisahannya dalam VLC.

Sedangkan Na diklofenak sebagai kontrol positif memberikan daya hambat sebesar 79,30%. Hal ini menunjukkan bahwa seluruh fraksi mempunyai aktivitas antiinflamasi yang kuat (% penghambatan > 40%) dan mempunyai aktivitas serupa dengan kontrol positif. Na CMC digunakan sebagai kontrol negatif dan penghambatannya ditetapkan sebagai 0%.

70,53 c

Uji statistik ANOVA satu arah menunjukkan terdapat perbedaan bermakna antara kelompok tikus yang diuji dengan kelima fraksi. Hal ini terlihat dari nilai F hitung yang lebih besar dari F0,05 (6,35) tabel (889,408 >

2,372) dan nilai p valuenya adalah

63.09d lebih kecil dari nilai ÿ (0,000 < 0,05).

60,59d Tabel 10. Hasil uji Post Hoc LSD setiap fraksi EaBW dari VLC.

0,00 e Contoh

C1 F.5 F.4 F.3 F.2 F.1 C0

% Penghambatan

X

79.30 a

(15)

20 Juli 2021

p-ISSN : 2302 – 4690 | e-ISSN : 2541 – 0733

Gambar 8. Kurva evaluasi antiinflamasi isolat.

Gambar 9. Grafik probit vs log dosis isolat.

Isolat diperoleh dari F.5.2. Hasil evaluasi isolat antiinflamasi dapat dilihat pada Gambar 8. Hasil evaluasi menunjukkan bahwa untuk dosis 5 mg/KgBB, 10 mg/KgBB, dan 20 mg/

KgBB persentase penghambatannya sebesar 53,86%, 65,88%. , dan masing-masing 76,94%. Grafik probit inhibisi terhadap logaritma dosis dapat dilihat pada

X

Gambar 9. Berdasarkan perhitungan persamaan linier pada Gambar 9, nilai ED50 isolat

sebesar 4,06 mg/KgBB.

(16)

20 Juli 2021

99 Nilai yang diikuti notasi huruf yang sama menunjukkan bahwa tidak terdapat perbedaan yang signifikan secara statistik

p-ISSN : 2302 – 4690 | e-ISSN : 2541 – 0733

Nilai yang diikuti notasi huruf yang berbeda menunjukkan adanya perbedaan yang signifikan secara statistik.

Catatan:

Beranda jurnal www.jpacr.ub.ac.id Karakterisasi Isolat

Tabel 11. Hasil Post Hoc Test LSD pada Isolat.

76.94 sebuah

Karakterisasi UV-Vis dan FT-IR dilakukan untuk mengetahui kerangka dasar dan gugus fungsi senyawa.

Spektrum UV-Vis (Gambar 10) menunjukkan bahwa isolat memberikan tiga puncak serapan pada ÿ = 224 nm;

268nm; dan 321 nm, dengan ÿmaks adalah 268 nm.

Zat dan Dosis

65.88b

Puncak-puncak ini menunjukkan kemiripan dengan beberapa spektrum UV-Vis indoles. Puncak sekitar 226 nm dan 229 nm hampir ditunjukkan oleh sebagian besar alkaloid indol. Namun, alkaloid indol fenolik dapat mengalami pergeseran batokromik [29]. Spektrum UV-Vis isolat pada gilirannya menunjukkan puncak yang sesuai dengan spektrum Bafotenin, yang merupakan alkaloid indol fenolik.

C1

53,86 c

Bafotenin memiliki ÿmaks pada 277 nm dengan bahu pada 295 nm yang dapat bergeser ke 322 nm pada kondisi dasar. Pola ÿmaks dan bahu ini mirip dengan pola spektrum UV-Vis isolat yang memiliki ÿmaks pada 268 nm dengan bahu pada 321 nm. Hal ini menunjukkan bahwa isolat tersebut mempunyai kerangka dasar yang mirip dengan bufotenin.

Isolasi 20 mg/KgBB

0,00d Isolasi 10 mg/KgBB

Isolasi 5 mg/KgBB C0

% Penghambatan

Uji statistik ANOVA satu arah menunjukkan terdapat perbedaan bermakna antara kelompok tikus uji dengan isolat. Hal ini terlihat dari nilai F hitung yang lebih besar dari F0,05(4,13) tabel (258,347 > 3,180) dan nilai p lebih kecil dari nilai ÿ (0,000 < 0,05). Berdasarkan data uji post hoc LSD yang disajikan pada Tabel 11, terlihat bahwa seluruh dosis isolat mempunyai perbedaan daya hambat yang signifikan secara statistik dibandingkan dengan kontrol negatif. Hal ini juga menunjukkan bahwa tidak terdapat perbedaan yang signifikan secara statistik antara kontrol positif dengan isolat 20 mg/KgBB. Artinya isolat dosis 20 mg/KgBB mempunyai kekuatan

antiinflamasi yang hampir sama dengan Na diklofenak 10 mg/KgBB.

X

79.30 a

(17)

20 Juli 2021

p-ISSN : 2302 – 4690 | e-ISSN : 2541 – 0733

Gambar 10. Spektrum UV-Vis isolat, ÿ = 224 nm; 268nm; dan 321nm.

Bufotenine (Gambar 12) adalah turunan tryptamine yang berhubungan dengan neurotransmitter Gambar 11. Spektrum FT-IR dari isolat.

X

Spektrum FT-IR (Gambar 11) menunjukkan bahwa gugus fungsi yang terkandung dalam isolat adalah – OH, NH, CN amina aromatik, dan CN amina. Berdasarkan perbandingan literatur, pola spektrum FT-IR isolat serupa dengan spektrum IR bufotenin. Perbandingan kedua adsorpsi IR dapat dilihat pada Tabel 12. Kesamaan kedua spektrum FT-IR memperkuat anggapan bahwa isolat merupakan senyawa yang memiliki kesamaan

serotonin. Secara alami terjadi pada beberapa spesies tumbuhan tingkat tinggi, katak (terutama kulit), dan jamur.

Bufotenine tergolong obat yang dikontrol di beberapa negara karena dapat menimbulkan efek berbahaya jika dikonsumsi oleh manusia. Namun, senyawa lain dengan 5-

struktur dengan bufotenin.

(18)

20 Juli 2021

101 p-ISSN : 2302 – 4690 | e-ISSN : 2541 – 0733

Sidik jari

3407

Kerangka 5-hidroksiindola pada isolat dapat terlihat jelas berdasarkan spektrum UV-Vis dan FT-IR.

Pada FT-IR ditunjukkan adanya serapan pada bilangan gelombang 1260,54

935

Memisahkan

Peregangan CN amina aromatik

Adsorpsi (cm-1 ) OH peregangan

Kerangka hidroksiindole juga dapat bertindak sebagai obat anti inflamasi.

1345.66 1202.16 928.72

Dugaan bahwa isolat tersebut merupakan senyawa dengan karakter seperti bufotenin juga didukung oleh kesamaan bentuk fisiknya. Bufotenine merupakan kristal kuning yang dapat berubah menjadi minyak kuning setelah teroksidasi oleh paparan udara [31,32,33]. Hal ini sesuai dengan bentuk fisik isolat yang berupa kristal berwarna kekuningan pada saat baru dikeringkan dari pelarutnya, namun setelah dipaparkan dalam waktu lama di udara, isolat tersebut berubah menjadi minyak berwarna kuning akibat proses oksidasi [33].

inti hidroksiindole seperti bufotenin, telah dilaporkan memiliki aktivitas anti-inflamasi.

1466 3421.71

1567.21

X

-

adanya ikatan amina aromatik CN, sebagai ciri kerangka 5-hidroksiindola, merupakan bukti kuat dugaan tersebut.

Sidik jari

1581 Bufotenin [27]

Peregangan CN amina

795 CH pembengkokan alkana

1203

[31],[32],[33]. Hal ini semakin memperkuat dugaan bahwa isolat tersebut merupakan senyawa dengan kerangka dasar seperti bufotenin.

- Tabel 12. Interpretasi dan Perbandingan Spektrum IR.

NH membungkuk

Berdasarkan hasil skrining fitokimia, bentuk fisik, data spektrum UV, IR dan perbandingan literatur, komponen utama dari ekstrak daun etanol daun P. serratifolia yang diisolasi dapat disimpulkan sebagai bufotenin, seperti yang terlihat sebelumnya dalam literatur.

Penafsiran

Bahkan salah satu senyawa yang mengandung 5-hidroksiindola, indometasin telah banyak digunakan sebagai obat anti inflamasi non stereoidal [30]. Hal ini menunjukkan bahwa senyawa yang mengandung 5-

-

Gambar 12. Struktur Bufotenin

(19)

p-ISSN : 2302 – 4690 | e-ISSN : 2541 – 0733

20 Juli 2021

[7]

REFERENSI

[15] Emrizal, A. Fernando, F. Suryani, F. Ahmad, HM Sirat dan Dayar Arbain, D, J.

[13] Harbone, J.B, Metode Fitokimia : Penuntun Cara Modern Menganalisis Tumbuhan, 2nd ed. 1987, ITB Pers, Bandung.

[19] Ross G, J, S dan Finney, DJ, Stat, 1972, 21 (3), 222.

[21] Aslamiah, S dan Haryadi, H.,

Anterior J, 2014, 14 (1), 11-19.

PENGAKUAN

Riset Kuantitatif Terapan, 2017, 1(1).

Tidak ada konflik kepentingan yang terkait dengan pekerjaan ini.

[4] Dianita, R dan Jantan, I.,

Pharm. Biol., 2017, 55 (1), 1715-1739.

tingkat dan persentase penghambatan yang diperoleh dari evaluasi anti-inflamasi, diamati bahwa ekstrak etanol daun P. serratifolia dan Bufotenine sebagai turunan alkaloid yang diisolasi dari ekstrak menunjukkan aktivitas anti-inflamasi . Hasil penelitian ini menunjukkan bahwa Premna serratifolia (bebuas) merupakan sumber ampuh agen anti-inflamasi alami .

[10] Black, PH dan Garbutt, LD, J. Psikosom. Res, 2002, 52 (1), 1-23.

[18] Luliana, S., Susanti, R dan Agustina, E., Jurnal Pengobatan Tradisional, 2017, 22 (3),

KESIMPULAN

[2] Sudarmono, S.,

JTLS, 2018, 8 (2), 238115.

(3), 1-11.

X

[16] Hasanah, F dan Hidayah, N.,

J. Pharm. Sains, 2018, 1 (1), 16-22.

Penelit. Peternakan. Indonesia, 2012, 1 (1), 1–5.

[8] Singh, C., Anand, SK, Tiwari, KN, Mishra, SK dan Kakkar, P., 3 Bioteknologi, 2021, 11 [1] Saim., Pro. Sem. tidak. dan Lokakarya Etnobotani 1. Cisarua Bogor., 381–389, 1992.

[20] Pagare, S., Bhatia, M., Tripathi, N., Pagare, S dan Bansal, YK,

Curr. Tren Bioteknologi.

Farmasi, 2015, 9 (3), 293-304.

[22] Williamson, EM, Okpako, DT dan Evans, FJ, Seleksi, Persiapan dan

Penulis mengucapkan terima kasih kepada Universitas Jambi atas dukungannya terhadap proyek penelitian ini.

Adyttia, A., Untari, EK dan Wahdaningsih, S.,

Int. J.Pharm. Sains. Res, 2014, 1 (2), 5.

[14] Titis, M., Fachriyah, E dan Kusrini, D, Chem Info J., 2013. 1 (1), 196–201.

[6] Parawansah, P., Nuralifah, N., Akib, N dan Antrie, G., Prosiding Seminar Nasional

[12] Tjay T. H dan Rahardja, K, Obat-Obat Penting Khasiat, Penggunaan dan Efek-Efek

Sampingnya, edisi ke-6, 2007, PT. Elex Media Komputindo, Jakarta.

199-205.

[11] Harapan Kesehatan Dunia, 'Indonesia: Harapan Hidup', Harapan Kesehatan Dunia, 2018.

[Online]. Tersedia: https://www.worldlifeexpectancy.com/indonesia-life-expectancy.

[Diakses: 10-Des-2019].

KONFLIK KEPENTINGAN

[5] Katzung, BG, Masters, SB dan Trevor, AJ eds.,

Basic Clin. Farmakol, 2004.

[9]

Berdasarkan aktivitas antiinflamasi ekstrak etanol daun P. serratifolia

[3] Nunes, CDR, Barreto Arantes, M., Menezes de Faria Pereira, S., Leandro da Cruz, L., de Souza Passos, M., Pereira de Moraes, L., Vieira, IJC dan Barros de Oliveira, D., 2020, 25 (16), 3726.

Ikawati, Z.,

Farmakoterapi Penyakit Sistem Syaraf Pusat, 2011, Bursa Ilmu, Yogyakarta.

[17] Apridamayanti, P., Sanera, F dan Robiyanto, R.,

Int. J.Pharm. Sains. Res, 2018, 5 (3), 6.

(20)

20 Juli 2021

p-ISSN : 2302 – 4690 | e-ISSN : 2541 – 0733

Evaluasi Farmakologis Bahan Tumbuhan, Volume 1, 1996, John Wiley Sons Inc, Hoboken, New Jersey.

[30] Ivan, BC, Caira, MR dan Dumitrascu, F, Pendeta Chim, 2020, 71, 51-57.

[23] Oktaviani, E., Wibowo, MA dan Idiawati, N., Jurnal Kimia Khatulistiwa, 2015, 4 (3).

[31] Mishraki-Berkowitz, T., Kochelski, E., Kavanagh, P., O'Brien, J., Dunne, C., Talbot, B., Ennis, P dan Wolf, U., J. Ilmu Forensik , 2020, 65 (5), 1450-1457.

[24] Dianita, R dan Jantan, I., Pharm. Biol, 2017, 55 (1), 1715-1739.

[32] Moreira, LA, Murta, MM, Gatto, C.C, Fagg, C.W dan Dos Santos, ML, Nat.

Melecut. Komuni, 2015, 10(4), 581–584.

[25] Wibowo, S dan Gofir, A, Farmakoterapi Nyeri Inflamasi: Farmakoterapi dalam Neurologi, edisi ke-1, 2001, Salemba Medika, Jakarta.

[33] Dey, P., Kundu, A., Kumar, A., Gupta, M., Lee, BM, Bhakta, T., Dash, S dan Kim, [26] Vandamme, TF, J. Pharm. bersekutu secara biologis. Sains, 2014, 6 (1), 2–9.

H. S, Analisis alkaloid (alkaloid indol, alkaloid isoquinoline, alkaloid tropane). Dalam Kemajuan Terkini dalam Analisis Produk Alami; Elsevier: Amsterdam, Belanda, 505–567. 2020.

[27] Amri, O., Zekhnini, A., Bouhaimi, A., Tahrouch, S dan Hatimi, A, Pharmacog. J, 2018, 10 (1), 71-76.

[28] Hussein, RA dan El-Anssary, AA, Herb. Kedokteran, 2019, 2, 11-30.

X

[29] Sangster, AW dan Stuart, KL, Chem. Pdt., 1965, 65 (1), 69-130.