PEMERIKSAAN FITOKIMIA DAN SPEKTROSKOPI FTIR PADA MENTAH S EKSTRAK DARIEnhalus acoroidesDAUN-DAUN
(Saringan Fitokimia dan Spektroskopi FTIR Ekstrak Mentah DaunEnhalus acoroides)
Made Farmwati1*dan Luh Putu Wrasiati21Jurusan Biologi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam
2Departemen Teknologi Agroindustri, Fakultas Teknologi Pertanian Universitas Udayana, Kampus Bukit Jimbaran, Badung, 80361, Bali, Indonesia
* Penulis koresponden: [email protected]
Diterima: 25 November 2019; Diterima: 9 Januari 2020
Abstrak
Lamun menyediakan jasa ekologi penting dalam ekosistem laut, seperti menstabilkan sedimen, menyediakan oksigen dan bertindak sebagai tempat berkembang biak bagi biota laut. Lamun juga dilaporkan memiliki aktivitas antioksidan yang bermanfaat bagi manusia. Salah satu spesies lamun,Enhalus acoroides, tersebar luas di Indonesia. Penelitian ini bertujuan untuk menyaring senyawa fitokimia, menentukan gugus fungsi dan mengevaluasi profil pigmen yang ada di dalamnyaE. acoroidesekstrak daun, yang dikumpulkan dari Pantai Semawang, Sanur, Bali, Indonesia. Ekstrak daun dibuat menggunakan kloroform:etanol (9:1) dan diuji keberadaan saponin, fenol, tanin dan flavonoid. Gugus fungsi dan profil pigmen ditentukan masing-masing melalui spektroskopi inframerah Fouriertransform (FTIR) dan kromatografi lapis tipis (TLC). Hasil penelitian menunjukkan bahwaE. acoroidesekstrak daun salam mengandung fenol, tanin dan flavonoid. Gugus fungsi utama yang ditemukan pada ekstrak daun adalah gugus hidroksil, lipid, alkana, amina sekunder, asam lemak, senyawa benzenoid dan fenol. Analisis FTIR juga mengidentifikasi adanya klorofil dan karotenoid pada ekstrak, yang selanjutnya didukung dengan analisis KLT. Penelitian ini menunjukkan hal ituE. acoroidesmerupakan sumber antioksidan yang potensial dan memberikan peluang bagi pengembangan produk alami dariE. acoroidesdalam penemuan obat.
Kata kunci:Enhalus acoroides, FTIR, kromatografi, senyawa fitokimia, lamun Abstrak
Rumput laut berperan penting dalam ekosistem laut yang menstabilkan sedimen, membekalkan oksigen dan berfungsi sebagai halaman bagi biota laut. Rumput laut juga dilaporkan mengandung aktivitas antioksidan yang bermanfaat bagi manusia. Spesis rumput laut,Enhalus acoroidesdi jumpai secara luas di Indonesia. Kajian ini bertujuan menyaring sebatian fitokimia, penentuan kumpulan berfungsi dan menilai profil pigmen yang wujud di dalam ekstrak daunE. acoroides, yang diambil dari Pantai Semawang, Sanur, Bali, Indonesia. Ekstrak daun disediakan menggunakan klorofom: etanol (9:1) dan diuji untuk menentukan penentuan keberadaan saponin, fenol, tanin dan flavonoid. Kumpulan fungsi dan profil pigmen telah ditentukan masing-masing melalui spektroskopi inframerah transformasi Fourier (FTIR) dan kromatografi lapisan tipis (TLC). Hasil kajian menunjukkan ekstrak daunE.
acoroidesmengandungi fenol, tanin dan flavonoid. Kumpulan fungsi utama yang dijumpai dalam ekstrak daun adalah kumpulan hidroksil, lipid, alkana, amina sekunder, asid lemak, sebatian benzoid dan fenol. Analisis FTIR juga mengetahuipasti keberadaan klorofil dan karotenoid di dalam ekstrak, yang mana ia juga disokong oleh hasil analisis TLC. Penelitian ini menunjukkan hal ituE.
acoroidesmerupakan sumber antioksidan yang potensial dan memberikan peluang bagi pengembangan produk alami dariE.
acoroidesdalam penemuan obat. Hasil penelitian menemukanE. acoroidesberpotensi sebagai sumber antioksidan dan potensinya dalam pembangunan sumber semulajadi dalam penemuan obat.
Kata kunci:Enhalus acoroides, FTIR, kromatografi, sebatian fitokimia, rumput laut
Perkenalan
Ekstrak tumbuhan mempunyai potensi yang besar dan dapat digunakan untuk berbagai keperluan. Sekitar 80% populasi dunia bergantung pada pengobatan tradisional untuk perawatan kesehatan, dan sebagian besar terapi menggunakan ekstrak tumbuhan dan senyawa aktifnya [1], menunjukkan bahwa dua pertiga dari seluruh spesies tumbuhan memiliki nilai obat [2]. Penelitian telah menunjukkan bahwa sebagian besar tanaman obat mengandung sifat antioksidan [3]. Saat ini, antioksidan alami digunakan dalam kosmetik, makanan dan produk farmasi karena aktivitas antioksidan dalam menangkap radikal bebas. Paparan polusi lingkungan, xenobiotik makanan, dan radiasi menyebabkan pembentukan spesies oksigen reaktif (ROS), yang menginduksi stres oksidatif [4].
Antioksidan mencegah pembentukan ROS, menetralisir ROS dan memperbaiki kerusakan yang disebabkan oleh ROS [5].
Ada banyak spesies tumbuhan yang kandungan fitokimianya belum diketahui. Salah satu kelompok tumbuhan yang belum tereksplorasi secara mendalam adalah lamun yang merupakan satu-satunya tumbuhan berbunga (Angiospermae) yang tumbuh di lingkungan laut. Dapat membentuk padang lamun yang terdiri dari satu atau beberapa spesies dominan [6]. Di Indonesia, 13 spesies lamun telah dilaporkan [7, 8], dan sembilan spesies telah ditemukan di Bali saja [9]. Salah satu spesies tersebut adalah Enhalus acoroides(Lf) Royle, spesies lamun tropis terbesar di perairan Asia Tenggara [10]. Sebuah studi sebelumnya tentangE. acoroidesdari India dilaporkan bahwa spesies ini mengandung alkaloid, fenol, flavonoid, steroid, tanin dan saponin. Selain itu, telah terbukti bahwa ekstrak airE. acoroidesmemiliki aktivitas pemulungan radikal yang tinggi [11]. Beberapa penelitian tentangE. acoroidesdari Indonesia telah menunjukkan bahwa ekstrak metanolE. acoroides mengandung fenol, flavonoid dan terpen [12-14].
Beberapa teknik tersedia untuk mengidentifikasi senyawa fitokimia dalam ekstrak tumbuhan. Misalnya, Spektroskopi inframerah Fouriertransform (FTIR) adalah metode yang digunakan untuk mengidentifikasi gugus fungsi dalam bahan gas, cair dan padat melalui sinar radiasi inframerah [15]. Ini telah digunakan sebelumnya untuk mengidentifikasi biomolekul yang ada dalam ekstrak tumbuhanErythrina variegata[16],Myristica dactyloides[17] danUrtika dioika[18] antara lain. Kromatografi lapis tipis (KLT) adalah metode lain yang digunakan untuk mengidentifikasi senyawa dalam campuran melalui pemisahan campuran yang tidak mudah menguap. Banyak penelitian sebelumnya telah menggunakan TLC untuk menganalisis senyawa bioaktif dalam tanaman obat [19, 20], pigmen tanaman [21] dan bahan tambahan makanan serta pengolahannya [22].
Tujuan dari penelitian ini adalah untuk menyaring senyawa fitokimia dalam ekstrak daunE. acoroidesdari Pantai Semawang, Sanur, Bali, Indonesia, mengidentifikasi pigmen yang terkandung dalam ekstrak daun dan menentukan gugus fungsi yang terdapat pada ekstrak daun tersebut.E. acoroidesdaun sebelum dan sesudah ekstraksi dengan kloroform:etanol (9:1).
Bahan dan metode Persiapan ekstrak
ItuE. acoroidesDaun dikumpulkan dari Pantai Semawang, Sanur, Bali, Indonesia, dicuci dan dikeringkan di udara selama tiga hari. Daun selanjutnya dikeringkan dalam oven pada suhu 50 ºC selama satu hari hingga rapuh. Daun kering dicincang dengan menggunakan blender dan diayak dengan ayakan 60 mesh. Spesimen voucher disimpan pada koleksi herbarium di Herbarium Biologi Udayana (HBU-MP10), Jurusan Biologi Universitas Udayana. Identifikasi dariE. acoroidesberdasarkan karakteristik morfologi dilakukan mengikuti proses den Hartog dan Kuo [23] dan McKenzie dan Yoshida [24].
Sebanyak 20 g serbuk kering diekstraksi dari 200 mL kloroform:etanol dengan perbandingan 9:1 (v/v). Ekstraksi dilakukan dengan menggunakan ekstraktor Soxhlet selama tiga jam. Pelarut disaring menggunakan kertas saring Whatman, dan filtratnya diuapkan dalam kondisi vakum menggunakan rotary evaporator pada suhu 40 ºC dan 100 mbar (IKA®, RV10).
Ekstraksi dilakukan sebanyak tiga kali.
Skrining hasil dan fitokimia
Hasil dinyatakan dalam persentase dan dihitung dengan membagi beratnya
E. acoroides
ekstrak dengan berat bubuk tanaman yang digunakan lalu dikalikan 100%. Skrining fitokimia awal dariE. acoroides
ekstrak dilakukan dalam rangkap tiga menggunakan berbagai uji kimia mengikuti metode standar [25] untuk menentukan keberadaan saponin, fenol, tanin dan flavonoid. Saponin diuji melalui uji busa. Ekstrak sebanyak 2 ml ditambahkan ke dalam air, lalu campuran dikocok. Adanya saponin ditunjukkan dengan terbentuknya busa.Fenol ditentukan dengan uji besi klorida, di mana besi klorida ditambahkan ke dalamnya
E. acoroidesekstrak. Hasil positif ditunjukkan dengan adanya perubahan warna dari hijau menjadi hitam. Uji keberadaan tanin dilakukan dengan penambahan besi klorida dan asam sulfat untuk mengencerkan ekstrak, dan hasil positif
ditunjukkan dengan adanya warna hitam dan terbentuknya endapan hitam. Flavonoid diuji dengan menambahkan amonia dan asam sulfat ke dalam ekstrak encer; warna kuning menunjukkan adanya flavonoid.
Analisis FTIR
Analisis FTIR dilakukan terhadap serbuk daun yang tidak diekstraksi dan sampel yang diekstraksi dengan kloroform: etanol.
Keringkan dalam oven pada suhu 50 ºCE. acoroidesDaunnya diblender hingga menjadi bubuk halus. Sebanyak 1 mg sampel dicampur dengan 50 mg KBr (grade FTIR); kemudian sebagian campuran dimasukkan ke dalam tempat sampel. Semua investigasi dilakukan dengan IRPrestige-21 (Shimadzu). Kloroform: diekstraksi dengan etanolE. acoroidespasta daun diencerkan dengan dua tetes kloroform: etanol (9:1). Satu tetes ekstrak yang telah diencerkan kemudian dicampur dengan KBr 50 mg. Kisaran serapan pemindaian adalah 400 hingga 4000 cm−1.
pemisahan TLC
Pemisahan dan identifikasi pigmen dilakukan menggunakan KLT pada pelat selulosa (Merck) berukuran 20 cm x 20 cm. Campuran pelarut terdiri dari petroleum eter, aseton dan n-propanol dengan perbandingan 90:10:0,45 [26]. Pelat selulosa KLT diaktivasi terlebih dahulu dengan cara mengeringkan pelat dalam oven bersuhu 105 °C selama minimal 45 menit. Ekstrak dioleskan pada piring dan dibiarkan kering. Kemudian, pelat tersebut ditempatkan dalam tangki TLC, dan bintik-bintik tersebut dipindahkan.
Hasil dan Diskusi
Rendemen ekstrak adalah 1,57% ± 0,23. Hasil penelitian yang menggunakan kloroform: etanol (9:1) lebih tinggi dibandingkan hasil penelitian sebelumnya.E. acoroidesekstrak dari Wakatobi, Sulawesi, Indonesia, dan Madura, Jawa Timur, Indonesia, dimana hanya kloroform yang digunakan sebagai pelarut. Rendemen ekstrak kasar dari Wakatobi sebesar 0,55%, sedangkan dari Madura sebesar 0,8%. Kloroform adalah pelarut non-polar; oleh karena itu, ia hanya mengekstrak senyawa nonpolar. Etanol merupakan pelarut yang bersifat polar, sehingga penambahan etanol pada penelitian ini menyebabkan ekstraksi senyawa yang lebih polar pada sampel daun. Selain itu, ada kemungkinan bahwa kondisi pertumbuhan lingkunganE. acoroidesmempengaruhi hasil ekstraksi.
Senyawa fitokimia yang terkandung dalam ekstrak
E. acoroides
ditunjukkan pada Tabel 1. Saponin tidak dianggap ada dalam ekstrak karena stabilitas busa tidak terdeteksi, yaitu busa bertahan kurang dari lima menit. Namun, fenol, tanin dan flavonoid terdeteksi dalam kloroform: etanol (9:1)E. acoroides
ekstrak daun.Kehadiran fenol dan tanin di dalamnya
E. acoroides
dedaunan dari perairan pesisir Indonesia juga telah dilaporkan sebelumnya [13, 27]. Ekstrak metanol sebelumnya dariE. acoroides
Daun dari Lombok Timur, Nusa Tenggara Barat, Indonesia, terbukti mengandung fenol, tanin dan terpen, namun flavonoid tidak terdeteksi [13]. Studi lain menguji ekstrak metanolE. acoroides
daun dari perairan pantai Ambon, Indonesia, dan menemukan adanya flavonoid [14]. Selanjutnya ekstrak kloroform sebelumnyaE. acoroides
daun dari India dilaporkan mengandung flavonoid [11]. Adanya fenol, tanin dan flavonoid di dalamnyaE. acoroides
menunjukkan potensi jenis lamun sebagai sumber antioksidan.
Tabel 1. Komposisi fitokimia kualitatif kloroform: etanol (9:1) ekstrak daunE. acoroides
Senyawa Perubahan Warna Hasil
Saponin
Fenol Tanin Flavonoid
Busa yang tidak stabil Hijau tua hingga hitam
Endapan yang terbentuk berwarna hijau tua hingga hitam dan hitam Hijau tua hingga kuning
- + + + +
= tidak terdeteksi, + = rendah, ++ = sedang
Ikatan kimia atau gugus fungsi terdapat pada bubuk daun kering dan ekstrak daunE. acoroidesdiprediksi
menggunakan FTIR. Ikatan ditentukan dengan menafsirkan spektrum serapan inframerah. Gambar 1 menunjukkan spektrum FTIR serbuk daun kering, sedangkan Tabel 2 menunjukkan interpretasi ikatan kimia pada serbuk daun yang tidak diekstraksi.E. acoroides. Ikatan kuat ditemukan pada ketinggian 3552 cm−1, 1654,92cm−1dan 2054cm−1, sedangkan yang lainnya bervariasi dari lemah hingga sedang. Hasil ini menunjukkan adanya gugus hidroksil, lipid, alkana, asam amino dan senyawa fosfor.
Gambar 1. Spektrum FTIR serbuk daun keringE. acoroides
Tabel 2. Nilai puncak spektral FTIR dan gugus fungsi serbuk daun kering
E. acoroides
SpektrumTIDAK.
Nomor Gelombang
cm
−1Nomor Gelombang
cm−1[28, 29] Penugasan Kelompok Fungsional Senyawa yang Diprediksi
1 2 3 4
3552
2945.30 2887.44 2360.87
3500–3650
~2955 2880–2890 2250–2700
v; OH getaran regangan (gratis) m; CH3peregangan asimetri w;
CH peregangan getaran m;
komponen NH
Gugus hidroksil Lipid
Alkana
Asam amino, komponen terkait amino
5 2054
2050–2140mw; simetri -NH
+ 3peregangan Asam amino bebas danhidrohalidanya
getaran; luas
S; C=C getaran regangan w;
Getaran deformasi CH wm;
CH3getaran goyang
6
7 8
1654.92 1411.89 1163.08
1580–1660 1350–1410 1155–1165
C=C terkonjugasi dengan C=O Bebas alkohol sekunder
POC
2H
5; Senyawa fosfor organik 9
10
927.76 858.32
925–930 820–920
M; getaran kerangka CC wm; Getaran kerangka CC
Alkana Alkana v = variabel, m = sedang, s = kuat
Tabel 3 menunjukkan gugus fungsi kloroform: ekstrak daun etanol
E. acoroides
. Spektrum FTIR ditunjukkan pada Gambar 2. Puncaknya pada 1743 cm−1, 1219 cm−1dan 771cm−1kuat, sementara yang lain bervariasidari lemah ke sedang. Berbagai senyawa yang ditemukan antara lain gugus hidroksil, lipid, alkana, tambang sekunder, senyawa benzenoid dan fenol.
Gambar 2. Spektrum FTIRE. acoroidesekstrak daun
Tabel 3. Nilai puncak spektral FTIR dan gugus fungsi
E. acoroides
ekstrak daun SpektrumTIDAK.
Nomor Gelombang
cm
−1Nomor Gelombang
cm−1[28, 29] Penugasan Kelompok Fungsional Senyawa yang Diprediksi
1 2 3 4 5
3612.67 2931.80 2858.51 2401.38 1743.65
3500–3650
~2930 2800–2900 2400–2600 1734–1745
v; OH getaran regangan (gratis) m; CH2peregangan asimetri w;
CH peregangan getaran wm;
Getaran regangan ND v; C=O ester
Gugus hidroksil Lipid
Alkana
milikku
Lipid membran, berlemak
asam 6
7 8 9
1544.98 1463.97 1219.01 771.53
1490–1580 1440–1465 1165–1225 700–900
w; getaran deformasi NH m;
Getaran deformasi CH Getaran rangka CC
Amina sekunder R-CH3; Alkana - C(CH3)3Alkana Benzenoid S; Getaran tekukan di luar bidang CH
(oop) untuk cincin benzena tersubstitusi
10
677.01 610–690 w; CH mengibaskan getaran Hidrokarbon vinilsenyawa
11
422.41 375–450 w; getaran lentur dalam bidang C-OHaromatik
Fenol
v = variabel, m = sedang, s = kuat
Seperti dapat dilihat pada Tabel 2 dan 3, terdapat perbedaan gugus fungsi antara bubuk daun kering dan ekstrak daun kloroform:etanol (9:1).E. acoroides. FTIR mengidentifikasi bahwa ekstrak daun mengandung getaran CH yang kuat di luar bidang tekukan (oop bending) untuk cincin benzena tersubstitusi, yang menunjukkan
adanya fenol dan flavonoid dalam minyak mentah
E. acoroides
ekstrak. Flavonoid adalah polifenol yang dicirikan oleh dua cincin benzena yang dihubungkan oleh rantai karbon linier [30]. Identifikasi senyawa benzenoidmelalui
Spektrofotometri FTIR mendukung temuan dari skrining fitokimia yang mendeteksi keberadaan fenol dan flavonoid. Amina, imina, alkana dan fenol yang ada dianggap sebagai gugus fungsi utama senyawa bioaktif [31].Puncaknya sekitar 1734–1745 cm−1ditugaskan sebagai ester C=O [31], yang mungkin terkait dengan feofitin dan klorofil [32].
Pada penelitian ini posisi puncak berada pada 1743 cm−1(Tabel 3). Karotenoid diduga terdapat pada bubuk daun keringE.
acoroides. Spektrum FTIR pada 1654 cm-1−1(Tabel 2) ditugaskan sebagai konjugat C=O. Ikatan rangkap terkonjugasi pada karotenoid telah dilaporkan sebagai struktur yang bertanggung jawab atas penyerapan cahaya [33]. Penelitian sebelumnya menyebutkan puncaknya pada 1654 cm−1Hal ini disebabkan oleh kandungan klorofil dan proteinnya [34].
Pemisahan tersebutE. acoroidesekstrak melalui KLT disajikan pada Tabel 4. Delapan titik terdeteksi, dan nilai Rf berkisar antara 0,11 hingga 0,94. Warna dipisahkan menjadi hijau kebiruan, hijau tua, kuning dan abu-abu kekuningan, dan pigmen yang diprediksi termasuk klorofil b, etil-klorofilida a, klorofil b bebas Mg, lutein, klorofil a bebas Mg, pheophytin dan β-karoten.
Tabel 4. Identifikasi senyawa berdasarkan nilai Rf dan warna dari profil KLT
PecahanTIDAK.
Rf
Nilai Warna Warna dariReferensi [26] Identifikasi Maksimum Spektrum (nm)1 2 3 4 5 6 7 8
0,11 0,21 0,24 0,28 0,33 0,39 0,53 0,94
Hijau kebiruan
Hijau tua
Hijau kebiruan Kuning Kuning muda Abu-abu kekuningan Abu-abu
Oranye
Biru hijau Hijau Biru hijau
Kuning KuningAbu-abu
Abu-abu
Kuning Oranye
Klorofil a Klorofil b Etil-klorofilida a Klorofil bebas Mg b lutein
Klorofil bebas Mg a feofitin
β-karoten
655
435 dan 645 434 dan 654
654 649
630 dan 656 424 dan 658
425
Spektrum maksimum setiap titik KLT untuk fraksi satu sampai delapan disajikan pada Tabel 4. Berdasarkan perbandingan dengan Lichtenthaler dan Buschmann [35], fraksi lima dengan serapan maksimum pada 654 nm diidentifikasi sebagai klorofil b, dan fraksi delapan dengan serapan maksimum pada 654 nm diidentifikasi sebagai klorofil b, dan fraksi delapan dengan serapan maksimum pada 654 nm diidentifikasi sebagai klorofil b, dan fraksi delapan dengan serapan maksimum pada 425 nm diidentifikasi sebagai β-karoten. Fraksi lainnya tidak teridentifikasi. Kehadiran β-karoten sesuai dengan hasil analisis FTIR yang mengkonfirmasi adanya klorofil, feofitin, dan karotenoid di dalamnya.E. acoroidesekstrak, dimana gugus fungsi ester C=O diidentifikasi (Tabel 3).
Berdasarkan senyawa fitokimia yang ditemukan dalam analisis FTIR dan TLC,E. acoroidesmemiliki potensi untuk digunakan untuk aplikasi biomedis, karena senyawa fenolik, tanin, flavonoid, klorofil dan karotenoid diketahui memiliki aktivitas antioksidan [36]. Temuan ini memberikan peluang bagi pengembangan produk alami dariE.
acoroidesdalam penemuan obat.
Kesimpulan
Senyawa fitokimia yang terdapat pada kloroform : etanol (9:1) ekstrak daun
E. acoroides
yaitu fenol, tanin, dan flavonoid. Gugus fungsi utama yang diidentifikasi adalah gugus hidroksil, lipid, alkana, amina sekunder, asam lemak, senyawa benzenoid, dan fenol. Analisis FTIR juga mengidentifikasi adanya klorofil dan karotenoid dalam ekstrak, yang kemudian dikonfirmasi dengan profiling TLC. Penelitian lebih lanjut akan fokus pada fraksinasi dan pemurnian senyawa bioaktif potensial yang ada dalam ekstrak.Pengakuan
Penelitian ini didanai oleh Kementerian Riset, Teknologi, dan Pendidikan Tinggi Republik Indonesia dengan Nomor Hibah 492.27/UN14.4.A/LT/2019
Referensi
1.Winston, JC (1999). Khasiat herbal umum yang meningkatkan kesehatan.Jurnal Nutrisi Klinis Amerika, 70(3): 491s-499s.
2. Krishnaiah, D., Sarbatly, R. dan Nithyanandam, R. (2011). Tinjauan potensi antioksidan spesies tanaman obat.
Pengolahan Makanan dan Bioproduk
, 89(3): 217-233.3. Saeed, N., Khan, MR dan Shabbir, M. (2012). Aktivitas antioksidan, kandungan total fenolik dan total flavonoid ekstrak tumbuhan utuhTorilis leptophyllaL.Pengobatan Komplementer dan Alternatif BMC, 12: 221.
4. Al-Gubory, KH (2014). Polutan lingkungan dan faktor gaya hidup menyebabkan stres oksidatif dan perkembangan prenatal yang buruk.BioMedis Reproduksi Online, 29:17-31.
5. Ighodaro, OM dan Akinloye, OA (2018). Antioksidan pertahanan lini pertama-superoksida dismutase (SOD), katalase (CAT) dan glutathione peroksidase (GPX): Peran mendasarnya dalam keseluruhan jaringan pertahanan antioksidan.Jurnal Kedokteran Alexandria, 54(4): 287-293.
6. Björk, M., Short, F., Mcleod, E. dan Beer, S. (2008). Mengelola padang lamun untuk ketahanan terhadap perubahan iklim.
IUCN, Gland, Swiss: hlm.8-18.
7. Kuriandewa, TE, Kiswara, W., Hutomo, M. dan Soemodihardjo, S. (2003). Lamun di Indonesia. Dalam: Green, EP dan Short, FT, Eds., World Atlas of Seagrasses, University of California Press, Barkeley: hlm.172-182.
8. Kuo, J. (2007). Lamun monoecious baru dariHalophila sulawesi(Hydrocharitaceae) dari Indonesia.Botani Perairan, 87(2): 171-175.
9. Pharmawati, M., Nurkamila, AS dan Stevanus. (2016). Kunci sidik jari RAPD dan filogenetik sembilan spesies lamun asal perairan pantai Sanur, Bali, Indonesia menggunakan sekuens matK.Keanekaragaman hayati, 17(2): 687-693.
10. Ogawa, H. dan Namba, N. (2002). Karakteristik ekologi lamun tropis khususnyaEnhalus acoroides.
Ilmu Perikanan, 68(sup2): 1767-1770.
11. Amudha, P., Vanitha, V., Mohanasundaram, S, Bharathi NP dan Jayalakshmi, M. (2017). Analisis fitokimia dan skrining antioksidan lamun secara invitroEnhalus acoroides.Jurnal Internasional Penelitian dan Ilmu Farmasi, 8(2): 251-258.
12. Santoso, J., Anwariyah, S., Rumiantin, RO, Putri, AP, Ukhty, N. dan Yoshie-Stark, Y. (2012). Kandungan fenol, aktivitas antioksidan dan profil serat empat lamun tropis asal Indonesia.Jurnal Pembangunan Pesisir, 15(2): 189-196.
13. Windyaswari, AS, Purba, JP, Nurrahmah, SS, Ayu, IP, Imran, Z., Amin, AA, Kurniawan, F., Pratiwi, NTM dan Iswantari, A. (2019). Profil fitokimia ekstrak lamun (Enhalus acoroides): Sumber laut baru dari Teluk Ekas, Lombok Timur.Seri Konferensi IOP: Ilmu Bumi dan Lingkungan, 278, 012081.
14. Tuapattinaya, PMJ dan Rumahlatu, D. (2019). Analisis kadar flavonoid
Enhalus acoroides
di perairan pantai yang berbeda di Pulau Ambon, Indonesia.Jurnal Internasional Biologi Terapan
, 3(1): 70-80.15. Khan, SA, Khan, S., B., Khan, LU, Farooq, A., Akhtar, K. dan M. Asiri AM (2018). Spektroskopi inframerah transformasi Fourier: Dasar-dasar dan aplikasi dalam gugus fungsi dan karakterisasi bahan nano.
Dalam: SK Sharma, SK, Ed., Buku Panduan Karakterisasi Bahan. Springer International Publishing AG, Springer Nature, Swiss: hlm.317-344.
16. Hemmalakshmi, S., Priyanga, S. dan Devaki, K. (2017). Analisis spektroskopi infra-merah transformasi Fourier
Erythrina variegata
L.Jurnal Ilmu dan Penelitian Farmasi,
9(11): 2062-2067.17. Rajiv, P., Deepa, A., Vanathi, DP dan Vidhya, D. (2017). Skrining fitokimia dan analisis FTIR Daktiloid Myristicaekstrak buah.Jurnal Internasional Farmasi dan Ilmu Farmasi, 9(1): 315-318.
18. Maobe, MAG dan Nyarango, RM (2013). Analisis spektrofotometer infra merah transformator Fourier Urtika dioika ramuan obat yang digunakan untuk pengobatan diabetes, malaria dan pneumonia di wilayah Kisii, Kenya Barat Daya.Jurnal Sains Terapan Dunia, 21(8): 1128-1135.
19. Kumar, S., Jyotirmayee, K. dan Sarangi, M. (2013). Kromatografi lapis tipis: Alat bioteknologi untuk isolasi senyawa bioaktif dari tanaman obat.Jurnal Internasional Tinjauan dan Penelitian Ilmu Farmasi , 18(1): 126-132.
20. Porika, R., Poojari, S., Lunavath, V. dan Mamidala, E. (2014). Investigasi fitokimia awal dan analisis KLT P.angulataekstrak buah.Jurnal Farmasi dan Ilmu Biologi IOSR, 9(2): 11-14.
21. Forgacs, E. dan Cserhati, T. (2002). Kromatografi lapis tipis pigmen alami: Kemajuan baru.Jurnal Kromatografi Cair dan Teknologi Terkait, 25(10-11): 1521-1541.
22. Zahra, N., Alim-un-Nisa, Fatima, Z., Kalim, I. dan Saeed, K. (2015). Identifikasi pewarna makanan sintetik pada minuman dengan kromatografi lapis tipis.Jurnal Ilmu Pangan Pakistan, 25(4): 178-181.
23. den Hartog, C. dan Kuo, J. (2006). Taksonomi dan biografi lamun. Dalam Larkum, T., Orth, RJ dan Duarte, CM, Eds. Lamun: Biologi, ekologi dan konservasi. Springer, Belanda: hlm.1-23.
24. McKenzie, LJ. dan Yoshida, RL (2009). Pengawasan lamun. Prosiding lokakarya pemantauan habitat lamun di Indonesia. The Nature Conservancy, Coral Triangle Center, Sanur, Bali: hlm.29-32.
25. Harborne, JB (1984). Metode fitokimia: Panduan teknik analisis tumbuhan modern. (2
danred).
Chapman dan Hall. London. hal.37-168.
26. Bacon, MF dan Holden, M. (1967). Perubahan klorofil akibat berbagai perlakuan kimia dan fisik daun dan ekstrak daun.Fitokimia, 6:193-210.
27. Dewi, CSU, Kasitowati, RD dan Siagian, JA (2018). Senyawa fitokimia dariEnhalus acoroides dari Pulau Wanci (Wakatobi) dan Pulau Talango (Madura) Indonesia.Seri Konferensi IOP: Ilmu Bumi dan Lingkungan, 137: 012045.
28. Alat Spektroskopi. Akses dari http://www.science-and-fun.de/tools/. [Akses online 21-25 Oktober 2019]
29. Socrates, G. (2004). Tabel dan grafik frekuensi kelompok karakteristik inframerah dan Raman. John Wiley & Sons Ltd, Baffins Lane, Chichester, West Sussex PO19 IUD, Inggris: hlm.1-340.
30. Corcoran, MP, McKay, DL dan Blumberg, JB (2012). Dasar-dasar Flavonoid: Kimia, Sumber, Mekanisme Kerja, dan Keamanan.
Jurnal Nutrisi di Gerontologi dan Geriatri
, 31(3): 176-189.31. Pratheeba, T., Ragavendran, C. dan Natarajan, D. (2015). Potensi larvasida, pupisidal, dan dewasa Ocimum gratissimumekstrak daun tanaman terhadap vektor penyebab filariasis.Jurnal Internasional Penelitian Nyamuk, 2 (2): 1-8.
32. Li, X., Zhou, R., Xu, K., Xu, J., Jin, J., Fang, H. dan He, Y. (2018). Penentuan cepat klorofil dan pheophytin dalam teh hijau menggunakan spektroskopi inframerah transformasi Fourier.Molekul, 23:1010.
33. Mezzomo, N. dan Ferreira, SRS (2016). Fungsionalitas karotenoid, sumber, dan pemrosesan dengan teknologi superkritis: Sebuah tinjauan.Jurnal Kimia, 2016: 1-16.
34. Kushwaha, K., Saxena, J., Tripathi, BK dan Agarwal, MK (2014). Deteksi karotenoid pada bakteri psikrotrofik dengan pendekatan spektroskopi.Jurnal BioScience dan Bioteknologi, 3(3): 253-260.
35. Lichtenthaler, HK dan Buschmann, C. (2001). Klorofil dan karotenoid: Pengukuran dan karakterisasi dengan spektroskopi UV-VIS. Dalam: Wrolstad, RE, Acree, TE, An, H., Decker, EA, Penner, M.
H., Reid, DS, Schwartz, SJ, Shoemaker, CF dan Sporns, P., Eds., Protokol terkini dalam kimia analitik makanan (CPFA), John Wiley and Sons, New York: hal. F4.3.1-F4.3.8 .
36. Lachowicz, S., Oszmiański, J. dan Wiśniewski, R. (2018). Penentuan triterpenoid, karotenoid, klorofil, dan kapasitas antioksidan dalam
