^ - - ^ ^ T^P CHI KHOfl HOC VR CÒNG NGH€ NÓNG NGHllP VifT NflM
CÀI THIÉN HIÉU QUA CHUYÉN GEN
THÒNG QUA VI K H Ù A N ÀGROBACTERIUM TUMEFACIENS CÙA MOT SO DÒNG NGÒ VIÉT NAM
Phgm Thi Ly Thu*, Le Thi Mai Huo'ng, Pham Thj Hu'cng, Nguyén Vàn Dòng, Le Huy Hàm ABSTRACT
Improvement of transformation efficiency of Vvietnamese maize lines t h r o u g h t Agrobacterìutn tumefaciens
Crop transformation research in general and particuiarly in maize depends on many factors, including the factors of bactena and plants The resuits of maize transfonnation studies in Vietnam reveaied that gene transfer capacity is very low. By improving of culture manner of Agrobacterium with two steps using ABC and YEP medium in inoculation step, combined wth one cycle of selection and regeneration stage of transfomried callus on ECM medium, the transformation efficiency of herbicide resistant gene EPSPS into immature embryos of three Vìetnamese maize lines (VH1, CM8. CH9) has been Increased The average transformation efficiency of these lines has risen from 0.16% to 0.32%. Our research resuits will be applied to transfer the other interested genes into maize.
Keywords: Agrobacterium tumefaciens, maize, transformation, EPSPS, immature embryo.
I.DATVANDE
Ngò (Zea mays L.) là mot trong ba cày luong ihuc quan trong nhàt trén Ihé gidi (cùng vói lùa mì va gao) va là dot tupng dupc tàp trung nghièn cuu bang eàe phuang phàp còng nghé sinh hoc. Hièn nay, ngành san xuàt ngò trén thè gidi nói ehung va d nude ta nói riéng dang phài dòi mat vói ràl nhièu vàn de nhu: khi bau bién dòi phuc tap, han hàn, lii lui ngày càng nang né hon, dac biét co dai eiìng là mòl vàn de quan trpng, co thè làm gìàm san lupng cày tròng tir 20-60% (James, 2013). Nghièn cùu bién nap gene khàng thuòc trìr ed va càc gen quan tàm khàc trén dòi tupng cày ngò dà va dang dupc tién hành lai nhiéu phòng ibi nghièm trén thè giéi trong dò Hoa Ky dupc xem là mot irong nhirng nude di dàu trong ITnh vuc này (Hyeyoung & Zhanyuan, 2014). Càc gióng ngò bién dòi gen chiù
' Email: [email protected]
thuòc trù ed da dupe thucmg mai hda trén thè gidi va góp phàn tàng thu nhàp cho ngudi nòng dàn (James, 2013).
Ò Viét Nam, nghièn euu chuyèn gen vào cày ngò dà dupc tién hành trong thòi gian vira qua vdi càc gen quy dinh tinh trang khàng sàu, chiù thuòc trù ed va chiù han. Tuy nhién, càc nghièn cuu bién nap gen vào thue vàt nói ehung va dac bi?t là bién nap gen d cày ngò con gap mot so Irò ngai va hiéu qua chuyèn gen thu dupc rat thàp. Vi vày. nghièn cuu này dupc ihuc hièn nhàm muc dich cài thién hiéu qua chuyèn gen thòng qua càc thi nghièm bièn nap gen kliàng thuòc trii eó vào mòl so dóng ngò chpn lpc cùa Vièt Nam.
II. VÀT LIÈU VA PHl/dNG PHÀP NGHIÈN CIÌTU
1 . V à t l i è u n g h i è n cù^u
Vàt liéu thuc vàt: Càc cày ngò me cho vài lièu phòi non cùa ba dòng ngò Viét Nam
TflP CHI KHOA HOC VA CÒNO NGHl NÒNG NGHIÉP VllT NflM
VHl, CMS, CH9 du-gc tròng tai Trai thuc nghièm Vàn Giang, Hung Yèn.
Val liéu di truyèn: Chùng vi khuan A.
tumefaciens C58 mang vector SP-EPSPS- Cmyc chùa gen khàng thuóc trù co EPSPS dugc phàn làp tir vi khuàn Agrobacterium CP4 do Vién Còng nghé Sinh hoc thièt ké.
2. Phu'O'ng phàp nghièn cu'u
Àp dung quy trinh chuyèn gen vào ngò thòng qua vi khuàn Agrobacterium cùa
Vièn Di truyèn Nòng nghiép (Pham Thi Ly Thu, 2007) va quy trinh cùa Phòng thi nghièm He gen hoc dàu tucmg va Di truyèn phàn tu. Dai hoc tóng hcrp Missouri, Columbia, MJ co cài tién.
a) Càc bum va mói Iruàng nudi cày Pimi non dugc tàch tu càc bàp ngò (7 -13 ngày sau thu phàn) dugc su dung làm mò dich. Càc giai doan nuói cày, chuyèn gen va thành phàn mòi trucrng su dung trong nghièn cùu àp dung theo Bang 1.
Bang 1. Càc buóc va mòi ùuòng nuòi cày àp dung trong nghièn cùu
Nuòi khuàn
Lày nhilm
Dòng nuòi cày
Phyc hèi
Chpn loc
Tài sinh choi
Tgo ré va tài sinh cày
Giai do^n Mau dii'Q'c cat giù- trong glycerol èf nhi?t dp -2<fC. Cày Irai Agrobacterium trén dia mòi tnj'dng dinh dirò'ng d^c co bó sung khàng sinh thich ho'p, nuòi tói à 21°C trong 2-3 ngày.
Càc mòl tru'ò'ng nuòi cày vi Ithuàn du-pc si> dgng tùy theo càc thi nghipm
Lày nhiem VK- phòi non trong mói tru-óng co mgt dò vi khuàn ODeoo =0.5-1, thò'i gian 30-60 phùt.
Nuói cày phòi non trong dièu ki^n tèi. ò' nhi?t dg 20°C trong 3 ngày.
Chuyèn phòi sang mòi tru'ò'ng ReM, nuói tèi à 28°C trong 7 ngày.
Chuyèn mÒ seo tgo thành sang mói truòng ECM, nuòi trong tèi ò' 28°C, thò'i gian 15 ngày.
Chuyèn mó seo màu tràng sang mòi tru'ò'ng SeM, nuói sang à as^C, thò'i gian 15-20 ngày.
Chòi tài sinh t^o thành duQ'c cày chuyèn sang mói trudng t^io rè RM, nuói sang ò 25°C, thò'i gian 15-20 ngày.
Mói tru'ò'ng LB (Bertani, 1952) YEP (Tianayan et al. 2004) ABC (Perry e(a/., iggg)
ÌM-AS
CCM
ReM
ECM
SeM
RM
Thành phàn mói tru'ò'ng (1 L) 10 g tryptone + 5 g yeast extract + 10 g NaCI;
pH=7; 25 mg rifampicin; 50 mg kanamycin.
10 g bacto peptone + 5 g yeast extract + 12 g agar; pH=7; 30 mg rifampicin; 50 mg kanamycin.
800 mi H2O + 3,9 g MES + 15 g bacto-difco agar + 50 mi dung dich AB (20x) + 50 mi ij?m AB (20x) + 20 mi dung dich C; pH=5,6; 50 mg kanamycin.
N6 (Chu et al. 1975) + 2 mg giycine + 68,5 g sucrose + 36 g giucose + 0,7 g l-proline + 0,5 g MES + 1,5 mg 2,4D; pH=5,2; 200 mM AS,
N6 + 2 mg giycine + 30 g sucrose + 0,7 g 1- proiine + 0,5 g MES + 1,5 mg 2,4D, 6 g geirite, pH=5,8: 200 mM AS; 0,85 mg A9NO3 N6 + 2 mg giycine + 30 g sucrose + 0,7 g 1- proiine + 0,5 g MES + 1,5 mg 2,4D; 6 g gelrite;
pH=5,8; 0,85 mg AgNOa; 250 mg cefotaxim.
N6 + 2 mg giycine + 30 g sucrose + 0.7 g 1- proline + 0,5 9 MES + 1,5 mg 2.4D; 6 g gelrite;
pH=5,8; 10 mg A9NO3; 250 mg cefotaxim; 50 mg kanamycin
N6 + 2 mg giycine + 30 g sucrose + 0,7 g 1- proiine + 0,5 g MES; 6 g gelrite; pH=5,8; 1 mg BAR, 0,85 mg AgNOa; 250 mg cefotaxim; 100 mg kanamycin.
MS (Murashige & Skoog, 1962) + 60 g sucrose + 100 mg myo-inositol; 9 g agar; pH=5,8.
TRP CHI KHOn HOC VA CÒNG NGHl NÓNG NGHKP VIIT NnM
ECM co bò sung 50mg/l kanamycin, nuòi trong tòi ò 28°C, thòi gian 15 ngày.
+ Còng thùc D: Chon lpc va lai sinh mó seo chuyèn gen hai chu ky {15 ngày/chu ky) trén mói truò'ng ECM co bò sung 50 mg/1 kanamycin, nuói trong tói ò 28''C dén khi mò seo dal duòng kinh 1,0 - 1,5 cm.
b) Càc còng thùc thi nghièm Càc thi nghièm dugc thiét ké nhàm muc dich cài thién hiéu qua chuyèn gen thòng qua viec cài tién hai giai doan cùa quy Irình: Giai doan nuòi khuàn va giai doan chon loc va tài sinh mó seo chuyèn gen.
* Thi nghièm 1: Nuòi va tao dich vi khuàn lày nhiém theo 2 phuang thuc:
+ Còng thùc A: Vi khuàn Agrobacterium dugc nuói cày trén mot loai mòi truòng gìàu dinh diròng LB, nuòi tói ò 21''C trong 3 ngày.
+ Cóng thùc B: Vi khuàn Agrobacterium dugc nuói cày trén hai loai mòi tniòng khàc nhau: i) mói Iruòng nghèo dinh duòrng ABC, nuói tòi ò 28''C trong 3 ngày; ii) mòi truòng YEP, nuói tièp 1 khuàn lac tu mòi tnròng ABC, nuói lòi ò 21°C trong 3 ngày.
* Thi nghièm 2: Chon loc va tài sinh mó s?o chuyèn gen
+ Cóng thùc C: Chpn lpc va tài sinh mò seo chuyèn gen mpt chu ky trèn mÒi Iruòng
Bang 2. Trinh tu càc d o ^ mòi su dung trong nghièn cihi e) Phàn tich cày chuyèn gen Tàch AND tóng so: Tàch chièt AND long so tu màu là cùa càc cày ngò chuyèn gen tài sinh theo phuang phàp CTAB (Saghai-Maroof e/a/., 1984) co cài tién.
Phàn tich PCR: Tién hành vói càp mòi CP4-EPSPS dac hiéu cho gen EPSPS (Bang 2); chucmg trinh phàn ùng vói cap mòi CP4-EPSP là QS^C/Sphùt, 95''C/lphùt, 51**C/30giày, 72''C/1 phùt 30 giày, làp lai trong 30 chu ky, 72°C/10 phùl, két thùc 4 C; San phàm PCR dugc kiém tra bang dién di trén gel agarose 1%.
STT 1 2
Tèn m6i CP4-EPSPS-F CP4-EPSPS-R
Trinh t^moi
5'- ATGOC ACAAA TTAAC AACAT GGCAC-3' 5'- GCCCA n r C G CGCAG CGGGT TCAAC - 3 '
Càc chi tìéu theo dòi va dành già Càc thòng so sau dugc quan tàm de dành già hièu qua chuyèn gene:
Ty le phuc hòi cùa phòi ngò sau bién nap (%) = So phòi song sòl sau chuyèn gen X 100%/Tóng so phòi bién nap.
Ty le tao mò seo chuyèn gen (%) = So mó s?o chuyèn gen tao thành x 100%/Tóng so phòi ph\ic hói sau bièn nap.
Ty le tài sinh cày chuyèn gen (%) = So cày chuyèn gen tài sinh x 100%/Tòng so mò s?o chuyèn gen phòi hóa.
Ty le song sót cùa cày chuyèn gen (%) - So cày chuyèn gen song sót x 100%/Tóng so cày chuyèn gen ra dàt.
Hiéu suàt bién nap (%) = So cày mang gen chuyèn x 100%/Tóng so phòi bién nap.
III.KÈTQUÀVÀTHÀOLUÀN
1. Nghièn cu'u ành hu'ò'ng cùa Phu'O'ng thipc nuói vi khuàn Agrobacterium tumefaciens dén hi^u qua chuyèn gen khàng thuòc trù> co vào mot sé dòng ngò chpn lpc
Nghièn cùu dugc thuc hièn bang càch àp dung 2 còng thùc nuói khuàn khàc nhau
T9P CHI KHOn HOC Vfl CÓNG N G H l NÒNG NGHICP VIÉT NHM
trong qua trinh chuyèn gen vói vector SP- ABC, YEP). Két qua bién n^p cùa moi thi EPSPS-Cmyc: còng thùc nuòi kliuàn A (su nghièm chuyèn gen dugc thòng kè chi tiét dung mói truòng giàu dinh duòng LB) va va dànli già thòng qua càc thòng so quan còng thùc B (su dung hai loai mòi truòng tàm dupc trinh bay tai Bang 3, 4.
Két qua thi nghièm chuyèn gen khàng thuòc trù co àp dung còng vi kliuàn trong mòi truòng LB (còng thùc A)
thùc nuòi
Dòng
VH1 CMS CH9 Tóng sé
sé ll^Q-ng m i u
CCM
926 1350
800 3076
ReM
721 687 554 1962
ECM 1 568 450 400 1418
ECM 2 230 182 183 595
SeM 51 35 37 123
RM 42 29 31 102
S6 cày dàt 29 24 25 78
So cày song
sót 14 13 11 38
So cày du'O'ng tinh PCR 2 1 2 5
Tylé phuc
(%)
hòi 77,86 50,89 69,25 63.78Tyl?
mó seo
(%)
31.90 26,49 33,03 30.33
Tylé tài sinh
(%)
22,17 19,23 20.22 20.67
Tylé song sót
(%)
48.28 54,17 44,00 48,72
Hiéu suàt bién n9P (%1
0.22 0,07 0,25 0,16
Bang 4. Két qua thi nghièm chuyèn gen khàng thuòc trù co àp dung còng thùc nuói vi khuàn hong mòi Iruòng ABC va YEP (còng Ihùc B)
Dòng
VHl CM8 CH9 Tóng so
So iUQ'ng màu CCM
760 1662 984 3406
ReM
652 1218 903 2773
ECM1 536 927 784 2247
ECM2 240 481 376 1097
SeM 82 126 110 318
RM
65 82 99 246
Sé cày ra dat 33 48 41 122
Sé cày song
sót 17 28 25 70
sé cày duong tinh PCR 2 2 3 7
Tylé phuc hòi
(%|
85,79 73,29 91,77 81,42
Tylé tao mò s^o
(%)
36,81 39,49 41,64 39,56
Tylé tal sinh
34.17 26.20 29.26 28,99
Tylé song sót
(%)
51,52 58,33 60.98 57,38
Hiéu suàt bièn nap
(%|
0,26 0,12 0,30 0,21
Dòi vói phuang phàp chuyèn gen thòng qua Agrobacterium, tàn so bièn nap phu thuòc vào càc yèu tò lién quan dén vi khuàn va thirc vàt. Dành già ve yèu lo vi khuàn, hai còng ihùc thi nghièm ma chùng tòi nghièn cùu dèu thuc hièn vói cùng mot loai mòi truòng va diéu kién nuòi cày, chi khàc nhau ò giai doan nuòi khuàn Agrobacterium dùng cho bién nap. Do vày, hièu suàt chuyèn gen cùa mòi còng thùc thi nghièm phu thuòc chù yèu vào ty le phuc bòi cùa phòi non sau lày nhiém.
Trong còng thùc A, ty le phuc hòi ehung cùa phòi non 3 dòng ngò sau lày nhiém dat 63,78%. Càc thòng so dành già
khàc cùa cà 3 giòng ngò dèu khòng khà quan vói ly le tao mò seo dat ehung là 30,33%, ly le tài sinh dat 20,67% va ty le song sót dat 48,72%. Phàn tich PCR 38 cày ngò sau chuyèn gen song sòl thuòc cóng Ihùc A ihu dugc 5 cày duong tinh: 2 cày VHl, 1 cày CM8, 2 cày CH9. Két qua cho Ihày hiéu qua chuyèn gen EPSPS cùa 3 dòng ngò ihu dugc rat thàp dal t>' le ehung là 0.16%, trong dò dòng CH9 dal hièu suàt 0,25%, VHl dat 0,22%, dòng CM8 thàp nhàt 0,07% (Hlnh la).
Khi ihay dòi càch Ihùc nuói khuan bang vièc àp dung còng thùc B, két qua bién nap dugc cài thién rò rèi ò cà 3 dòng ngò vói
TflP CHt KHOn HOC Vn CÓNG N G H l N Ò N G N G H l l P VI^T NHM
càc thòng so chuyèn gen dèu tàng. dac biét ty le phuc hòi cùa phói non dugc tàng lén dang ké dat ty le ehung là 81,42%. Két qua phàn tich PCR 70 cày ngò sau chuyèn gen song sót thuóc còng thùc B thu dugc 7 cày duang tinh góm: 2 cày V H l , 2 cày CMS, 3 cày CH9 (Hinh Ib). Hiéu suat bién nap cùa cà 3 dòng ngò ciìng dugc cài thién hon vói
dòng VHl dal 0,26%, CMS dat 0,12% va CH9 dat 0,3%..
Nhu vày, ànli huòng cùa càch thùc nuòi khuàn dén hiéu qua chuyèn gen là luong tir ò cà 3 giòng ngò, nhrnig vói moi dòng ngò kliàc nliau thi tàn so chuyèn gen thu dugc cùng kliàc nhau.
^ -s»^ ^ ^ ^ * * t ^ ' ' <^'
^C^^'^^^SfJ!'^^^
(a) (b)
Hình 1: Phàn tich PCR gen EPSPS càc cày TO cùa (hi nghièm chuyèn gen àp dung còng Ihùc A (a) va còng thùc B (b). Vgch kich (huàc 644 bp là doan AND cùa gen EPSPS. M. Marker ìkb (Fermentas): P. Boi c/n'mg duong (ANDplasmidSP-EPSPS-Cmyc); WT. Dói chùng àm (AND
dòng khàng chuyèn gene).
Tu kèt qua thi nghièm so sành giiia hai còng thùc nuòi khuàn A va B cho thày vi khuàn Agrobacterium chuàn hi theo cóng Ihùc B dà co ành huòng dàng ké dén hiéu suàt bièn nap gen EPSPS.
Diéu này co thè giài thich là do vi khuàn dugc nuói cày trong mòi truòng nghèo dinh duong ABC co toc dò sinh truòng bi kìm hàm, sau dò dugc chuyèn sang mói truòng giàu dinh duràn^ YEP vi khuàn sé dal mùc sinh truòng tói da truóc khi lày nhiém vói màu thuc vàt, dan dèn khà nàng xàm nhiém cùa vi khuàn vào té bào thuc vàt manh han. Trong tnròng hgp nuói khuàn bòi mòi Iruòng giàu dinh duòng LB (còng thùc A), vi khuàn dat ngay mùc sinh truòng tòi da sau dò giàm dàn, vi thè khà nàng xàm nhièm vào tè bào thuc vàt cùng giàm.
Tuy nhièn, trong qua trinh nuói cày khà nàng tài sinh cùa 3 dòng rat thàp dat 26,20 - 34,17% do thòi gian nuòi cày va chuyèn mau kéo dai ò giai doan chpn loc
dàn dén hiéu suàt chuyèn gene dat dugc chi ò mùc khièm tòn 0,21%. Chinh vi vày, ngoài yèu tò vi khuàn con mot yéu tò quyèt djnh dén hiéu suàt bién nap khàc ma nhóm nghièn cùu càn quan tàm là yéu tò tài sinh thuc vàt, càn phài cài tién so làn cày chuyèn ò giai doan chon loc de tàng hièu suàt chuyèn g e n .
2. Nghièn cu'u ành hu'ò'ng cùa sé chu ky chon loc va tal sinh mò s^o dén hi^u qua chuyèn gen khàng thuòc trù" co vào mot sé dòng ngò chon loc
Thi nghièm dành già dira trén co so so sành hiéu qua tài sinh cùa 3 dòng ngò chuyèn gen sau qua Irình chon lpc 1 chu ky (còng ihùc C) va 2 chu ky (cóng thùc D). Càn cu vào kèl qua nghièn cùu dà thu dugc tai Bang 4, chùng lòi tién hành Ihi nghièm vói cóng thùc C àp dung phuong phàp nuòi vi khuàn Agrobacterium trèn hai loai mòi Iruòng ABC va YEP (Bang 5, Hình 2).
TflP CHI KHOn HOC VA CÒNG HOHÌ NÒNG NGHiéP VIET N n M
Bang 5. Két qua thi nghièm chuyèn gen kliàng thuòc trù co àp dung 1 chu ky chon lpc va tài sinh cày (còng thùc C)
Dòng
VHl CM8 CH9 Tèng so
So li^o'ng màu CCM
904 915 997 2816
ReM 828 750 903 2481
ECM 543 482 584 1609
SeM 200 186 222 608
RM 114 90 103 307
Sé cày ra
dàt 60 52 58 170
Sé cày song
sót 32 30 37 82
So cày du'O'ng tinh PCR
3 2 4 9
Tylé tao mò seo (%) 65,58 64,27 64,67 64,85
Tylé tài sinh (%1 36.83 38,59 38,01 37.79
Tylé song sót (%)
53,33 57,69 63,79 58,24
Hiéu suàt bièn nap
(%)
0.33 0,22 0,40 0.32
Hinh 2 Phàn tich PCR gen EPSPS càc cày TO cùa thi nghiém chuyèn gen àp dung cóng thùc
C; M Maiker Ikb (Feimentas), P Bòi ehung duxmg (AND plasmid SP-EPSPS-Cmyc); WT.
Bòi chùng àm (AND dòng khòng chuyèn gen).
Kèt qua bièn nap cùa ihi nghiém àp dung còng thùc C cho ihày hiéu suàt chuyèn gen cùa cà 3 dòng ngò dal ly le ehung là 0,32%. Càc thòng so dành già co chiéu huóng tàng cao, trong dò ty le tao mò seo cùa cóng thùc C dal 64,85% va ly le tài sinh mò seo chuyèn gen dat 37,79% cao hon han so vói kèt qua chpn lpc vói 2 chu ky (Bang 3). Quan sàt callus phòi hóa tao Ihành sau 1 va 2 chu ky chpn lpc nhàn tliày dàc diém hinh thài va khà nàng tài sinh cùa 2 mau callus co su khàc bièl rò rét. Callus cùa qua trinh chpn lpc 1 chu ky co màu Iràng sùa^ cùng, kich thuóc to han va khà nàng lai sinh cao hon so vói callus dugc chon lpc qua 2 chu ky.
So sành vói kèt qua chuyèn gen cùa thi nghièm truóc (Còng thùc A dat hiéu suat 0,16%; Gòng thùc B dat 0,21%) ihì hiéu qua chuyèn gen EPSPS vào 3 dòng ngò
chpn lpc cùa cóng Ihùc C là cao nhàt. Xét ve dac dièm sinh ly cày tròng, cày ngò co thòi gian sinh truòng ngàn, vi thè càc giai doan trong qua trinh nuòi cày, chpn lpc va tài sinh in vitro néu kéo dai thi sau khi chuyèn cày ra dàt tròng ihòi gian sinh truòng cùa cày se con lai rat ngàn, dàn dén cày ra hoa som, càc dàc tinh nóng hoc cùa cày kém. Diéu này ciìng ành huòng Inrc tièp dén khà nàng tài sinh cày in vitro.
IV.KETLUÀN
Thòng qua càc nghièn cùu cài thién phuong thùc nuòi cày vi lAwmiJ^obacterium hai buóc vói mòi truòng ABC va YEP, chpn lpc va tài sinh mò seo chuyèn gen Irèn mói truòng ECM mot chu ky dà cài thièn dupc hiéu qua chuyèn gen khàng thuòc trù co EPSPS vào phòi non cùa mot so dòng ngò Vièt Nam, hiéu suàt bièn nap gen trung bình dà tàng tu 0,16% lèn 0,32%. Ket qua cùa nghièn cùu này tao co so quan trpng cho càc nghièn cùu chuyèn gen quan tàm khàc vào dòi tugng cày ngò.
TÀI LIÈU THAMKHÀO
1. Chu C. C , Wang C. C , Sun C. S., Hsu C, Yin K. C , Chu C. Y., Bi F. Y., (1975),
"Establishment of an efficient medium for anther culture ofrice through comparative experiinents on ihe nitrogen source'\ Sci Sin 18: 659-668.
TflP CHI KHOn HOC VR CONG NGHl NÒNG NGHlfP VI€T NAM
Hyeyoung L., Zhanyuan J. Z. (2014). 5. Saghai-Maroof M.A, Soliman K.M, Agrobacterium-Me(/iaW Transformation Jorgensen R.A. and Allard R W. (1984).
of Maize (Zea mays) Immature Embryos. Ribosomal DNA spacer-Ienglh Methods in Molecular Biology 1099: polymorphism in barley: Mendelian^
273-280. inheritancc. chromosomal location, and
popiilation dynamics. Proc. Nati. Acad.
James C. (2013). Global Status of Sci. USA, 81: 8014-8019.
Commercialized Biotech/GMCrops: 2013. 6. Tianyan S., Claudia T., Noboru N. and ISAAA Brlef 46-2013. Masaaki I. (2004). Aerolysìn /.v actìvated by
meiaUoproiea.se in Aeromonas veronii biovar sobria. J Med Microbio! 53: 477-482.
Pham Thi Ly Thu (2007). Nghièn cihi xày dimg he thòng lai sinh tu phài non va xàc
dinhphicaiìg phàp chuyèn gen thich hg^p ò Mgày nhàn bài: 01/12/1014
ngò. Luàn àn tién sy Sinh hpc, Vién Còng Nguòi phàn bièn: GS. TSKH. Tran Duy Quy nghé Sinh hpc, Vién Khoa hpc va Còng Ngày phàn bién: 04/12/2014
nghé Vièt Nam. Ngày duyèt dàng: 15/12/2014
KÉT QUA NGHIÈN CQU XÀC DINH BIOVAR VA DA DANG DI TRUYÈN MOT SO ISOLATE VI KHUAN RALSTONIA SOLANACEARUM SmJH GAY BÉNH HÉO XANH LAG
Ò MOT SO T Ì N H T R O N G LAG MIEN BAG VIÉT NAM 'Z. J Z ^ '. O Nguyén Vàn Viét, Nguyén Thj Vàn,
^ ' Le Thi Bich Thùy, Nguyén Manh Hùng, Ngo Vàn Ngòn', Ngò Thi Thùy Linh ABSTRACT
Research result on identification of biovar and genetic diversity of some Ralstonia solanacearum Smith Bacteria isolates causing peanut bacteria wilt
in some peanut growing provinces in Northern Vietnam
The resean^h result on biovar identification of 61 isolates ofR. so/anaceanjm bactena isolatedfrom peanut plants affected by bacterial wilt disease in some key groundnut grciwing provinces in the North shows that ali isolates belong to biovar 3 and biovar 4, of which 80.3% are of Biovar 3 and 19 7% are of Biovar 4. By RAPO analysis, the isolated bactena are divided into two main groups and of rather dose genetic diversity (with coefRcient similarity ranging from 0-74 to 0.99). Group I accounts for 5,4% and group II accounts for 94 6% and are divided into lOdifferentsubgroups.
The resuits on analyzing the distribution of Ralstonia solanacearum Smith Bactena isolates in some groundnut-growing provinces in the North has identified that Ralstonia solanacearum Smith Bacteria is rather diversed in Hanoi (including Biovar 3, 4 and 7 subgroups on genetic diversity) Average genetic diversity is found in Ninh Binh, Nghe An, Thanh Hoa, Bac Ninh. Bac Giang, Hoa Binh (there are only 2 types of biovar 3 and 4, and 2-3 subgroups on genetic diversity). It is less diverse in Ha Tinh {only biovar 3 and 2 subgroups of genetìc diversity).
Keywo/ids: Groundnut, bactena! wilt, Ralstonia solanaceamm, genetic diversity, biovar.
' Email: [email protected]
