4 HASIL DAN PEMBAHASAN
S. aureus dan Ekspresi Gen sea
Aktivitas Ekstrak Kasar Alkaloid terhadap Jumlah BakteriS. aureus
PemaparanS. aureusSJ1 dengan konsentrasi 0, 1, dan 2 KHM selama 2 jam menghasilkan jumlah sel bakteri yang lebih rendah dibandingkan dengan kontrol (Gambar 16). Pada pemaparan dengan 0 mg/ml ekstrak kasar alkaloid, jumlah bakteri mengalami kenaikan 1.09 log CFU/ml, sedangkan pada konsentrasi 0.25 mg/ml dan 0.5 mg/ml, jumlah bakteri hanya mengalami sedikit kenaikan, yaitu 0.42 log CFU/ml dan 0.21 log CFU/ml. Semakin tinggi konsentrasi ekstrak yang diberikan, semakin kecil kenaikan jumlah bakteri setelah 2 jam waktu inkubasi. Berdasarkan perbandingan dengan pertumbuhan kontrol (0 KHM), ekstrak kasar alkaloid konsentrasi 0.25 mg/ml dapat menghambat 61% pertumbuhan dan pada konsentrasi 0.5 mg/ml mampu menghambat 81% pertumbuhan. Konate et al. (2012) dan Luoet al.(2013) juga menemukan terjadinya penurunan jumlah selS. aureusyang diberi perlakuan dengan alkaloid.
Gambar 16 Pengaruh ekstrak kasar alkaloid daun pepaya pada 0, 1, dan 2 KHM terhadap pertumbuhan S. aureusSJ1. 0 jam, 2 jam.
Konate et al. (2012) menguji aktivitas antibakterial ekstrak alkaloid dari Cienfuegosia digitata Cav. terhadap methicilin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA). Pemaparan MRSA dengan ekstrak alkaloid C. digitata Cav. selama 6 jam dapat membunuh bakteri tersebut, yang ditunjukkan dengan tidak adanya pertumbuhan pada media cawan. Luoet al.(2013) melakukan pengujian aktivitas berbagai alkaloid berberine terhadap MRSA dengan menggunakan tikus sebagai hewan model. Tikus dengan defisiensi sistem imun diinfeksikan dengan suspensi MRSA serta diberikan berbagai alkaloid berberine secara oral. Pada hari ke-16 setelah infeksi, organ dari tikus dihomogenisasi dengan garam fisiologis, diencerkan, dan disebar pada agar cawan serta dilakukan perhitungan jumlah koloni. Kombinasi optimum alkaloid berberine, coptisine, jatrorrhizine, palamtine, dan epiberberine dapat mereduksi jumlah MRSA dibandingkan dengan kontrol tanpa alkaloid, yaitu dari 8.1 menjadi 4.3 log CFU/g pada organ ginjal, 4.7
5.93 5.94 5.80 7.02 6.37 6.01 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 0 0.25 0.5 J u m la h b a k te r i (lo g CF U/m l)
32
menjadi 2.6 log CFU/g pada organ paru-paru, serta dari 2.8 menjadi 1.8 log CFU/g pada organ otak.
Kemurnian Isolat RNA
Isolat RNA yang baik memiliki nilai rasio A260/A280 ~ 2.0 (Barbas et al. 2007). Pada penelitian ini, isolat RNA yang diperoleh memiliki rasio A260/A280di atas 2.0. Isolat RNA S. aureus yang tidak dipaparkan dengan ekstrak kasar alkaloid memiliki nilai rasio A260/A280 yang baik, yaitu 2.1. Akan tetapi, isolat RNA yang telah dipaparkan dengan ekstrak kasar alkaloid pada 1 dan 2 kali KHM memiliki nilai rasio A260/A280 yang lebih besar, yaitu 4.5 dan 3.3. Walaupun demikian, rasio absorbansi pada 260 dan 280 nm di atas 1.8 biasanya dianggap sebagai indikator kemurnian RNA yang dapat diterima (Elaume dan Jabbouri 2004; Imbeaudet al. 2005). Rasio A260/A280 di atas 1.8 mengindikasikan jumlah protein pada suspensi isolat RNA yang cukup rendah.
Aktivitas Ekstrak Kasar Alkaloid terhadap Ekspresi Gensea
Walaupun pemaparan dengan ekstrak kasar alkaloid daun pepaya hingga konsentrasi 0.5 mg/ml selama 2 jam menghasilkan sedikit kenaikan jumlah sel, ekstrak kasar alkaloid pada konsentrasi tersebut dapat menyebabkan penurunan ekspresi relatif gen sea. Pemaparan ekstrak kasar alkaloid daun pepaya menyebabkan peningkatan nilai CTdari gensea. Nilai CTgen seadengan adanya pemaparan dengan ekstrak kasar alkaloid berbeda nyata dengan nilai CT gen sea tanpa pemaparan alkaloid (Lampiran 3). Akan tetapi, pemaparan ini tidak mempengaruhi nilai CT dari gen penyandi 16S rRNA (Tabel 9). Nilai CT berbanding terbalik dengan jumlah kopi dari DNA cetakan. Semakin tinggi jumlah awal DNA, semakin rendah nilai CT.
Nilai CTgen penyandi 16S rRNA yang relatif konstan ini mengonfirmasikan terjadinya sedikit peningkatan jumlah sel S. aureus. Gen penyandi 16S rRNA merupakan genhousekeepingyang selalu diekspresikan. Gen ini menyandikan 16 ribosomal RNA, yang merupakan komponen dari subunit 30S ribosom prokatiotik. 16S rRNA diperlukan oleh sel, selalu diproduksi pada berbagai kondisi, serta terlibat di dalam metabolisme protein. Gen ini digunakan sebagai standar atau kontrol internal di dalam qPCR dan dapat berperan sebagai penanda jumlah sel di dalam sampel (Vandecasteeleet al.2001).
Amplifikasi gen sea pada 0 mg/ml ekstrak kasar alkaloid membutuhkan 17.38 siklus sehingga sinyal fluoresens yang dihasilkan dapat melewati nilai threshold (Tabel 9). Akan tetapi, pemaparan dengan 0.25 dan 0.5 mg/ml ekstrak kasar alkaloid menyebabkan amplifikasi gen seamembutuhkan siklus yang lebih banyak untuk melewati nilaithreshold.Hal ini menunjukkan terjadinya penurunan jumlah cDNAseaawal, yang berarti lebih sedikit mRNA yang disintesis dari gen sea.Lee et al. (2007) mempelajari ekspresi gen enterotoksin dari isolat S. aureus asal pangan dengan teknik qRT-PCR menggunakan SYBR green. Tingkat ekspresi gen yang diperoleh bervariasi, bergantung pada spesies dan gen enterotoksin. Duquenneet al.(2010) juga menggunakan qRT-PCR dengan SYBR green untuk mempelajari ekspresi dari gen sea dansedselama proses pembuatan keju. Ekspresi gen sea tidak mengalami perubahan yang berarti dalam 72 jam pertama waktu pembuatan keju, sedangkan ekspresi gen sed mengalami penurunan. Perbedaan tingkat ekspresi ini terjadi karena adanya interaksi antaraS.
33 dan pada keju serta karena adanya perbedaan pengaturan dalam proses pembentukan SEA dan SED.
Berbagai metode dapat digunakan untuk menganalisis data ekspresi relatif gen. Salah satunya adalah dengan menggunakan metode perbandingan CT atau metode 2 ∆∆ . Pada penelitian ini, nilai ekspresi relatif dari gen merupakan nilai 2 ∆∆ , yaitu dengan nilai !!CT diperoleh dari selisih antara !CT gen dengan gen 16S rRNA bakteri yang mengalami pemaparan 0.25 mg/ml atau 0.5 mg/ml ekstrak kasar alkaloid dengan !CT gen dengan gen 16S rRNA bakteri tanpa pemaparan (0 mg/ml). dengan 0 mg/ml ekstrak kasar alkaloid memiliki nilai ekspresi relatif 1, sedangkan dengan pemaparan 0.25 mg/ml dan 0.5 mg/ml ekstrak kasar alkaloid memiliki nilai ekspresi relatif yang lebih rendah, yaitu 0.035 dan 0.025 (Tabel 9). Nilai ekspresi relatif tersebut menunjukkan bahwa ekspresi gen mengalami penurunan 28.5 (1/0.035) kali berkaitan dengan pemaparan 0.25 mg/ml ekstrak kasar alkaloid daun pepaya. Ekspresi gen pada dengan konsentrasi pemaparan 0.5 mg/ml mengalami penurunan yang lebih besar, yaitu 40.7 (1/0.025) kali.
Tabel 9 Nilai ekspresi relatif gen dengan metode 2 ∆∆
Konsentrasi ekstrak kasar alkaloid (mg/ml)
CT gen * CT gen penyandi
16s rRNA* CT CT ∆∆
0 17.38 ± 0.28b 15.26 ± 0.41c 2.12 0 1.000
0.25 22.58 ± 1.07a 15.63 ± 0.17c 6.95 4.83 0.035
0.5 23.15 ± 0.62a 15.69 ± 0.58c 7.47 5.35 0.025
* Nilai dengan huruf yang berbeda adalah berbeda nyata (P < 0.05).
SYBR green sebagai molekul reporter fluoresens di dalam qPCR dan analisis dengan metode perbandingan CT juga digunakan oleh Qiu (2010) dan Azizkhani (2013) untuk mengukur ekspresi dari enterotoksin dan hemolisin dari . Qiu (2010) mempelajari pengaruh thymol, suatu senyawa fenol monoterpen, terhadap sekresi α:hemolisin, SEA, dan SEB
. Bakteri dengan konsentrasi 109 CFU/ml dipaparkan dengan thymol pada konsentrasi 64 µg/ml selama 4 jam pada suhu 37°C. Pemaparan tersebut menyebabkan penurunan ekspresi gen penyandi hemolisin, SEA, dan SEB sebesar 10.2, 8.6, dan 5.2 kali. Di sisi lain, Azizkhani (2013) mempelajari efek minyak esensial dari Boiss. terhadap ekspresi SEA, SEC, dan SEE pada Minyak esensial dari tanaman tersebut mengandung senyawa fenol, carvacrol, sebagai penyusun utamanya. Setelah pemaparan pada suhu 35°C selama 72 jam, minyak esensial Boiss. pada konsentrasi 0.023 % (v/v) dapat menurunkan ekspresi gen penyandi SEA, SEC, dan SEE sebesar 13.9, 11.21, dan 12.44 kali.
Gen membentuk puncak kurva pelelehan pada suhu 76°C, sedangkan gen penyandi 16S rRNA pada suhu 84°C (Gambar 17). Berdasarkan hasil analisis kurva pelelehan tersebut, tidak terdapat produk kontaminan di dalam reaksi. Analisis kurva pelelehan penting dilakukan pada penggunaan SYBR green sebagai molekul fluoresens di dalam qPCR karena SYBR green dapat mendeteksi semua DNA utas ganda, termasuk primer dimer, DNA kontaminan, dan produk PCR dari primer yang salah menempel. DNA kontaminan atau primer dimer ditunjukkan dengan terbentuknya puncak ( ) tambahan selain puncak
amplikon yang diingink menggunakan probe fluo ganda lain, selain DNA t (Artin 2008; Marta 2
Gambar 17 Kurva pelele Secara kualitatif, pe elektroforesis produk qPC kasar alkaloid menghasi (Gambar 18).
Gambar 18
Berdasarkan hasil termasuk dalam golongan produksi enterotoksin. Hook et Arn dan Kedua piperidin alkaloid konsentrasi 0.5 mg/ml sebesar 79% dan 71%. mencapai 200 µg/ml tida sel L 1210 (Marambio
12
inginkan (Azizkhani 2013). Beberapa peneli e fluoresens untuk meminimalkan terdeteksinya D NA target, sehingga dapat diperoleh hasil yang lebih
arta 2011; Cao 2012).
pelelehan gen dan gen penyandi 16S rRNA tif, penurunan jumlah awal cDNA dapat dilihat p uk qPCR gen . yang dipaparkan denga
nghasilkan pita DNA berukuran 120 bp yang le
Hasil elektoforesis produk qPCR gen SJ1 yang dipaparkan dengan ekstrak kasar alkaloid daun pepaya pada konsentrasi (1) 0 mg/ml, (2) 0.25 mg/ml, dan (3) 0.5 mg/ml. M= 100 bp plus DNA ladder. hasil yang diperoleh, alkaloid pada daun pepay longan piperidin, memiliki aktivitas pernghambatan sin. Alkaloid piperidin yang berasal dari
L memiliki kemampuan dalam mengik kaloid tersebut, yaitu norlobelanidin dan norlelobani
memiliki persentase aktivitas pengikatan terhad . Akan tetapi, alkaloid norlobelanidin pada ko ml tidak mengubah biosintesis DNA, RNA, atau pro
. 1999). 120 bp
34 penelitian lain nya DNA utas g lebih spesifik
SJ1. ilihat pada hasil
dengan ekstrak ng lebih tipis pepaya, yang batan terhadap mengikat DNA. lobanidin, pada terhadap DNA da konsentrasi u protein pada
35 Alkaloid piperidin yang berasal dari , yaitu (:):spectaline, (:):spectalinine, dan canavaline menunjukkan aktivitas dalam memodifikasi DNA khamir (Bolzani 1995). Aktivitas induksi kerusakan DNA juga ditemukan pada sel yang dipaparkan dengan pseudodistomins B:F. Pseudodistomins B:F merupakan alkaloid piperidin yang terdapat pada
36
5 SIMPULAN DAN SARAN
Simpulan
Ekstrak kasar alkaloid daun pepaya dengan metode UAE memiliki rendemen 0.48% – 1.82% per berat kering daun pepaya. Isolat
penghasil SEA diperoleh dari beberapa pangan, yaitu susu sapi mentah, telur balado, tumis usus ayam, dan sate jeroan. Ekstrak kasar alkaloid daun pepaya memiliki aktivitas antibakteri terhadap dengan nilai KHM 0.25 mg/ml. Pemaparan dengan ekstrak kasar alkaloid daun pepaya pada konsentrasi 1 dan 2 KHM mampu menghambat 61% dan 81% pertumbuhan bakteri serta ekspresi gen . Ekspresi gen mengalami penurunan 28.5 dan 40.7 kali dengan perlakuan 1 dan 2 KHM. Ekstrak kasar alkaloid daun pepaya tidak hanya menghambat pertumbuhan bakteri tetapi juga menghambat ekspresi SEA. Ekstrak kasar alkaloid daun pepaya berpotensi sebagai pengawet pangan yang dapat menghambat pertumbuhan bakteri dan pembentukan toksin pada bahan pangan.
Saran
Saran yang dapat disampaikan berdasarkan hasil penelitian ini adalah dapat dilakukan pengujian aktivitas alkaloid dari daun pepaya dengan menggunakan ekstrak alkaloid yang lebih murni atau dengan isolat alkaloid tertentu yang terdapat pada daun pepaya. Selain itu, di dalam pengukuran ekspresi gen menggunakan qPCR, dapat digunakan probe fluoresens sebagai pengganti SYBR green sehingga dapat diperoleh hasil yang lebih spesifik.
37
DAFTAR PUSTAKA
Abdalla HO, Ali NAA, Siddig FS, Ali SAM. 2012. Improving tenderness of spent layer hens meat using papaya leaves ( ).
33(1): 73:76.
Alabi OA, Haruna MT, Anokwuru CP, Jegede T, Abia H, Okegbe VU, Esan BE. 2012. Comparative studies on antimicrobial properties of extracts of fresh and dried leaves of (L) on clinical bacterial and fungal isolates. 3(5): 3107:3114.
Alaboudi AR, Jaradat ZW, Shatnawi MM. 2012. Biotypes and enterotoxigenicity of staphylococci isolated from camel’s meat in Jordan. !
2(1): 23:35.
Alarcon B, Vicedo B, Aznar R. 2006. PCR:based procedures for detection and quantification of and their application in food.
! 100: 352:364.doi:10.1111/j.1365:2672.2005.02768.x. Andrews JM. 2005. BSAC standardized disc susceptibility testing method
(version 4). " 56: 60:76.doi:10.1093/jac/dki124. Anibijuwon II, Udeze AO. 2009. Antimicrobial activity of
(pawpaw leaf) on some pathogenic organism of clinical origin from South: Western Nigeria. # " " 13: 850:864.
[AOAC] Association of Official Analytical Chemists. 2005. $ !
" " " %" " " . Washington DC (US): AOAC.
Artin I, Carter AT, Holst E, Lovenklev M, Mason DR, Peck MW, Radstrom. 2008. Effects of carbon dioxide on neurotoxin gene expression in nonproteolytic " type E. #" " !
74(8): 2391.doi: 10.1128/AEM.02587:07.
Azizkhani M, Misaghi A, Basti AA, Gandomi H, Hosseini H. 2013. Effects of Boiss. essential oil on growth and gene expression of enterotoxins A, C and E in ATCC 29213. %" & ! 163: 159:165.doi:10.1016/j.ijfoodmicro.2013.02.020.
Azmir J, Zaidul ISM, Rahman MM, Sharif KM, Mohamed A, Sahena F, Jahurul MHA, Ghafoor K, Norulaini NAN, Omar AKM. 2013. Techniques for extraction of bioactive compounds from plant materials: a review. & #" 117: 426:436.doi: 10.1016/j.jfoodeng.2013.01.014.
Balaban N, Rasooly A. 2000. Review staphylococcal enterotoxins [ulasan]. %" & ! 61: 1:10.
Barbas III CF, Burton DR, Scott JK, Silverman GJ. 2007. Quantitation of DNA and RNA. " ' . doi:10.1101/pdb.ip47.
Baskaran C, Ratha bai V, Velu S, Kumaran K. 2012. The efficacy of
leaf extract on some bacterial and a fungal strain by well diffusion method. " ( ) 2: S658:S662.doi: 10.1016/S2222: 1808(12)60239:4.
Bennet RW, Lancette GA. 2001. BAM: . [Internet]. [diunduh 2013 Mar 27]. Tersedia pada: http://www.fda.gov/Food/Food ScienceResearch/LaboratoryMethods/ucm071429.htm.
38 Bleve G, Rizzotti L, Dellaglio F, Torriani S. 2003. Development of reverse
transcription (RT):PCR and Real:Time RT:PCR assays for rapid detection and quantification of viable yeasts and molds contaminating yogurts and pasteurized food product. #" " ! 69(7): 4116:4122.doi: 10.1128/AEM.69.7.4116:4122.2003.
Bolzani VS, Gunatilaka AAL, Kingston DGI. 1995. Bioactive and other piperidine alkaloids from . ( " 52(21): 5929: 5934.doi: 10.1016/0040:4020(95)00254:6.
Borst DW, Betley MJ. 1994. Phage:associated differences in staphylococcal enterotoxin A gene ( ) expression correlate with allele class. %" % " 62(1):113.
Burdick EM. 1971. Carpaine: an alkaloid of : its chemistry and pharmacology [ulasan]. # " 25(4): 363:365.
Bustin SA. 2005a. Real:time PCR. Di dalam: Fuchs J, Podda M, editor.
#" ) " * " " . New York (US): Marcel Dekker. hlm 1117:1125.
Bustin SA. 2005b. Real:time reverse transcription PCR. Di dalam: Fuchs J, Podda M, editor. #" ) " * " " . New York (US): Marcel Dekker. hlm 1131:1135.
[CDC] Centers for Disease Control and Prevention. Foodborne outbreak online database (FOOD). [Internet]. [diunduh 2013 Sep 13]. Tersedia pada: http://wwwn.cdc.gov/foodborneoutbreaks/Default.aspx.
Cao R, Peng W, Wang Z, Xu A. 2007. β:carbolin alkaloids: biochemical and pharmacological functions. ! 14: 479:500.
Cao R, Zeaki N, Wallin:Carlquist N, Skandamis PN, Schelin J, Radstrom P. 2012. Elevated enterotoxin A expression and formation in
and its association with prophage induction. #" " !
78(14): 4942.doi: 10.1128/AEM.00803:12.
Capita R, Alonso:Calleja C, Moreno B, del Camino Garcia:Fernandez M. 2001. Assesment of Baird:Parker Agar as screening test for determination of
in poultry meat. ! 39(4): 321:325.
Caro Y, Villeneuve P, Pina M, Reynes M, Graille J. 2000. Investigation of crude latex from various varieties for lipid bioconversions.
$ 77(8): 891:901.
Cetin:Karaca H. 2011. Evaluation of natural antimicrobial phenolic compounds againts foodborne pathogens [tesis]. Kentucky (US): University of Kentucky.
Cheng AG, McAdow M, Kim HK, Bae T, Missiakas DM, Schneewind. 2010.
Contribution of coagulases towards disease and
protective immunity. 6(8): 1:18.doi:10.1371/journal.ppat. 1001036
Cowan MM. 1999. Plant products as antimicrobial agent. " !
12(4): 564:582.
Cruz:Galvez AM, Gomez:Aldapa CA, Villagomez:Ibarra JR, Chavarria: Hernandez N, Rodriguez:Banos J, Rangel:Vargas E, Castro:Rosas J. 2013. Antibacterial effect against foodborne bacteria of plants used in traditional medicine in central Mexico: studies in vitro and in raw beef. & "
39 Derzelle S, Dilasser F, Duquenne M, Deperrois V. 2009. Differential temporal
expression of the staphylococcal entertotoxins genes during cell growth.
& ! 26: 896:904.doi:10.1016/j.fm.2009.06.007.
Di Giannatale E, Prencipe V, Tonelli A, Marfoglia C, Migliorati. 2011. Characterisation of strains isolated from food for human consumption. % 47(2): 165:173.
Djilani A, Legseir B, Soulimani R, Dicko A, Younos C. 2006. New extraction technique for alkaloids. + 17(3): 518:520.
Duquenne M, Fleurot I, Aigle M, Darrigo C, Borezee:Durant E, Derzelle S, Bouix M, Deperrois:Lafarge V, Delacroix:Buchet A. 2010. Tool for quantification of staphylococcal enterotoxin gene expression in cheese.
#" " ! 76(5): 1367:1374.doi:10.1128/AEM.01736:09.
Ehsan BR, Vital A, Bipinraj NK. 2009. Antimicrobial activity of the ethanolic extract of " " leaf, stem, fruit and seed [komunikasi singkat]. " 8(15): 3565:3567.
Elaume H, Jabbouri S. 2004. Comparison of two standardisation methods in real:
time quantitative RT:PCR to follow genes
expression during in vitro growth. ! ! 59: 363:370. doi:10.1016/j.mimet.2004.07.015.
Fazeli H, Salehi R. 2007. Antibiotic resistance pattern in shiga:toxin producing
# isolated from diarrheal patients in Al:zahra Hospital, Isfahan, Iran. 2: 29:33.
[FDA] US Food and Drug Administration. 2012. , & " " ! " " - ( . " ' " . Ed ke:2. New York (US): International Medical Publishing.
Freyer AJ, Patil AD, Killmer L, Troupe N, Mentzer M, Carte B, Faucette L, Johnson RK. 1997. Three new pseudodistomins, piperidine alkaloids from
the Ascidian . - 60(10): 986:990.doi:
10.1021/np9701438.
Fujikawa H, Morozomi S. 2006. Modeling growth and enterotoxin production in milk. & ! 23: 260:267. doi:10.1016/j.fm.2005.04.005.
Hesse M. 2002. , - / " 0 Weinheim (DE): J Wiley.
Imbeaud S, Graudens E, Boulanger V, Barlet X, Zaborski P, Eveno E, Mueller O, Schroeder A, Auffray C. 2005. Towards standardization of RNA quality assessment using user:independent classifiers of microcapillary electrophoresis traces. - 33(6): e56.doi: 10.1093/nar/gni054. Jindal A, Kumar P. 2012. Antibacterial activity of Burm. f. against
human pathogens. " " 5(3): 33:35.
Jindal A, Kumar P, Gautam K. 2013. Evaluation of antibiotic potential of alkaloids of ( L. against some pathogenic microorganism.
%" * " 7: 102:105.
Johnson WM, Tyler SD. 1993. Genes for enterotoxins, exfoliative toxins, and toxic shock syndrome toxin:1 in Di dalam: Persing DH, Smith TF, Tenover FC, White TJ, editor. ) " !
40 Konate K, Mavoungou JF, Lepengue AN, Aworet:Sameny RRR, Hilou A, Souza
A, Dicko MH, M’Batchi B. 2012. Antibacterial activity against β: lactamase producing methicillin and amphicillin:resistants
: fractional inhibitory concentration index (FICI) determination. "" " ! " 111: 18. doi:10.1186/1476:0711:11:18.
Krishna KL, Paridhavi M, Patel JA. 2008. Review on nutritional, medicinal, and pharmacological properties of papaya ( Linn.) [ulasan].
7(4): 364:373.
Lee YD, Moon JH, Park JH, Chang HI, Kim WJ. 2007. Expression of
enterotoxin genes in isolates based on mRNA
analysis. ! " 17(3): 461:467.
Luo J, Yan D, Yang M, Dong X, Xiao X. 2013. Multicomponent therapeutics of berberine alkaloids. # " " ! 2013: 1:10. Marambio O, Monsalve E, Schmeda:Hirshchmann G. 1999. DNA binding
alkaloids from Hook et Arn and L.
2 44(3).doi: 10.4067/S0366:16441999000300016.
Marta D. 2011. Molecular monitoring of meat spoiling " species and analysis of staphylococcal enterotoxin expression and formation [disertasi]. Budapest (HU): Corvinus University of Budapest.
Mason WJ, Blevins JS, Beenken K, Wibowo N, Ojha N, Smeltzer MS. 2001. Multiplex PCR protocol for the diagnosis of staphylococcal infection.
" ! 39(9): 3332:3338.
Masuda Y, Tashiro T, Mori K. 2006. Synthesis of (+):carpamic acid from (+): alanine. ( ", 17(24): 3380:3385.doi: 10.1016/j.tetasy. 2006.12.025.
Mazzola PG, Jozala AF, de Lencastre Novaes LC, Moriel P, Penna TCV. 2009. Minimal inhibitory concentration (MIC) determination of disinfectant and/or sterilizing agents. + 45(2): 241:248.
Miller ND, Davidson PM, D’Souza DH. 2011. Real:time reverse:transcriptase PCR for " Typhimurium detection from lettuce and tomatoes.
3(4& ( " 44: 1088:1097.doi:10.1016/j.lwt.2010.08.003. Moore E, Arnscheidt A, Kruger A, Strompl C, Mau M. 2004. Simplified
protocols for thr preparation of genomic DNA from bacterial cultures. Di dalam: Kowalchuk GA, de Brujin FJ, Head IM, Akkermans ADL, van Elsas JD, editor. ! ! # ! " . Ed ke:2. Volume ke:1. Dordrecht (NL): Kluwer Academic Publishers. hlm 3:18.
Mustarichie R, Udin LZ, Muchtaridi, Supriyatna. 2012. Identification and antibacterial activity of methanol extract of " Roxb. !
' 12: 70:77.
[NCBI] National Center for Biotechnology Information. 2012. Real:time qRT: PCR. [Internet]. [diunduh 2013 Feb 19]. Terdapat pada: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/projects/genome/probe/doc/TechQPCR.shtml. [NCBI] National Center for Biotechnology Information. 2013.
subsp. ST228 complete genome, isolate 10388. [Internet]. [diunduh 2013 Sep 4]. Terdapat pada: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/ nucleotide/408422572?report=genbank&log$=nucltop&blast_rank=8&RID =1XTDV6X4015.
41 Nwofia GE, Ojimelukwe P, Eji C. 2012. Chemical composition of leaves, fruit
pulp and seeds in some (L) mophotypes. %" ! " 2(1): 200:206.
Oliveira DC, de Lencastre H. 2011. Methicillin:resistance in
is not affected by the overexpression in trans of the gene repressor: a surprising observation. $-# 6(8): e23287. doi:10.1371/journal.pone.0023287.
Pfaffl MW, Horgan GW, Dempfle L. 2002 Relative expression software tool (REST©) for group:wise comparison and statistical analysis of relative expression results in real:time PCR. - 30(9): 1:10.
Pinchuk IR, Beswick EJ, Reyes VE. 2010. Staphylococcal enterotoxins [ulasan].
( . " 2: 2177:2197. doi:10.3390/toxins2082177.
Proft T, Fraser JD. 2003. Bacterial superantigens [ulasan]. " #. % "
133: 299:306.
Pyzik E, Marek A. 2013. Plasmid profile analysis and evaluation of antibiotic susceptibility of strains isolated from table chicken eggs. 16(2): 307:312.doi: 10.2478/pjvs:2013:0042.
Qiagen. 2004. Critical factors for successful Real:Time PCR. [Internet]. [diunduh 2013 Jun 15]. http://www.icmb.utexas.edu/core/DNA/qPCR/ QiagenRT:PCR.pdf.
Qiu J, Wang D, Xiang H, Feng H, Jiang Y, Xia L, Dong J, Lu J, Yu L, Deng X. 2010. Subinhibitory concentrations of thymol reduce enterotoxins A and B
and α:hemolysin production in isolates. $-#
5(3): e9736. doi:10.1371/journal.pone.0009736.
Rahman S, Imran M, Muhammad N, Hassan N, Chisthi AK, Khan AF, Sadozai KS, Khan SM. 2011. Antibacterial screening of leaves and stem of
. ! " 5(20): 5167:5171.
Rall VLM, Sforcin JM, Augustini VCM, Watanabe MT, Fernandes Jr. A, Rall R, Silva MG, Araujo Jr. JP. 2010. Detection of enterotoxin genes of sp. Isolated from nasal cavities and hands of food handlers.
+ ! 41: 59:65.
Rall VLM, Vieira FP, Rall R, Vieitis RL, Fernandes Jr. A, Candeias JMG, Cardoso KFG, Araujo Jr. JP. 2008. PCR detection of staphylococcal enterotoxin genes in strains isolated from raw and pasteurized milk [komunikasi singkat]. ! 132: 408:414.doi: 10.1016/j.vetmic.2008.05.011.
Rosen MJ. 2004. " " %" " " . Ed ke:3. New Jersey (US): John Wiley & Sons, Inc.
Schelin J, Wallin:Carlquist N, Cohn MT, Lindqvist R, Barker GC, Radstrom P. 2011. The formation of enterotoxin in food environments and advances in risk assessment. " 2 (6): 580: 592.doi: 10.4161/viru.2.6.18122.
Schmittgen TD, Livak KJ. 2008. Analyzing real:time PCR data by the comparative CT method. - 3(6): 1101:1108.doi:10.1038/nprot. 2008.73.
Shields P, Tsang AY. 2013. Mannitol salt agar plates protocols. [Internet]. [diunduh 2013 Agu 2]. http://www.microbelibrary.org/component/resource/ laboratory:test/3034:mannitol:salt:agar:plates:protocols.
42 Sinam YM, Kumar S, Hajare S, Gautam S, Shantibala G, Sharma A. 2013.
Morpho:phenological and antibacterial characteristics of " spp.
5(2): 189:197.
Subramanian SP, Saratha V. 2010. Evaluation of antibacterial activity of
" latex extract on selected pathogenic bacteria. 3(3): 517:521.
Sudsai T. 2006. Effect of purified alkaloid from L. leaves on smooth muscle contraction in rat uterus [tesis]. Songkhla (TH): Prince of Songkla University.
Suzuki H, Lefebure T, Bitar PP, Stanhope MJ. 2012. Comparative genomic
analysis of the genus including and
its newly described sister species ! * "
13:38.doi: 10.1186/1471:2164:13:38.
Tang CS. 1979. New macrocyclic, !1:piperidine alkaloids from papaya leaves: dehydrocarpaine I and II. 18(4): 651:652.doi: 10.1016/S0031:9422(00)84279:X.
Vandecasteele SJ, Peetermans WE, Merckx R, Van Eldere J. 2001.
Quantification of expression of housekeeping
genes with taqman quantitative PCR during in vitro growth and under
different conditions. 183(24): 7094:7101.doi:
10.1128/JB.183.24.7094:7101.2001.
Vinatoru M. 2001. An overview of the ultrasonically assisted extraction of bioactive principles from herbs. 5 " " 8: 303:313.
Wong ML, Medrano JF. 2005. Real:time PCR for mRNA quantitation [ulasan].
( " 6 39: 75:85.
Xu RS, Yang Y. 2011. Alkaloids. Di dalam: Xu RS, Yang Y, Zhao W.
%" " - . Florida (US): CRC Pr. Hlm 55:80.
43 Lampiran 1 Sekuen gen penyandi 16S rRNA isolat dari pangan.
>S1 GTGGGGATAGGCATTGACGGGGACCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAA TTCGAAGCAACGCGAAGAACCTTACCAAATCTTGACATCCTTTGACAACTCTA GAGATAGAGCTTTCCCCTTCGGGGGACAAAGTGACAGGTGGTGCATGGTTGT CGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCC TTAAAA >S4 GTGGGCCCTTAGGGATTGACGGGGACCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTT AATTCGAAGCAACGCGAAGAACCTTACCAAATCTTGACATCCTTTGACAACT CTAGAGATAGAGCTTTCCCCTTCGGGGGACAAAGTGACAGGTGGTGCATGGT TGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAA CCCTTAAAN >S10 GTGGTATAAGGGATTGACGGGGACCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAA TTCGAAGCAACGCGAAGAACCTTACCAAATCTTGACATCCTTTGACAACTCTA GAGATAGAGCTTTCCCCTTCGGGGGACAAAGTGACAGGTGGTGCATGGTTGT CGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCC TTAAAN >TB1 AGGGGTACAAGGATTGACGGGGACCGCACAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAAT TCGAAGCAACGCGAAGAACCTTACCAAATCTTGACATCCTTTGACAACTCTA GAGATAGAGCTTTCCCCTTCGGGGGACAAAGTGACAGGTGGTGCATGGTTGT CGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCC