Adnam M. 1997. Teknik Kromatografi untuk Analisis Bahan Makanan. Yogyakarta: Penerbit ANDI.
Amrullah IK. 2004. Nutrisi Ayam Petelur. Ed ke-3. Bogor: Lembaga Satu Gunung Budi.
[Anonim]. 2005. Stress pada ayam menjadi kambing hitam.
http://www.ciptapangan.com/cpbuletin/0107.htm[14 Des 2008].
Apostolopoulos V, Loveland BE, Pietersz GA, McKenzie. 1995. CTL in mice immunized with human mucin 1 are MHC-restricted. J Immunol 155:5089-5094.
Apostolopoulos V, Siamon G, Martinez-Pomares L, McKenzie IFC. 2000. Aldehyde-mannan antigen complexes target the MHC Class I antigen presentation pathways. Eur J Immunol 30:1714-1723.
Bar-Shira E, Friedman A. 2005. Ontogeny of gut associated immunocompetence in the chick. Israel J Vet Med 62: 42-50.
Buckeridge MS, dos Santos HP, Tine MAS. 2000. Mobilization of storage cell wall polisaccharides in seeds. Plant Physiol Biochem 38:141-156.
Cann AJ. 1997. Principle of Molecular Virology. Di dalam: Samsi M. 2007. Estrak benalu teh (Scurulla oortiana) sebagai immunomodulator dan antitumor infeksi Marek’s Disease Virus (MDV) serotipa 1 onkogenik pada ayam [disertasi]. Bogor: Sekolah Pascasarjana, Institut Pertanian Bogor. Capua I, Mutinelli F, Maragon S, Alexander DJ. 2000. H7N1 avian influenza in
Italy (1999-2000) in intensively reared chicken and turkeys. Avian Pathol
29:537-543.
Capua I, Mutinelli F. 2001. Low pathogenicity (LPAI) and highly pathogenic (HPAI) avian influenza in turkeys and chicken. Didalam: Capua I, Mutinelli F, Editor. A colour atlas and text on Avian Influenza. Bologna: Papi Editore. hlm 13-20.
Carre B. 2002. Carbohydrate chemistry of the feedstuffs used for poultry. Di dalam: McNab J, Boorman N, Editor. Poultry feedstuff supply, composition, and Nutritive Value. New York: CABI Publishing. hlm 39-56.
Chen D et al. 2001. Serum and mucosal immune response to an inactivated influenza virus vaccine induced by epidermal powder immunization. J Virol
75: 7956-7965.
[CDC] Center for Disease Control and Prevention. 2005. Transmission of Influenza a viruses between animal and people.
http://www.cdc.gov/flu/avian/gen-info/transmission.htm [14 Des 2008]. Crowther JR. 1995. ELISA: Theory and Practice. Totowa, New Jersey: Humana
Darminto. 2006. Mengenal penyakit flu burung dan strategi pengendaliannya. Di dalam: Putri DD. 2006. Deteksi virus avian influenza (H5N1) pada unggas air di Propinsi Lampung dengan uji Hemagglutinin Inhibition (HI) dan
Reverse Transcriptase-Polymerase Chain Reaction (RT-PCR) [tesis]. Bogor: Sekolah Pascasarjana, Institut Pertanian Bogor.
Daud MJ, Jarvis MC. 1992. Mannan of oil palm kernel. J Phytochem 31:463-464. Decker JM. 2000. Introduction to Immunology. Massachusetts: Blackwell Science
Inc.
[Deptan] Departemen Pertanian Republik Indonesia. 2007. Laporan Dinas UPP-AI Departemen Pertanian Republik Indonesia. Di dalam: Jatmiko DW. 2007. Studi pustaka dinamika perkembangan flu burung/ avian influenza (AI) di Indonesia [skripsi]. Bogor: Sekolah Pascasarjana, Institut Pertanian Bogor.
Devegowda G, Aravind BIR, Rajendra K, Morton MG, Buburanthna A. 1994. A biological approach to countract aflatoxicosis in broilers chickens and ducklings by the use of Saccharomyces cerevisiae cultures added to feed. Di dalam: Lyons TP, Jacques KA, editor. Biotechnology in the Feed Industry.
Proceedings of Alltech 10th Annual Symposium. Nottingham: Nottingham Univ Pr. hlm 235-245.
de Vires RP. 2003. Regulation of Aspergillus genes encoding plant cell wall polysaccharide degrading enzymes; relevance for industrial production.
Appl Microbiol Biotechnol 61:10-20.
Dharmayanti NLPI, Damayanti R, Wiyono A, Indriani R, Darminto. 2004. Identifikasi virus avian influenza Indonesia dengan Reverse Transcriptase Polymerase Chain Reaction (RT-PCR). J Ilmu Ternak dan Veteriner 9:136-142.
Dharmayanti NLPI, Indriani R, Damayanti R, Wiyono A. 2005a. Isolasi dan identifikasi wabah avian influenza pada bulan Oktober 2004-Maret 2005 di Indonesia. J Biol Indones 3:341-350.
Dharmayanti NLPI, Damayanti R, Indriani R, Wiyono A, Adjid RMA. 2005b. Karakterisasi molekuler virus avian influenza isolat Indonesia. J Ilmu Ternak dan Veteriner 10:127-133.
[Depkoinfo] Departemen Komunikasi dan Informatika. 2005. Flu Burung Ancaman dan Pencegahan. Jakarta: Badan Informasi Publik.
[Dirjen Perkebunan] Direktorat Jenderal Perkebunan. 2008. Statistik Perkebunan Indonesia (Kelapa Sawit) 2007-2009. Jakarta: Sekretaris Direktorat Jenderal Perkebunan.
Dubois M, Giles KA, Hamilton JK, Rober PA, Smith F. 1956. Colorimetric method for determination of sugars and related substances. Anal Chem
Dusterhoft EM, Posthumus MA, Voragen AGJ. 1992. Non-starch polysaccaharides from sunflower (Helianthus annuus) meal and palm kernel (Elaeis guineensis) meal preparation of cell wall material and extraction of polysaccaharide fractions. J Food and Agri Sci 59:151-160.
Elbers AR, Koch G, Bouma A. 2005. Performance of clinical signs in poultry for detection of outbreaks during the avian influenza A (H7N7) epidemic in Netherlands in 2003. Avian Pathol 33:418-422.
Erickson KL, Hubbard NE. 2000. Probitic immunomodulation in health and disease. J Nutr 130:403-409.
[FKH IPB] Fakultas Kedokteran Hewan, Institut Pertanian Bogor. 2007. Laporan Monitoring dan Evaluasi Program Pengendalian Avian Influenza pada Peternakan Ayam Rakyat di Kabupaten Sukabumi dan Bogor. Bogor: FKH IPB.
Flemming JS, Freitas JRS, Fontoura P, Monthaninhi NR, Arruda JS. 2004. Use of mannanoligosaccharides in broiler feeding. Braz J Poult Sci 6:159-161. Fouchier RA, Olsen B, Bestebroer TM. 2003. Influenza A virus surveillance in
wild birds in Northern Europe in 1999 and 2000. Avian Dis 47: 857-860. Frandson RD. 1996. Anatomi dan Fisiologi Ternak. Ed ke-4. Srigandono B,
Praseno K Penerjemah. Yogyakarta: Gadjah Mada Univ Pr. Terjemahan dari: Anatomy and Fisiology of Farm Animals.
Fritts CA, Waldroup PW. 2003. Evaluation of Bio-Mos mannan oligosaccharide as a replacement for growth promoting antibiotics in diets for turkeys. Int J Poult Sci 2: 19-22.
Guyton AC. 1995. Fisiologi Kedokteran. Ed ke-7. Tengadi KA Penerjemah; Oswari, editor. Jakarta: EGC. Terjemahan dari: Medical Fisiology.
Harlow E, Lane D. 1999. Using Antibodie: A Laboratory Manual. New York: Cold Spring Harbor Laboratory Pr.
Indriani R, Dharmayanti NLPI, Wiyono A, Darminto, Parede L. 2004. Deteksi respon antibodi dengan uji Hemaglutinasi Inhibisi dan titer proteksi terhadap virus Avian Influenza Subtipe H5N1. J Ilmu Ternak dan Veteriner
9:204-209.
Indriani R, Dharmayanti NLPI, Syafriati T, Wiyono A, Adjid RMA. 2005. Pengembangan prototipe vaksin inaktif Avian Influenza (AI) H5N1 isolat lokal dan aplikasinya pada hewan coba di tingkat laboratorium. J Ilmu Ternak dan Veteriner 10:315-321.
Jaelani A. 2007. Peningkatan kualitas bungkil inti sawit oleh kapang Trichoderma reesei sebagai pendegradasi polisakarida mannan dan pengaruhnya terhadap penampilan ayam pedaging [disertasi]. Bogor: Sekolah Pascasarjana, Institut Pertanian Bogor.
Janeway CA, Paul T, Mark W, Mark JS. 2001. Immuno Biology. 5th Ed. New York: Garland Publishing.
Karanikas et al. 1997. Antibody and T cell responses of patients with adenocarcinoma immunized with mannan-MUCI fusion protein. J Clin Invest 100:2783-2792.
Kennedy JF, White CA. 1988. The Plant, Algae, and Microbial Polysaccharides. Kennedy JF, Editor. Carbohydrate Chemistry. Di dalam: Tafsin M. 2007. Kajian Polisakarida Mannan dari Bungkil Inti Sawit sebagai Pengendali
Salmonella thypimurium dan Immunostimulan pada Ayam [disertasi]. Bogor: Sekolah Pascasarjana, Institut Pertanian Bogor.
Kuby. 2007.Immunology. Di dalam: Kindt TJ, Goldsby RA, Osborne BA, editor.
Kuby Immunology. 6th Ed. New York: WH Freeman and Company.
Kiyohara H et al. 2006. Stimulating effect of Japanese herbal (Kampo) medicine, hochuekkito on upper respiratory mucosal immune system. Phytomedicine
3:459-467.
Kiyono H. 1997. Intestinal Immune System and Oral Vaccines. Di dalam:
Intestinal Flora and Immunity: Intestinal Infection, Allergies and Cancer. Tokyo: Yakult Honsha Co Ltd.
Klasing KC. 1998. Nutritional modulation of resistance to infectious diseases.
Poult Sci 77:1119-1125.
Kresno SB. 1996. Imunologi: Diagnosis dan Prosedur Laboratorium. Edisi ke-4. Jakarta: Balai Penerbit Fakultas Kedokteran, Univ Indonesia.
Laursen BS, Nielsen BO. 2000. Mannan binding lectin (MBL) in chicken: molecular and functional aspect. Develop Comp Immun 24:85-101.
Li Z et al. 2005. Molecular basic of replication of duck H5N1 influenza viruses in a mammalian mouse model. J Virol 76:12078-12086.
Li B, Xie B, Kennedy JF. 2005. Studies on the molecular chain morphology of konjac glucomannan. Carbohydr Polymers 64:501-612.
Lyons TP. 1996. Goal 2000: A truly global science based company that responds rapidly to emerging issues. Di dalam: Lyons TP, Jacques KA, editor.
Biotechnology in the Feed Industry. Proceedings of Alltech 12th Annual Symposium. Nottingham: Nottingham Univ Pr. hlm 1-22.
Machdum N. 2008. Avian Influenza; Perkembangan kasus avian influenza. Jakarta: PT Romindo Primavetcom.
Mahardika IGN, Suartha IN, Suartini IGAA, Antara IMS, Sukanda IM. 2008. Model penanggulangan flu burung berbasis hasil penelitian yang berkelanjutan. Laporan pertemuan ilmiah 3-6 September 2008 Dies Natalis Universitas Udayana Ke-46. Denpasar: Univ Udayana.
Malole MB. 1988. Virologi. Pusat Antar Universitas. Bogor: Institut Pertanian Bogor.
Marcotte H, Lavoie MC. 1998. Microbial ecology and the role of salivary Immunoglobulin A. Microbiol Mol Biol Rev: 71-109.
Markham KR. 1988. Cara Menidentifikasi Flavonoid. Padmawinata K Penerjemah. Bandung: ITB Pr. Terjemahan dari: Tecniques of flavonoid identification.
Mattjik AA, Sumertajaya IM. 2002. Perancangan Percobaan. Jilid I Ed ke-2. Bogor: IPB Pr.
Mayhofer G. 1994. Epithelial disposition of antigen. Di dalam: Goldie R, editor.
Immunopharmacology of Epithelial Barriers. London, UK: Academic Pr Inc. hlm 19-70.
Neutra MR, Frey A, Kraehenbuhl. 1996. Epithelial M cells: Gateways for mucosal infection and immunization. Cell 86:345-348.
[NRC] National Research Council. 1994. Nutrient Requirement of Poultry. 9th Ed. Washington: National Academy Pr.
[OIE] Office International des Epizooties. 2004. Manual of Diagnostic tests and vaccines for terrestrial animals: Avian Influenza. 5th Ed. http://www.oie.int/eng/normes/mmanual/A_00037.htm [9 April 2009].
Ogra PL, Faden H, Welliver RC. 2001. Vaccination strategies for mucosal immune response. Clin Microbiol Rev 14:430-445.
Ooi VEC, Liu F. 2000. Immunomodulation and anti-cancer activity of polysaccharides-protein complexes. Curr Med Chem 7:715-729.
Pastoret PP, Blancou J, Vannie P, Vershueren C. 1997. Veterinary Vaccinology. Amsterdam: Elsevier.
Perdigon G, Alvarez S, Rachid M, Aguero G, Gobbato N. 1995. Immune system stimulation by probiotics. Symposium: Probiotic bacteria for human: Clinical system for evaluation of effectiveness. J Dairy Sci 78:1597-1606. Pietersz GA, Esparon SE, Proudfoot O, penemu; Patent Cooperation Treaty
(PCT). 3 April 2008. Flu vaccine admixture of mannan and flu antigen. Aust patent 037 033 A1.
Porporatto C, Ismael DB, Silvia GC. 2005. Local and systemic activity of the polysaccharide chitosan at lymphoid tissues after oral administration. Int J Immunol 4:1-19.
Puls J, Schuseil J. 1993. Chemistery of hemicelluloses: Relationship between hemicelluloses structure and enzymes required for hydrolysis. Di dalam: Coughlan MP, Hazelewood GP, editor. Hemicellulose and hemicellulases. London: Portland Pr. hlm 1-28.
Rahardjo Y. 2004. Avian Influenza. Jakarta: GITA Pustaka.
Ramli N, Wiryawan KG, Setiyono A. 2008a. Produksi feed additive dan konsentrat protein dari bungkil inti sawit sebagai upaya diversifikasi produk menuju ketahanan pakan unggas. Laporan Tim Hibah Pascasarjana-HPTP 19 Oktober 2008. Bogor: Institut Pertanian Bogor. hlm 1-44.
Ramli N et al. 2008b. Evaluasi sifat fisiko-kimia dan nilai energi metabolis konsentrat protein bungkil inti sawit pada broiler. J Ilmu Ternak dan Veteriner 13:249-255.
Ratcliffe I, Williams PA, Viebke C, Meadows J. 2005. Physicochemical characterization of konjac glucomannan. Biomacromol 6:1977-1986.
Roitt I, Delves PJ. 2001. Roitt’s Essential Immunology. 10th Ed. London: Blockwell Scientific Publication.
Ross A et al. 2001. Human IgA activates the complement system via the mannan binding lectin pathway. J Immun 167:286-2868.
Salminen S, Ouwehand, Isolauri E.1998. Clinical application of probiotic bacteria.
Int J Dairy 8:563-572.
[SAS Institute]. 1996. The SAS System for Windows Software Release 6.12. SAS® Users Guide. SAS Institute Inc. Cary. NC. United State.
Savage TF, Cotter PF, Zakrzewska EI. 1996.The effect of feeding a mannan oligosaccharide on immunoglobulins plasma IgG and bile IgA of Wrolstad MW male turkeys. Di dalam: Lyons TP, Jacques KA, editor. Biotechnology in the Feed Industry. Proceedings of Alltech 12th Annual Symposium. Nottingham: Nottingham Univ Pr. hlm 16-19.
Schr der et al. 2001. Purification and characterization of galactoglucomannan from kiwifruit (Actinidia deliciosa). Carbohydr Res 331:291-306.
Shafey TM, Al-mufarez M, Shalaby I, Jarlenabi, AJ. 2001 The effect of feeding mannanoligosaccharides (Bio-MOS) on the performance of meat chicken under two different vaccination programs. Asian-Aust J Anim Sci 14:559-563.
Sharma JM. 1991. Overview of avian immune system. Vet Immunol and Immunopathol 30:13-17.
Shashidara RG, Devegowda G. 2003. Effec of dietary mannan oligosaccharide on broiler breeder production traits and immunity. Poult Sci 82:1319-1325. Sims I, Craik DJ, Basic A. 1997. Structural characterization of glucomannan
secreted by suspension-cultured cells of Nicotiana plumbaginifolia.
Carbohydr Res 303:79-92.
Soejoedono RD, Handharyani E. 2005. Flu Burung. Jakarta: Penebar Swadaya. Spearman KR. 2004. Effect of mannanoligosaccharide (MOS) supplementation on
the immune status of mares and their foals [thesis]. Florida: Univ of Florida. Spector WG. 1993. Pengantar Patologi Umum. Ed ke-3. Soetjipto NS, Harsoyo,
Hana A, Astuti P, Penerjemah. Yogyakarta: Gadjah Mada Univ Pr. Terjemahan dari: An Introduction to General Pathology.
Spring P, Wenk C, Dawson KA, Newman KE. 2000. The effects of dietary Mannanoligosaccharides on cecal parameters and the concentrations of enteric bacteria in the ceca of Salmonella-challenged broiler chicks. Poult Sci 79:205-211.
Sturm-Ramirez KM. 2004. Re-emerging H5N1 influenza viruses in Hong Kong in 2002 are highly pathogenic to ducks. J Virol 78:4892-4901.
Sturm-Ramirez KM. 2005. Are ducks contributing to the endemicity of highly pathogenic H5N1 influenza virus in Asia?. J Virol 79:11269-11279.
Suarez et al. 2004. Recombination resulting in virulence shift in avian influenza outbreak, Chile. Emerg Infect Dis 10:693-699.
Sudarisman. 2006. Pencegahan penyakit virus pada hewan dengan vaksin mukosal. Wartazoa 16:181-189.
Swanson KS et al. 2002. Suplemental Fructooligosaccharides and
Mannanoligosaccharides influence immune function, ileal and total tract nutrient digestibilities, microbial population and concentrations of protein catabolits in the large bowl of dogs. J Nutr 132:980-989.
Swayne DE, Suarez LD. 2000. High pathogenic avian influenza. Rev Tech Sci
19:463-482.
Tafsin M. 2007. Kajian Polisakarida Mannan dari Bungkil Inti Sawit sebagai Pengendali Salmonella thypimurium dan Immunostimulan pada Ayam [disertasi]. Bogor: Sekolah Pascasarjana, Institut Pertanian Bogor.
Takahashi K, Mashiko T, Akiba Y. 2000. Effect of dietary concentration of xylitol on growt in male broiler chicks during immunological stress. Poult Sci
79:743-747.
Tizard IR. 1982. Pengantar Imunologi Veteriner. Partodiredjo M, Hardjosworo S, Penerjemah. Surabaya: Airlangga Univ Pr. Terjemahan dari: An Introduction to Veterinary Immunology.
Tumpey TM, Renshaw M, Clements JD, Katz JM. 2001. Mucosal delivery of inactivated influenza vaccine induces B cell dependent heterosubtypic cross protection against lethal influenza A H5N1 virus infection. J Virol 75: 5141-5150.
Tumpey TM et al. 2002. Characterization of highly pathogenic H5N1 avian influenza A virus isolated from duck meat. J Virol 76: 6344-6355.
Turner JL, Dritz PAS, Minton JE. 2000. Alternatives to conventional microbials in swine diets. J Anim Sci 17:217-226.
Van Ginkel FW, Nguyen HH, Mc Ghee JR. 2000. Vaccine for mucosal immunity to combat emerging infectious disease. Emerg Infect Dis 6: 123-132.
Vranjes V, Wenk C. 1995 The influence of extruded vs untreated barley in the feed, with or without dietary enzyme supplement on broiler performance. J Anim Feed Sci and Tech 54:21-32.
Waldroup PW, Edgar O, Oviedo-Rondon, Fritts CA. 2003. Comparison of Bio-MOS and antibiotic feeding programs in broiler diet containing cooper sulfate. Int J Poult Sci 2:28-31.
Webster RG,Beam WJ, Gorman OT, Chambers TM, Kwaoka Y. 1992. Evaluation and ecology of influenza a viruses. Microbiol Rev 56:152-179.
Wibawan IWT, Soejoedono RD. 2003 Imunologi. Departemen Penyakit Hewan dan Kesehatan Masyarakat Veteriner Fakultas Kedokteran Hewan, Institut Pertanian Bogor.
Worrall EE, Sudarisman, Priadi A. 2009. Sialivac: An intranasal homologous inactivated split virus vaccine containing bacterial sialidase for the control of avian influenza in poultry. J Vaccine 27:4161-4168.
Yatno, Ramli N, Purwadaria T, Setiyono A, Hardjosworo P. 2008. Sifat kimia dan nilai biologi konsentrat protein bungkil inti sawit hasil ekstraksi kombinasi fisik dan kimiawi. J Media Peternakan 31:178-185.
Yokomizo F, penemu; Fuji Oil Co. LTD. 24 Mei 2005. Mannose-containing palm kernel meal. US patent 6 896 918.
Zarkasie K. 2007. Vaksin H5N2 dan H5N9 gagal atasi Flu Burung. http://www.depkes.go.id/index.php?option=news&task=viewarticle&sid=26 04&Itemid=2#.html [9 April 2009].
Lampiran 1 Formulasi penggunaan polisakarida mannan dari bungkil inti sawit sebagai oral adjuvan vaksin avian influenza.
Perlakuan yang diterapkan :
R0A = Tanpa Antigen H5N1 + 0 µg Polisakarida Mannan BIS R0B = Antigen H5N1 inaktif + 0 µg Polisakarida Mannan BIS R1 = Antigen H5N1 inaktif + 50 µg Polisakarida Mannan BIS R2 = Antigen H5N1 inaktif + 100 µg Polisakarida Mannan BIS R3 = Antigen H5N1 inaktif + 200 µg Polisakarida Mannan BIS
Bahan yang digunakan :
- Antigen H5N1 Strain A/CK/Legok/2003 Homolog; 512 HAU/ml yang diperoleh dari PT IPB-Shigeta
- Polisakarida mannan (PM) dari bungkil inti sawit
Total gula 10 624 µg/ml, kandungan mannosa 73.54% dari total gula terekstrak. Kandungan mannosa : 10 624 µg/ml x 73.54% = 7 812.88 µg/ml
- Phosphate buffer saline (PBS)
Larutan PBS untuk 1 liter : Sodium chlorida 8 g, Disodium hydrogenphosphate 2.89 g, Pottasium dihyhidrogenphosphate 0.2 g proanalysis
Penggunaan polisakarida mannan (PM) :
- Penggunaan 0 µg PM, ditambahkan 0 µl PM - Penggunaan 50 µg PM, ditambahkan 6.4 µl PM - Penggunaan 100 µg PM, ditambahkan 12.8 µl PM - Penggunaan 200 µg PM, ditambahkan 25.6 µl PM
Formulasi setiap 100 dosis = 25 ml 1 dosis = 0.25 ml
- R0B = Antigen H5N1 inaktif + 0 µg Polisakarida Mannan BIS
Campuran 25 000 µl (0 µl PM + 10 000 µl antigen H5N1 + 15 000 µl PBS)
- R1 = Antigen H5N1 inaktif + 50 µg Polisakarida Mannan BIS
Campuran 25 000 µl (640 µl PM + 10 000 µl antigen H5N1 + 14 360 µl PBS)
- R2 = Antigen H5N1 inaktif + 100 µg Polisakarida Mannan BIS
Campuran 25 000 µl (1 280 µl PM + 10 000 µl antigen H5N1 + 13 720 µl PBS)
- R3 = Antigen H5N1 inaktif + 200 µg Polisakarida Mannan BIS
Campuran 25 000 µl (2 560 µl PM + 10 000 µl antigen H5N1 + 12 440 µl PBS)
Lampiran 2 Prosedur Uji Haemaglutination Agglutination (HA) dan Haemaglutination Inhibition (HI) (metode OIE 2004)
Uji HA
1. Masukkan 0.025 ml PBS ke dalam tiap well mikroplate dasar V
2. Masukkan 0.025 ml suspense virus (mis. Cairan alantois) dalam well pertama. Untuk hasil yang lebih akurat lakukan pengenceran seri dengan jarak pengenceran yang lebih kecil misalnya 1/3, ¼, 1/5, 1/6 dan lain-lain. 3. Buatlah pengenceran seri kalipatan dua dari 0.025 ml volume suspense
virus.
4. Masukkan 0.025 ml PBS ke dalam tiap well
5. Masukkan 0.025 ml SDM (sel darah merah) ayam 1% ke dalam tiap well 6. Campur dengan cara menggoyang plate secara perlahan dan diamkan
selama 40 menit pada suhu ruang, mis. Kira-kira 20oC, dan selama 60 menit pada 4oC jika suhu ruangan tinggi, sehingga SDM ayam control mengendap.
7. Titer HA dibaca dengan cara menegakkan plate dan mengamati ada tidaknya aliran (tear drop) SDM. Titer HA dibaca berdasarkan pengenceran tertinggi yang memberikan HA sempurna (tidak ada steaming). Nilai ini menunjukkan 1 HA unit (HAU) dan dapat dihitung secara tepat berdasarkan pengenceran awal.
Haemaglutination Inhibition (HI)
1. Masukkan 0.025 ml PBS ke dalam tiap well microplate dasar V. 2. Masukkan 0.025 ml serum ke dalam well pertama.
3. Buatlah pengenceran seri kelipatan dua dari volume 0.025 ml serum ke well sebelahnya.
4. Tambahkan 0.025 ml virus/antigen 4 HAU ke dalam tiap well dan diamkan selama 30 menit pada suhu ruang (mis. Kira-kira 20oC) atau 60 menit pada suhu 4oC
5. Tambahkan 0.025 ml SDM 1% ke dalam tiap well dan goyang perlahan, inkubasikan selama 40 menit pada suhu ruang 20oC atau selama 60 menit pada suhu 4oC jika suhu ruang terlalu tinggi, sehingga SDM kontrol mengendap.
6. Titer HI adalah angka pengenceran tertinggi dimana hambahan aglutinasi terjadi secara sempurna terhadap antigen 4 HAU. Aglutinasi dibaca dengan menegakkan plate. Hanya well yang mengalami steam pada waktu yang sama, dapat dinilai sebagai hambatan aglutinasi.
7. Validasi hasil harus dinilai dengan menyertakan serum kontrol negatif, yang tidak boleh memberikan titer yang lebih besar dari ¼ (22 atau log2) dan serum kontrol positif harus menunjukkan titer yang tidak berbeda satu kali pengenceran dari titer yang diketahui.
Titer HI dapat dinyatakan positif bila terjadi hambatan aglutinasi pada pengenceran serum 1/16 (24 atau log4) atau lebih terhadap antigen 4 HAU.
Catatan:
Untuk serum dari mamalia dan unggas selain ayam sebaiknya serum diabsorpsi dengan menambahkan sel darah merah ayam untuk menghindari reaksi positif non spesifik.
Dengan cara menambahkan 0.025 ml SDM (packed cell) ke dalam setiap 0.5 ml antiserum, goyang perlahan dan biarkan selama 30 menit. Kemudian disentrifugasi 800 G selama2-5 menit, ambil supernatant.
Lampiran 3 Prosedur metode ELISA
1. Coating plate dengan serum sampel pengenceran 1:100 dengan Carbonat Bicarbonat Buffer 9.6. Volume yang dimasukkan 100 µl. Inkubasi semalam dalam 4oC
2. Cuci plate dengan PBS-tween 5x volume 300 µl
3. Blocking dengan menambahkan skim-PBS 5% ke dalam masing-masing well kemudian inkubasi pada 37oC selama 1 jam
4. Cuci plate dengan washing solution PBS-tween 5x volume 300 µl
5. Tambahkan/masukkan conjugate anti IgA pada masing-masing well sebanyak 100 µl
6. Inkubasi pada 37oC selama 1 jam
7. Cuci plate dengan PBS-tween 5x volume 300 µl 8. Tambahkan substrat 50 µl, inkubasi 15-30 menit 9. Baca pada panjang gelombang 615 nm.
Lampiran 4 Analisis ragam pertambahan bobot badan (PBB) dan bobot badan akhir ayam dan itik
Prosedur GLM (General Linear Models Procedure) Tabel analisis ragam pertambahan bobot badan broiler umur 7-21 hari (g/ekor)
Sumber keragaman DB Jumlah kuadrat Kuadrat tengah F.hitung Pr > F Perlakuan 4 6955.93066667 1738.98266667 0.66 0.6345
Galat 10 26405.39166667 2640.53916667
Total 14 33361.32233334
Prosedur GLM (General Linear Models Procedure)
Tabel analisis ragam pertambahan bobot badan broiler umur 21-42 hari (g/ekor)
Sumber keragaman DB Jumlah kuadrat Kuadrat tengah F.hitung Pr > F Perlakuan 4 30918.83900000 7729.70975000 0.91 0.4945 Galat 10 84956.24833333 8495.62483333
Total 14 115875.08733333
Prosedur GLM (General Linear Models Procedure)
Tabel analisis ragam pertambahan Bobot Badan (PBB) broiler umur 7-42 hari (g/ekor) Sumber keragaman DB Jumlah kuadrat Kuadrat tengah F.hitung Pr > F Perlakuan 4 30814.73433334 7703.68358334 0.45 0.7716 Galat 10 171841.49999999 17184.15000000
Total 14 202656.23433333
Prosedur GLM (General Linear Models Procedure) Tabel analisis ragam bobot badan akhir broiler umur 42 hari (g/ekor)
Sumber keragaman DB Jumlah kuadrat Kuadrat tengah F.hitung Pr > F Perlakuan 4 34269.74900000 8567.43725000 0.47 0.7571 Galat 10 182375.13833333 18237.51383333
Total 14 216644.88733333
Prosedur GLM (General Linear Models Procedure) Tabel analisis ragam pertambahan Bobot Badan (PBB) ayam petelur (g/ekor)
Sumber keragaman DB Jumlah kuadrat Kuadrat tengah F.hitung Pr > F Perlakuan 4 50386.02266667 12596.50566667 0.83 0.5336 Galat 10 151056.88833333 15105.68883333
Total 14 201442.91100000
Prosedur GLM (General Linear Models Procedure) Tabel analisis ragam bobot badan akhir ayam petelur(g/ekor)
Sumber keragaman DB Jumlah kuadrat Kuadrat tengah F.hitung Pr > F Perlakuan 4 29696.99933332 7424.24983333 0.51 0.7324 Galat 10 146574.33000000 14657.43300000
Prosedur GLM (General Linear Models Procedure) Tabel analisis ragam pertambahan bobot badan (PBB) itik (g/ekor)
Sumber keragaman DB Jumlah kuadrat Kuadrat tengah F.hitung Pr > F Perlakuan 4 1725.72500000 431.43125000 0.13 0.9670
Galat 10 32685.22833333 3268.52283333
Total 14 34410.95333333
Prosedur GLM (General Linear Models Procedure) Tabel analisis ragam bobot badan akhir itik (g/ekor)
Sumber keragaman DB Jumlah kuadrat Kuadrat tengah F.hitung Pr > F Perlakuan 4 4062.05833333 1015.51458333 0.23 0.9159 Galat 10 44344.89500000 4434.48950000
Total 14 48406.95333333
Lampiran 5 Analisis ragam titer antibodi AI ayam broiler
Prosedur GLM (General Linear Models Procedure)
Tabel analisis ragam titer antibodi (HI log2) 1 minggu setelah vaksinasi pertama Sumber keragaman DB Jumlah kuadrat Kuadrat tengah F.hitung Pr > F Perlakuan 4 19.06666667 4.76666667 17.88 0.0001 R0AvsR0B,R1,R2,R3 1 17.06666667 17.06666667 64.00 0.0001 R0BvsR1,R2,R3 1 1.77777778 1.77777778 6.67 0.0273 R1vsR2,R3 1 0.05555556 0.05555556 0.21 0.6578 R2vsR3 1 0.16666667 0.16666667 0.62 0.4475 Galat 10 2.66666667 0.26666667 Total 14 21.73333333
Prosedur GLM (General Linear Models Procedure)
Tabel analisis ragam titer antibodi (HI log2) 2 minggu setelah vaksinasi pertama Sumber keragaman DB Jumlah kuadrat Kuadrat tengah F.hitung Pr > F Perlakuan 4 2.00000000 0.50000000 1.25 0.3512
Galat 10 4.00000000 0.40000000
Total 14 6.00000000
Prosedur GLM (General Linear Models Procedure)
Tabel analisis ragam titer antibodi (HI log2) 1 minggu setelah vaksinasi kedua
Sumber keragaman DB Jumlah kuadrat Kuadrat tengah F.hitung Pr > F Perlakuan 4 5.06666667 1.26666667 1.90 0.1871
Galat 10 6.66666667 0.66666667
Total 14 11.73333334
Prosedur GLM (General Linear Models Procedure)
Tabel analisis ragam titer antibodi (HI log2) 2 minggu setelah vaksinasi kedua
Sumber keragaman DB Jumlah kuadrat Kuadrat tengah F.hitung Pr > F Perlakuan 4 3.33333333 0.83333333 1.25 0.3512
Galat 10 6.66666667 0.66666667
Prosedur GLM (General Linear Models Procedure) Tabel analisis ragam titer antibodi (HI log2) 3 minggu setelah vaksinasi kedua
Sumber keragaman DB Jumlah kuadrat Kuadrat tengah F.hitung Pr > F