Anggirasti, Hariyadi P, Andarwulan N, Haryati T. 2008. Gliserolisis RBDPO
(Refined Bleached Deodorized Palm Oil) dengan lipase untuk sintesis
MDAG (Mono-diasilgliserol). Prosiding Seminar PATPI, Palembang. Apriyanti S. 2012. Optimasi Produksi Diasilgliserol dari CPO dengan Biokonversi
Enzim Lipase Spesifik 1,3 Amobil [Skripsi]. Bogor (ID) : Universitas Pakuan.
Arini N. 2005. Isolasi dan penapisan mikroba penghasil lipase spesifik 1,3-gliserida serta penentuan kondisi optimum produksi diasilgliserol menggunakan minyak sawit mentah [Tesis]. Depok (ID) : Universitas Indonesia.
Balca˜o VM, Paiva AL, Malcata FX. 1996. Bioreactors with immobilized lipases: state of the art. Enzyme Microb Technol 18:392–416.
Brockman HL. 1984. Lipases. Elsevier. Oxford.
Cheirsilp B, Kaewthong W, Kittikun AH. 2007. Kinetic study of glycerolysis of palm olein for monoacylglycerol production by immobilized lipase. Biochl Engineering Journal 35 : 71-80.
Chen TC, Ju YH. 2001. Polyunsaturated fatty acids concentration from borage oil and linseed oil fatty acids. JAOCS 78 : 1030-1036.
Compton DL, Laszlo JA, Eller FJ, Taylor SL. 2008. Purification of 1,2-diacylglycerols from vegetable oils: Comparison of molecular distillation and liquid CO2 extraction. Industrial crops and products. 28 : 113–121. Elisabeth J, Jatmika A, Sitanggang OP. 1999. Optimasi proses gliserolisis
enzimatik pada minyak sawit untuk meningkatkan monigliserida. J Penelitian Kelapa Sawit 7 (3), 173-185.
Hasanuddin A, Mappiratu, Hutomo GS. 2003. Pola perubahan mono dan diasilgliserol dalam reaksi etanolisis minyak sawit mentah. J Tekn & Indust Pangan 14 (3), 241-247.
Hermansyah H, Utami TS, Arbianti R, Achmadi F. 2010. Simulasi reaksi esterifikasi asam lemak bebas dan gliserol untuk menghasilkan minyak diasilgliserol. Reaktor. Vol. 13. No. 2. 95-102.
Ibrahim CO, Noor NJ, Darah I. 1991. Isolation and identification of an exogenous lipase producing fungi using palm oil medium. J. Bioscience 2 : 56-59. Irimescu R, Iwasaki Y, Hou CT. 2002. Study of ethanolysis to 2-MAG by
immobilized Candida antartica lipase and synthesis of symmetrically structure TAG. J Am Oil Chem. Soc 79:879-883.
Jaeger KE, Reetz TM. 1998. Microbial lipases from versatile tools for biotechnology. Trends Biotechnol 16: 396–403.
Kimmel T. 2004. Kinetic investigation of the base-catalyzed glycerolysis of fatty acid methyl ester. Genehmigte Dissertation, Technischen Universitat Berlin. Berlin. Germany.
32
Knežević ZD, Šiler-Marinković SS, Mojović LV. 2004. Immobilized lipases as practical catalysts. APTEFF, 35, 1-280. BIBLID : 1450-7188. 35, 151-164. Krishnakant S, Madamwar D. 2001. Ester synthesis by lipase immobilized on
silica and microemulsion based organogels (MBGs). Process Biochem 36:607–11.
Mappiratu. 1999. Penggunaan biokatalis dedak padi dalam biosintesis antimikroba monoasilgliserol dari minyak kelapa [Disertasi]. Bogor (ID) : Institut Pertanian Bogor.
Muderhwa JM, Ratomahenina. 1985. Purification and properties of the lipase from Candida deformans (Zach) Langeron and Guerra. JAOCS 62 (6) : 1030-1036.
Murase T, Mizuno T, Omachi T, Onizawa K, Komine Y, Kondo H, Hase T, Tokimitsu I. 2001. Dietary diacylglycerol supresses high fat and high sucrose diet-induced body fat accumulation in C57BL/6J mice. Journal of
Lipid Research Vol. 42 : 372-378.
Nagao T, Watanabe H, Goto N, Onizawa K, Taguchi H, Matsuo N, Yasukawa T, Tsushima R, Shimasaki H, Itakura H. 2000. Dietary Diacylglycerol Supresses Accumulation of Body Fat Compared to Triacylglycerol in Men in a Double-Blind Controlled Trial. The Journal of Nutrition. 130 : 792-797. Noureddini H, Harkey DW, Gutsman MR. 2004. A Continuous Process for the
Glycerolysis of Soybean Oil. JAOCS. 81 (1):1-5.
Nuraeni F. 2008. Sintesis Mono-Diasilgliserol (M-DAG) dari Destilat Asam Lemak Minyak Sawit (DALMS) Melalui Esterifikasi Enzimatis. [Tesis]. Bogor (ID) : Institut Pertanian Bogor.
Nuraida L, Anggraini D, Mintarti IS, Haryati T. 2008. Kajian aktivitas antimikroba monoasilgliserol dan mono-diasilgliserol dari minyak kelapa dan minyak inti sawit. Dalam: Prosiding Seminar Tahunan MAKSI 2008. Bogor, Masyarakat Perkelapa-Sawitan Indonesia (MAKSI) & SEAFAST Center, IPB. p 204-214.
Perwitasari U. 2008. Optimasi Produksi Enzimatik dan Isolasi DAG dari CPO. [Tesis]. Bogor (ID) : Institut Pertanian Bogor.
Pramana YS, Mulyani S. 2007. Proses Gliserolisis CPO Menjadi Mono dan Diasilgliserol Dengan Pelarut Tert-Butanol dan Katalis MgO. Semarang (ID) : Universitas Diponegoro.
Putranto RA, Santoso D, Tri-Panji, Suharyanto, Budiani A. 2006. Karakterisasi gen penyandi lipase dari kapang Rhizopus oryzae dan Absidia corymbifera.
Menara Perkebunan 74 (1) : 23-32.
Rizzi M, Stylos P, Rick A, Reuss M. 1992. A kinetic study of immobilized lipase catalyzing the synthesis of isoamyl acetate by transesterification in n-hexane. Enzyme Microb Technol 14:709–13.
Sawangpanya N, Muangchim C, Phisalaphong M. 2010. Immobilization of lipase on CaCO3 and entrapment in calcium alginate bead for biodiesel production.
Sci J UBU. Vol. 1. No. 2. 46-51.
Sharma R, Chisti Y, Banerjee UC. 2001. Production, purification, characterization, and applications of lipases. Biotechnology Advances. 19 : 627-662.
Shaw JF, Chang RC, Wang HJ. 1990. Lipolytic activities of a lipase immobilized on six selected supporting materials. Biotechnol Bioeng 35:132–7.
33 Su EZ, Zhang MJ, Zhang JG, Gao JF, Wei DZ. 2007. Lipase-catalyzed
irreversible transesterification of vegetable oils for fatty acid methyl esters production with dimethyl carbonate as the acyl acceptor. Biochemical
Engineering Journal. 36 (2007) 167-173.
Suharyanto, Tri-Panji, Abdullah MI, Syamsu K. 2006. Biokonversi CPO dengan desaturase amobil sistem kontinu pada skala semipilot untuk produksi minyak mengandung GLA. Menara Perkebunan, 74(2).96-105.
Suharyanto, Tri-Panji, Perwitasari U. 2011. Optimasi Produksi Diasilgliserol dari Crude Palm Oil Menggunakan Lipase Spesifik 1,3-gliserida dari Rhizopus
oryzae TP-2. Menara Perkebunan. 79(1), 23-29.
Susi. 2010. Potensi pemanfaatan minyak sawit sebagai emulsifier monoasilgliserol. Agroscientiae. No. 3 Vol. 17. 156-163.
Telefoncu A, Dinekaya E, Vorlop KD. 1990. Preparation and characterization of pancreatic lipase immobilized on Eudragit matrix. Appl Biochem Biotechnol 26:311–7.
Tri-Panji, Suharyanto, Arini N. 2008. Lipase Spesifik 1,3-Gliserida dari Fungi Lokal Untuk Biokonversi CPO Menjadi Diasilgliserol. Menara Perkebunan. 76(1), 11-22.
Turner C, King JW, Mckeon T. 2004. Selected uses of enzymes with critical fluids in analytical chemistry. J AOAC Int. 2004 Jul-Aug; 87(4):797-810. Watanabe Y, Nagao T, Kanatani S, Kobayashi T, Terai T, Shimada Y. 2006.
Purification of monoacylglycerol with conjugate linoleic acid synthesized through a lipase-catalyzed reaction by solvent winterization. J. Oleo Sci 55 (10) : 537-543.
Wisdom RA, Dunnill P, Lilly MD, Macrae RA. 1984. Enzyme esterification of fats: factors influencing the choice of support for immobilized lipase.
Enzyme Microb Technol 6:443–6.
Yasunaga K, Katsuragi Y, Yasukawa T. 2001. Nutritional characteristics of diacylglycerol. In Proc Internat Palm Oil Congress Food Technology & Nutrition Conf, Malaysia 20-22 August 2001. P149-155.
Yuan Q, Ramprasath VR, Harding SV, Rideout TC, Chan YM, Jones JH. 2010. Diacylglycerol Oil Reduces Body Fat but Does Not Alter Energy or Lipid Metabolism in Overwight, Hypertriglyceridemic Women. The Journal of
34
LAMPIRAN
Lampiran 1. Diagram alir penelitian optimasi produksi DAG
Panen miselium dengan filtrasi (corong Buchner + kertas saring secara vakum)
Isolat fungi Rhizopus oryzae dari tempe
Peremajaan pada cawan petri media PDA Inkubasi selama 3-4 hari, suhu ruang
Kultur R. oryzae dalam cawan petri
Inokulasi dalam media fermentasi cair, inkubasi selama 5 hari, suhu ruang
Filtrat cairan fermentasi
Pengendapan dengan aseton dingin filtrat + aseton (1: 2)
Sentrifugasi
(10.000 rpm, 15 menit, 4 °C)
Uji aktivitas enzim lipase
Penyiapan media gliserolisis kontinu
Optimasi produksi DAG melalui gliserolisis kontinu dengan variasi laju alir CPO, waktu gliserolisis dan bentuk lipase (bebas dan amobil)
35 Lampiran 2. Uji aktivitas enzim lipase
Bobot sampel (g) Volume titrasi (mL) Aktivitas lipase (mol ALB/menit)
3,029 14,2 1,091
MNaOH = 0,9524 N; Bobot blanko = 3,14 g; Volume titrasi blanko = 12 mL
Aktivitas lipase
=
=
=
=
1,091 mol ALB/menitLampiran 3. Komposisi produk DAG yang terbentuk melalui gliserolisis kontinu dengan variasi laju alir substrat (CPO)
Waktu Gliserolisis (Jam)
Fraksi Massa DAG (%) ∆ Fraksi Massa DAG (%) µ = 1 mL/mnt µ = 3 mL/mnt µ = 1 mL/mnt µ = 3 mL/mnt 4 11,651 14,286 -1,752 0,593 18 13,991 14,525 0,589 0,832 21 14,139 16,000 0,737 2,307 24 14,121 15,190 0,719 1,497 Waktu Gliserolisis (Jam)
Laju Konversi DAG (%/Jam) Konversi DAG (%) µ = 1 mL/mnt µ = 3 mL/mnt µ = 1 mL/mnt µ = 3 mL/mnt
4 -0,438 0,148 -13,069 4,329
18 0,033 0,046 4,398 6,077
21 0,035 0,110 5,498 16,848
36
Lampiran 4. Fraksi massa produk DAG dengan variasi waktu gliserolisis Waktu
Gliserolisis (Siklus Ke-)
Fraksi Massa DAG (%)
6 14,286 12 14,159 18 17,647 24 13,793 30 14,286 36 14,525 42 16,000 48 15,190 51 13,924
Ket : 1 Siklus = ± 30 menit
Lampiran 5. Perubahan fraksi massa produk TAG, DAG, MAG dan ALB dibandingkan fraksi massa awal
Waktu Gliserolisis (Siklus Ke-)
Fraksi Massa Komponen (%) ∆ Fraksi Massa Komponen (%)
TAG DAG MAG ALB TAG DAG MAG ALB
6 73,016 14,286 6,349 6,349 -4,577 0,593 1,785 2,200 12 79,646 14,159 6,195 0,000 2,053 0,466 1,631 -4,149 18 72,549 17,647 5,229 4,575 -5,044 3,954 0,665 0,426 24 80,172 13,793 6,034 0,000 2,579 0,100 1,471 -4,149 30 83,516 14,286 1,099 1,099 5,924 0,593 -3,465 -3,050 36 77,095 14,525 5,028 3,352 -0,498 0,832 0,464 -0,797 42 77,600 16,000 3,200 3,200 0,007 2,307 -1,364 -0,949 48 79,114 15,190 3,165 2,532 1,521 1,497 -1,399 -1,617 51 78,481 13,924 4,430 3,165 0,888 0,231 -0,134 -0,984 Ket :
- ∆ Fraksi Massa Komponen (%) = Fraksi Massa Produk (%) – Fraksi Massa Awal
- Tanda (+) menandakan fraksi massa produk bertambah dibandingkan fraksi massa awal
- Tanda (-) menandakan fraksi massa produk berkurang dibandingkan fraksi massa awal
37 Lampiran 6. Laju konversi DAG dibandingkan dengan kondisi awal
Waktu Gliserolisis (Siklus Ke-) Waktu Gliserolisis (Jam) Fraksi Massa DAG (%) Laju Konversi DAG (%/Jam) 6 3 14,286 0,198 12 6 14,159 0,078 18 9 17,647 0,439 24 12 13,793 0,008 30 15 14,286 0,040 36 18 14,525 0,046 42 21 16,000 0,110 48 24 15,190 0,062 51 25,5 13,924 0,009
Lampiran 7. Nilai konversi fraksi massa produk DAG dibandingkan dengan fraksi massa DAG awal
Waktu Gliserolisis
(Siklus Ke-) Fraksi Massa DAG Konversi DAG (%)
6 14,286 4 12 14,159 3 18 17,647 29 24 13,793 1 30 14,286 4 36 14,525 6 42 16,000 17 48 15,190 11 51 13,924 2
Lampiran 8. Perbandingan komposisi massa produk DAG selama 9 jam gliserolisis dengan perlakuan penggantian substrat CPO sebanyak 3 kali Waktu Gliserolisis (Siklus Ke-) Fraksi Massa DAG Awal (%)
Fraksi Massa DAG (%)
Substrat I Substrat II Substrat III 1 14,580 19,149 17,778 17,391 2 18,812 18,447 17,647 3 16,418 20,000 18,452 4 18,310 19,608 17,797 5 17,808 12,102 16,981 6 18,584 17,241 17,021
38
Lampiran 9. Perbandingan laju konversi pembentukan DAG selama 9 jam gliserolisis dengan perlakuan penggantian substrat CPO sebanyak 3 kali Waktu Gliserolisis (Siklus Ke-) Waktu Gliserolisis (Jam)
Fraksi Massa DAG (%) Laju Konversi DAG (%/Jam) TAG DAG MAG ALB TAG DAG MAG ALB 1.1 0,5 69,149 19,149 6,383 5,319 15,348 9,132 3,390 2,826 1.2 1 70,297 18,812 5,941 4,951 -6,526 4,229 1,253 1,044 1.3 1,5 74,627 16,418 4,478 4,478 -1,464 1,223 -0,140 0,381 1.4 2 77,465 18,310 2,817 1,409 0,321 1,863 -0,936 -1,249 1.5 2,5 78,082 17,808 2,740 1,370 0,504 1,290 -0,779 -1,014 1.6 3 71,681 18,584 5,310 4,425 -1,714 1,334 0,207 0,173 2.1 0,5 76,667 17,778 3,333 2,222 -0,313 6,390 -2,709 -3,368 2.2 1 71,845 18,447 5,825 3,884 -4,978 3,864 1,137 -0,023 2.3 1,5 72,174 20,000 4,348 3,478 -3,099 3,611 -0,227 -0,285 2.4 2 73,529 19,608 3,922 2,941 -1,647 2,512 -0,383 -0,482 2.5 2,5 80,892 12,102 3,822 3,185 1,627 -0,992 -0,347 -0,289 2.6 3 70,690 17,241 6,035 6,035 -2,044 0,886 0,449 0,709 3.1 0,5 73,913 17,391 4,348 4,348 -5,820 5,617 -0,680 0,884 3.2 1 71,765 17,647 7,059 3,529 -5,058 3,064 2,371 -0,377 3.3 1,5 69,643 18,452 6,548 5,357 -4,787 2,580 1,240 0,967 3.4 2 69,492 17,797 6,780 5,932 -3,666 1,607 1,046 1,013 3.5 2,5 72,327 16,981 5,031 5,660 -1,798 0,959 0,137 0,702 3.6 3 74,468 17,021 4,255 4,255 -0,785 0,813 -0,144 0,116 Ket : 1.1 = Pergantian substrat ke-1, siklus ke-1, dst
2.1 = Pergantian substrat ke-2, siklus ke-1, dst 3.1 = Pergantian substrat ke-3, siklus ke-1, dst
Lampiran 10. Peningkatan nilai konversi pembentukan DAG hasil gliserolisis kontinu dengan 3 kali pergantian substrat CPO dibandingkan kandungan DAG awal
Waktu Gliserolisis (Siklus Ke-)
Fraksi Massa DAG (%) Konversi DAG (%) Substrat I Substrat II Substrat III Substrat I Substrat II Substrat
III 1 19,149 17,778 17,391 31,340 21,950 19,270 2 18,812 18,447 17,647 29,010 26,540 21,060 3 16,418 20,000 18,452 12,620 37,170 26,540 4 18,310 19,608 17,797 25,580 34,500 22,090 5 17,808 12,102 16,981 22,150 17,010 16,460 6 18,584 17,241 17,021 27,430 18,240 16,740
39 Lampiran 11. Perbandingan fraksi massa DAG hasil gliserolisis kontinu dengan
lipase bebas dan lipase amobil
Waktu Gliserolisis (Jam) Fraksi Massa DAG (%)
Lipase Bebas Lipase Amobil
3 14,286 12,834 6 14,159 14,948 9 17,647 14,706 12 13,793 15,385 15 14,286 15,703 18 14,525 16,561 21 16,000 17,241 24 15,190 14,493
Lampiran 12. Perbandingan perubahan fraksi massa DAG antara lipase bebas dan amobil dibandingkan dengan fraksi massa awalnya
Waktu Gliserolisis
(Jam)
Fraksi Massa DAG (%) Perubahan Fraksi Massa DAG (%) Lipase
Bebas Lipase Amobil Lipase Bebas
Lipase Amobil 3 14,286 12,834 0,593 -0,084 6 14,159 14,948 0,466 2,030 9 17,647 14,706 3,954 1,787 12 13,793 15,385 0,100 2,466 15 14,286 15,703 0,593 2,784 18 14,525 16,561 0,832 3,642 21 16,000 17,241 2,307 4,323 24 15,190 14,493 1,497 1,574
Lampiran 13. Perbandingan laju konversi DAG antara lipase bebas dan amobil Waktu
Gliserolisis (Jam)
Fraksi Massa DAG (%) Laju Konversi DAG (%/Jam) Lipase
Bebas Lipase Amobil Lipase Bebas
Lipase Amobil 3 14,286 12,834 0,198 -0,028 6 14,159 14,948 0,078 0,338 9 17,647 14,706 0,439 0,199 12 13,793 15,385 0,008 0,206 15 14,286 15,703 0,040 0,186 18 14,525 16,561 0,046 0,202 21 16,000 17,241 0,110 0,206 24 15,190 14,493 0,062 0,066
40
Lampiran 14. Perbandingan nilai konversi DAG antara lipase bebas dan amobil ketika dibandingkan dengan kandungan DAG awal
Waktu Gliserolisis
(Jam)
Fraksi Massa DAG (%) Konversi DAG (%) Lipase
Bebas Lipase Amobil Lipase Bebas
Lipase Amobil 3 14,286 12,834 4,329 0,654 6 14,159 14,948 3,405 15,712 9 17,647 14,706 28,877 13,834 12 13,793 15,385 0,731 19,088 15 14,286 15,703 4,329 21,549 18 14,525 16,561 6,077 28,190 21 16,000 17,241 16,848 33,461 24 15,190 14,493 10,932 12,185
Lampiran 15. Perbandingan komposisi massa DAG antara lipase bebas dan amobil dengan perlakuan penggantian substrat sebanyak 3 kali Waktu
Gliserolisis (Jam)
Fraksi Massa DAG (%) Konversi DAG (%) Lipase Bebas Lipase Amobil Lipase Bebas Lipase Amobil
3 18,584 19,653 27,463 26,966
6 17,241 15,584 18,254 0,680
41
RIWAYAT HIDUP
Penulis dilahirkan di Manado pada tanggal 1 September 1988 sebagai anak sulung dari pasangan Rolles Nixon Palilingan dan Meity Martina Pungus. Pendidikan sarjana ditempuh di Program Studi Kimia Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Sam Ratulangi Manado, lulus pada tahun 2010. Pada tahun 2011, penulis diterima di Program Studi Biokimia Departemen Biokimia pada Program Pascasarjana IPB Bogor. Beasiswa pendidikan pascasarjana diperoleh dari Direktorat Jenderal Pendidikan Tinggi (Ditjen Dikti) melalui Beasiswa Unggulan (BU) untuk Calon Dosen dari tahun 2011-2013.