BAB 4 HASIL PENELITIAN DAN PEMBAHASAN
4.2 Pembahasan
4.2.3 Penentuan Struktur Kimia Senyawa VDH8-3-2 Fraksi Etil Asetat
4.2.3.5 Hasil Analisis Spektra LCMS untuk Isolat VDH8-3-2
Hasil analisis spektra berat molekul untuk isolatt VDH8-3-2 menggunakan alat LCMS (Liquid Chromatografi Mass Spectroscopy) bertujuan untuk menentukan berat molekul suatu senyawa hasil isolasi. Hasil analisis spektra massa untuk isolat VDH8-3-2 dapat dilihat pada Gambar 4.43 di bawah ini.
Gambar 4.43 Spektra LCMS untuk isolat VDH8-3-2
Berdasarkan Gambar 4.43 menunjukkan bahwa adanya ion molekul pada m/z 138 [M+1]. Dari hasil analisis tersebut menunjukkan bahwa isolat VDH8-3-2 memiliki bobot molekul 138 (BM 138) dengan rumus molekul C7H6O3. Dari hasil spektra UV-Vis, 1 H-NMR dan 13C-NMR 1 Dimensi serta LCMS diketahui bahwa isolat VDH8-3-2 terdiri dari satu benzena 1,4-disubstitusi, satu karboksilat terkonjugasi serta terdapat satu gugus OH pada posisi para sehinnga struktur senyawa kimia dalam isolat VDH8-3-2 yang
diusulkan adalah asam para hidroksi benzoat (PHBA) seperti yang tertera pada Gambar 4.44 di bawah ini.
Gambar 4.44 Struktur kimia dari isolat VDH8-3-2 4.2.4 Bioaktivitas Isolat dari Daun Halban (Vitex Pinnata Linn)
Hasil pengujian aktivitas yang dilakukan kepada masing-masing isolat yaitu VDFA2-4 dari fraksi air dan VDH9-3-13, VDH8-3-2 dari fraksi etil asetat menggunakan metode pengujian antioksidan DPPH (2,2-difenil-1-pikrihidrazil) sebagai penangkap radikal bebas, menunjukkan bahwa ke tiga isolat tersebut memiliki bioaktivitas. Isolat VDHFA2-4 dari fraksi air memiliki aktivitas antioksidan dengan nilai Inhibition Concentration (IC50) sebesar 42,54 dan isolat VDH9-3-13 dari fraksi etil asetat juga memiliki akvitas antioksidan yaitu nilai IC50 sebesar 41,87.
Berdasarkan data nilai IC50 isolat VDHFA2-4 dan VDH9-3-13 menunjukkan nilai IC50 yang tidak jauh berbeda, yaitu sama-sama memiliki aktivitas antioksidan yang sangat kuat. Hal ini didasarkan pada kriteria dari nilai IC50 dimana semakin kecil nilai IC50 berarti semakin tinggi aktivitas antioksidannya. Secara spesifik suatu senyawa dikatakan sebagai antioksidan sangat kuat jika nilai IC50 kurang dari 50 ppm (IC50 < 50 ppm), kuat (50 ppm < IC50 < 100 ppm), sedang untuk nilai IC50 (100 ppm < IC50 < 150 ppm), lemah (150 ppm < IC50 < 200 ppm), dan sangat lemah (IC50 > 200 ppm) (Molyneux, 2004). Reaksi penangkapan radikal bebas oleh senyawa DPPH dapat dilihat pada Gambar 4.45 di bawah ini.
Gambar 4.45 Reaksi radikal DPPH radikal dengan radikal lain (Alkil radikal R=H) (Nimse et al, 2015)
Senyawa fenolik juga dapat bersifat sebagai radikal, seperti yang dilaporkan oleh (Charles, 2014) dimana kemampuan menyumbangkan elektron dari substitusi butil metil, etil tersier pada posisi orto dan para pada gugus hidroksil dapat meningkatkan aktivitas antioksidan fenol alami. Reaksi radikal senyawa fenol dapat dilihat pada Gambar 4.46 berikut ini.
Gambar 4.46 Mekanisme reaksi pembentukan radikal senyawa fenolik (Craff, 2012) Tetapi (Craff, 2012) juga melaporkan bahwa meningkatnya hibridisasi disosiasi homolitik ikatan OH atau potensial ionisasi secara negatif dapat mempengaruhi aktivitas antioksidan senyawa fenolik, seperti yang terjadi pada senyawa asam para hidroksi benzoat (PHBA) dimana berdasarkan hasil penelitian senyawa asam para hidroksi benzoat (PHBA) memiliki aktivitas antioksidan yang sangat lemah. Hal ini dikarenakan pada PHBA terjadi kenaikan hibridisasi disosiasi homolitik ikatan OH atau potensial ionisasi secara negatif sehingga mempengaruhi aktivitas antioksidan senyawa fenolik. Antioksidan fenolik terbaik adalah senyawa yang mengandung kelompok donor elektron yang secara langsung terikat pada cincin aromatik. turunan asam sinamat umumnya menunjukkan aktivitas antioksidan lebih besar daripada turunan asam benzoat.
Sedangkan untuk isolat VDH8-3-2 memiliki nilai toksisitas Letal Concentration (LC50) yaitu PHBA memiliki toksisitas LC sebesar 59,41. Suatu ekstrak dinyatakan aktif dan bersifat toksik jika dapat menyebabkan kematian 50% hewan uji pada konsentrasi kurang dari 1000 ppm dan bersifat tidak toksik jika ditemukan pada konsentrasi lebih dari 1000 ppm (Meyer et al., 1982).
O H
O O O O
BAB 5
KESIMPULAN DAN SARAN
5. 1 Kesimpulan
Berdasarkan hasil penelitian yang sudah dilakukan dapat diambil beberapa kesimpulan antara lain sebagai berikut :
1. Diperoleh 3 jenis isolat yang sudah murni yang disolasi dari daun halban (Vitex pinnata Linn) yang berasal dari Kota Kuala Simpang, Aceh yaitu dari fraksi air isolat VDHFA2-4, sedangkan dari fraksi etil asetat yaitu isolat VDH9-3-13 dan VDH8-3-2.
2. Hasil penentuan struktur kimia pada ke tiga isolat tersebut menunjukkan bahwa ke tiga isolat tersebut adalah senyawa Agnuside (isolat VDHFA2-4), 4-Hidroksi-Metil Benzoat (isolat VDH9-3-13) dan Asam para Hidroksi Benzoat (PHBA) (isolat VDH8-3-2)
3. Struktur ke- tiga senyawa tersebut adalah
4- Hidroksi-metil Benzoat Asam Para Hidroksi Benzoat
Agnuside
4. Hasil uji bioaktivitas menunjukkan bahwa senyawa agnuside dari isolat VDHFA2-4 memiliki aktivitas antioksidan dengan nilai IC50 sebesar 42,54 dan senyawa 4-hidroski metil benzoat memiliki aktivitas antioksidan IC50 sebesar 41,87. Sedangkan senyawa Asam Para Hidroksi Benzoat (PHBA) memiliki toksisitas dengan nilai LC50 sebesar 59,41.
5.2 Saran
Adapun saran-saran yang dapat diberikan setelah melakukan penelitian ini adalah : 1. Perlu melakukan penelitian lebih lanjut mengenai kandungan metabolit sekunder
yang terkandung di dalam daun tanaman halban (V. pinnata L), karena baru diperoleh tiga senyawa yaitu dua dari metabolit sekunder fenolik dan satu senyawa dari kelompok terpenoid
2. Senyawa kimia metabolit sekunder dari jenis flavonoid belum ditemukan, sehingga penelitian ini perlu dilanjutkan untuk mencari senyawa kimia aktif flavonoid baru ataupun yang sudah dikenal di dalam daun tanaman halban (V.
pinnata L)
3. Perlu penelitian lebih lanjut untuk uji bioaktivitas yang lain dari ekstrak dauan tanaman halban, baik fraksi etil asetat maupun fraksi dari fraksi air.
DAFTAR PUSTAKA
Alvares, Maria, Alejandra, 2014, Plant Biotecnology for Health from Secundery Metabolite Molecular Farming, Buenos Aires, Argentina
Assefa at al, 2016, Antioxidant and Antiplatelet Activities of Flavonoid-rich Fractions of Three Citrus Fruits from Korea, 3 Biotech 6:109 Springerlink.com
Burkill, I. H. 1966, A Dictionary of The Economic Products of The Malay Penisula, Vol. II, Ministry of Agriculture and Cooperative, Kuala Lumpur
Charles, Denys, 2014, Antioxidant Properties of Spices, Herbs and Other Souces, Springer-Verlag Berlin Heidelberg
Craff, Briand et al, 2012, Phenol-Based Antioxidants and the In Vitro Methods Used for Their Assessment, Comprehensive Riview in Food Science and Food Safety Volume 11, Issue 2 Pages 148–173
Ghandjar, Gholib, Ibnu dkk, 2015, Kimia Farmasi Analisis, Pustaka Pelajar, Yogyakarta
Harborne, 2006, Metode Fitokimia, ITB Bandung
Heise, Henrike et al, 2014, Modern NMR Methodology, Springer-Verlag Berlin Heidelberg
Hiraoka, Kenzo, 2013, Fundamentals of Mass Spectrometry, Springer-Verlag Berlin Heidelberg
Iqbal E, Abu salim K, Lim Linda B.L. 2015. Phytochemical Screening, Total Phenolic and Antioxidant Activities of Bark and Leaf Extracts of Goniothalamus Velutinus (Airy Shaw) from Brunei Darussalam. Journal of King Saud University-Science xxx, xxx-xxx
Krishnaraju, et al, 2005, Assessment of Bioactivity of Indian Medicinal Plants Using Brine Shrimp (Artemia salina) Lethality Assay. International Journal of Applied Science and Engineering, 3 (2) : 125- 134.
Lamert, Eehkard, 2014, Metabolism of Human Deseases, Departement Metabolic Researh: Germany
Mahendran, 2015, Antioxidants, anti-proliferative, anti-inflammatory, anti-diabetic andanti-microbial effects of isolated compounds from Swertia corymbosa (Grieb.) Wight ex C.B. Clark – An in vitro approach, Food Science and Human Wellness 4, 169–179 Science Direct
Mahmoudi, Souhila et al, 2015, Phenolic and Flavonoid Contents, Antioxidant and Antimicrobial Activities of Leaf Extracts from Ten Algerian Ficus carica L.
Varieties.Asian Pacific Journal of Tropical Biomedicine
Mann, Andre et al, 2014, Progress in the Chemistry of Organic Natural Product Springer-Verlag Berlin Heidelberg
Mastura, Sarjani, 2016, Kajian Ethnobotany Tananan Antidiabetes yang Populer di Kota Langsa, Aceh, Prosiding Seminar Nasional MIPA Kimia USU dan Pendidkan Kimia Unimed
Mastura, Barus T, Marpaung L, Simanjuntak P, 2017. Senyawa Fenolik Dari Daun Halban (Vitex pinnata Linn) sebagai Antioksidan, Prosiding Seminar Nasional MIPA, Universitas Mulawarman, Kalimantan
Mastura, Barus T, Marpaung L, Simanjuntak P, 2017. Aktivitas Antioksidan dan Toksisitas Fraksi Etil Asetat dari Daun Halban (Vitex pinnata Linn) Asal Aceh, Prosiding Seminar Nasional MIPA Kimia USU dan Pendidkan Kimia Unimed Mastura, Barus T, Marpaung L, Simanjuntak P, 2018. Isolation and Identification of
Iridoid from Water Extract of Leaves of Vitex Pinnata Linn. as Antioxidant.
Asian Journal Chemistry. Vol.30 No.4. 814-816
Meyer at al, 1982, Brine Shrimp : A Convenient General Bioassay for Avtive Plant Constituents, Journal Medical Plant Research, Hippokrates Verlag GmbH, Vol 45, pp 31-34
Molyneux, P., 2004, The Use of The Stable Free Radical Diphenulpicrylhydraxyl (DPPH) Fore Estimaing Antioxidant Activity. Songklanakarin J. Sci. Technol. 26 (2) pp 211-219.
Mondal, Suvendu et al, 2015, Genetic Variability for Total Phenolics, Flavonoids and Antioxidant Activity of Testaless Seeds of a Peanut Recombinant Inbred Line Population and Identification of Their Controlling QTLs, Euphytica 204:311–
321. Springer Science+Business Media Dordrecht
Motohashi, Noboru, 2009, Bioactive Heterocycles VII Flavonoids and Anthocyanins in Plants, and Latest Bioactive Heterocycles II, Springer Dordrecht Heidelberg London New York
Nagarani et al, 2014, A Comparative Study on Antioxidant Potentials, Inhibitory Activities Againstkey Enzymes Related to Metabolic Syndrome, and Anti-inflammatory Activityof Leaf Extract from Different Momordica Species, Food Science and Human Wellness 36–46 sciencedirect.com
Naggar et al, 1980, Iridoids. a Review, Jounal of Natural Products, Division of Pharmacognosy and Natural Products Chemistry,The Ohio State Unversity, Columb, Ohio, vol.43, no. 6
Nimse et al, 2015, Free Radicals, Natural Antioxidant, and their Reaction Mecanism, Royal Society of Chemistry, RSC Adv
Ogata, Y., Kasaharea, Y., and Iwasaki, T., 1995, Medicine Herb Index Indonesia, Second edition, Eisai Indonesia.
Oluwasesan et al, 2017, The genus Vitex: An Overview of Iridoids as Chemotaxonomic, MarkerBeni-Suef University Journal of Basic and Applied Sciences
Ordenez et al, 2012, Fourier Transform Infrared Spectroscopy in Food Microbiology.
Springer-Verlag Berlin Heidelberg
Popp et al, 2012, Chailenges in Molecular Sturcture Ditermination, Springer-Verlag Berlin Heidelberg
Pretsch et al, 2009, Structure Ditermination of Organik Compounds, Springer-Verlag Berlin Heidelberg
Qinghu Wang, 2015, Three Flavonoids from the Leaves of Astragalus Membranaceus and Their Antifungal Activity. Monatsh Chem 146:1771–1775 Springer-Verlag Wien
Ramawat, 2009, Herbal Drugs: Ethnomedicine to Modern Medicine, Springer-Verlag Berlin Heidelberg
Roy, Somendus et al, 2014, Determination of Negundoside and Agnuside in Vitex negundo by qNMR and Method Validation Journal of Analytical Chemistry
Shah, et al, 2013, Validated HPLC Method for Identification and Quantification of P-hydroxy Benzoic Acid and Agnuside in Vitex negundo and Vitex trifolia, Journal of Pharmaceutical Analysis
Sharma dan Rahmawat, 2013, Isoflavonoids 60, Springer-Verlag Berlin Heidelberg Silverstein, 1986, Penyidikan Spektrometrik Senyawa Organik, Erlangga, Jakarta
Steven M., and Molyneux R, 1993, Bioaktive Natural Products, CRC Press Boca Raton Ann Arbor London Tokyo pp 3-14
Suffness, M. Pezzuto, J.M., 1991, Assays Realted To Cancer Drug Discovery in To Methods in Plant Biochemistry, 6.pp 71-124
Suksamrarn, A., and Sommechai, C., 1993, Ecdysteroids from Vitex pinnata, Phytochemistry, 32 (2), 303-306
Suksamrarn, A., Sommechai, C., Charulpong, P., and Chitkul, B., 1995, Ecdysteroids from Vitex canescens, Phytochemistry, 38 (2), 473-476
Suksamrarn, A., Promrangsan, N., Chitkul, B., Homvisasevongsa, S., and Sirikate, A., 1997, Ecdysteroids of The Root Bark of Vitex canescens, Phytochemistry, 45 (6), 1149-1152
Syafruddin, 2013, Isolasi dan Identifikasi Senyawa Flavonoid dari Buah Laban (Vitex pinnata Linn.) Asal Nanggroe Aceh Darussalam, Serambi Saintia : Vol. I No.1 Syah, 2016, Dasar-Dasar Spektroskopi NMR Satu dan Dua Dimensi, Labaratorium
Spektroskopi Massa dan NMR FMIPA ITB
Tamat, S. R., T. Wikanta dan L. S. Maulina, 2007, Aktivitas Antioksidan dan Toksisitas Senyawa Bioaktif dari Ekstrak Rumput Laut Hijau Ulva reticulata Forsskal. Jurnal Ilmu Kefarmasian Indonesia, 5 (1) : 31-36.
Tarigan et al, 2008, Skrining Fitokimia Tumbuhan yang Digunakan oleh Pedagang Jamu Gendong untuk Merawat Kulit Wajah di Medan Baru, Jurnal Biologi Sumatera, Vol 3. No 1
.