BAB V KESIMPULAN DAN SARAN
5.2 Saran
Perlu dilakukan analisis lebih lanjut pada pita-pita hasil pemisahan SDS-PAGE dengan menggunakan LCMS sehingga dapat diketahui urutan asam amino pada masing-masing pita tersebut.
DAFTAR PUSTAKA
Albert, B., Johnson, J., Lewis, M., Raff, K., Roberts, & Walier P. 2002. Molecular Biology of The Cell. Gardland science. New York: xxxiv + 1463 hlm. Anonim. 1995. Farmakope Indonesia. Edisi IV. Departemen Kesehatan Republik
Indonesia. Jakarta: Ditjen POM 404.
Al-Janabi, J., J. A. Hartsuck, et al. 1972. ‘Kinetics and mechanism of pepsinogen activation.’ J Biol Chem 247:4628-32.
Ansel, Howard C. 2005. Pengantar Bentuk Sediaan Farmasi Ed 4th. UI PRESS: Jakarta.
Azira, T., Amin. I., and Che Man, Y. B., 2012. Differentiation of bovine and porcine gelatins in processed products via Sodium Dodecyl Sulphate-Polyacrylamide Gel Electrophoresis (SDS-PAGE) and principal component analysis (PCA) techniques. International Food Research Journal 19 (3): 1175-1180 (2012). Bell et al., 2004. Porchine Collagens and Gelatins. Uniter States Patent
Applicatioon Publication. Pub. No.: US 2004/005663 A1. Bintang, Maria. 2010. Biokimia Teknik Penelitian. Jakarta: Erlangga
Bhatt, Bhawna, dan Agrawal, S.S. 2007. Pharmaceutical Technology Capsules. Delhi Institute of Pharmaceutical Science and Research.
Burden, David W & Whitney, Donald W. 1958. Biotechnology: Protein to PCR: A
Course in Strategies and Lab Techniques. Boston: Birkhauser.
Carr, J. M., K. Sufferling, & J. Poppe. 1995. Hydrocolloids and their use in the confectionery industry. Journal of Food Techniques. Boston: Birkhauser. Cole, C. B. 2002. The Occurence of Dark Coloured Gelatin, In Occurence,
Measurement and Origins of Gelatine Colour as Determined by Fluoresence and Electhrophoresis. South Africa: Thesis University of Petroria.
Departemen Agama RI. 2008. Al-Quran dan Terjemahnya. Cahaya Qur’an: Depok.
Doi, H., Watanabe, E., Shibata, H., Tanabe, S. A reliable enzyme linked immunosorbent assay for the determination of bovine and porcine gelatin in processed foods. Journal of Agricultural and Food Chemistry. 2009. 57: 1721-6.
Fatchiyah, Laras, Esti Arumningtyas, Widyarti, Sri dan Rahayu, Sri. 2011. Biologi Molekular Prinsip Dasar Analisis. Erlangga, Jakarta.
Gadri , A. dan Ega Priani, S. 2012. Stabilitas Kadar dan Laju Disolusi Ketoprofen Dalam Sediaan Kapsul Gelatin dan HPMC-Karagenan. Prosiding SnaPP 2012, Sains, Teknologo dan Kesehatan.
GMIA, 2012. Gelatin Handbook, USA: Gelatin Manufacturers Institute of
America.
Gorgieva, S., Kokol, V. 2011. Collagen- vs Gelatine-Based Biomaterials and their Biocompatibility. Review and Perspectives, Biomaterials-Applications forr Nanomedicine, Prof. Rosario Pignatello (Ed.), ISBN: 978-953-307-661-4. Grobben A.H., Steele P.J., Somerville R.A., Taylor D.M. 2004. Inactivation of the
ovine-spongiform-encephalopathy (BSE) agent by the acid and alkali processes used the manufacture of bone gelatin. Biotechnology and Applied Biochemistry 39:329-338.
Hammes, B.D. 1998. Electhrophoresis of Protein. Oxford University Press. New
York.
Hana, Abu. 2009. Gelatin Halal dan Gelatin Haram. http//republika.co.id/infohalal. (6 Mei 2014 pukul 01.55).
Hardi, Y. R. 2010. Struktur Molekul Protein. http://sciencebiotech.net/struktur-molekul-protein/ (6 Mei 2014, pukul 01.51 WIB).
Hashim, D. M., Che Man, Y. B., Norakasha, R., Shuhaimi, M., Salmah, Y. and Syahariza, Z. A. 2010. Potential use of Fourier transform infrared spectroscopy for differentiation of bovine and porcine gelatins. Food Chemistry 118: 856 - 860.
Hardi, Yepi, R. 2010. Struktur Molekul Protein. http://sciencebiotech.net/struktur-molekul-protein/ (06 Mei 2014, Pukul 04.00 WIB)
Hermanto, S. dan Ode L. S. 2013. Differentiation of Bovine and Prochine Gelatin
Based on Spectroscopic and Electrophoretic Analysis. Journal of Food and Pharmaceutical Science 1 (2013) 68-73.
Hermanto, S. Dhien, C. K. Mentia. 2009. Perbedaan Profil Protein Produk Olahan
(Sosis) Daging Babi dan Sapi Hasil Analisa SDS-PAGE. UIN Syarif Hidayatullah Jakarta.
Hidaka, S. dan S. Y. Liu. 2003. Effect of Gelatins on Calcium Phosphate Precipitation: A Possible Application for distinguishing Bovine Bone Gelain, J. Food Compos. Anal., 16, 477-483.
Jamaludin, M.A., Zaki, N.N.M. Ramli, M.A., Hasim, D.M. dan Ab. Rahman, S. 2011. Istihalah: Analysis on The Utilization of Gelatie in Food Products 2011 2nd International Conference on Humanities, Historical and Social Science IPEDR vol. 17. Singapore: IACSIT Press.
Mahasri, G., Fajriah, U. Dan Subekti, S., 2010. Characterization of Protein Lernaea cyprinacea by Using SDS-PAGE Electrophoresis Method. Jurnal Ilmiah Perikanan dan Kelautan Vol. 2, No. 1.
Mannucci, PM, Mannucci, Pier Mannuccio. 1998. Hemostatic Drugs. N. Eng. J. Med. 339 (4): 245-53.
Martoharsono, Soeharsono. 2006. Biokimia. Yogyakarta: Gajah Mada University Press.
Mohd, R. H., N. R., C. Y. M., Amin, I., & A. Noorfaizan. 2011. Chemical and Functional Properties of Bovine and Porcine Skin Gelatine. International Food Research Journal 18: 813-817.
Murray R. K, et al. 2000. Biokimia Harper Edisi 25. Jakarta: Penerbit buku kedokteran EGC.
Nemati, M., Oveisi, M. R., Abdollahi, H. and Sabzevari, O. 2004. Differentiation of bovine and porcine gelatins using principal component analysis. Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis 34: 485-492.
Poedjiadi, Anna. 1994. Dasar-Dasar Biokimia. Jakarta: Penerbit Universitas Indonesia (UI-Press).
Reich, G. 2001. Formulation and physical properties of soft capsules Chapter 11.
Deutsche Lederinstitute, Frieberg/SA
Rybicky, E., dan Purves, M. (n.d.). SDS Polyacrilamide Gel Elektrophoresis
(SDS-PAGE).http://www.mcb.utc.ac.za/Mannual/sdspage.html (06 Mei 2014, pukul 03.00 WIB)
Riaz, M.N. dan M.M. Chaudry. 2004. Halal food production. CRC Press, USA.
Schrieber, R. & Gareis, H. 2007. Gelatine Handbook : Theory dan Industrial Practice. Jerman: Wiley VCH Verlag GmbH dan Co. KgaA
Sudarmadji, S., Haryono, B., Suhardi. 1996. Analisa Bahan Makanan dan
Pertanian. Yogyakarta: Penerbit Liberty.
Venien, A & Levieux, D. 2005. Differentiation of Bovine from Porcine Gelatines Using Polyclonal Anti-peptide Antibodies in Indirect and Competitive Indirect ELISA. Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis 39 (2005) 418-424.
Veis, A. 1964. The Macromolekul Chemistry of Gelatin. New York and London:
Academic Press.
Widyaninggar, A., Triwahyudi, Triyana, K., dan Rohman, A. 2012. Differentiation
Between Porcine and Bovine Gelatin in Commercial Capsule Shells Based on Amino Acid Profiles and Principal Component Analysis. Indonesian J. Pharm. Vol. 23 No. 2: 96-101.
Zhang, G., Liu, T., Wang Q., Chen, L., Lei, J., Luo, J., Ma, G., & Su, Z. 2008. Food Hydrocolloids. Journal homepage: www.elsevier.com/locate/foodhyd (6 Mei 2014 pukul 02.00 WIB).
LAMPIRAN ALUR PENELITIAN
Lampiran 1
Staining dan destaining gel setelah proses elektroforesis Loading 10µl gelatin kedalam
sumuran gel
Running gel elektroforesis 40 mA pada tegangan 150 volt (60
menit) Sampel Kapsul
Lunak
Ekstraksi Gelatin
Simulasi Gelatin Cangkang Kapsul Lunak
Konsentrasi gel stacking 4% resolving 12%
Standar Gelatin Sapi dan Gelatin Babi
Hidrolisis Dengan Pepsin pada pH 4,5 dan Inkubasi pada suhu 60°C
selama 1 jam
Centrifuge 3 menit, preparasi endapan untuk dielektroforesis
Preparasi gel elektroforesis
Analisis pola pmisahan protein Pembahasan dan Kesimpulan
Lampiran 2
Seperangkat alat elektroforesis Pengeluaran isi cangkang kapsul lunak
Penimbangan cangkang kapsul kosong Ekstraksi sampel
Pemanasan sampel sebelum dieketroforesis
Loading sampel Elektroforesis
Staining Staining semalaman menggunakan shaker
Lampiran 3
Preparasi Reagent SDS-PAGE
a. Larutan Stok Acrylamide/ Bis (30%%T;2,67%C)
29,2 g akrilamide dilarutkan dalam 100 ml air deionisasi, kemudian ditambahkan 0,8 ml N’N’ –bis-methylene-acrylamide ke dalam larutan aduk hingga larut dengan stirer, kemudian larutan disaring dan disimpan pada suhu 4°C ditempat yang terhindar dari cahaya.
b. SDS 10% (w/v)
10 g SDS dilaritkan dalam 90 ml air deionisasi diaduk dengan hati-hati kemudia pH disesuaikan hingga 8,8 dengan penambahan 6 N HCL. Kemudian air deionisasi ditambahkan pada larutan hingga 100 ml, larutan disimpan pada suhu 4°C.
c. Resolving Buffer: 1,5 M Tris-HCl;pH 8,8
18, g Basa Tris dilarutkan dalam 60 ml air deionisasi diaduk dengan hati-hati kemudian pH disesuaikan hingga 8,8 dengan penambahan 6 N HCl. Kemudian ditambahkan air deionisasi hingga 100 ml larutan disimpan pada suhu 4°C.
d. Stacking Buffer: 0,5 M Tris-HCl, pH 6,8
Ditimbang sebanyak 6 g tris dilarutkan dalam 60 ml air deionisasi. Atur pH 6,8 dengan 6N HCl, kemudian tambahkan air deionisasi hingga total
volumenya 100 ml. Simpan pada suhu 4°C.
e. Sample Buffer
Sampel buffer dibuat dengan cara mencampurkan 3,5ml air deionisasi, 1,25 ml stacking buffer, 2,5 ml gliserol, 2 ml SDS 10% dan 0,2 ml 0,5% (w/v) bromophenol blue. Total larutan 9,5 ml disimpan pada suhu ruang.
f. Running Buffer
Basa tris ditimbang sebanyak 30,3 gram, kemudian ditambahkan 144 gram glisisn dan 10 gram SDS. Dilarutkan dalam 100 ml air deionisasi, larutan diaduk kemudian ditambahkan air deionisasi hingga volume total 1000 ml. Larutan disimpan pada suhu 4°C.
APS ditimbang sebanyak 100 mg kemudian dilarutkan dalamP 1 ml air deionisasi.
