Gambar 3 Pembentukan dinding sel silicaseous dalam siklus sel diatom (Kröger & Wetherbee, 2000).
Silika yang terbentuk sebagai penyusun dinding sel diatom merupakan salah satu contoh peristiwa biologi organisme yang memanfaatkan langsung komponen disekitarnya untuk menyusun bagian tubuhnya. Menurut Poulsen & Kröger (2004), selama terjadi evolusi, diatom dan organisme penghasil silika lain seperti spons dan radiolaria memerlukan asam monosilikat Si(OH)4
Asam silikat Si(OH)
yang ada di habitat untuk pembentukan struktur yang spesifik pada setiap endo dan eksoskeleton.
3O- yang banyak terdapat diperairan laut ditransport secara aktif masuk ke dalam appratus golgi. Dari apparatus golgi ini asam silikat masuk ke dalam organel yang disebut a small silicon-laden vesicle oleh mikrofilamen (Lee 1989). Hildenbrand et al. (1998) menemukan bahwa mikrofilamen tersebut adalah sejenis protein transporter yang memiliki atom Na+
sitokinesis ekspansi eksositosis Pemisahan sel Pertumbuh an sel SDV Replikasi DNA
yang disebut protein silica transpoter. Selanjutnya a small silicon-laden vesicle menjadi silica deposition vesicle (SDV) yakni organel yang mempolimerisasi asam silikat menjadi polimer silika.
Di dalam SDV asam silikat mengalami reaksi kondensasi dengan gugus hidroksi dari suatu protein.
Mekanisme pemindahan silika menjadi dinding sel silicaseous belum jelas meskipun telah diketahui sebagian dari komponen yang terlibat biosilifikasi diatom (Sumper & Kröger 2004).
Kröger et al. (1997) dan Kröger et al. (1999) memastikan adanya peran molekul organik yang terlibat dalam pembentukan silika di dalam SDV. Mereka berhasil mengisolasi serta mengkarakterisasi sebagai satu set peptida polikationik berberat molekul rendah dan peptida berberat molekul tinggi. Selain itu ada komponen lain yakni non protein rantai poliamin panjang dengan rantai spesifik yang berperan dalam penyusunan pola silika (Sumper 2002). SDV silicaseous dalam pertumbuhan sel diatom mengalami perluasan dan bergabung dengan silicalemma membentuk jaringan skeletal yang diduga melibatkan protein trans-silicalemma dan elemen skeletal (Lee 1989).
Protein yang Terlibat dalam Biosilika Diatom
Kröger et al. (1997) telah menemukan adanya protein yang terlibat dalam pembentukan silika dari diatom Cylindrotheca fucifomis yang kemudian dikenal dengan protein silaffin. Protein tersebut bertanggungjawab pada tingkat molekuler dalam membentuk struktur silika berukuran nano dari asam silikat (silikon) di dalam lingkungannya. Proteinsilaffin sangat kuat terikat dengan silika dan hanya ditemukan di dalam SDV yang telah terintegrasi menjadi dinding sel.
Protein silaffin diatom Cylindrotheca fuciformis terdiri tiga polipeptida yaitu silaffin 1A (4 kDa), silaffin 1B (8 kDa) dan silaffin 2 (17 kDa), serta komponen non-protein yakni poliamin (<3,5 kDa). Hasil analisis sekuens protein menunjukkan silaffin 1A terdiri dari dua campuran peptida yang sama dan disebut silaffin 1A1, 1A2, masing-masing mengandung 15 dan 18 asam amino dan memiliki homologi sekuens yang cukup tinggi dengan silaffin 1B.
Poulsen & Kröger (2004), mengkarakterisasi protein silaffin diatom Thalassiosira pseudonana dan Cylindrotheca fuciformis. Protein silaffin T.
pseudonana mengandung 5 peptida, yakni tpSil 1H (35 kDa), tpSil 2H (35 kDa), tpSil 1L (19 kDa), tpSil 2L (18 kDa) dan tpSil 3 (35 kda). Peptida tpSil 1H dan 2H mempunyai berat molekul yang lebih tiggi dari tpSil 1L dan 2L. Analisis sekuen N-terminal terhadap 5 protein silaffin utama dari T. pseudonana ternyata tidak homolog dengan protein silaffin C. fucifrmis, namun mempunyai kemiripan komposisi asam amino. Protein tpSil 1 & 2H mempunyai komposisi asam amino yang tidak jelas karena banyaknya asam amino yang tidak teridentifikasi dan mengandung campuran 2 peptida yang mempunyai sekuen berbeda sama sekali. Pada tpSil 1L dan 2L merupakan sekuen yang mirip, namun juga mengandung asam amino yang tidak teridentifikasi.
Spons juga memiliki silika yang juga dikontrol oleh protein yang disebut protein silicatein. Menurut Shimizu et al. (1998), protein silicatein dari spons Tethya aurantia terdiri dari 3 protein dengan berat molekul 29, 28 dan 27 kDa yang kemudian disebut sebagai 3 subunit α, β dan γ. Tiga protein tersebut sebagai protein isomer, karena satu subunit mampu melakukan reaksi katalis dan susunan asam aminonya juga hampir sama. Hasil sekuen silicatein α mempunyai kemiripan yang tinggi dengan famili cathepsin-L. Tiga ratus tiga puluh satu asam amino yang menyusun silicatein didominasi oleh residu serin, tirosin dan treonin (Shimizu et al.1998). Protein silicatein yang diisolasi dari spons Suberitas domuncula mempunyai 79% kemiripan dengan silicatein T. aurantia, tersusun atas 331 asam amino dengan berat molekul 36. 30 kDa dan 23. 12 kDa (Krasco et al. 2000).
Pembentukan Silika secara In Vitro Menggunakan Katalis Protein
Kröger et al. (1999), menunjukkan bahwa protein silaffin Cylindrotheca fuciformis secara in vitro mampu menghasilkan silika nanosphere pada pH < 7 dan temperatur ruang ketika ditambahkan larutan asam silikat dalam beberapa detik. Lebih lanjut diungkapkan bahwa protein silaffin Sil 1A mampu secara tunggal menghasilkan silika nanosphere berdiameter 500-700 nm, sedangkan hasil katalisis menggunakan protein silaffin Sil 2 menghasilkan silika nanosphere berdiamter kurang dari 50 nm.
Gambar 4 dan 5 memperlihatkan hasil Scanning Electron Microscope (SEM) perbedaan presipitasi silika nanosphere yang dihasilkan dari protein silaffin Sil 1A dan protein silaffin Sil 2 dari hasil isolasi C. fuciformis. Jumlah presipitasi silika tergantung dari yang ditambahkan. Sedangkan Poulsen et al. (2003) menjelaskan bahwa protein silaffin Sil 2 tidak berkontribusi dalam pembentukan silika tetapi diduga hanya memiliki peran regulasi aktivitas Sil 1A sehingga presipitasi silika yang dihasilkan memiliki struktur pori yang tidak beraturan.
Gambar 4 Hasil SEM presipitasi silika yang terbentuk dari protein sil 1A (A) dan (B) gabungan Sil 1A dan Sil 2 dari C.fuciformis
(Kröger et al. 1999)
Gambar 5 Hasil SEM presipitasi silika dengan pori tak beraturan menggunakan protein silaffin gabungan natSil 2 dan natSil 1A dari C. fuciformis (kiri ke kanan : rasio semakin kecil)
Reaksi in vitro menggunakan substrat TEOS dengan mengkombinasikan fraksi-fraksi dari protein silaffin T. pseudonana sebagai katalis menghasilkan berbagai struktur seperti silika spherical (diameter 230 nm); silika porous sheet (susunan pori tidak teratur dan bentuk yang tidak seragam, diamter 20-200 nm); silika plates of densely packed (partikel silika kecil dan besar); dan silika sphere
polydisperse(diameter dari 900 nm hingga 4,2 μm) (Poulsen et al. 2003). Struktur silika yang terbentuk tergantung jenis peptida silaffin yang menyusun dan keterlibatan long-chain polyamin (Poulsen & Kröger 2004). Hasil penelitian Manurung et al. (2007), memperlihatkan protein biosilika yag diisolasi dari diatom C. gracilis mampu mengkatalisa pembentukan silika sphere dalam waktu 10 menit menggunakan TEOS yang dihidrolisis dengan asam klorida sebagai substrat.
Menurut Poulsen et al. (2003), protein pada mekanisme biosintesis silika bertindak sebagai template dan asam monosilikat hasil hidrolisis TMOS (Tetramethoxyorthosilicate) bertindak sebagai prekursor. Berdasarkan mekanisme polimerisasi yang diajukan oleh Poulsen & Kroger (2004) dan Shimizu et al. (1999), katalis protein silicatein dan silaffin memiliki keistimewaan karena selain sebagai katalis juga menjadi tempat melekatnya silika yang terbentuk sebagai hasil polimerisasi atau bertindak sebagai template.
Silika dan Aplikasinya dalam Bidang Pangan
Menurut Singh (1979), sudah sejak lama silika sebagai fosil diatom di dasar laut yang disebut tanah diatomite mempunyai pori-pori yang ideal untuk filter oil dan sebagai clearing solvent, demikian juga untuk industri yang memerlukan filtration devices untuk industri minuman. Tanah diatom atau diatomite atau diatomaceous earth atau kieselguhr dieksplorasi sebagai bahan pembuatan pasta gigi, metal polishes dan sebagai absorben liquid nitroglycerins dalam pembuatan dinamit (Lee 1989). Oleh karena sifat yang tidak membahayakan bagi kesehatan terutama yang berbentuk amorf, mempunyai daya serap tinggi, berpori halus dan secara kimia stabil banyak dimanfaatkan di dalam industri pangan terutama banyak digunakan sebagai filtering agent yang banyak ditemui di industri minuman seperti beer dan wine.
Menurut Sumper & Kröger (2004) berdasarkan sifat struktur nanosilika pada dinding sel diatom ini dapat berfungsi sebagai filtrasi. Apabila dapat mengidentifikasi dan menyeleksi sifat dinding sel diatom, akan berpeluang membuat membran dari frustule dinding diatom dengan struktur yang pori-porinya sesuai dengan kebutuhan. Dalam bidang pangan, sistem filtrasi
merupakan aspek yang menentukan untuk produk yang tidak tahan panas. Sistem filtrasi yang digunakan biasanya menggunakan membran ultrafiltrasi.
Salah satu alat analitik untuk bidang pangan penting saat ini adalah biosensor, yakni suatu alat deteksi yang menggunakan agen biologi dan sensing. Biosensor membutuhkan suatu komponen yang dapat merespon sesuai ukuran molekul targetnya yang disebut biochip. Penggunaan struktur nanosilika akan meningkatkan respon sensornya karena bersifat highly refractive native (Tamiya et al. 2005). Silika yang bersifat fiber optic dalam biosensor merupakan transducer yang mengirimkan sinyal kimia ke sinyal elektrik untuk menghasilkan secara proposional konsentrasi yang menjadi target deteksi (Turner & Newman 1989). Bahan nanokomposit silika dan emas merupakan elemen pelapis pada tip nanosensor yang berbahan serat optik. Pelapis komposit silica-gold merupakan nanosensor devises yang penting untuk mengurangi pantulan cahaya (Dinh 2005).
Industri pengemasan makanan silika dimanfaatkan dalam pengembangan sensor dan elektronik pada lapisan transistor thin berbasis thin-film silico. Lapisan ini untuk melapisi material kemasan seperti kertas dan plastik, sehingga secara aktif menjaga kesegaran dan kondisi produk.
Asam Lemak dan Biosintesis Polyunsaturated Fatty Acid Diatom
Diatom merupakan salah satu kelas mikrolga yang berpotensi menghasikan asam lemak. Komposisi asam lemak diatom beragam dari rantai pendek hingga tantai panjang, dari asam lemak jenuh (saturated fatty acid) hingga rantai panjang dengan banyak ikatan rangkap atau polyunsaturated fatty acid. Telah diketahui, diatom dikenal menghasilkan PUFA EPA dan DHA yang tinggi. Dari berbagai penelitian yang telah dilakukan terhadap berbagai jenis diatom, menunjukkan konsentrasi rata-rata EPA adalah 0.6 hingga 40.7% dari total asam lemak dan DHA 0.1-6.6 % dari total asam lemak (Dunstan et al. 1994).
Kemampuannya menghasilkan asam lemak EPA dan DHA tinggi terkait selain diatom memiliki lipid sebagai cadangan makanan, mensintesis PUFA rantai panjang (long chain PUFA atau LC-PUFA) secara de novo. Kemampuan seperti
ini terkait dengan mekanisme sintesisnya yang secara genetis memiliki protein enzim yang mensintesis hingga PUFA DHA.
BiosintesisAsam Lemak
PUFA adalah asam lemak dengan jumlah atom C minimal 20 dan mempunyai ikatan rangkap lebih dari satu dalam bentuk cis (Gurr et al. 2002). Diatom merupakan organisme fotoautotrof yang menggunakan karbondioksida sebagai satu-satunya sumber karbon untuk membentuk molekul organik baik glukosa, protein, lipid dan lain-lain. Sintesis asam lemak diatom dan mikroalga lain secara umum mempunyai kesamaan dengan tumbuhan.
Pembentukan asam lemak tersebut mutlak menggunakan asetil KoA yang dihasilkan dari proses fotosintesis. Proses tersebut terjadi di dalam plastida, yakni suatu organel sel tumbuhan yang mengandung pigmen penangkap cahaya. Plastida diatom dengan pigmen karotenoid dominan menangkap cahaya untuk menghasilkan energi ATP & NADPH yang akan digunakan untuk mereduksi karbondioksida membentuk glukosa. Piruvat yang dihasilkan dalam proses akhir glikolisis pindah ke mitokondria untuk menghasilkan asetil KoA karena keberadaan piruvat dehidrogenase, kemudian diikuti secara spontan pembebasan asam asetat yang dikatalisis oleh enzim asetil KoA thioesterase. Asam asetat yang terbentuk keluar dari mitokondria dan dikatalisa oleh enzim asetil KoA sintetase bersama energi ATP membetuk asetil KoA. Asam asetat merupakan substrat pembentukan asetil KoA yang merupakan kunci pembentukan asam lemak (Yap & Chen 2001). Asam asetat sebagai substrat pembentuk asetil KoA di dalam diatom merupakan mekanisme yang mirip pembentukan asetil KoA pada tumbuhan dalam sintesis asam lemak. Namun diatom Cyclotella cryptica, menggunakan asam sitrat sebagai prekursor asetil KoA, karena ditemukan enzim sitrat sintase yang mengkatalisa terbentuknya asetil KoA (Roessler 1988).
Dalam proses fotosintesis, karbon dioksida difiksasi oleh enzim asetil KoA karboksilase menggunakan asetil KoA dan energi yang diperoleh (ATP dan NADPH) secara bertahap menghasilkan propionil-KoA dan butiril-KoA kemudian berlanjut menjadi malonil KoA melalui enzim karboksiltransferase (Moat & Foster 1995).
Dari malonil KoA selanjutnya terjadi rangkaian reaksi yang membentuk rantai panjang asam lemak C18 (asam stearat). Acyl Carrier Protein (ACP) bersama propionil KoA membentuk malonil-ACP yang dikatalisa oleh enzim transasilase malonil-KoA-ACP. Selanjutnya malonil-ACP dengan asetil ACP dikatalisa oleh β-ketoasil-ACP sintase menghasilkan diketobutiril-ACP, yang direduksi dengan penambahan NADPH dan ketoasil- ACP reduktase sehingga membentuk B-hidroksibutiril-ACP. Enzim β-hidroksiasil-ACP dehidrase kemudian mengkatalisa pembentukan butinil-ACP dari β-hidroksibutiril-ACP, selanjutnya dikatalisa oleh enoyl-ACP reduktase membentuk butanoil-ACP. Pada tahap ini selanjutnya pembentukan rantai panjang asam lemak dilakukan kembali bersama asetil-ACP dan β-ketoasil-ACP-sintase. Kompleks enzim untuk mengkatalisa penambahan dua atom C adalah enzim kompleks fatty acid synthase (Yap & Chen 2001). Kompleks enzim fatty acid synthase ini merupakan enzim yang berfungsi seperti lengan panjang yang memfiksasi substrat dan meneruskan dari pusat reaksi ke pusat reaksi lainnya.
Pada tumbuhan dan kelompok alga, rangkaian proses panjang yang dilakukan oleh enzim fatty acid synthase berlangsung berulang kali hingga diperoleh asam lemak stearat (18:0). Asam stearat menjadi awal pembentukan asam lemak tidak jenuh dengan satu ikatan rangkap atau monounsaturated fatty acid (MUFA). Pembentukan asam lemak tidak jenuh dan seterusnya dalam pembentukan asam lemak dengan rantai lebih panjang dan lebih tidak jenuh menggunakan proses desaturasi dan elongasi. Kedua proses tersebut melibatkan enzim desaturase dan elongase. Pembentukan asam oleat (18:1) merupakan proses desaturasi dari enzim desaturase Δ9 pada asam stearat (18:0). Asam oleat inilah selanjutnya menjadi prekursor pembentukan PUFA baik omega 9, 6 dan 3 (Yap & Chen 2001). PUFA dapat diklasifikasikan menjadi 4 golongan yaitu omega-3 (ω -3), omega-6 (ω-6), omega-7 (ω-7), dan omega-9 (ω-9). Omega-3 dan omega-6 merupakan golongan yang paling dominan pada mikroalga (Chen & Jiang 2000).
Biosintesis PUFA
MUFA diatom merupakan bagian dari proses panjang pembentukan PUFA yang diinisiasi melalui proses fotosintesis yang berlangsung di dalam plastida.
Dengan terbentuknya prekursor asam oleat, mekanisme pembentukan asam lemak tak jenuh rantai panjang (PUFA) selanjutnya dikatalisa oleh enzim kompleks desaturase dan elongase melalui proses desaturasi dan elongasi. Pada mikroalga proses desaturasi merupakan proses aerobik (Gurr et al. 2002). Desaturasi merupakan reaksi penambahan ikatan rangkap yang melibatkan enzim-enzim desaturase sedangkan elongasi merupakan reaksi penambahan atom C yang melibatkan enzim elongase (Lobb 1992). Organisme tingkat rendah misalnya alga, mempunyai kemampuan mendesaturasi rantai asam lemak seperti organisme tingkat tinggi dan p
Asam oleat (18:1Δ9) didesaturasi oleh enzim desaturase Δ12 membentuk asam linoleat (LA, 18:2Δ9,12) dilanjutkan oleh enzim desaturase Δ15 membentuk asam α-linolenat (ALA, 18:Δ9,12,15). LA merupakan prekursor keluarga PUFA omega 6 rantai lebih panjang, sedangkan ALA merupakan prekursor keluarga PUFA omega 3 rantai lebih panjang dan PUFA lebih panjang akan diproduksi oleh serangkaian aktivitas desaturasi dan elongasi dari prekursor-prekursornya (Yap & Chen 2001).
roses desaturasi dan elongasinya memiliki aktivitas yang berurutan untuk mensintesis berbagai jenis PUFA (Yap & Chen 2001). Gambar 6 memperlihatkan jalur sintesis PUFA pada umumnya mikroalga.
Kemampuan yang dimiliki mikroalga tersebut dikarenakan keberadaan sejumlah enzim yang berperan dalam proses desaturasi dan elongasi (Yap & Chen (2001), namun jalur metabolisme sintesisnya belum jelas diketahui seperti pada tanaman atau hewan (Domergue et al. 2002). Arao dan Yamada (1994) melaporkan ada 7 hipotesis biosintesis EPA diatom Phaeodactylum tricornutum, yang diawali dengan substrat asam oleat (18:1Δ9, ω9) dengan metode analisis menggunakan penelusuran radiolabeling pada asam acetat([1-14C] asam acetat) untuk melihat asam lemak yang disintesis selama pertumbuhannya (Gambar 7). Begitu juga dengan Khozin et al. (1997) melaporkan ada 4 jalur hipotesis biosintesis EPA pada Porpyridium cruentum, dengan metode labeling ([1-14
Domergue et al. (2002), juga menggambarkan kemungkinan jalur sintesis EPA diatom P. tricornutum berdasarkan enzim yang ditemukan, seperti yang terlihat pada Gambar 8. Jalur biosintesis yang terdapat pada diatom tersebut
C] asam linoleat.
masih merupakan hipotesis yang melibatkan enzim elongase Δ9 dan desaturase
Δ8 untuk membuat jalur sintesis EPA melalui omega 3 asam eikosatrienoat (20:3Δ11,14,17) seperti yang digambarkan dengan anah panah putus-putus pada Gambar 8.
Gambar 6 Biosintesis keluarga PUFA omega 9,6 dan 3 dari mikroalga (Yap & Chen 2001)
desaturase Δ12 desaturase Δ15 desaturaseΔ17 Keluarga omega 3 Keluarga omega 6 Keluarga omega 9 Asam stearat 18;0 desaturase Δ9 Asam oleat 18:1Δ9 Desaturasi desaturase Δ6 Asam oktadekadienoat 18:2∆ 6,9 Elongasi + C2 Eicosadienoic acid 20:2Δ8,11 Desaturasi desaturase Δ5 Asam eikosatrienoat 20:3Δ5,8,11 Asam linoleat 18:2Δ9,12 Asam γ-linolenat 18:3Δ6,9,12
Asam Dihomo-γ-Linolenat 20:3Δ8,11,14 Asam arakidonat 20:4Δ5,8,11,14 desaturase Δ5 Asam aurenat 22:4Δ7,10,13,16 Elongasi + C2 Desaturasi Asam Dokosapentaenoat 22:5Δ4,7,10,13,16 desaturase Δ6 desaturase Δ4 Asam α-linolenat 18:3Δ9,12,15 Asam oktadekatetraenoat 18:4Δ6,9,12,15 Asam eikosatetraenoat 20:4Δ8,11,14,17 Asam eikosapentaenoat 20:5Δ5,8,11,14,17 desaturase Δ5 Asam dokosapentaenoat 22:5Δ4,7,10,13,16,19 Asam Dokosaheksaenoat 22:6Δ4,7,10,13,16,19 desaturase Δ6
Jalur I : 18:1 (ω-9) 18:2 (ω-6) 18:3 (ω-3) 20:5 (ω-3) Jalur II : 20:3 (ω-6) 20:4 (ω-6)20:5 (ω-3) Jalur III: 18:1 (ω-9) 18:2 (ω-6) 18:3 (ω-3) 18:4 (ω-3) 20:4 (ω-3) 20:5 (ω-3) Jalur IV: 18:1 (n-9) 18:2 (n-6) 18:3 (n-3) 18:4 (n-3) 20:4 (n-3) 20:5 (n-3) 18:3 (n-6) Jalur V: 18:1 (n-9) 18:2 (n-6) 18:3 (n-3) 18:4 (n-3) 20:4 (n-3) 20:5 (n-3) 18:3 (n-6) 20:3 (n-6) 20:4 (n-6) Jalur VI: 20:3 (n-3) 18:1 (n-9) 18:2 (n-6) 18:3 (n-3) 18:4 (n-3) 20:4 (n-3) 20:5 (n-3) 18:3 (n-6) 20:3 (n-6) 20:4 (n-6) Jalur VII: 18:1(n-9) 18:2 (n-6) 20:1(n-9) 20:2 (n-6) 20:3 (n-6) 20:4 (n-3) 20:5 (n-3)
Gambar 7 Hipotesis biosintesis EPA P. tricornutum (Arao & Yamada (1994)
Gambar 8 Hipotesis biosintesis EPA diatom P. tricornutum. Tanda anak panah putus-putus menunjukkan jalur yang tidak biasa ditemui pada diatom (Domergue et al. 2002). 18:3Δ9,12,15 desaturase ω3 20:3Δ8,11,14 20:3Δ11,14,17 20:4Δ8,11,14,17 20:5Δ5,8,11,14,17 desaturase Δ8 desaturase Δ5 elongase Δ6 elongase Δ9 18:4Δ6,9,12,15 20:4Δ5,8,11,14 desaturase ω3 desaturase Δ5 elongase Δ6 18:3Δ6,9,12 desaturase Δ6 18:0 18:1Δ9 18:2Δ9,12 desaturase Δ9 desaturase Δ12 desaturase ω3
Tahap-tahap penelitian dan hasil yang diharapkan dalam peneltian ini secara garis besar dapat dilihat pada Gambar 9. Penelitian dilakukan dalam 3 tahap yang meliputi tahap pertama analisis protein dan lipid Chaetoceros gracilis selama pertumbuhan, tahap kedua identifikasi asam lemak selama pertumbuhan C. gracilis dan tahap yang terakhir adalah analisis 2 dimensi protein dan studi bioinformatika.
Gambar 9 Skema garis besar penelitian
Tempat Pelaksanaan Penelitian
Penelitian dilakukan dalam beberapa tahap. Kultur diatom diawali di laboratorium Marikultur, Pusat Penelitian dan Pengkajian Oseanografi-Lembaga Ilmu Pengetahuan Indonesia-Jakarta. Preparasi protein dilakukan di laboratorium Mikrobiologi dan Biokimia dan juga di laboratorium Bioteknologi Hewan dan Biomedis pada Pusat Penelitian Sumberdaya Hayati dan Bioteknologi IPB. Ekstraksi lipid dan analisis komposisi asam lemak di laksanakan di laboratorium Kimia Pangan Seafast Center IPB dan laboratorium Kimia Lembaga Ilmu
TAHAP I
Analisis protein dan lipid selama pertumbuhan
C. gracilis
Pola protein dan lipid selama pertumbuhan C. gracilis
TAHAP II