BAB 5 KESIMPULAN DAN SARAN
5.2 Saran
Perlu dilakukan penelitian lebih lanjut tentang isolasi senyawa-senyawa yang memiliki aktivitas antioksidan dari kulit batang kayu jawa. Selain itu, perlu dilakukan juga penelitian lebih lanjut tentang toksisitas kronik dan aktivitas antikanker dari kulit batang kayu jawa (Lannea coromandelica).
DAFTAR PUSTAKA
Alam Badrul, Hossain Sarowar, Habib Razibul, Rea Julia, dan Islam Anwarul. 2012. Antioxidant and Analgesic Activities of Lannea coromandelica Linn. Bark Extract. International Journal of Pharmacology 8 (4): 224-233. ISSN 1811-7775. Bangladesh
Asni, A & Dewi, Y. 2010. Etnofarmakologi Tumbuhan Obat Pada Etnis Bugis Untuk Pengobatan Gangguan Saluran Cerna Dan Identifikasi Farmakognostiknya. Prosiding Seminar Nasional “Eight Star Performance Pharmacist”. Yogyakarta.
Anderson, J.E. 1991. A Blind Comparison Of Simple Bench Top Bioassay And Human Tumor Cell Cytotoxities As Antitumor Prescreens Natural Product Chemistry. Phytochemical Analysis 2: 107-111.
Arora, A., M.G. Nair, and G.M. Strasburg. 1998. Structure – activity relationships for antioxidant activities of a series of flavonoids in a liposomal system. Free Radic. Biol.& Med. 24(9): 1355-1363
Badan POM RI. Acuan Sediaan Herbal. 2010.
Beck, W.T., Mo, Y.Y., dan Bhat, U.G., 2001, Cytotoxic signalling by inhibitor of DNA topoisomerase II. Biochemical Society,29(6), 702–70
Bimakr Mandana, et al. 2011. Comparison of Different Extraction Methods for the Extraction of Major Bioactive flavonoid Compounds from Spearmint (Mentha spicata L.) leaves. Food and Bioproducts Processing 89 : 67-72 Elsevier Journal.
Dachriyanus. 2004.Analisis Struktur Senyawa Organik Secara Spektrofotometri. Padang. CV. Trianda Anugrah Pratama.
Daintith, John. 1994. A Concise Dictionary of Chemistry Oxford. Oxford University Press.
Day R.A.&Underwood. 1980. Analisa Kimia Kuantitatif. Erlangga, Jakarta. Depkes RI. 1995. Materia Medika Indonesia Jilid VI. Jakarta.
Depkes RI. 1995. Farmakope Indonesia Jilid IV. Jakarta.
Direktorat Jenderal Pengawasan Obat dan Makanan. 2000. Parameter Standar Umum Ekstrak Tumbuhan Obat. Departemen Kesehatan Republik Indonesia. Jakarta.
E. Kubicka, L Jçdrychowski and R. Amarowicz. 1999. Effect of Phenolic Compounds Extracted From Sunflower Seeds on Native Lipoxygenase Activity.
Farnworth, N. R. 1966. Biological and Phytochemical Screening of Plants. Journal of Pharmaceutical Sciences.
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
Finney, D.J. 1971. Probit Analysis, 3rd edition. Cambridge University Press, Cambridge, UK. ISBN 0-521-08041-X.
Gandjar &Rohman. 2007. Kimia Farmasi Analisis. Pustaka Pelajar. Yogyakarta Gritter Roy J., James M. Bobbit, Arthur E. S., 1991. Pengantar Kromatografi.
Penerbit ITB. Bandung.
Harborne, J.B. 1987.Metode Fitokimia: Penuntun Cara modern Menganalisis Tumbuhan.Penerjemah: Kosasih P, Soediro Iwang. Bandung. Penerbit ITB. Hal: 6-17.
Hernani & M. Raharjo. 2005. Tanaman Berkhaisat Antioksidan. Jakarta. Penerbit Swadaya.
Hiroe Kikuzaki, Masashi Hisamoto, Kanae Hirose,Kayo Akiyama& Hisaji Taniguchi. 2002. Antioxidant Properties of Ferulic Acid and Its Related Compounds. Journal of Agric. Food Chem.
Isnindar, Wahyuono, S., & Setyowati, E. P. 2011. Isolasi dan Identifikasi Senyawa Antioksidan Daun Kesemek (Diospyros kaki Thunb.) dengan Metode DPPH (2,2-Difenil-1-pikrihidrazil). Majalah Obat Tradisional. 16(3), 157-164.
Ivanišová,et al. 2013. Antioxidant Activity of Selected Plant Products. Journal of Microbiology, Biotechnology, and Food Sciences.
Joseph Stalin D, D. Thomas Babu, S. Senthil Kumar. 2013. A Study on the Antioxidant and Free Radical Scavenging Property of Lannea coromandelica Bark Extract. International Journal Of Universal Pharmacy And Life Sciences.
Kuncahyo, I. & Sunardi. 2007. Uji Aktivitas Antioksidan Ekstrak Belimbing Wuluh (Averrhoa bilimbi, L.) terhadap 1,1-diphenyl-2-Picrylhidrazil (DPPH). Seminar Nasional Teknologi. ISSN: 1978-9777.
Kuntorini,E. M. & Astuti, M. D. 2010. Penentuan Aktivitas Antioksidan Ekstrak Etanol Bulbus Bawang Dayak (Eleutherine Americana Merr.). Jurnal Sains dan Terapan Kimia.
Langseth Lilian. 1995. Oxidants, Antioxidants, and Diseaseprevention.
Mandal, P. & Ghasal, M.. 2012. Phytochemical Screening and Antioxidant Activities of Two Selected ‘Bihi’ Fruits Used as Vegetables in Darjeeling Himalaya. International Journal of Pharmacy and Pharmaceutical Sciences. ISSN: 0975-1491.
Manik, M.A. Wahid, S.M.A. Islam, A. Pal, K.T. Ahmed. 2013. A Comparative Study of the Antioxidant, Antimicrobial and Thrombolytic Activity of the Bark and Leaves of lannea coromandelica (Anacardiaceae). International
Journal of Pharmaceutical Sciences and Research. Vol. 4(7): 2609-2614. E-ISSN: 0975-8232; P-ISSN: 2320-5148.
Maulida, Dewi & Naufal, Zulkarnaen. 2010. Ekstraksi Antioksidan (Likopen) dari Buah Tomat dengan Menggunakan Sovent Campuran, n-Heksana, Aseton dan Etanol. Universitas Diponegoro. Semarang
Meyer B. N., et al. 1982. Brine Shrimp: A Convenient General Bioassay For Active Plant Constituents. Journal of Medical Plant Research Vol. 45. Molyneux, P. 2004. The Use of the Stable Free Radical Diphenylpicryl Hydrazyl
(DPPH) for Estimating Antioxidant Activity. SongklanakarinJournal Science and Technology.
Musfiroh & Syarief. 2012. Uji Aktivitas Peredaman Radikal Bebas Nanopartikel Emas dengan Berbagai Konsentrasi sebagai Material Antiaging dalam Kosmetik. UNESA Journal of Chemistry Vol. 1 (2).
Nurjanah, Izzati, Abdullah. 2011. Aktivitas Antioksidan dan Komponen Bioaktif Kerang Pisau (Solen sp.). Jurnal Ilmu Kelautan Vol 16 (3): 119-124. ISSN 0853-7291.
Prakash, A. 2011. Antioxidant activity. Medallion Laboratories: Analytical Progress Vol 19 (2).
Prasad, MR. Rajendra & Mani, T. Tamiz. 2014. Phytochemical Evaluation and Biological Studies on the Bark of odina wodier roxb. International Journal Of Pharmaceutical And Chemical Sciences. India.
Rahayu, Sunarti , S. Diah, P. Suhardjono. 2006. Pemanfaatan Tumbuhan Obat secara Tradisional oleh Masyarakat Lokal di Pulau Wawonii, Sulawesi Tenggara. Jurnal Biodiversitas Vol. 7 (3).
Rao V. Srinivasa, Einstein John Wilkin, Das Kuntal. 2014. Hepatoprotective and Antioxidant Activity of Lannea coromandelica Linn. on Thioacetamide Induced Hepatotoxicity in Rats. International Letters of Natural Sciences. Ren, W., Qiao, Z., Wang, H., Zhu, L., Zhang, L., 2003. Flavonoids: Promising
Anticancer Agents. Medicinal Research Reviews,23 (4), 519–534
Sahidi F., and P.K.J. Warnasundara. 1997. Phenolic antioxidant. Crit Rev J. Food Sci. Nutrition.
Saifudin, Rahayu, & Teruna. 2011. Standarisasi Bahan Obat Alam. Graha Ilmu: Yogyakarta.
Saija, A., et al. 1995. Flavonoids as antioxidant agents : importance of their interaction with biomembranes. Free Radic. Biol. & Med. 19(4): 481-486. Sastrohamidjojo. 2005. Kimia Organik; Stereokimia, Karbohidrat, Lemak. dan
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
Scherer R, Godoy HT.2009. Antioxidant activity index (AAI) by the 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl method. Food Chemistry:112(3): 654-658.
Scheuer, J. S. 1994. Produk Alami Lautan. IKIP Semarang Press: Semarang. Shetti, Neelu & Pati, Renuka. 2011. Antioxidants: Its Beneficial Role Against
Health Damaging Free Radical. World Journal of Science and Technology.
Sumardika & Jawi. 2012. Water Extract of Sweet Potato Leaf Improved Lipid Profile and Blood SOD Cntent of Rats with High Cholesterol Diet.
Medicina vol. 43:2.
Sunardi. 2005. Uji Mutu Teh Hijau Perdagangan. Jurnal Kimia dan Teknologi. ISSN 0216-163.
Tiwari, Kumar, Kaur Mandeep, Kaur Gurpreet & Kaur Harleem. 2011.
Phytochemical Screening and Extraction: A Review. Internationale Pharmaceutica Sciencia vol. 1: issue 1.
Tofazzal, I. Toshiaki, S. Mitsuyoshi, T. Satoshi. 2002. Zoosporicidal Activity of Polyflavonoid Tannin Identified in Lannea coromandelicaStem Bark against Phytopathogenic Oomycete Aphanomyces cochlioides. Journal of Agricultural and Food Chemistry.
Vasic, S. M., Stefanovic, O. D., Licina, B. Z., Radojevic, I. D., & Comic, L. R. 2012. Biological Activities of Extracts from Cultivated Granadilla passifloraalata. EXCLI Journal. ISSN: 1611-2156.
Venkata s. S. N. Kantamreddi, Y. Nagendra Lakshmi and V. V. V. Satyanarayana Kasapu. 2010. Preliminary Phytochemical Analysis of Some Important Indian Plant Species. International Journal of Pharma and Bio Sciences. Vimala S., Ilham, Adenan Mohd., Rashih, Ahmad Abdull., Rohana, Shahdan.
2003. Nature’s choice to wellnessμ Antioxidant Vegetables/ Ulam. Forest
Reserach Institut Malaysia.
W.M. Koné, D Soro, B. Dro, K. Yao, K. Kamanz. 2011. Chemical Composition, Antioxidant, Antimicrobial And Acetylcholinesterase Inhibitory Properties of Lannea Barteri (Anacardiaceae). Australian Journal of Basic and Applied Sciences, 5(10): 1516-1523.
Wahid Arif. In Vitro Phytochemical and Biological Investigation of Plant Lannea coromandelica(Family: Anacardiaceae). Thesis to Department of Pharmacy, East West University. Bangladesh.
Winarsi, Hery. 2007. Antioksidan Alami dan Radikal Bebas. Yogyakarta: Kanisius. Deresan.
http://indiabiodiversity.org/species/show/230190 (diakses pada tanggal 21 Maret pukul 08.26 WIB).
Lampiran 1. Alur Kerja Penelitian
Ekstrak kental Ekstrak air
Uji Antioksidan secara kualitatif menggunakan metode KLT
Uji Toksisitas menggunakan metode BSLT
Skrining Fitokimia
Uji Antioksidan secara kuantitatif menggunakan metode DPPH 344 gram dimaserasi dengan
menggunakan etanol 70%
5 gram didekokta 5% dengan menggunakan air Diuapkan
Serbuk Simplisia 688 gram
Sortasi basah, dicuci, dikering anginkan, sortasi kering, dihaluskan
Determinasi Tanaman
Penyiapan Simplisia 1,5 kg kulit batang tanaman kayu
jawa (Lannea coromandelica) Tanaman kayu jawa (Lannea
coromandelica) segar
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta Lampiran 2. Hasil Determinasi Lannea coromandelica
No. Golongan Senyawa Gambar Keterangan (Hasil Uji) 1. Alkaloid (Dragendorf) (Mayer) -Tidak terbentuk endapan kuning (Mayer) -Hasil (-) alkaloid -Tidak terbentuk endapan merah (Dragendorf) -Hasil (-) alkaloid 2. Flavonoid -Perubahan intensitas warna kuning menjadi tidak berwarna -Hasil (+) flavonoid 3, Saponin -Tebentuk busa
setinggi 1 cm yang stabil -Hasil (+)saponin 4. Glikosida -Terbentuk larutan
berwarna kuning -Hasil (+)
glikosida
5. Triterpenoid -Tidak terbentuk warna kuning emas
-Hasil (-) triterpenoid 6. Fenol -Terbentuk warna
hitam kebiruan -Hasil (+) fenol
7. Tanin
(Setelah) (Sebelum) Penambahan larutan FeCl3
0,1 %
-Terbentuk biru kehitaman -Hasil (+) tanin
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta Lampiran 4. Penapisan Fitokimia Ekstrak Etanol 70%
No. Golongan Senyawa Gambar Keterangan (Hasil Uji) 1. Alkaloid (Dragendorf) (Mayer) -Tidak terbentuk endapan kuning (Mayer) -Hasil (-) alkaloid -Tidak terbentuk endapan merah (Dragendorf) -Hasil (-) alkaloid 2. Flavonoid -Perubahan intensitas warna kuning menjadi tidak berwarna -Hasil (+) flavonoid 3, Saponin -Tebentuk busa
setinggi 1 cm yang stabil -Hasil (+)saponin 4. Glikosida -Terbentuk larutan
berwarna kuning -Hasil (+)
glikosida
5. Triterpenoid -Terbentuk warna kuning emas -Hasil (-) triterpenoid 6. Fenol -Terbentuk warna
hitam kebiruan -Hasil (+) fenol
7. Tanin
(Sebelum) (Setelah) Penambahan larutan FeCl3
0,1 %
-Terbentuk biru kehitaman -Hasil (+) tanin
Lampiran 5. Perhitungan Rendemen Ekstrak Etanol 70%
Lampiran 6. Perhitungan Residu Pelarut Etanol pada Ekstrak Etanol 70%
Penimbangan 1 2 3
Bobot piknometer + ekstrak (gram) 40,962 41,108 40,991 Bobot piknometer kosong (gram) 15,922
Bobot piknometer + aquades (gram) 40,839
Bobot Jenis 1,0049 1,0107 1,0061
Bobot Jenis Rata-rata 1,0072
Bobot jenis yang diperoleh disetarakan dengan kadar etanol pada tabel bobot jenis dan kadar etanol pada Farmakope Indonesia edisi III, sehingga diperoleh kesetaraan sama dengan 0%.
Lampiran 7. Perhitungan Kadar Abu Total Ekstrak Etanol 70%
% Kadar abu = Bobot abu akhir – Bobot krus tanpa tutup x 100% Bobot ekstrak
Penimbangan 1 2 3
Bobot krus tanpa tutup (gram) 24,894 25,618 29,774 Bobot ekstrak (gram) 2,061 2,032 2,070 Bobot abu akhir (gram) 25,188 25,913 30,079
Persen Kadar Abu Total (%) 14,265 14,517 14,734
Persen Kadar Abu Total
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
E. Etanol E. Air
E. Etanol E. Air E. Etanol E. Air
E. Etanol E. Air
Lampiran 8. Hasil KLT Uji Aktivitas Antioksidan Secara Kualitatif
Eluen etanol, etil asetat, dan kloroform dengan perbandingan 2:1:1
Setelah disemprot dengan DPPH
Setelah disemprot dengan DPPH
Recolor dengan saturasi 0%
Lampiran 9. Perhitungan dalam Uji Antioksidan
1. Pembuatan larutan DPPH (0,1 mM)
- Banyaknya DPPH yang ditimbang :
X = 1,98 mg
- Jadi, ditimbang 1,98 mg DPPH dan dilarutkan dengan metanol p.a serta dicukupkan volumenya hingga 50 mL.
2. Pembuatan larutan induk ekstrak etanol 70% 1000 ppm
- Konsentrasi 1 ppm setara dengan 1 µg/mL, sehingga untuk membuat konsentrasi 1000 ppm dapat dilakukan dengan menimbang 50 mg ekstrak dan dicukupkan dengan metanol p.a hingga 50 mL.
3. Contoh perhitungan pembuatan larutan uji dan kontrol positif
- Pembuatan larutan uji ekstrak etanol 70% konsentrasi 20 ppm dari larutan induk 1000 ppm menggunakan labu ukur 10 mL
N1 x V1 = N2 x V2
10000 ppm x V1 = 20 ppm x 10 mL
V1 = 0,2 mL atau 200 µ L (jumlah yang dipipet dari larutan induk), kemudian dicukupkan dengan metanol p.a hingga 10 mL pada labu ukur.
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
- Pembuatan larutan uji ekstrak air konsentrasi 0,15% dari larutan induk 5% menggunakan labu ukur 10 mL
N1 x V1 = N2 x V2
5% x V1 = 0,15% x 10 mL
V1 = 0,3 mL atau 300 µ L (jumlah yang dipipet dari larutan induk) Kemudian dicukupkan dengan metanol p.a hingga 10 mL pada labu ukur.
4. Perhitungan % inhibisi
- Contoh perhitungan % inhibisi pada absorbansi rata-rata konsentrasi 0,05% ekstrak air sebesar 0,2913 dengan absorbansi blangko (DPPH) sebesar 0,523.
5. Perhitungan IC50
- Contoh perhitungan IC50 pada ekstrak etanol 70%
Sebelumnya, konsentrasi (x) dan % inhibisi (y) dari ekstrak etanol 70% dibuat persamaan regresi linearnya menggunakan aplikasi pengolah data microsoft excel 2010 hingga diperoleh persamaan y = 2,3797x + 33,075. Dari persamaan ini dihitunglah nilai IC50 nya.
y = 2,3797x + 33,075 50 = 2,3797x + 33,075 x = 7,1122 ppm
6. Perhitungan nilai AAI (Antioxidant Activity Index) - Contoh perhitungan nilai AAI dari kontrol positif vitamin C
Konsentrasi DPPH yang digunakan adalah 1,98 mg/50 mL = 39,6 ppm serta nilai
IC50 vitamin C yang diperoleh sebesar .
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta Lampiran 10. Perhitungan dalam Uji Toksisitas BSLT
1. Perhitungan pembuatan larutan uji
- Contoh pembuatan larutan uji ekstrak etanol 70% konsentrasi 100 ppm dari larutan induk 1000 ppm menggunakan tabung reaksi 10 mL
N1 x V1 = N2 x V2
1000 ppm x V1 = 100 ppm x 10 mL
V1 = 1 mL atau 1000 µ L (jumlah yang dipipet dari larutan induk), kemudian dicukupkan dengan aquades hingga 10 mL (telah ditakar sebelumnya) pada tabung reaksi yang telah berisi 10 ekor larva Artemia salina.
- Contoh pembuatan larutan uji ekstrak air konsentrasi 1% dari larutan induk 5% menggunakan tabung reaksi 10 mL
N1 x V1 = N2 x V2
5% x V1 = 1% x 10 mL
V1 = 2 mL atau 2000 µ L (jumlah yang dipipet dari larutan induk), kemudian dicukupkan dengan aquades hingga 10 mL (telah ditakar sebelumnya) pada tabung reaksi yang telah berisi 10 ekor larva Artemia salina.
2. Perhitungan % kematian larva
- Contoh perhitungan % kematian larva pada ekstrak etanol 70% konsentrasi 10 ppm dimana diperoleh larva yang mati setelah 24 jam sebanyak 7 ekor dari jumlah larva uji sebanyak 30 ekor.
3. Pencarian nilai probit pada tabel probit
- Contoh pencarian nilai probit dari % kematian larva 23,3% pada tabel probit.
4. Perhitungan nilai LC50
- Contoh perhitungan LC50 pada ekstrak etanol 70%
Sebelumnya, log konsentrasi (x) dan probit (y) dari ekstrak etanol 70% dibuat persamaan regresi linearnya menggunakan aplikasi pengolah data microsoft excel 2010 hingga diperoleh persamaan y = 1,0707x + 3,5266. Dari persamaan ini dihitunglah nilai LC50 nya.
y = 1,0707x + 3,5266 5 = 1,0707x + 3,5266 x = 1,3761
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta Lampiran 11. Panjang Gelombang Maksimum DPPH
Lampiran 12. Skema Uji Aktivitas Antioksidan Ekstrak Etanol 70% menggunakan Metode DPPH
Larutan induk ekstrak etanol 70% (1000 ppm) (50 mg ekstrak ad metanol p.a hingga 50 mL)
Masing-masing ditambahkan 2 mL DPPH 0,1 mM Vorteks dan inkubasi 30 menit (tempat gelap)
Absorbansi
Ukur absorbansi pada panjang gelombang 515,5 nm
25 ppm 200 µ L Ad metanol p.a hingga 10 mL 250 µ L Ad metanol p.a hingga 10 mL 100 µ L Ad metanol p.a hingga 10 mL 150 µ L Ad metanol p.a hingga 10 mL 20 ppm 15 ppm 10 ppm % Inhibisi