Saran - KESIMPULAN DAN SARAN - ISOLASI FUNGI ENDOFIT DAUN TALAS (Xanthosoma sagittifolium [L] S

KESIMPULAN DAN SARAN

V.2 Saran

BAB V

Jose P, Edeltrudes OL. 2016. In vitro anti-Candida activity and mechanism of action of the flavonoid isolated from Praxelis clematidea against Candida albicans species. Journal of Applied Pharmaceutical Science. Vol. 6. (01). p. 066-069.

Abramowicz, M. 2005. Handbook of Antimicrobial Therapy. 17^th ed. The Medical Letter Inc. New York. pp. 117. Available as PDF file.

Anggarwulan E, Solichatun, Widya M. 2008. Karakter Fisiologi Kimpul (Xanthosoma sagittifolium (L.) Schott) pada Variasi Naungan dan Ketersediaan Air. Biodiversitas. Vol 9. (4). Hal. 265-268

Apsari, A.S., Adiguna, M.S. 2013. Resistensi Antijamur dan Strategi Untuk Mengatasi. MDVI. 40. (2): hal. 90-91

Balouiri, M., Sadiki, M., Ibnsouda, S.K. 2016. Methods for in vitro evaluating antimicrobial activity: A review. J Pharm Anal. 6(2):74.

Brunton, L., Parker, K., Blumenthal, D., Buxton, L. 2008. Goodman &

Gilmans Manual of Pharmacology and Therapeutics. 17^th ed. The McGraw-Hill Companies Inc. New York. pp. 811. Available as PDF file.

CABI Datasheets. 2018. Xanthosoma sagittifolium [L] Schott. Taxonomic Serial No.: 56989. www.cabi.org. Akses 27/03/2018).

Darmadi. 2008. Infeksi Nosokomial: Problematika Dan Pengendaliannya.

Penerbit Salemba Medika. Jakarta. hal. 5

Davis, W.W. and T.R Stout. 1971. Disc plate methods of microbiological antibiotic assay. J. Microbiology. (4): 659-665.

Depkes RI. 2013. Riset Kesehatan Dasar. Badan Penelitian dan Pengembangan Kesehatan Kementrian Kesehatan RI. Jakarta Ditjen POM Depkes RI. 1995. Farmakope Indonesia Edisi IV. Departemen

Kesehatan Republik Indonesia. Jakarta.

Franklin, T.J., Snow, G.A. 2005. Biochemistry and Molecular Biology of Antimicrobial Drug Action. 6^th ed. Springer. England. p. 41-44.

Available as PDF file.

Freisleben SH, Anna KJ. 2014. Correlation between Plant Secondary Metabolites and Their Antifungal Mechanisms–A Review. Med Aromat Plants. 3. (2): p. 1-6

Graham-Brown R, Tony B. 2002. Dermatologi. Ed. 8. Terjemahan oleh Anies Zakaria. 2005. Jakarta: Erlangga. hal. 38-40

Handajani NS, Marti H, Zulfikar I, Zurida D, Fadlila U, Tetri W. 2015. Uji Potensi Umbi Kimpul (Xanthosoma sagittifolium) sebagai Bahan Pangan Fungsional Anti Hiperglikemik dan Anti Hiperkolesterolemia. Bioteknologi. Vol. 12(2). hal. 53-57.

Harmita, dan Radji, M. 2008. Buku Ajar Analisis Hayati. Edisi ketiga.

Penerbit Buku Kedokteran EGC. Jakarta. hal. 2.

Hidayat, N., Wignyanto, Sumarsih, S., Putri, A.I. 2016. Mikologi Industri.

UB Press. Malang. hal. 5-9. Available as PDF file.

ITIS Report. 2010. Xanthosoma sagittifolium [L] Schott. Taxonomic Serial No.: 42586. (www.itis.gov. Akses 27/03/2018).

ITIS Report. 2018. Candida albicans. Taxonomic Serial No.: 194598.

(www.itis.gov. Akses 27/03/2018).

Jatmiko GP, Teti E. 2014. Mie Dari Umbi Kimpul (Xanthosoma Sagittifolium): Kajian Pustaka. Jurnal Pangan dan Agroindustri. Vol.

2(2): hal. 128-133

Komariah, Sjam, R. 2012. Kolonisasi Candida dalam Rongga Mulut.

Majalah Kedokteran FK UKI. 28. (1): hal. 41-42

Langeland KA; Cherry HM; McCormick CM; Craddock Burks KA, 2008.

Identification and Biology of Non-native Plants in Florida's Natural Areas. Gainesville, Florida, USA: University of Florida IFAS Extension. Available as PDF file.

Leba, M.A.U. 2017. Ekstraksi dan Real Kromatografi. Ed.1. Deepublish.

Yogyakarta. hal. 1-9. Available as PDF file.

Li L, Sun J, Xia S, Tian X, Cheserek MJ, Le G. 2016. Mechanism of Antifungal Activity of Antimicrobial Peptide APP, A Cell-Penetrating Peptide Derivative, Against Candida albicans: Intracellular DNA Binding and Cell Cycle Arrest. Appl Microbiol Biotechnol. 100. (7):

p. 3245-3253

Mariska, Ika. 2013. Metabolit Sekunder: Jalur pembentukan dan kegunaannya. (Online). (http://biogen.litbang.deptan.go.id, diakses 30 Maret 2018)

Marlinda L, Ety A. 2016. Otomikosis Auris Dekstra pada Perenang. J Medula Unila. 6. (1): hal. 68-69

Marzuki, Asnah. 2015. Kimia Analisis Farmasi. Makassar: Dua satu press.

hal.189-201

Minantyorini, Ida, H.S. 2002. Panduan Karakterisasi dan Evaluasi Plasma Nutfah Talas. Departemen Penelitian Badan Penelitian dan Pengembangan Pertanian. Bogor. hal. 55-56. Available as PDF file.

Munaf S, Chaidir J. 1994. Farmakologi: Obat Antimikroba. EGC. Jakarta.

hal. 324. Available as PDF file.

Mutiawati, V.K. 2016. Mikrobiologi pada Candida albicans. Jurnal Kedokteran Syekh Kuala. 16. (1): hal. 53-54

O'Neill J. 2014. Antimicrobial Resistance : Tackling A Crisis for The Health and Wealth of Nations. The Review on Antimicrobial Resistence. 6.

Pratiwi, S.T., 2008. Mikrobiologi Farmasi. Jakarta. Erlangga. hal. 164-190.

Available as PDF file.

Perea S, Patterson TF. 2002. Antifungal Resistance in Pathogenic Fungi.

Clin Infect Dis. 35. (9): pp. 1073.

Radji, M. Desember 2005. Peranan bioteknologi dan mikroba endofit dalam pengembangan obat herbal. Majalah Ilmu Kefarmasian.vol (2)3: Hal. 113-126.

Rubiyanto, Dwiarso. 2016. Teknik Dasar Kromatografi. Deepublish Ed. 1.

Cet. 2. Yogyakarta. hal. 31-41

Saifudin, Azis. 2014. Senyawa Alam Metabolit Sekunder Teori, Konsep dan Teknik Pemurnian. Deepublish. Ed.1. Cet. 1. Yogyakarta. hal.

3-4. Available as PDF file.

Sastrahidayat, I.R. 2014. Peranan Mikroba Bagi Kesehatan Tanaman dan Kelestarian Lingkungan. Universitas Brawijaya Press. Malang. hal.

50-51. Available as PDF file.

Schmourlo G, Ricardo R, Celuta SA, Sonia SC. 2005. Screening of Antifungal Agents Using Ethanol Precipitation and Bioautography of Medicinal and Food Plants. Journal of Ethnopharmacology. 96. (3).

p. 563-568.

Siregar, RS. 2004. Penyakit Jamur Kulit. Ed.2. Jakarta: EGC. hal. 47-50.

Soeharsono. 2006. Biokimia 1. Yogyakarta: UGM Press.

Strobel G, Daisy B. 2003. Bioprospecting for Microbial Endophytes and Their Natural Products. Microbiology and Molecular Biology Reviews.67. (4): p. 491–493.

Tan, R.X., Zou, W.X. 2001. Endophytes: a rich source of functional metabolites, Nat.Prod. Rep. 18: p. 448-459.

Tanaka, M., Sukiman. H., Takebayashi. M., Saito.K., Prana M. S and Tomita, F. 1999. Isolation, Screening and Phylogenetic Identification of Endophytes from Plant in Hokaido Japan and Java Indonesia. Microbes and Environment. 4: p. 237-241.

Utami ER. 2002. Antibiotika, Resistensi, dan Rasionalitas Terapi. Sainstis.

1(1): hal. 126.

WHO. 2015. WHO | The top 10 causes of death (Online).

(http://www.who.int/news-room/fact-sheets/detail/the-top-10-causes-of-death, diakses 20 November 2017)

59 S

Gambar 10. Skema Kerja Isolasi Fungi Endofit Daun Talas

Diekstraksi menggunakan metode maserasi dengan cairan penyari etil asetat perbandingan 1:10

-disortasi basah -dicuci -dikeringkan -dihaluskan -diayak

- Dipotong lempeng agar isolat murni ukuran 1 cm²

- Ditempelkan pada medium PDA baru berisi jamur C. albicans dan A. niger - Diinkubasi pada suhu 25 ⁰C selama 7x24 jam.

- Peremajaan kultur murni fungi uji

- Disuspensikan satu ose fungi uji kedalam 10 ml NaCl 0.9% steril - Dibuat lapisan dasar/ base layer

- Dibuat sumuran dengan meletakkan 6 buah pencadang - Dibuat lapisan kedua/ seed layer

- Dikeluarkan pencadang menggunakan pinset

- Didalam sumuran diteteskan sebanyak 30 µL ekstrak etil asetat fermentasi fungi, metanol, air, etil asetat daun talas, kontrol positif dan negatif

- Diinkubasi pada suhu 25⁰C selama 3x24 jam Dimasukkan isolat ke dalam medium PDY

Diinkubasi pada suhu 25⁰C selama 13x24 jam sambil dishaker ±30 menit setiap hari.

- Diekstraksi 2 kali menggunakan pelarut etil asetat (1:1 v/v) selama 20 menit menggunakan corong pisah.

- Fase etil diuapkan, fase air di freeze drying

- Dihancurkan

- Diekstraksi menggunakan pelarut metanol

- Disaring, filtrat diuapkan

Disaring

- Isolat dipindahkan ke dalam medium PDA baru - Diinkubasi pada suhu 25 ⁰C selama 7x24 jam.

- Disterilisasi permukaan menggunakan etanol 70% (1 menit), natrium hipoklorit 3,25% (30 detik) dan dibilas menggunakan air suling steril sebanyak 3 kali.

- Dipotong daun talas ukuran 1 cm²

- Ditanam pada medium PDA dan diinkubasi pada suhu 25 ⁰C selama 7x24 jam.

Fermentasi

Ekstraksi Hasil Fermentasi

Kesimpulan Analisis Data dan Pembahasan

Daun Talas

Isolat Fungi Endofit

Isolat Murni

Uji Aktivitas Antifungi Uji antagonis

Isolat Aktif

Skrining Fitokimia Peremajaan isolat

Serbuk simplisia

Ekstrak kental etil asetat daun talas

Biomassa Cairan Fermentasi

Ekstrak Etil Asetat Ekstrak Metanol

Identifikasi Mikroskopik

60 LAMPIRAN II Komposisi Media

a. Media Potato Dextrose Agar (PDA) Kentang : 200 gram

Dekstrosa : 20 gram Agar-agar :15 gram Aquadest : 1 liter

b. Media Potato Dextrose Broth (PDB) Kentang : 200 gram

Dekstrosa : 20 gram Aquadest : 1 liter

Tabel 3. Hasil Uji Aktivitas Antifungi

Perlakuan Replikasi

Zona hambat

(mm)

Rata-rata Fungi Uji

Ekstrak Etil Asetat

Fungi Endofit Isolat TL

1 27,15

26,27±1,03 Candida albicans

2 26,53

3 25,13

1 19,89

20,83±1,32 Aspergillus niger

2 21,76

3 0

Ekstrak Metanol Fungi Endofit Isolat TL

1 27,06

28,64±2,23 Candida albicans

2 30,21

3 0

1 27,68

28,73±0,95 Aspergillus niger

2 28,98

3 29,52

Ekstrak Air Fungi

Endofit Isolat TL

1 23,45

20,43±4,03 Candida albicans

2 15,85

3 21,99

1 29,42

28,01±1,24 Aspergillus niger

2 27,54

3 27,07

Ekstrak Etil Asetat

dari Daun Talas

1 19,7

24,68±7,04 Candida albicans

2 29,66

3 0

1 30,72

27,84±2,50 Aspergillus niger

2 26,37

3 26,42

Kontrol (+) 27,16 Candida albicans

26,47 Aspergillus niger

Kontrol (-) - Candida albicans

- Aspergillus niger

62 LAMPIRAN IV Dokumentasi Penelitian

Gambar 11. Xanthosoma sagittifolium [L] Schott. A= Tumbuhan Talas, B= Daun Talas.

Gambar 12. Proses pengerjaan tahap isolasi fungi endofit

Gambar 13. Proses pengerjaan tahap uji antagonis

Gambar 14. Proses pengerjaan tahap fermentasi

Gambar 15. Proses pengerjaan tahap ekstraksi, A= Proses ekstraksi cair-cair medium fermentasi, B= Proses ekstraksi biomassa dengan metode maserasi, C=

Proses ekstraksi daun talas dengan metode maserasi, D= Hasil ekstraksi fase air dengan metode freeze drying

Fase Etil Fase

air

A B

C D

Gambar 16. Proses pengerjaan tahap uji aktivitas antifungi

Gambar 17. Proses pengerjaan tahap skrining fitokimia

65 LAMPIRAN V Gambar Hasil Penelitian

Gambar 18. Hasil Uji aktivitas ekstrak isolat TL terhadap fungi uji, A= Candida albicans, B= Aspergillus niger

Gambar 19. Hasil pengamatan skrining fitokimia, A= Pada UV 254 nm, B= Pada UV 366 nm

Ket: e = ekstrak etil asetat fungi endofit isolat TL m = ekstrak metanol fungi endofit isolat TL

a = ekstrak air fermentasi fungi endofit isolat TL t = ekstrak etil asetat dari daun talas

A B

Gambar 20. Hasil pengamatan skrining fitokimia menggunakan beberapa pereaksi semprot, A= Pereaksi vanillin, B= Pereaksi sitroborat pada UV 366 nm, C= Pereaksi Dragendorff, D= Pereaksi Lieberman-Burchard

alkaloid

flavonoid steroid

terpenoid steroid terpenoid

terpenoid

A B

C D

Gambar 21. Hasil uji kualitatif protein

Dalam dokumen ISOLASI FUNGI ENDOFIT DAUN TALAS (Xanthosoma sagittifolium [L] Schott.) SEBAGAI PENGHASIL SENYAWA ANTIFUNGI ISOLATION OF ENDOPHYTIC FUNGI FROM COCOYAM LEAF (Xanthosoma sagittifolium [L] Schott.) AS A PRODUCER OF ANTIFUNGAL COMPOUND (Halaman 73-87)