5. KESIMPULAN DAN SARAN
5.2 Saran
Berdasarkan hasil yang diperoleh selama penelitian, maka masih sangat perlu melanjutkan penelitian melakukan beberapa hal berikut ini, antara lain:
1. Fraksinasi ekstrak kasar kedua sampel dengan melakukan partisi cair-cair menggunakan pelarut organik polar dan non polar;
2. Uji sitotoksik in vitro terhadap sel T47D pada ekstrak hasil fraksinasi; 3. Pengambilan kembali sampel spons W-19-08 dan W-36-08 yang baru di
lokasi yang sama untuk membandingkan hasil uji sitotoksik dengan hasil uji sebelumnya;
4. Uji sitotoksik in vitro terhadap sel uji yang lain dan uji toksisitas brine shrimp lethality test (BSLT) pada ekstrak spons W-19-08 dan W-36-08 yang ada.
5. Perlu dilakukannya kajian pendahuluan yang mendalam mengenai ekologi spons, biota laut yang berasosiasi dengannya dan habitatnya untuk mempelajari pola produksi metabolit sekunder oleh spons.
6. Perlu dikembangkannya bioteknologi di bidang produk alami laut terutama dalam hal pemenuhan kebutuhan metabolit sekunder yang memiliki potensi bioaktif melalui kolaborasi dengan ilmuwan yang terkait di luar negeri dalam rangka memperoleh manfaat ekonomi dari potensi metabolit sekunder dan meningkatkan perlindungan dan konservasi keanekaragaman hayati laut.
Amador ML, Jimeno J, Paz-Ares L, Cortes-Funes H, & Hidalgo M. 2003. Progress in the development and acquisition of anticancer agents from marine sources. Annals of Oncology 14:1607-1615.
Castro P, Huber ME. 2007. Marine Biology. New York: McGraw-Hill hlm 120- 151, 298, 316, 396.
Colin PL, Arneson C. 1995. Tropical Pacific Invertebrates. California: Coral Reef Press hlm 17-61.
Corley DG, Herb R, Moore RE, Scheuer PJ, Paul VJ. 1988. Laulimalides. New potent cytotoxic macrolides froam a marine sponge and a nudibranch predator. J Org Chem 53:3644-3646.
[CRITC COREMAP-LIPI] Coral Reef Information and Training Center Coral Reef Rehabilitation and Management Program Lembaga Ilmu Pengetahuan Indonesia. 2006. Studi Baseline Ekologi Kabupaten Wakatobi Sulawesi Tenggara Tahun 2006. Jakarta: CRITC COREMAP-LIPI 72 hlm.
[CRITC COREMAP-LIPI] Coral Reef Information and Training Center Coral Reef Rehabilitation and Management Program Lembaga Ilmu Pengetahuan Indonesia. 2007. Monitoring Kesehatan Terumbu Karang Kabupaten Wakatobi Tahun 2007. Jakarta: CRITC COREMAP-LIPI 70 hlm.
Dahuri R. 2003. Paradigma Baru Pembangunan Indonesia Berbasis Kelautan (Orasi Ilmiah). Institut Pertanian Bogor hlm 16-17.
Davis RA. 2000. Chemical investigations of Great Barrier Reef Ascidians – natural product and synthetic studies [disertasi]. Queensland: School of Science, Griffith University.
de Voogd NJ. 2004. Callyspongia (Euplacella) biru spec. nov. (Porifera: Demospongiae: Haplosclerida) from Indonesia. Zool Med Leiden 78:477- 483.
Dewi AS, Tarman K, Uria AR. 2008. Marine natural products: prospects and impacts on the sustainable development in Indonesia. Dalam: Proceeding of Indonesian Students’ Scientific Meeting Delft, Netherlands Mei 2008:54-63. Dewi AS. 2009. Biologically active secondary metabolites from tropical marine
invertebrates [thesis]. Vancouver: University of British Columbia.
[BRKP]. Badan Riset Kelautan dan Perikanan. 2009. Laporan Penelitian Balai Besar Riset Pengolahan Produk dan Bioteknologi Kelautan dan Perikanan 2008: Riset Isolasi dan Uji Farmakologi Senyawa Bioaktif dari Biota Laut. Jakarta: BRKP 51 hlm.
[Dirjen PHKA DepHut] Dirjen Perlindungan Hutan dan Konservasi Alam, Departemen Kehutanan. 2007. Zonasi Taman Nasional Wakatobi. Jakarta: Dirjen PHKA DepHut 21 hlm.
purification, and structural elucidation of bioactive secondary metabolites from marine invertebrates. Nature Protocols 3:1820-1831.
Faulkner DJ. 2000. Marine pharmacology. Antonie van Leeuwenhoek 77:135-145. Gritter RJ, Bobbit JM, Schwarting AE. 1991. Pengantar Kromatografi.
Penerjemah : Kosasih Padmawinata. Edisi kedua. Penerbit ITB. Bandung.
Gudbjarnason S. 1999. Bioactive marine natural products. Rit Fiskideildar
16:107-110
Guyot M. 2000. Intricate aspects of sponge chemistry. Zoosystema 22:419-431. Han B, Goeger D, Maier CS, Gerwick WH. 2005. The Wewakpeptins, cyclic
depsipeptides from a Papua New Guinea collection of the marine cyanobacterium Lyngbya semiplena. J Org Chem 70:3133-3139.
Hanani E, Mun’im A, Sekarini R. 2005. Identifikasi senyawa antioksidan dalam spons Callyspongia sp. dari Kepulauan Seribu. Majalah Ilmu Kefarmasian
II:127-133.
Handayani D, Almahdy A, Farlian A. 2006. Isolasi senyawa larvasida dari fraksi nonpolar spons laut Axinella carteri Dendy. J Sains Tek Far 11:94-100. Handayani D, Sayuti N, Dachriyanus. 2008. Isolasi dan karakterisasi senyawa
antibakteri epidioksi sterol dari spons laut Petrosia nigrans, asal Sumatera Barat. Prosiding Seminar Nasional Sains dan Teknologi-II 2008 Universitas Lampung:297-305.
Harborne JB. 1987. Metode Fitokimia. Penerjemah : Kosasih Padmawinata dan Iwang Soedro. Edisi kedua. Penerbit ITB. Bandung.
Hay ME, Fenical W. 1996. Chemical ecology and marine biodiversity: insights and products from the sea [feature]. Oceanography 9:10-20.
Hedner E. 2007. Bioactive compounds in the chemical defence of marine sponges. Structure-activity relationships and pharmacological targets [dissertation]. Acta Universitatis Upsaliensis. Digital Comprehensive Summaries of Uppsala Dissertations from the Faculty of Pharmacy 63 54 hlm.
Hunt B, Vincent ACJ. 2006. Scale and sustainability of marine bioprospecting for pharmaceuticals. Ambio 35:57-64.
Ismet MS. 2007. Penapisan senyawa bioaktif spons Aaptos aaptos dan Petrosia sp. dari lokasi yang berbeda [tesis]. Bogor: Program Pascasarjana, Institut Pertanian Bogor.
Isnansetyo A, Trijoko, Setyowati EP, Anshory HH. 2009. In vitro antibacterial activity of methanol extract of a sponge Geodia sp. against oxytetracycline- resistant Vibrio harveyi and its toxicity. J Biol Sci 9:224-230.
and corals in coral health and disease. New York: Springer-Verlag Berlin Heidelberg 2004 hlm 243-258.
Lee T, Fukumori I, Menemenlis D, Xing Z, Fu L-L. 2002. Effects of the Indonesian Throughflow on the Pacific and Indian Oceans. J Phys Oceanogr 32:1404-1429.
Lee YK, Lee JH, Lee HK. 2001. Microbial symbiosis in marine sponges. J Microbiol 39:254-264.
Mendola D. 2000. Aquacultural production of bryostatin 1 and ecteinascidin 743. Dalam: Drugs from the sea, Fusetani N [editor]. Basel, Karger:120–133.
Mendola D. 2003. Aquaculture of three phyla of marine invertebrates to yield
bioactive metabolites: process developments and economics. Biomol Eng
20:441–458.
Munro MHG, Blunt JW, Dumdei EJ, Hickford SJH, Lill RE, Shangxiao L, Battershill CN, Duckworth AR. 1999. The discovery and development of marine compounds with pharmaceutical properties. J Biotech 70:15-25. Newman DJ, Cragg GM. 2004. Marine natural products and related compounds in
clinical and advanced preclinical trials. J Nat Prod 67:1216-1238.
Pawlik JR, McFall G, Zea S. 2002. Does the odor from sponges of the genus
Ircinia protect them from fish predators? J Chem Eco 28:1103-1115.
Pechenik JA. 2005. Biology of the Invertebrates. New York: McGraw-Hill hlm 82, 119, 120, 128, 468, 476, 531, 539.
Piel J. 2004. Metabolites from symbiotic bacteria. Nat Prod Rep 21:519-538. Piel J, Hui D, Wen G, Butzke D, Platzer M, Fusetani N, Matsunaga S. 2004.
Antitumor polyketide biosynthesis by an uncultivated bacterial symbiont of the marine sponge Theonella swinhoei. Proceedings of National Academy of Science 101:16222-16227.
Proksch P. 2000. Bioactive natural products from marine invertebrates and associated microorganisms. Dalam: Proceedings of international symposium on marine biotechnology [editor]. Bogor: Center for Coastal and Marine Resources Studies hlm 6-14.
Proksch P, Edrada-Ebel R, Ebel R. 2003. Drugs from the sea-opportunities and obstacles [review]. Mar Drugs 1:5-17.
Radjasa OK. 2008. Microbial symbionts in marine sponges: marine natural product factory. J Coa Dev 11:59-63.
Radjasa OK, Sabdono A. 2009. Bacterial symbionts of reef’s invertebrates as a sustainable source of marine natural products. Curr. Res. Bacteriol.:1-7.
laut. Jakarta: Pusat Penelitian dan Pengembangan Oseanologi-LIPI hlm 115-128.
Rudianto W, Santoso P. 2008. Memilih alternatif pengelolaan Taman Nasional Wakatobi yang efektif. Bogor: Diklat Manajemen Teknik Kehutanan Tingkat III/SECEM I.
Rupert EE, Barnes RD. 1994. Invertebrate Zoology, 6th edition. United States of America: Saunders College Publishing.
Selvin J, Lipton AP. 2004. Biopotentials of Ulva fasciata and Hypnea musciformis collected from the peninsular coast of India. J Mar Sci & Tech
12:1-6.
Setyowati EP, Jenie UA, Sudarsono, Kardono B, Rahmat R, Meiyanto E. 2007. Isolasi senyawa sitotoksik spons Kaliapsis. Majalah Farmasi Indonesia
18:183-189.
Sjögren M. 2006. Bioactive compounds from the marine sponge Geodia barretti
[dissertation]. Acta Universitatis Upsaliensis Uppsala Faculty of Pharmacy. 49 hlm.
Suharyanto. 2007. Distribusi dan Persentase Tutupan Sponge (Porifera) pada Kondisi Terumbu Karang dan Kedalaman yang Berbeda di Perairan Pulau Barranglompo, Sulawesi Selatan. Biodiversitas 9:209-212.
Swantara IMD, Supriyono A, Trinoviani M. 2007. Isolasi dan identifikasi senyawa toksik pada spons dari perairan Gili Sulat, Lombok. Jurnal Kimia. 1:67-79.
Thakur NL, Müller WEG. 2004. Biotechnological potential of marine sponges [review]. Current Science 86:1506-1512.
Triyulianti I. 2009. Bioaktivitas ekstrak karang lunak Sinularia sp dan
Lobophytum sp hasil fragmentasi di perairan Pulau Pramuka, Kepulauan Seribu, Jakarta [tesis]. Bogor: Program Pascasarjana, Institut Pertanian Bogor.
Wilkinson CR. 1980. Cyanobacteria symbiotic in marine sponge. Di dalam: Schwemmler, editor. Endocytobiology: Endosymbiosis and cell biology. Berlin: Walter de Gruyter hlm 553-563.
Zachary I. 2003. Determination of Cell Number. Di dalam: Hughes D & Mehmet H (Eds). Cell proliferation and apoptosis. Oxford: BIOS scientific Publishers Ltd. hlm 13-36.
dihasilkan*
Spesies spons Metabolit sekunder Aktivitas biologis
Acanthella sp. Kalihinol-A Antibiotik
Agelas dispar Aminozooanemonin Antibakteria
Agelas dispar Pyridinebetaine A Antibakteria
Agelas mauritiana Agelasimine Sitotoksik
Agelas mauritiana Sceptrin Antimikroba
Agelas nakamurai Ageliferine Antibakteria
Agelas nakamurai Debromosceptrin Antibakteria
Agelas nakamurai Nakamuric acid Antibakteria
Agelas novaecaledoniae Ageliferine Somatostatin/VIP inhibitor
Agelas novaecaledoniae Sceptrin Somatostatin/VIP inhibitor
Agelas novaecaledoniae Xestospongine B Somatostatin/VIP inhibitor
Agelas sp. Agelasine Antileukimia
Agelas sp. Agelasine F Antituberkulosa
Agelas sp. Agelasine I Antimikroba
Amphimedon sp. Pyrinodemin Sitotoksik
Aplysina aerophoba Aeroplysinin I Sitotoksik
Batzella sp. Discorhabdin Sitotoksik, inhibitor enzim
Batzella sp. Secobatzelline Inhibitor fosfatase
Crella sp. Crellastatins Sitotoksik
Corticium sp. Meridine Antifungi
Cymbastela sp. Agelastatins C, D Insektisida
Discodermia calyx Calyculin A Antitumor
Discodermia kiiensis Discodermin A Antimikroba
Discodermia sp. Discobahamins Antifungi
Disidea avara Avarol Sitotoksik
Druinella purpurea Psammaplysin C Sitotoksik
Dysidea sp. Furodysinin Antiparasit
Echinoclathria sp. Echinoclathrines Immunosuppressive
Erylus lendenfeldi Eryloside A Antitumor, Antifungi
Fascaplysinopsis reticulata b-Carbolium salt Antiparasit
Halichondria okadai Halichondrin B Antitumor
Haliclona osiris Osirisynes Inhibitor Na+/K+-ATPase
Haliclona sp. Manzamine A Antitumor
Haliclona tulearensis Halitulin Sitotoksik
Hamacantha sp. Hamacanthin Antifungi
Hyrtios erecta Heteronemin Antiparasit
Ianthella basta Bastadin Antimikroba
Ianthella sp. 34-sulfatobastadin 13 Inhibitor endothelin A receptor
Ircinia sp. Haterumalides Sitotoksik
Jaspis johnstoni Jasplakinolide Sitotoksik
Jaspis johnstoni Jasplakinolide Insektisida
Jaspis johnstoni Toyocamycin Sitotoksik
Jaspis johnstoni Tubercidin Sitotoksik
Jaspis sp. Bengamides Antitumor
Jaspis sp. Bengazoles Antiparasit
Jaspis sp. Cyclodepsipeptide Antifungi
Jaspis sp. Jaspisamides Sitotoksik
Jaspis sp. Psammaplin Antibakteria
Jaspis splendans Jaspamide Antitumor
Lampiran 1 (lanjutan)
Spesies spons Metabolit sekunder Aktivitas biologis
Latrunculia magnifica Latrunculin A Neurotoksin
Leucetta cf. chagosensis Isonaamidine D Antifungi
Neosiphonia superstes Sphinxolides Sitotoksik
Notodoris citrina-Leucetta chagosensis Naamidines & naamines Antiparasit
Pachastrissa sp. Bengamides Antifungi
Pachastrissa sp. Bengazoles Antifungi
Pandaros acanthifolium Acanthifolicin Antitumor
Petrosia sp. Petrocortynes Sitotoksik, inhibitor enzime
Petrosia sp. Petrotetrayndiols Sitotoksik
Petrosia sp. Petrosiacetylenes Inhibitor Na+/K+-ATPase
Plakinastrella sp. Elenic acid Inhibitor Topoisomerase II
Poecillastra wondoensis Wondosterols Antimikroba
Psammaplysilla crassa Purealin Antiparasit
Psammaplysilla purpurea Aeroplysinin I Antiparasit
Psammaplysilla purpurea Bastadin Antimikroba
Psammaplysilla purpurea Purealidin A Sitotoksik
Reidispongia coerulea Reidispongiolide Sitotoksik
Reniera cratera Dorimidazole A Antiparasit
Rhaphisia lacazei Topsentins Antiproliferation
Spongia sp. Spongianolide Sitotoksik
Spongionella gracilis Gracilin B Sitotoksik
Stronglyophora hartmani Puupehenone Sitotoksik
Stylinos n. sp. Mycalamides Sitotoksik
Suberea creba Aeroplysinin I Antibakteria
Suberea creba Dibromoverongiaquinol Antibakteria
Tedania digitata 1-methylisoguanosine Effektor kardiovascular
Tedania ignis Tedanolide Sitotoksik
Tethya crypta Spongouridine, Spongothymidine Antivirus, antitumor
Theonella sp. Koshikamide Sitotoksik
Theonella swinhoei Swinholide Antifungi
Theonella swinhoei Theopederins Antifungi, Sitotoksik
Verongia aerophoba Aeroplysinin I Antibakteria
Verongia aerophoba Dienone Sitotoksik
Verongia spengelii Aplysinopsin Sitotoksik
Xestospongia sp. Xestospongine B Somatostatin/VIP inhibitor
Xestospongia sp. Ageliferine Somatostatin/VIP inhibitor
Xestospongia sp. Sceptrin Somatostatin/VIP inhibitor
Xestospongia sp. Xestoaminol A Antiparasit
Zyzzya fuliginosa Veiutamine Sitotoksik
51
Uji klinis dihentikan pada pertengahan 2002
Petrosia contignata Contignasterol (IZP-94005) Fase 2 sebagai obat anti asma Senyawa turunan IPL-576,092 memasuki uji kinis fase 2
Ijin pengembangan dipegang oleh Aventis
Stylotella aurantium Debromohymenialdisine Fase 1 sebagai obat osteoartritis Ijin pengembangan dipegang oleh Genzyme Tissue Repair
Berpotensi juga sebagai bahan anti-Alzheimer
Discodermia dissoluta Discodermolida Fase 1 berpotensi sebagai anti-kanker pankreas Ijin pengembangan dipegang oleh Novartis Pharma AG
dan mengobati kanker lain yang sudah resisten Kombinasi discodermolide & Taxol berpotensi sebagai obat kanker paru-paru
Pseudaxinyssa (=Cymbastela) cantharella Girolline (Girodazol) Fase 1 sebagai inhibitor sintesis protein Uji klinis dihentikan dengan efek samping hipertensi
Cymbastella sp. Turunan hemiasterlin Fase 1 sebagai obat anti-kanker Senyawa analog sintetik HTI-286 memasuki fase 2 uji klinis
Auletta sp. Ijin pengembangan dipegang oleh Wyeth
Siphonochalina spp. Senyawa asli berasal dari Hemiasterella minor
Agelas mauritianus Agelasphins Fase 1 sebagai obat anti-kanker Senyawa analog sintetik KRN-700 digunakan dalam uji klinis
Forcepia sp. Lasonolida Pra-uji klinis untuk anti-kanker Dalam tahap uji budidaya laut
Luffariella variabilis Manoalida Fase 2 sebagai obat anti-inflamasi Fase 2 uji klinis dihentikan
Ijin pengembangan dipegang oleh Allergan Pharmaceutical
Topsentia genitrix Topsentin - Potensi sebagai obat anti-inflamasi, anti-kanker dan
Hexadella sp. Alzheimer
Spongoserites ruetzieri
Spongia sp. (family Corallistidae) Dictyostatin Pra-uji klinis untuk anti-kanker Penelitian memasuki tahap pembuatan senyawa sintetik
Latrunculia magnifica Latrunculin Pra-uji klinis untuk bahan aktif actin
Cacospongia mycofijiensis Laulimalida - Berpotensi sebagai stabilisator mikrotubulin
Hyatella sp. Fasciospongia sp. Dactylospongia sp.
Haliclona sp. Manzamin A Pra-uji klinis untuk anti-malaria, anti-TB dan Beberapa sampel sponge diperoleh di perairan Indonesia
penyakit infeksi lain
Mycale hentscheli Pelorusida A Pra-uji klinis untuk antikanker Ijin pengembangan dipegang oleh Reata Pharmaceutical Inc.
Dalam tahap uji budidaya laut
Haliclona sp. Salicylihalamida - Berpotensi sebagai obat anti-tumor dan osteoporosis
Tabel Probit Persentase Probit 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 0 - 2,67 2,95 3,12 3,25 3,36 3,45 3,52 3,59 3,66 10 3,72 3,77 3,82 3,87 3,92 3,96 4,01 4,05 4,08 4,12 20 4,16 4,19 4,23 4,26 4,29 4,33 4,36 4,39 4,42 4,45 30 4,48 4,5 4,53 4,56 4,59 4,61 4,64 4,67 4,69 4,72 40 4,75 4,77 4,8 4,82 4,85 4,87 4,9 4,92 4,95 4,97 50 5 5,03 5,05 5,08 5,1 5,13 5,15 5,18 5,2 5,23 60 5,25 5,28 5,31 5,33 5,36 5,39 5,41 5,44 5,47 5,5 70 5,52 5,55 5,58 5,61 5,64 5,67 5,71 5,74 5,77 5,81 80 5,84 5,88 5,92 5,95 5,99 6,04 6,08 6,13 6,18 6,23 90 6,28 6,23 6,41 6,48 6,55 6,64 6,75 6,88 7,05 7,33 99 0 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 0,6 0,7 0,8 0,9 7,33 7,37 7,41 7,46 7,51 7,58 7,65 7,75 7,88 8,09
Lampiran 4 Contoh Perhitungan rendemen ekstrak kasar sponge
W-19-08 dan W-36-08
W-19-08 (1) 1,14 W-19-08 (2) 0,54 W-36-08 (1) 5,60 W-36-08 (2) 3,66 50 1,68 3,36 140 9,26 6,61Sampel Berat basah spons (gram) Berat ekstrak (gram) Berat ekstrak total (gram) Rendemen ekstrak (%)
Berat ekstrak kering (gram)
Rendemen = x 100% Berat basah sampel awal (gram)
1,68
Rendemen W-19-08 = x 100% = 3,36 % 50
penentuan LC
50Rerata sampel Kontrol sel Kontrol media
30 0,340 0,331 0,335 0,339 0,336 0,408 0,120 W-19-08 60 0,295 0,294 0,297 0,289 0,294 0,415 0,125 120 0,280 0,279 0,280 0,284 0,281 0,409 0,112 30 0,366 0,384 0,399 0,388 0,384 0,404 0,116 W-36-08 60 0,266 0,268 0,266 0,276 0,269 0,408 0,125 120 0,267 0,261 0,263 0,271 0,266 0,411 0,118 0,409 0,119 Ekstrak Konsentrasi (ppm) Absorbansi Sampel Rerata 30 1,477 25,16 4,33 60 1,778 39,82 4,75 120 2,079 44,31 4,85 30 1,477 8,60 3,66 60 1,778 48,36 4,95 120 2,079 49,57 5,00 97,04 W-36-08 Konsentrasi (ppm) Log konsentrasi (x) Mortalitas (%) Probit (y) W-19-08 LC50 (ppm) 156,14 Ekstrak
Pada ekstrak W-19-08 konsentrasi 30 ppm
• Persen kematian = 100% ) B A ( ) C A ( × − − = 100% ) 119 , 0 409 , 0 ( ) 336 , 0 409 , 0 ( × − −
= 25,16 % (nilai probitnya sebesar 4,33 (Lampiran 3)) Keterangan: A = Absorbansi sumuran kontrol sel (tanpa perlakuan ekstrak)
B = Absorbansi sumuran kontrol media
C = Absorbansi sumuran yang diberi ekstrak uji
• Dari grafik hubungan antara log konsentrasi (sumbu x) dengan nilai probit sumbu y didapatkan persamaan y = 0,863 x + 3,107
• Penentuan LC50 (konsentrasi yang dapat menyebabkan kematian sebesar 50%)
50% nilai probit (y) = 5 (dilihat dari tabel probit (Lampiran 3)) x = log konsentrasi y = 0,863 x + 3,107 5 = 0,863 x + 3,107 x = (5 – 3,107)/0,863 anti log = 2,194 LC50 = 156,14 ppm
Ekstraksi spons W-19-08