ORIZA SAVITRI ARIANTIE
SEKOLAH PASCASARJANA INSTITUT PERTANIAN BOGOR
BOGOR 2013
dengan pengencer dasar tris untuk pembekuan semen kambing memiliki hasil yang mirip dengan gliserol. Dengan demikian DMF dapat digunakan sebagai krioprotektan alternatif untuk pembekuan semen kambing.
SIMPULAN DAN SARAN
Simpulan
Pengencer tris-soya dapat digunakan sebagai pengencer semen cair kambing dan suplementasi rafinosa mempertahankan daya hidup spermatozoa dalam tris-soya sampai 60 jam, sedangkan suplementasi trehalosa mempertahankan daya hidup spermatozoa dalam tris-kuning telur sampai 84 jam.
Pengencer tris-kuning telur trehalosa dengan penambahan gliserol menunjukkan peranan yang lebih baik dalam melindungi kualitas spermatozoa pada saat pembekuan dibandingkan dengan pengencer tris-soya rafinosa dengan penambahan DMF.
Pemeriksaan motilitas spermatozoa dapat menggambarkan pemeriksaan membran plasma utuh dan spermatozoa hidup.
Saran
Penelitian ini merupakan penelitian pertama untuk mengevaluasi efek dari lesitin kacang kedelai untuk preservasi dan kriopreservasi semen kambing PE, sehingga diperlukan penelitian lebih lanjut untuk mendapatkan informasi tentang lesitin kacang kedelai.
Untuk membuat semen cair kambing dapat digunakan pengencer tris-kuning telur dengan suplementasi trehalosa 50 mM dan tris-soya dengan suplementasi rafinosa 50 mM.
Perlu dilakukan IB pada kambing betina menggunakan semen cair hasil penelitian ini untuk mengetahui fertilitas spermatozoa yang sebenarnya.
DAFTAR PUSTAKA
Aboagla EME, Terada T. 2003. Trehalose-enhanced fluidity of the goat sperm membrane and its protection during freezing. BOR Papers in Press Published. pp 1-18.
Aboalga EME, Terada T. 2004a. Effect of egg yolk during the freezing step preservative on the viability of goat spermatozoa. Theriogenology. 62:1160- 1172.
Aboagla EME, Terada T. 2004b. Effects of supplementation of trehalose extender containing egg yolk with sodium dodecyl sulfate on the freezability of goat spermatozoa. Theriogenology. 62: 809-818.
Aires VA, Hinsch KD, Mueller-Schloesser F, Bogner K, Mueller-Schloesser S, Hinsch E. 2003. In vitro and in vivo comparison of egg yolk-based and soybean lecithin-based extenders for cryopreservation of bovine semen. Theriogenology. 60:269 -279.
Aisen EG, Alvarez HL, Venturino A, Garde JJ. 2000. Effect of trehalose and EDTA on cryoprotective action of ram semen diluents. Theriogenology. 53:1053- 1061.
Aisen EG, Medina VH, Venturino A. 2002. Cryopreservation and post-thawed fertility of ram semen frozen in different trehalose concentrations. Theriogenology. 57:1801-1808.
Aku AS, Sandiah N, Sadsoeitoeboen PD, Amin MR, Herdis. 2007. Manfaat lesitin nabati pada preservasi dan kriopreservasi semen: suatu kajian pustaka. Anim Prod. 9(1):49-52.
Althouse GC, Kuster CE, Clark SG, Weisiger RM. 2004. Field investigations of bacterial contaminations and their effects on extended porcine semen. Theriogenology. 53:1167-1176.
Alvarenga MA, Papa FO, Landim-Alvarenga FC, Medeiros ASL. 2005. Amides as
cryoprotectants for freezing stallion semen: a review. Anim Reprod Sci. 89:105-113.
Amirat L, Tainturier D, Jeanneau L, Thorin C, Gerard O, Courtens JL, Anton M. 2004. Bull semen in vitro fertility after cryopreservation using egg yolk LDL: a comparison with optidyl, a commercial egg yolk extender. Theriogenology. 61:895-907.
Anghel AH, Zamfirescu S, Coprean D. 2009. Influence of vitamin E on microscopic and oxidative parameters of frozen-thawed ram semen. Lucra ri S tiint ifice. 53:635-639.
Ari UC, Daskin A. 2010. Freezing of washed Angora goat semen with extenders added bull or ram seminal plasma. Kafkas University Vet Fak Derg. 16(2):233- 237.
Arifiantini I, Yusuf TL, Graha N. 2005. Recovery rate dan longivitas pasca thawing semen beku sapi FH (Friesian Holstein) menggunakan berbagai bahan pengencer. Buletin Peternakan. 29(2):53-61.
Arifiantini RI, Wresdiyati T, Retnani EF. 2006. Morfologi spermatozoa sapi Bali (Bos sondaicus) menggunakan pewarnaan “Williams”. J Pengembangan Peternakan Tropis. 31:105-110.
Arifiantini RI, Supriantna I. 2007. Kriopreservasi semen kuda menggunakan berbagai krioprotektan pada pengencer susu skim. JITV 12(2):139-146.
Arifiantini RI, Yusuf TL. 2010. Developing of tris soy milk diluent for Friesian Holstein bull frozen semen. Hayati Biosci IPB 17(2):91-94.
Arifiantini RI, Purwantara B. 2010. Motility and viability of Friesian Holstein spermatozoa in three different extender stored at 5°C. J Indonesian Trop Anim Agric. 35(4):222-226.
Ax RL, Dally M, Didion BA, Lenz RW, Love CC, Varner DD, Hafez B, Bellin ME. 2000. Semen Evaluation. In: Hafez B, Hafez ESE. 2000. Reproduction in Farm Animals. 7th ed. Philadelphia (US): Lippincott Williams & Wilkins. p 365-389. Barth AD, Oko RJ. Abnormal Morphology of Bovine Spermatozoa. Iowa (US): Iowa
Bearden HJ, Fuquay JW, Willard ST. 2004. Applied Animal Reproduction. 6th ed. New Jersey (NJ): Pearson education Inc. pp 155-234.
Bender DA, Mayes PA. 2009. Karbohidrat yang Penting Secara Fisiologis. Dalam: Murray RK, Granner DK, Rodwell VW. 2009. Biokimia Harper. Ed ke-27. Pendit BU, penerjemah. Jakrata (ID): EGC. Terjemahan dari: Harper’s Illustrated Biochemistry. 27th ed. hlm 119-127.
Best B. c1990. Viability, cryoprotectant toxicity and chilling injury in cryogenics [internet]. [diunduh 2011 Mei 30]. Tersedia pada www.benbest.com/pdf. Bezerra FSB, Castelo TS, Alves HM, Oliveira IRS, Lima GL, Peixoto GCX, Bezerra
ACSD, Silva AR. 2011. Objective assessment of the cryoprotective effects of dimethylformamide for freezing goat semen. Cryobiology. 63(3):263-266. Bixara MI. 2009. Memisahkan dan menyimpan gas asetilen menggunakan cecair
ionik. Proses “super hijau” [internet]. [diunduh 2012 Jan 12]. Tersedia pada http://howgreenareyou.wordpress.com.
Botham KM, Mayes PA. 2009. Pengangkutan dan Penyimpanan Lipid. Dalam: Murray RK, Granner DK, Rodwell VW. 2009. Biokimia Harper. Ed ke-27. Pendit BU, penerjemah. Jakrata (ID): EGC. Terjemahan dari: Harper’s Illustrated Biochemistry. 27th ed. hlm 225-238.
Crowe JH, Crowe LM. 2000. Preservation of mammalian cells learning nature’s tricks. Nature Biotechnology. 18:145-147.
Darnell J, Lodish H, Baltimore D. 1990. Molecular Cell Biology. 2nd ed. New York (US): Scientific American Books, Inc. pp 489-583.
Dong UA, Sang HL, Haribabu S, Eun JL, Jae CK. 2006. Sequential separation of main component from chicken egg yolk. Food Sci and Biotechnology. 12(2):189-195.
Dorado J, Hidalgo M, Mu˜noz A, Rodriguez I. 2009. Assessment of goat semen freezability according to the spermatozoa characteristics from fresh and frozen samples. Anim Reprod Sci. 112:150-157.
Dorado J, Mu˜noz-Serrano A, Hidalgo M. 2010. The effect of cryopreservation on goat semen characteristics related to sperm freezability. Anim Reprod Sci. 121:115-123.
Drobnis EZ, Crowe LM, Berger T, Anchordoguy TJ. Overstreet W, Crowe JJH.
1993. Cold shoch damage is due to lipid phase transition in cell membranes: a demonstration using sperm as a model. J Exp Zoology. 265:432-437.
El-Keraby FE, Osman KT, Ganah HB, El-Siefy EM. 2010. Soymilk-based extender for cryopreservation of bovine semen. J Anim and Poultry Prod. 1(2):61-69. Evans G, Maxwell WMC. 1987. Salamon’s Artificial Insemination of Sheep and
Goats. London (UK): Butterworths.
Fernández-Santos MR, Martínez-Pastor F, García-Macías V, Esteso MC, Soler AJ, de Paz P, Anel L, Garde JJ. 2007. Extender osmolality and sugar supplementation exert a complex effect on the cryopreservation of Iberian red deer (Cervus elaphus hispanicus) epididymal spermatozoa. Theriogenology. 67(4):738-753.
Fessenden RJ, Fessenden JS. 2006. Kimia Organik. Ed ke-3. Jilid 2. Pudjaatmaka AH, penerjemah. Jakarta (ID): Erlangga. Terjemahan dari: Organic Chemistry. 3rd ed. hlm 101-240.
Fukui Y, Kohno H, Togari T, Hiwasa M, Okabe K. 2008. Fertility after insemination using a synthetic semen extender in sheep. J Reprod Dev. 54:286-289.
Garner DL, Hafez ESE. 2000. Spermatozoa and Seminal Plasma. In: Hafez B, Hafez ESE. 2000. Reproduction in Farm Animals. 7th ed. Philadelphia (US): Lippincott Williams & Wilkins. pp 96-109.
Gazali M, Tambing SN. 2002. Kriopreservasi sel spermatozoa. J Hayati. 9(1):27-32. Gogol P, Wierzchoś–Hilczer A. 2009. Membrane integrity, energy status and
motility of rabbit spermatozoa stored for 2 days at 15°C. J Anim Sci. 9(1):43-49.
Graham LH, Bando J, Gray C, Buhr MM. 2004. Liquid storage of Asian (Elephas maximus) sperm at 4°C. Anim Reprod Sci. 80:329-340.
Guthrie HD, Liu J, Critser JK. 2002. Osmotic tolerance limits and effects of
cryoprotectants on motility of bovine spermatozoa. Biol of Reprod 67:1811-1816.
Hafez B, Hafez ESE. 2000. Reproduction in Farm Animals. 7th ed. Philadelphia (US): Lippincott Williams & Wilkins. pp 96 -442.
Hafez ESE. 2000. Preservation and Cryopreservation of Gametes and Embryo. In: Hafez B, Hafez ESE. 2000. Reproduction in Farm Animals. 7th ed. Philadelphia (US): Lippincott Williams & Wilkins. pp 431-442.
Hermansson U, Linde-Forsberg C. 2006. Freezing of stored, chilled dog spermatozoa. Theriogenology. 65:584-593.
Higashiyama T. 2002. Novel function and applications of trehalose. Pure Appl Chem.74(7):1263-1269.
Holt WV. 2000. Basic aspects of frozen storage of semen. Anim Reprod Sci. 62:3–22.
Hu JH, Li QW, Li G, Jiang ZL, Bu SH, Yang H, Wang LQ. 2009. The cryoprotective effect of trehalose supplementation on boar spermatozoa quality. Anim Reprod Sci. 112:107-118.
Juneja LR, Sugino H, Fujiki M, Kim M, Yamamoto T. 1994. Preparation of Pure Phospholipid from Egg Yolk. Sim SJ, Nakai S, editor. Egg Uses and Processing Technologies (New Developments). Wallingford (UK): CAB International.
Khalifa TAA, El-Saidy BE. 2006a. Testing usability of butylated hydroxytoluene in conservation of goat. J Agric and Environ Sci. 1(3):288-293.
Khalifa TAA, El-Saidy BE. 2006b. Pellet-freezing of Damascus goat semen in a chemically defined extender. Anim Reprod Sci. 93:303-315.
Kimball JW. 1998. Biologi Jilid 1. Ed ke-5. Tjitrosomo SS, Sugiri N, penerjemah. Jakarta (ID): Erlangga. Terjemahan dari: Biology. hlm 86-115.
Kostaman T, Sutama IK. 2006. Studi motilitas dan daya hidup spermatozoa kambing Boer pada pengencer tris sitrat-fruktosa. J Sain Vet. 24(1):58-64.
Leboeuf B, Restall B, Salamon S. 2000. Production and storage of goat semen for artificial insemination. Anim Reprod Sci. 62:113-141.
Mazur P. 1984. Freezing of living cells: Mechanisms and implications. Am J Physiol 247:125-142.
Medeiros CM, Forell F, Oliveira AT, Rodrigues JL. 2002a. Current status of sperm cryopreservation: why in n’t better. Theriogenology. 57:327-344.
Medeiros ASL, Gomes GM, Carmo MT, Papa FO, Alvarenga MA. 2002b. Cryopreservation of stallion sperm using different amides. Theriogenology. 58:273-276.
Mitchell JR, Doak GA. 2004. The artificial insemination and embryo transfer of dairy and beef cattle (including information pertaining to goats, sheep, horses, swine and other animals): a handbook and laboratory manual. 9th ed. Upper Saddle River (NJ): Pearson Education, Inc. pp 57-135.
Molinia FC, Evans G, Maxwell WMC 1994. Effect of monosaccharides and disaccharides in Tris-based diluents on motility, acrosome integrity and fertility of pellet frozen ram spermatozoa. Anim Reprod Sci. 36:113-122.
Morel DMCG. 1999. Equine Artificial Insemination. Wallingford (UK): CABI Publishing.
Morrell JM. 2010. Artificial Insemination: Current and Future Trends. Uppsala, Sweden (SE): Swedish University of Agricultural Sciences.
Moussa M, Martinet V, Trimeche A, Tanturies D, Anton M. 2002. Low density lipoprotein extracted from hen egg yolk by an easy method: cryoprotective effect on frozen-thawed bull semen. Theriogenology. 57:1591-1762.
Murray RK, Granner DK, Rodwell VW. 2009. Biokimia Harper. Ed ke-27. Pendit BU, penerjemah. Jakrata (ID): EGC. Terjemahan dari: Harper’s Illustrated Biochemistry. 27th ed. hlm 119-238.
Naing SW, Wahid H, Azam MK, Rosnina Y, Zuki AB, Kazhal S, Bukar MM, Thein M, Kyaw T, San MM. 2010. Effect of sugars on characteristic of Boer goat semen after cryopreservation. Anim Reprod Sci. 122:23-28.
Nel-Themaat L, Harding GD, Chandler JE, Chenevert JF, Damiani P, Fernandez JM, Humesa PE, Pope CE, Godke RA. 2006. Quality and freezing qualities of first and second ejaculates collected from endangered Gulf Coast Native rams. Anim Reprod Sci. 95:251–261.
Ogbuewu IP, Aladi NO, Etuk IF, Opara MN, Uchegbu MC, Okoli IC, Iloeje MU. 2010. Relevance of oxygen free radicals and antioxidants in sperm production and function. Res J Vet Sci. 3(3):138-164.
Pamela CC, Richard AH, Denise RF. 2008. Biochemistry. 4th ed. Philadelphia (US): Lippincott Williams & Wilkins. pp 219-245.
Pamungkas FA, Batubara A, Doloksaribu M, Sihite E. 2009. Petunjuk Teknis Potensi Beberapa Plasma Nutfah Kambing Lokal Indonesia. Deli Serdang (ID): Pusat Penelitian dan Pengembangan Pertanian, Departemen Pertanian. hlm 5-31. Parks JE, Graham JK. 1992. Effects of cryopreservation procedures on sperm
membranes. Theriogenology. 38:209-222.
Paulenz H, So¨derquist L, Adnøy T, Fossen OH, Berg KA. 2003. Effect of milk and Tris-based extenders on the fertility of sheep inseminated vaginally once or twice with liquid semen. Theriogenology. 60: 759-766.
Paulenz H, So¨derquist L, Adnøy T, Soltun K, Sæther PA, Fjellsøy KR, Berg KA. 2005. Effect of cervical and vaginal insemination with liquid semen stored at room temperature on fertility of goats. Anim Reprod Sci. 86:109-117.
Pegg DE. 2002. The history and principles of cryopreservation. Seminar Reprod Med. 20:5-13.
Pelarut [internet]. 2011. [diunduh 2012 Jan 12]. Tersedia pada http://id.wikipedia.org/wiki/Pelarut.
Pine SH, Hendrickson JB, Cram DJ, Hammond GS. 1988. Kimia Organik. Ed ke-4. Joedodibroto R, Purbo-Hadiwidjoyo SW, penerjemah. Bandung (ID): Penerbit ITB. Terjemahan dari: Organic Chemistry. 4th ed. hlm 265-399.
Purdy PH. 2006a. A review on goat sperm cryopreservation. Small Ruminant Research. 63:215-225.
Purdy PH. 2006b. The post-thaw quality of ram sperm held for 0 to 48 prior to cryopreservation. Anim Reprod Sci. 93:114-123.
Purdy PH, Moce E, Stobart R, Murdoch WJ, Moss GE, Larson B, Ramsey S. Graham JK, Blackburn HD. 2010. The fertility of ram sperm held for 24h at 5°C prior to cryopreservation. Anim Reprod Sci. 118:231-235.
Rasul Z, Anzar M, Jalali S, Ahmad N. 2000. Effect of buffering system on post-thaw motion characteristic, plasma membrane integrity and acrosome morphology of buffalo spermatozoa. Anim Reprod Sci. 59:31-4.
Revell SG, Mrode RA. 1994. The hypoosmotic swelling test. Anim Reprod Sci. 2:139-144.
Rizal M, Toelihere MR, Yusuf TL, Purwantara B, Situmorang B. 2003. Kualitas semen beku domba garut dalam berbagai konsentrasi gliserol. JITV. 7(3):194- 199.
Rizal M, Herdis, Surachman M, Mesang-Nalley MW. 2008. Pengaruh plasma semen domba Priangan terhadap daya hidup spermatozoa kambing Peranakan Etawah yang disimpan pada suhu 3-5 °C. JITV. 13(1):23-29.
Salamon S, Ritar AJ. 1982. Deep freezing of Angora goat semen: effect of diluent composition and method and rate of dilution on survival of spermatozoa. Aust J Biology Sci. 35:295-303.
Santiago-Moreno J, Coloma MA, Tolendano-Diaz A, Gomez-Brunet A, Pulido- Pastor A, Zamora-Soria A, Carrizosa JA, Urrutia B, Lopez-Sebastian A. 2008. A comparison of the protective action of chicken and quail egg yolk in the
cryopreservation of Spanish ibex epididymal spermatozoa. Cryobiology. 57:25-29.
Sariözkan S, Tuncer PB, Bucak MN, Ulutaş PA. 2009. Influence of various antioxidants on microscopic-oxidative stress indicators and fertilizing ability of frozen-thawed bull semen. ACTA Vet. 78:463-469.
Schafer-Somi S, Kluger S, Knapp E, Klein D, Aurich C. 2006. Effects of semen extender and semen processing on motility and viability of frozen-thawed dog spermatozoa. Theriogenology. 66:173–182.
Souhoka DF, Matatula MJ, Mesang-Nalley WM, Rizal M. 2009. Laktosa mempertahankan daya hidup spermatozoa kambing Peranakan Etawah yang dipreservasi dengan plasma semen domba Priangan. J Vet. 10(3):135-142. Soylu MK, Nur Z, Ustuner B, Dogan I, Sagirkaya H, Gunay U, Kemal AK. 2007.
Effects of various cryoprotective agents and extender osmolality on post- thawed ram semen. Bulletin Vet Inst Pulawy. 51:241-246.
Squires EL, Keith SL, Graham JK. 2004. Evaluation of alternative cryoprotectans for preserving stallion spermatozoa. Theriogenology. 62:1056-1065.
Steel RGD, dan Torrie JH. 1995. Prinsip dan Prosedur Statistika: Suatu Pendekatan Biometrik. Sumantri B, penerjemah. Jakarta (ID): Gramedia Pustaka Utama. Terjemahan dari: Principles and Procedures of Statistics: A Biometrical Approach. 772 hlm.
Sukhato P, Thongsodseang S, Utha A, Songsasen N. 2001. Effects of cooling and warming conditions on post-thawed motility and fertility of cryopreserved buffalo spermatozoa. Anim Reprod Sci. 67:69–77.
Suwarso. 1999. Peranan rafinosa dalam pengencer tris sitrat kuning telur terhadap kualitas semen beku kambing Peranakan Etawah. [Tesis]. Bogor (ID): Institut Pertanian Bogor.
Sztein JM, Noble K, Farley JJS, Mobraaten LE. 2001. Comparison of permeating and nonpermeating cryoprotectan for mouse sperm cryopreservation. Cryobiology. 42(1):28-39.
Tambing SN, Toelihere MR, Yusuf TL, Sutama IK. 2000. Pengaruh gliserol dalam
pengencer tris terhadap kualitas semen beku kambing Peranakan Etawah. JITV. 5(2):1-8.
Tambing SN, Toelihere MR, Yusuf TL, Sutama IK. 2001. Kualitas semen beku kambing Peranakan Etawah setelah ekuilibrasi. Hayati. 8:70-75.
Tambing SN, Toelihere MR, Purwantara B, Sutama IK. 2003. Kualitas semen beku kambing Saanen pada berbagai jenis pengencer. Hayati. 10:146-150.
Thun R, Hurtado M, Janet F. 2002. Comparison of Biochipos-Plus® and tris egg yolk extender for cryopreservation of bull semen. Theriogenology. 57:1087- 1094.
Toelihere MR. 1985. Fisiologi Reproduksi pada Ternak. Bandung (ID): Angkasa. hlm 92-132.
Vidament M, Daire C, Yvon JM, Doligez P, Bruneau B, Magistrini M, Ecot P. 2002. Motility and fertility of stallion frozen semen with glycerol and/or dimethylformamide. Theriogenology. 58:249-251.
Viswanath R, Shannon P. 2000. Storage of bovine semen in liquid frozen state. Anim Reprod Sci. 62:23-53.
Voet D, Voet JG, Pratt CW. 1999. Fundamental of Biochemistry. New York (US): John Wiley and Sons. pp 41-277.
Wade LG. 2000. Organic Chemistry. 2nd ed. New Jersey (NJ): Prentice-Hall Inc. pp 926-973.
Watson PF. 2000. The caused of reduced fertility with cryopreserved semen. Anim Reprod Sci. 60-61:481-492.
Woelders H, Matthij A, Engel B. 1997. Effect of trehalose and sucrose, osmolality of the freezing medium and cooling rate on viability and intactness of bull sperm after freezing and thawing. Cryobiology. 35:93-105.
Yildiz C, Kaya A, Aksoy M, Tekeli T. 2000. Influence of sugar supplementation of the extender on motility, viability and acrosomal integrity of dog spermatozoa during freezing. Theriogenology.. 54:579-585.
Zhang SS, Hu JH, Li QW, Jiang ZL, Zhang XY. 2009. The cryoprotective effects of soybean lecithin on boar spermatozoa quality. African J Biotechnology. 8(22):6476-6480.
Zhu H, Luo H, Meng H, Zhang G, Yan L, Yue D. 2010. Effect of vitamin E supplement in diet on antioxidant ability of testis in Boer goat. Anim Reprod Sci. 117:90-94.
LAMPIRAN
Lampiran 1 Komposisi Melilea sari kedelai bubuk dan struktur 20 asam amino menurut Kimball (1998)
Komposisi Melilea sari kedelai Komposisi: Kacang kedelai Sukrosa Maltosa Kandungan: Isoflavon Saponin Lesitin Asam Aspartat Asam Glutamat Serin Prolin Valin Isoleusin Leusin Phenilalanin Lisin 6 mg 555 mg 615 mg 575 mg 1061 mg 304 mg 982 mg 312 mg 275 mg 1122 mg 275 mg 629 mg Struktur 20 asam amino menurut Kimball (1998)
Lampiran 2 Buffered Formal-Saline solution
Disodium hydrogen phosphate dihydrate 6.19 g Potassium dihydrogen phosphate 3.54 g
Sodium chlorida 5.41 g
Formaldehyd solution (37%) 125 mL
Aquadest 875 mL
Larutan Buffered Formol-Saline
Campur bahan no 1 sampai 4, kemudian dilarutkan dengan Aquadest 875 mL.
Lampiran 3 Pewarna Eosin-Nigrosin (Barth dan Oko 1989)
Nigrosin 20 g
Sodium sitrat 1.5 g
Distillet water 300 mL
Eosin yellow 3.3 g Larutan pewarna Eosin-Negrosin
Campur bahan no 1 dan no 2, kemudian dilarutkan dengan distillet water 300 mL, distirrer dan dihangatkan sampai larut ditambahkan bahan no 4. pH disesuaikan sampai 6.8-7.0. Larutan dibiarkan beberapa hari dan disaring sebelum digunakan.
Lampiran 4 Larutan hipoosmotik (Revell dan Mrode 1994) Natrium sitrat 7.35 g
Fruktosa 13.52 g
distillet water 1000 mL
Larutan hipoosmotik
Campur bahan no 1 dan 2, memudian dilarutkan dengan distillet water 1000 mL, distirrer. Sebanyak 1 mL larutan hipoosmotik ditambah dengan 5 µl spermatozoa, kemudian diinkubasi pada suhu 37 oC selama 30 menit.
Lampiran 5 Spermatozoa dengan membran plasma utuh dan tidak utuh
(a) spermatozoa dengan membran plasma utuh dan (b) spermatozoa dengan membran plasma tidak utuh
Lampiran 6 Pewarna Williams (Arifiantini et al. 2006) Stock solution
Stock solution yang harus dipersiapkan terdiri atas 1. 10 g basic Fuchsin dalam 100 mL alkohol 95% 2. Saturated bluish eosin alkohol 95%
3. Basic Fuchsin dalam larutan phenol : 10 mL larutan no 1 dan 170 mL larutan phenol 5%
Larutan pewarna Williams
Campur dua bagian dari larutan no 3 dan satu bagian dari larutan no 2, biarkan selama 14 hari dan disaring sebelum digunakan.
Pewarnaan Williams
1. Pewarnaan dilakukan dengan cara memfiksasi preparat ulas dari semen segar yang dikoleksi dari lapang dengan heating table.
2. Cuci dalam alkohol absolut selama 4 menit. Biarkan sampai kering.
3. Masukkan kedalam larutan 0.5% chloramin selama 1-2 menit, sambil diangkat dan dimasukan kembali berkali-kali dengan tujuan menghilangkan mukus dan ulasan terlihat jernih.
4. Cuci dalam distilled water selanjutnya masukan kedalam alkohol 95%. 5. Warnai dengan larutan Williams selama 8-10 menit.
6. Cuci dengan air mengalir sampai air terlihat jernih. Keringkan. b
a
a a
Lampiran 7 Abnormalitas primer
(a) macrocephalus, (b) microcephalus, (c) detached head, (d) double head,
(e) narrow, (f) abaxial, (g) pear shaped, (h) narrow.
Lampiran 8 Abnormalitas sekunder
(a) coiled principal piece, (b) bowed midpiece, (c) teratoid forms, (d) distal
droplet (e,f) proximal droplet, (g) pseudodroplet, (h) bent principal piece.
a b e d c f g h a d g b e c h f
Lampiran 9 Struktur umum lipoprotein (Pamela et al. 2008; Botham dan Mayes 2009)
Lampiran 10 Membran spermatozoa sebelum dan sesudah cold shock (Morel 1999)
A. Konfigurasi normal B. Konfigurasi heksagonal Fosfolipid
Asam lemak
Asam lemak
RIWAYAT HIDUP
Penulis lahir di Kota Bengkulu pada tanggal 20 Juni 1987. Penulis merupakan anak pertama dari tiga bersaudara dari pasangan Bapak Ir. Susdy Matamien Nawi dan Ibu Hartini. Pendidikan sarjana ditempuh di Program Studi Produksi Ternak Fakultas Peternakan, Universitas Diponegoro Semarang, lulus pada tahun 2009. Pada tahun 2010, penulis diterima di Program Studi Biologi Reproduksi pada Program Pascasarjana Institut Pertanian Bogor dan sekarang masih tercatat sebagai mahasiswa Pascasarjana Institut Pertanian Bogor.
Karya ilmiah yang berjudul Suplementasi Trehalosa dan Rafinosa pada Pengencer Tris Soya dan Tris Kuning Telur dalam Preservasi Semen Cair Kambing Peranakan Etawah (PE) telah diajukan pada Jurnal Veteriner, Fakultas Kedokteran Hewan Universitas Udayana, Bali. Karya ilmiah tersebut merupakan bagian dari program S-2 penulis.
ORIZA SAVITRI ARIANTIE. Kriopreservasi Semen Kambing Peranakan Etawah (PE) Menggunakan Pengencer Tris-kuning telur dan Tris-soya dengan Modifikasi Karbohidrat dan Krioprotektan Berbeda. Dibimbing oleh TUTY LASWARDI YUSUF dan DONDIN SAJUTHI.
Salah satu upaya perbaikan mutu genetik ternak kambing di Indonesia dilakukan melalui pemanfaatan teknologi Inseminasi Buatan (IB). Teknologi IB pada ternak kambing masih kurang diaplikasikan secara luas. Hal ini terkait berbagai kendala, salah satunya adalah kualitas semen beku yang dihasilkan. Kualitas semen beku ditentukan oleh berbagai faktor diantaranya teknik pembekuan, jenis pengencer, jenis dan konsentrasi krioprotektan yang digunakan. Saat ini semen kambing telah diproduksi oleh beberapa balai inseminasi buatan menggunakan pengencer Tris-kuning telur (TKT). Asal kuning telur diketahui adalah dari hewan yang memungkinkan dapat menstransfer bibit penyakit yang dapat memengaruhi kualitas spermatozoa. Oleh karena itu dicari alternatif pengganti kuning telur, yakni soya yang berasal dari tumbuhan. Untuk preservasi semen kambing, informasi mengenai pengencer yang mengandung ekstrak kacang kedelai belum banyak diketahui. Penggunaan disakarida (trehalosa) dan trisakarida (rafinosa) pada pengencer semen beberapa ternak diduga lebih mampu melindungi spermatozoa dalam proses pembekuan. Selain itu penambahan krioprotektan dimethilformamida (DMF) dapat digunakan sebagai krioprotektan alternatif dalam pembekuan semen kambing. Akan tetapi, mekanisme DMF untuk pembekuan semen kambing belum banyak dilaporkan. Penelitian ini dilaksanakan dua tahap: 1) preservasi semen cair mengunakan pengencer tris- kuning telur (TKT) dan tris-soya (TS) dengan suplementasi trehalosa dan rafinosa
