LARVA
Aedes aegypti
INSTAR III/IV
Laporan Penelitian ini ditulis sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar
SARJANA KEDOKTERAN
OLEH:
KIKI ROSMAYANTI
NIM: 1111103000052
PROGRAM STUDI PENDIDIKAN DOKTER
FAKULTAS KEDOKTERAN DAN ILMU KESEHATAN
UNIVERSITAS ISLAM NEGERI
SYARIF HIDAYATULLAH
JAKARTA
iv
KATA PENGANTAR
Bismillahirrahmanirrahim.
Puji syukur kami panjatkan kepada Allah SWT atas segala nikmat, rahmat
dan ridha-Nya sehingga penelitian ini dapat terselesaikan dengan judul “Uji Efektifitas Ekstrak Biji Sirsak (Annona muricata L) Sebagai Larvasida Pada Larva
Aedes aegyptiInstar III/IV”
Penulis menyadari bahwa tanpa bantuan dan bimbingan dari berbagai
pihak, sangatlah sulit untuk menyelesaikan penelitian ini. Oleh karena itu, dalam
kesempatan kali ini kami ingin menyampaikan penghargaan yang
setinggi-tingginya dan rasa terima kasih yang tak terhingga kepada:
1. Prof. Dr (hc). dr. M. K. Tadjudin, SpAnd, dr. H. Djauhari
Wijayakusumah, dan Dr. DelinaHasan, M.kes, Apt selaku Dekan dan
Wakil Dekan Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan Universitas
Islam Negeri Syarif Hidayatullah Jakarta.
2. dr. Witri Ardini, M.Gizi, SpGK selaku Ketua Program Studi
Pendidikan Dokter.
3. dr. H. M. Fachrizal Achmad, M.Biomed dan Nurlaely Mida R.,
M.Biomed, DMS selaku dosen pembimbing yang telah banyak
menyediakan waktu, tenaga, dan pikiran untuk mengarahkan kami
dalam penyusunan penelitian ini.
4. dr. Flori Ratna Sari, Ph.D selaku penanggung jawab riset PSPD 2011.
5. Kedua orang tua kami, H. Sapuri KS dan Hj. Asnawati yang selalu
mencurahkan kasih sayangnya, mendukung dalam suka dan duka, dan
selalu mendoakan yang terbaik untuk putrinya.
6. Nisrina Fatin Mardiyah, Yoga Eka Prayuda, Apriangga sastriawan,
Candra Ahmad Rosidi, Mohammed Shabat dan Mohammad Ardan
Makarim Corny yang telah membantu sehingga penelitian ini dapat
v
7. Teman-teman Program Studi Pendidikan Dokter angkatan 2011, dan
semua pihak yang telah membantu sehingga penelitian ini dapat
terselesaikan.
Kami sadari penyusunan laporan penelitian ini masih jauh dari
kesempurnaan. Kritik dan saran yang membangun dari semua pihak sangat saya
harapkan demi kesempurnaan penelitian ini.
Akhir kata Wallahul muwaffiq ila aqwamit thoriq
Wassalamu’alaikum Warahmatullahi Wabarakatuh
“...Allah akan mengangkat (derajat) orang-orang yang beriman diantara kamu dan orang-orang yang diberi ilmu beberapa derajat...(Q.S. Al Mujadilah:11)”
vi ABSTRAK
Kiki Rosmayanti. Program Studi Pedidikan Dokter. Uji Efektivitas Ekstrak Biji Sirsak (Annona muricata L) Sebagai Larvasida Pada Larva Aedes aegypti Instar III/IV).
Penyakit akibat virus dengue merupakan penyakit akibat perantara nyamuk (mosquito borne disease) dengan penyebaran virus tercepat di dunia pada tahun 2012. Nyamuk Aedes aegypti adalah vektor bagi virus tersebut. Hingga kini pengobatan infeksi dengue hanya bersifat suportif dan simtomatif saja. Tanaman sirsak diduga memiliki efek sebagai larvasida terhadap larva Aedes aegypti karena dianggap memiliki zat aktif berupa acetogenin yang dapat menghambat kerja enzim NADH pada mitokondria sehingga menyebabkan kematian larva. Tujuan penelitian ini adalah untuk mengetahui efek biji sirsak (Annona muricata L) sebagai larvasida pada larva Aedes aegypti instar III/IV. Penelitian ini bersifat eksperimental dengan metode the post test only controlled group design. Sampel diambil dengan teknik purposive samplingdengan 25 larva pada masing-masing kelompok. Hasil pada analisis probit didapatkan nilai LC50 sebesar 603 (0,060%) ppm dan LC99 adalah 3713 ppm (0,371%). Kruskal-Wallis didapatkan perbedaan yang signifikan dengan angka signifikansi = 0,000. Hasil Korelasi Pearson didapatkan nilai p = 0,000 dengan koefisien korelasi sebesar 0,919. Mann-Whitney menunjukkan bahwa semua konsentrasi uji berbeda secara signifikan terhadap kelompok kontrol dengan nilai p <0,05 yaitu konsentrasi 250 ppm (p= 0,005), 500 ppm (p= 0,005), 750 ppm (p=0,005), dan 1000 ppm (p=0,005). Kesimpulan ekstrak biji sirsak memiliki efek larvasida terhadap larva Aedes aegypti instar III atau IV pada LC50 603 ppm (0,060%).
Kata kunci : Annona muricata L, Aedes aegypti, larvasida, dengue
ABSTRACT
Kiki Rosmayanti. Medical Education Study Programme. Effect of Annona muricata L Extract as Lavarcide on Aedes aegyptiLarvae Instar III/ IV.
Disease caused by dengue virus, with Aedes aegyptias its vector, is one of the leading mosquito borne diseases with highest rate of deploymen in the world in 2012. Unfortunately, advanced development of dengue infection medication is only capable of treating either supportively or symptomatically. Annona muricata L, especially its seed part, is thought to have lavarcide effect to Aedes aegypti larvae instar III/ IV. This is an experimental study with post test only controlled group design using purposive sampling with 25 larvae each group. The result of probit analysis shows LC50 value of 603 (0.060%) ppm and LC99 value of 3713
vii
(p=0.005) – differ significantly with that of control with p < 0.05. This study concludes that Annona muricata L extract has lavarcide effect to Aedes aegypti larvae instar III/ IV on LC50 603 ppm (0.060%=).
viii DAFTAR ISI
LEMBAR PERNYATAAN KEASLIAN KARYA ... i
LEMBAR PENGESAHAN PEMBIMBING ... Error! Bookmark not defined. PENGESAHAN PANITIA UJIAN... Error! Bookmark not defined. KATA PENGANTAR ... iv
1.4 Tujuan Penelitian ... 4
1.5 Manfaat Penelitian ... 5
BAB 2 TINJAUAN PUSTAKA ... 6
2.1 Aedes aegypti ... 6
2.1.1 Perilaku dan Distribusi Aedes aegypti ... 6
2.1.2 Habitat ... 7
2.1.3 Klasifikasi ... 7
2.1.4 Morfologi Aedes aegypti ... 8
2.1.5 Siklus Hidup Nyamuk Aedes aegypti ... 9
2.2 Sirsak (Annona muricata L) ... 13
2.5 Definisi Operasional ... 20
ix
3.1 Desain Penelitian ... 22
3.2 Tempat dan waktu penelitian ... 22
3.3 Populasi dan Sampel ... 23
3.3.1 Populasi penelitian ... 23
3.3.2 Sampel... 23
3.4. Rancangan Penelitian ... 25
3.5. Alat dan Bahan ... 26
3.6. Cara Kerja ... 26
3.6.1 Pembuatan Ekstrak Biji Sirsak... 26
3.6.2 Pembuatan Larutan Stok ... 27
3.6.3 Pembuatan Larutan Perlakuan ... 27
3.6.4 Pembagian Kelompok Uji ... 29
3.6.5 Penetasan telur ... 29
3.6.6 Pemindahan Larva pada Gelas Perlakuan ... 29
3.6.7 Pemeliharaan Larva sebagai Bahan Uji ... 30
3.6.8 Pemilihan Larva ... 30
3.6.9 Pembuangan Limbah penelitian ... 30
3.7 Managemen Data ... 30
3.8 Analisis Data ... 31
BAB 4 HASIL PENELITIAN DAN PEMBAHASAN ... 32
x
DAFTAR TABEL
Tabel 2.1 Perbandingan Panjang Larva ... 12
Tabel 2.2 Kandungan Makronutrien Biji Sirsak ... 18
Tabel 2.3 Kandungan Mikronutrien Biji Sirsak ... 18
Tabel 2.4 Kandungan Mikronutrien dalam ppm ... 18
Tabel 3.1 Perhitungan Larutan Perlakuan ... 28
Tabel 4.1 Jumlah Mortalitas Larva Aedes aegypti pada Berbagai Konsentrasi Ekstrak Biji Sirsak setelah 24 Jam pertama ... 32
Tabel 4.2 Hasl Uji Distribusi Data ... 33
Tabel 4.3 Hasil Uji Variasi Data ... 34
Tabel 4.4 Hasil Uji Kruskal-wallis... 34
Tabel 4.5 Hasil Uji Mann-Whitney ... 35
Tabel 4.6 Hasil Analisis Probit ... 36
Tabel 4.7 Hasil Uji Korelasi Pearson ... 37
DAFTAR GRAFIK Grafik 4.1 Rerata Mortalitas Larva Aedes aegypti ... 33
DAFTAR GAMBAR Gambar 2.1 Toraks pada Nyamuk Aedes sp. Betina Dewasa ... 9
Gambar 2.2 Nyamuk Dewasa Aedes aegypti ... 9
Gambar 2.3 Telur Aedes aegypti ... 10
Gambar 2.4 Telur Aedes aegypi Usia 2 Minggu Setelah Ovitrap... 10
Gambar 2.5 Larva Aedes aegypti. ... 11
Gambar 2.6 Abdomean Larva Aedes aegypti Instar I-IV ... 12
Gambar 2.7 Pupa Aedes aegypti... 13
xi
Gambar 2.9 Buah Sirsak ... 15
Gambar 2.10 Biji Sirsak ... 16
Gambar 2.11 Acetogenin ... 17
Gambar 2.12 Struktur Kimia Annonacin ... 17
DAFTAR LAMPIRAN Lampian Gambar Kegiatan ... 48
Lampian Surat Pembelian Telur Aedes aegypti ... 51
Lampian Surat Keterangan Ekstraksi ... 52
BAB I
PENDAHULUAN
1.1 Latar Belakang
Penyakit akibat virus dengue seperti demam dengue dan Demam
Berdarah Dengue (DBD) adalah Penyakit yang dihasilkan oleh penularan
vektor nyamuk atau Mosquito-borne diseases terbesar di dunia terutama
pada negara tropis dan negara berkembang.1 infeksi virus dengue ini ditularkan melalui gigitan nyamuk Aedes aegypti dan Aedes albopictus
sebagai vektor potensial.2 Menurut laporan World Health Organization
(WHO) lebih dari 70% populasi berisiko terinfeksi virus dengue berasal dari
Asia-Pasifik seperti Indonesia.2-3
Indonesia termasuk negara dengan endemisitas virus dengue
tertinggi setelah Brazil.2 Di Indonesia, pada tahun 2007 terdapat kejadian infeksi dengue tertinggi dengan 150.000 kasus dan lebih dari 25.000 kasus
berasal dari daerah urban seperti Jakarta dan jawa Barat. Dengan tingkat
kematian saat itu mencapai 1%.3 Lebih dari 60% penduduk tinggal di pulau jawa, daerah kejadian luar biasa infeksi dengue terjadi. Pada tahun 2012,
Indonesia memiliki kejadian 129.435 kasus infeksi dengue. Pola
epidemiologi infeksi dengue di Indonesia terus mengalami perubahan dari
tahun ke tahun dimana jumlah kasus memuncak setiap siklus 10 tahunan.
Pada tahun 1997, 2004 dan 2005 Departemen Kesehatan (Depkes)
melaporkan angka kematian dengue berurutan adalah 15,2 per 100.000 jiwa,
30 per 100.000 jiwa dan 13,7 per 100.000 jiwa.4 Sampai saat ini pengobatan akibat infeksi dengue hanya bersifat simtomatik dan supotif saja.5
Pencegahan perkembangan nyamuk menjadi sangat esensial untuk
menekan insiden infeksi dengue yang ditularkan melalui gigitan nyamuk
Aedes aegypti.2,3 Salah satu program dunia untuk menekan transmisi nyamuk adalah dengan pemberantasan larva.3,7 Larvasida sintetik merupakan cara yang paling umum untuk memutus rantai penularan virus
larvasida abate yang merupakan bahan dasar kimia sebagai salah satu cara
pemberantasan pertumbuhan jentik-jentik nyamuk. Namun, penggunaan
abate (temephos 1 %) secara terus-menerus dapat mencemarkan kondisi air,
terutama air minum. Bagaimanapun temephos tidak digunakan secara oral.
Selain itu, penggunaan larvasida sintetik yang rutin dapat menjadikan vektor
nyamuk semakin resisten. Resistensi vektor nyamuk terhadap temephos
telah ditemukan diberbagai negara seperti Brazil pada tahun 2001, Thailand
pada tahun 20058 dan beberapa daerah di Indonesia. Pada tahun 2001, Budi dalam penelitiannya yang berjudul Deteksi Dini Status Resistensi Nyamuk
Demam Berdarah dengue terhadap Insektisida Organofosfat di Daerah
Endemis di Yogyakarta dengan Uji Biokemis melaporkan kejadian resistensi
Anopheles sp. terhadap temephos di Yogjakarta. Di Palembang, Bandung,
Semarang dan juga Jakarta telah dilaporkan mengalami resistensi vektor
nyamuk terhadap themepos.9-11
Banyaknya efek negatif akibat larvasida sintetik membuat
penggunaan larvasida sintetik dibatasi, hal ini mendorong perkembangan
larvasida sebagai pemberantasan nyamuk sumber penyakit ke arah yang
lebih alami. Salah satunya dengan menggunakan biopestisida yang aman
bagi tubuh manusia, mudah didapat serta ramah lingkungan.6,11-12
Biji sirsak (Annona muricata L) memiliki senyawa aktif berupa
saponin, alkaloid, bullatacin, goniothalamin, sylvaticin, senyawa hasil
metabolik sekunder: golongan saponin alakaloid dan trierpenoids, annonin
IV dan squamosin yang termasuk golongan senyawa acetogenin.13-14 Semuanya berperan sebagai larvasida.13 Afirts dkk melaporkan pada studinya, bahwa ekstrak biji sirsak dapat bersifat sebagai agen laravasida
dengan konsentrasi letal (LC50) 244.27 ppm terhadap larva Aedes aegypti.13 Grzbowski dkk pada tahun 2012 melaporkan bahwa ekstrak biji sirsak dapat
bahwa biji sirsak memiliki efek larvasida pada nyamuk Anopheles sp. dan
Culex sp.14 Biji sirsak telah banyak diteliti tidak hanya sebagai larvasida, namun juga sebagai insektisida, akarisida, antiparasit dan antibakteri13 : Abdullah dkk pada homoptera dan carlos dkk pada serangga hama
Sitophilus zaemais.17-18 Senyawa aktif ini memiliki toksisitas yang cukup tinggi terhadap larva, senyawa acetogenin, annonacin dan squamosin serta
senyawa hasil metabolik sekunder: golongan saponin alkaloid dan
trierpenoids memiliki efek sitotoksik dan neurotoksik pada sel larva maupun
serangga sehingga menimbulkan kematian pada larva. Senyawa ini
menghambat kerja enzim Nikotinamida Adenosin Dinukleotida Hidrogen
(NADH) dengan sitokrom c- reduktase dan sitokrom komplek sub unit yang
berada dalam mitokondria larva atau serangga.14
Tingginya kasus infeksi dengue dan terbatasnya mengenai penelitian
pemanfaatan ekstrak biji sirsak (Annona muricata L) sebagai larvasida pada
larva Aedes aegypti yang dijadikan vektor virus dengue di Indonesia
menjadi alasan peneliti untuk melakukan peneltian dengan judul “Uji
Efektivitas Ekstrak Biji Sirsak (Annona muricata L) Sebagai Larvasida Pada
1.2 Rumusan Masalah
Berdasarkan uraian diatas, maka dapat dirumuskan masalah
penelitian sebagai berikut :
1. Apakah ekstrak biji sirsak (Annona muricata L) efektif dalam membunuh
larva Aedes aegypti pada instar III / IV?
2. Berapakah Lethal Concentration 50% (LC50) dan Lethal Concentration 99% (LC99) dari ekstrak biji sirsak yang mematikan larva Aedes aegypti dalam waktu 24 jam?
1.3 Hipotesis
Ekstrak biji sirsak (Annona muricata L) memiliki efek larvasida
terhadap larva Aedes aegypti pada instar III/IV.
1.4 Tujuan
1.4.1 Tujuan Umum
Untuk mengetahui efek larvasida ekstrak biji sirsak
(Annonamuricata L) terhadap larva Aedes aegypti.
.1.4.2 Tujuan Khusus
1. Berapakah Lethal Concentration 50% (LC50) dan Lethal
Concentration 99% (LC99) dari ekstrak biji sirsak yang dapat mematikan larva Aedes aegypti.
2. Untuk mengetahui perbedaan mortalitas larva Aedes aegypti
terhadap perbedaan konsentrasi ekstrak biji sirsak (Annona muricata
L).
3. Untuk mengetahui kekuatan hubungan antara konsentrasi ekstrak biji
1.5 Manfaat Penelitian
1.5.1 Aspek Teoritis
Memberikan bukti ilmiah tentang efek larvasida dari ekstrak biji
sirsak (Annonamuricata L) terhadap larva Aedes aegypti.
1.5.2 Aspek Aplikatif
a. Meningkatkan pemanfaatan biji sirsak untuk membunuh larva Aedes
agypti dengan harapan dapat membantu untuk menurunkan angka kejadian
penyakit akibat infeksi virus dengue yang ditransimisikan melalui nyamuk
tersebut.
b. Memberikan informasi ilmiah kepada masyarakat terkait manfaat biji
BAB II
TINJAUAN PUSTAKA
2.1 Aedes aegypti
2.1.1 Perilaku dan Dirtribusi Aedes aegypti.
Aedessp. ditemukan di negara-negara yang terletak antara 35° Lintang
Utara dan 35° Lintang Selatan pada temperatur udara paling rendah sekitar
10°C . Pada musim panas ditemukan di daerah sekitar 45° Lintang Selatan.
Biasanya spesies ini jarang ditemukan diketinggian lebih dari 1000 meter di
atas permukaan laut. Aedes aegypti memiliki sifat highly anthropophilic
yang artinya lebih menyukai menggigit manusia daripada binatang dan juga
bersifat endofilik, artinya lebih menyukai istirahat di dalam rumah.
Sedangkan Aedes albopictus merupakan nyamuk kebun (forest mosquito)
yang memperoleh makanan dengan cara mengigit dan menghisap darah
berbagai jenis binatang.19
Di Indonesia, Aedes sp. tersebar luas di seluruh wilayah di hampir
semua provinsi, umumnya di temukan di pemukiman yang padat penduduk.9
Aedes sp. adalah genus nyamuk yang awalnya ditemukan di daerah tropis,
namun kini telah mnyebar hingga ke semua benua kecuali Antartika. Genus
ini pertama kali diberi nama oleh Johann Wilhelm Meigen pada tahun 1818.
Aedes berasal dari bahasa Yunani yang berarti “tidak menyenangkan” atau
“najis”. Disebut demikian dikarenakan banyak penyakit yang disebarkan
oleh nyamuk jenis ini, diantaranya adalah demam dengue, DBD dan yellow
fever.1,20
Aedes sp. bersifat diurnal atau aktif pada pagi hingga siang hari.
Nyamuk dewasa betina mengisap darah vertebrata baik yang berdarah
dingin maupun panas. Darah yang dihisap nyamuk diperlukan tidak hanya
sebagai makanan melainkan sebagai sumber protein untuk mematangkan
telurnya. Sedangkan dewasa jantan tidak menghisap darah dan memperoleh
energi dari nektar bunga ataupun tumbuhan.21
Untuk mendapatkan inangnya, nyamuk aktif terbang pada pagi hari
2.1.2 Habitat
Nyamuk Aedes sp. terutama spesies aegypti akan berkeliaran ke
rumah-rumah, biasanya hinggap di benda-benda yang menggantung seperti
pakaian dan kelambu serta hinggap di tempat-tempat gelap. Nyamuk ini
mempunyai kebiasaan menggigit berulang (multiple bitters) yaitu mengigit
beberapa orang secara bergantian dalam waktu singkat. Baik nyamuk Aedes
sp. dan culex sp. memiliki kebiasaan mencari makan diantara sepanjang
kolom air, berbeda dengan Anopheles sp yang mencari makan di dasar air.21
Tempat perindukan utama Aedes sp. adalah air bersih yang tenang dan
di tempat gelap di daerah padat penduduk yang rumahnya saling dekat satu
sama lain.21 Suhu untuk perkembangbiakan nyamuk Aedes sp. berkisar antara 25°C-35°C. Larva akan mati pada suhu kurang dari 10°C atau lebih
dari 40°C. Nyamuk dapat berkembang pada pH antara 4-9. Nyamuk Aedes
sp. dapat hidup optimal di kelembapan udara berkisar 81,5-89,5%.22
2.1.3 Klasifikasi
Nyamuk Aedes sp. diperkirakan mencapai 950 spesies yang tersebar di
seluruh dunia.23
2.1.3.1 Taksonomi Aedes aegypti.24
Kingdom : Animalia
2.1.4 Morfologi Aedes sp.
Nyamuk Aedes sp. berukuran kecil dan halus (4-13 mm).
Bagian-bagian tubuhnya terdiri dari caput atau kepala, torak dan abdomen. Tubuh
nyamuk dewasa ini ramping dan disekujur badannya berwarna hitam dengan
bercak-bercak putih, nyamuk ini lebih kecil dari nyamuk rumah Culex
quinquefasciatus.
Di bagian caputnya terdapat probosis halus yang panjangnya melebihi
panjang kepala. Probosis ini berguna untuk menangkap makanan yang
dibutuhkan untuk kelangsungan hidup nyamuk. Pada nyamuk betina,
probosis ini digunakan untuk alat tusuk dan penghisap darah. Sedangkan,
pada nyamuk jantan, probosis ini digunakan sebagai penghisap cairan
tumbuh-tumbuhan, buah dan keringat. Di kiri dan di kanan probosis terdapat
sepasang antena yang terdiri dari 15 segmen. Antena pada nyamuk jantan
berambut lebih lebat dari pada nyamuk betina, rambut pada antena nyamuk
jantan disebut pulmose sedangkan pada nyamuk betina disebut pilose.25 Pada bagian torak terdapat mesonotum yang berbentuk lyra
(“Lyreform” atau lyre-shaped). Dibagian mesonotum ini terdapat scutellum
yang memiliki 3 lobus. Perbedaan antara A. aegypti dan A. albopcitus
teletak pada perbedaan mesonatumnya. Pada A. Albopictus mesonotumnya
terdapat gambaran garis putih yang memanjang dan hanya memiliki satu
garis yang luas di tengah-tengah toraknya, sedangkan A. Aegypti memiliki
dua garis pada toranya.24 Sayap nyamuk ini panjang dan langsing, mempunyai vena yang permukaanya ditutupi sisik sayap. Sisik sayap
Bagian abdomen dari tubuh nyamuk terdiri dari 10 segmen, 2 segmen
terakhir berubah menjadi alat kelamin. Ujung abdomen Aedes sp. lancip
disebut pointed.25
2.1.5 Siklus Hidup Nyamuk Aedes aegypti
Aedes sp. dan termasuk ordo diftera lainya, mengalami metamorfosis
lengkap. Siklus hidupnya terdiri dari telur, larva (jentik), pupa (kepompong)
dan nyamuk dewasa. Metamorfosis nyamuk Aedes aegypti mulai dari telur
sampai menjadi larva memakan waktu kurang lebih 2 hari, dari larva
menjadi pupa membutuhkan waktu 6-8 hari dan sampai menjadi nyamuk
dewasa selama 2 hari.23
Selama masa bertelur, seekor nyamuk betina mampu meletakan
100-400 butir telur. Telur-telur tersebut diletakkan di bagian yang berdekatan
dengan permukaan air. Telur diletakkan satu-persatu pada dinding.23
1. Stadium telur
Telur nyamuk Aedes sp. tidak memiliki frill atau floats,
bantuknya memanjang dan oval. Pada bagian luar cangkak telur ada
sedikit bentuk retikularis. Telur Aedes sp. pada kedua spesies Gambar 2.1 Toraks pada Nyamuk
Aedes sp. Betina Dewasa (modifikasi
dari WHO, 1995).
Sumber : Chooi Khim, 2005.
Gambar 2.2 Nyamuk Dewasa
Aedes aegypti.
memiliki rupa yang sama yakni hitam legam dan mengkilat. Pada
awalnya telur berwarna putih dan lembut ketika pertama kali
dikeluarkan oleh induknya. Namun, kemudian telur berubah menjadi
hitam dan sedikit keras. Sebelum telur matang, telur ini mengalami
pertambahan ukuran.21 Telur ini berukuran sekitar ± 0,8 mm. Telur akan menetas dalam kurun waktu 2 hari.23
2. Stadium larva
Telur menetas menjadi larva instar I dalam waktu 2 hari, setelah
itu larva akan mengalami 3 kali pergantian kulit (ecdysis)
berturut-turur menjadi larva instar II,III, dan larva instar IV.18 Proses dari larva instar I sampai ke instar IV membutuhkan waktu sekitar 10 hari.
Variasi waktu tergantung pada suhu dan diet larva. Setiap mengakhiri
instar dengan cara moult atau ecdysis. Salah satu tanda dari ecdysis
adalah munculnya pita-pita hitam di dadanya yang terbungkus sirkular
dan muncul rambut secara lateral di sepanjang kutikula . Ukuran larva
sekitar 0,5-1 cm2. Setiap instar memiliki ciri masing-masing,19,23,45 yaitu
a. Pada instar I ukuran larva berkisar 1 mm , duri-duri (spine) pada
dadanya belum begitu jelas dan corong pernapasan (siphon) belum
menghitam. Larva akan terus tumbuh menjadi 2 kali lipat panjang Gambar 2.3 Telur Aedes aegypti.
Sumber: Zettel, 2009.
Gambar 2.4 Telur Aedes aegypti
Usia 2 Minggu Setelah Ovitrap.
tubuh awal. Dibutuhkan waktu 1-2 hari unuk menjadi larva instar
I.
b. Pada instar II, kepala dan bagian terminal larva lebih besar dari
pada larva instar I, tubuh dan kepala semakin gelap dan lebih
panjang serta silindris, spine belum jelas dan siphon sudah
berwarna hitam. Dibutuhkan waktu 2-3 hari untuk mencapai instar
II.
c. Pada larva instar III, tampak larva lebih besar dan panjang dari
sebelumnya. Dibutuhkan waktu 2-3 hari untuk mencapai instar ini.
d. Pada instar IV terjadi pengembangan tunas imaginal dada dan
akumulasi lemak di tubuh larva sehingga tampak lebih besar dan
gemuk, pada fase ini terdapat struktur yang khas yakni adanya
rudiment of the pupal respiratory trumpets. Stadium ini sudah bisa
dibagi berdasarkan anatominya. Pada larva ini dibutuhkan waktu
2-3 hari.
Larva bergerak terutama dengan dua cara yakni dengan tersentak
oleh tubuhnya dan dengan mouth brushes.19 larva ini selalu bergerak aktif di dalam air. Gerakannya berulang-ulang dari bawah keatas
permukaan air untuk bernapas, kemudian turun kembali dan
seterusnya. Pada waktu istirahat, posisinya hampir tegak lurus dengan
permukaan air. biasanya berada disekitar dinding tempat
penampungan air. Setelah 6-8 hari larva atau jentik akan menjadi
pupa.19,23
Gambar 2.5 Larva Aedes aegypti.
Berdasarkan tabel diatas dapat disimpulkan bahwa total panjang
instar I berkisar 1,434-2,056 mm, instar II adalah 2,432- 3,438 mm,
instar III adalah 3,95-4,736 mm dan instar IV adalah 6,393-8,011
mm.
3. Stadium pupa
Saat fase ecdysis mendekati akhir, larva akan menjadi pupa. Pupa
merupakan stadium akhir. Bentuk pupa bengkok dan kepalanya besar.
Fase ini membutuhkan waktu sekitar 2-5 hari. Selama fase ini tidak
makan apapun. Didalam pupa terdapat kantung udara yang terletak
diantara bakal sayap nyamuk dewasa dan terdapat sepasang sayap
pengayuh yang saling menutupi sehingga memungkinkan pupa untuk
menyelam cepat dan mengadakan serangkaian jungkiran sebagai
reaksi terhadap rangsangan. Bentuknya seperti koma, gerakan lambat,
sering berada dipermukaan air. Ketika pertama kali muncul, pupa Gambar 2.6 Abdomen Larva Aedes aegypti Instar I-IV, Pembesaran 22x.
Sumber : Bar, anaya, 2013
Tabel 2.1 Perbadingan panjang larva.
berwarna putih tetapi dalam waktu yang singkat terjadi perubahan
pigmen. setelah 1-2 hari pupa akan menjadi nyamuk baru.8,19,23
2.2 Sirsak (Annona muricata L)
guanabana. Di Salvador dikenal sebagai guanaba, di Mexico sebagai zopote
de viejas atau cabeza de negro. Di Venezuela sebagai catoche, di Argentina
sebagai anona de puntitas ,di Brazil sebagai araticum do grande, graviola
atau jaca do para, dalam bahasa Ingrris dikenal sebagai soursop, Di Afrika
barat dan Vietnam Utara dikenal sebagai corossol epineux. Di Malaysia
dikenal sebagai durian belanda, sedangkan di Indonesia dikenal sebagai
sirsak atau nangka belanda.28
Tanaman ini dapat tumbuh pada daerah tropis dengan ketinggian
diatas 300 m di atas permukaan laut, tanaman ini dapat tumbuh pada suhu
15-30° C dengan kondisi tanah cukup dalam dan sedikit kering serta pH
6.0- 6.5.30-31
Sirsak banyak dikonsumsi di berbagai daerah, bisa dijadikan jelly
buah, penyusun minuman, es krim dan sirup.32 Selain itu, tanaman ini memiliki efek pengobatan dari hampir semua komonen dari tanaman sirsak,
Gambar 2.7 Pupa Aedes aegypti.
tanaman sirsak dapat bersifat sebagai antibakteri, antivirus dan properti
antiparasit.30 Ekstrak kulit batang dari Annona muricata diketahui dapat menghambat cytopathic effect dari HSV-1, sedangkan pada penelitian
terbaru melaporkan bahwa ekstrak metanol dari tanaman ini dapat
menghambat aktivitas Herpes Simplex Virus-2 (HSV-2). Kandungan
giganthalamicin dan gigantetrocin menunjukkan efek sitotoksik pada
karsinoma paru A 549, karsinoma payudara MCF-7 dan adenocarcinoma
human tumor cell line HT-29pada kolon.28 Ekstrak alkohol dari batang dan kulit kayunya dapat bersifat untuk mempercepat penyembuhan luka, esktrak
dari daun A. Muricata dengan aquades dapat mengobati jaringan pankreas
yang rusak akibat induksi oksidatif stres streptozotocon. Ekstrak etanol dan
metanol dari biji sirsak dapat bersifat larvasida.42-43 Ekstrak dari Annona muricata dengan metanol dan aquades juga dapat bersifat antibakteri
broadspectrum, sudah di coba pada beberapa jenis bakteri seperti
Staphylococcus aereus, Escherichia coli, Streptococcus pyogenes,
Salmonella typhymurim, Proteus vulgaris dan bakteri lainnya.33 Senyawa isoquinolinic alakaloid dan acetogenin pada tanaman ini memiliki efek
sitotoksik dan neurotoksik pada sel larva maupun serangga sehingga
menimbulkan kematian sel larva. Senyawa ini menghambat kerja enzim
NADH dengan sitokrom c-reduktase dan sitokrom kompleks sub unit I yang
berada dalam mitokondria larva atau serangga.28,32
2.2.2 Taksonomi Annona muricata L.34
2.2.3 Buah
Bentuk buah ini tidak teratur, namun umumnya sering berbentuk oval
atau berbentuk seperti hati dengan panjang buah 10-30 cm dan lebar sekitar
20 cm dengan beratnya mencapai 0,5- 10 kg. Kulitnya berduri kecil-kecil
dan berwarna hijau tua ketika masih mentah dan akan berubah menjadi hijau
kekuningan saat sudah matang. Daging buahnya mengandung
segmen-segmen yang berserat dan berair, dimana bentuk seratnya memanjang. Pada
bagian dalamnya terdapat 5-200 biji sirsak yang berukuran 1.25- 2cm.28,35
Gambar 2.9 Buah Sirsak.
Sumber: Mohamed, 2009
Gambar 2.8 Pohon Sirsak (Annona muricata L).
2.2.4 Daun
Daun sirsak memiliki panjang 7,6-15,2 cm dan lebar 2,5-7,6 cm,
tekstur kasar, berbentuk elips, mengkilap di bagian atas daun, ada stipula,
warna hijau pada atapnya, serat-serat yang mengarah lateral dan kuat,
baunya menyengat dan bertangkai pendek sekitar 3-10 mm.
2.2.5 Biji
Biji buah sirsak kaya akan lemak dan protein dan sedikit kandungan
toxicant (tanin, fitat dan sianida). Biji sirsak mengandung 22.10 %
pale-yellow oil dan 21.43% protein. Jumlah lemak yang tersaturasi berkisar
28.07% dan yang tidak tersaturasi adalah 71.83%. Biji ini tinggi akan
kandungan magnesium dan zinc daripada dagingnya.28
2.2.6 Acetogenin
Bahan kimia acetogenin dimiliki hampir oleh seluruh famili
Annonaceae, termasuk sirsak (Annona murcata L), telah banyak diketahui
bahwa molekul ini berperan sebagai larvasida. Tanaman jenis Annonaceae
yang paling berperan sebagai larvasida adalah Annona muricata dan Annona
squamosa. Acetogenin yang ditemukan pada A.muricata termasuk
annocatalin, annohexocin, annomonicin, annomontacin, annomuricatin,
annomuricin, annonacin, coronin, corossolin, corossolone, gigantetrocin,
giganthalamicin, nontanancin, muracin, muricatalin, muricin, robustosin, Gambar 2.10 Biji Sirsak.
solamin, squamocin, uvariamicin,. Dari semua varietas bioaktif tersebut
yang paling berpengaruh sebagai insektisida dan larvasida adalah
acetogenin, annonacin dan squamocin. Dari kesemua zat aktif, yang paling
berperan terhadap kematian larva Aedes aegypti adalah
annonacin.8Acetogenin dapat ditemukan pada daun, akar dan paling banyak terdapat pada bagian biji sirsak (Annona muricata L). Pada penelitian yang
dilakukan oleh Freddy pada tahun 200542 menunjukkan bahwa ektrak etanol dari biji sirsak (Annona muricata L) memiliki kadar annonacin yang paling
tinggi dibandingkan dengan pelarut yang lain seperti etil asetat. Cara kerja
acetogenin adalah dengan menghambat rantai pernapasan pada NADH
ubiquinone reduktase (complex I) yang menyebabkan penurunan kadar
adenosine triphosphat (ATP), menyebabkan secara langsung gangguan
transport elektron di mitokondria sehingga memacu apopotosis sel. Ekstrak
tanaman famili Annonaceous telah banyak diteliti sebagai insektisida dan
larvasida seperti Aedes aegypti dan lepidoptera larvae.8
Gambar 2.11 Struktur Kimia Acetogenin dari A. Muricata.
Sumber : Wele, 2004.
Gambar 2.12 Struktur Kimia Annonacin.
2.2.7 Komposisi Makronutrien dan Mikronutrein dalam Biji Sirsak
(A.muricata).
Kandungan Jumlah
Lemak 22.57 ± 0.2
Protein 27.34 ± 0.1
Karbohidrat 4.36 ± 0.1
Serat 43.44 ± 0.2
Kandungan Jumlah
Potassium 31.40 ± 0.1
Sodium 19.10 ± 0.2
Kalsium 00.2
Magnesium 53.30 ± 0.1
Kandungan Jumalh
Besi 63.20
Zinc 49.10
Copper 1.00
Tabel 2.2 Kandungan makronutrien biji sirsak (Annona muricataL) dalam %
Tabel 2.3 Kandungan mikronutrien biji sirsak (Annona muricataL)
Tabel 2.4: Kandungan mikronutrien
Sumber : Muharsini, 2006
Sumber : Muharsini, 2006
2.3 Kerangka Teori
Menghambat rantai pernapasan pada NADH ubiquinone reduktase (complex I )
Menurunkan kadar ATP di mitokondria larva
2.5Definisi Operasional Variabel
No Variabel Definisi
4 Volume air Volume air
Pipet tetes Ekor Numerik
6 Temperatur Suhu ruangan
BAB III
METODE PENELITIAN
3.1 Desain Penelitian
Desain penelitian ini adalah penelitian eksperimental karena larva Aedes
aegypti mendapat perlakuan langsung dengan dimasukan ke dalam larutan ekstrak
biji sirsak dengan berbagai konsentrasi. Rancangan penelitian ini adalah the post
test only controlled group design. Rancangan penelitian ini dipilih karena tidak
dilakukan pretest terhadap sampel sebelum perlakuan. Karena telah dilakukan
randomisasi baik pada kelompok eksperimen maupun kelompok kontrol.
3.2 Tempat dan Waktu Penelitian:
3.2.1 Determinasi
Biji sirsak yang telah dibeli dari Balai Penelitian Tanaman Rempah
dan Obat (BALITRO) Bogor kemudian dideterminasi di Pusat Konservasi
Tumbuhan – Kebun Raya Bogor pada tanggal 18 Maret 2014 untuk memastikan bahwa jenis bahan yang didapat merupakan biji sirsak (Annona
muricata L).
3.2.2 Ekstraksi
Bahan yang sudah dideterminasi kemudian diekstraksi di BALITRO
pada tanggal 29 Maret 2014. Ekstraksi bahan uji dilakukan oleh rekan
peneliti dan peneliti.
3.2.3 Pengenceran Ekstrak
Bahan yang sudah diekstraksi kemudian diencerkan di Laboratorium
Biokimia Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan Universitas Islam Negri
3.2.4 Perkembangbiakan Larva
Telur Aedes aegypti diperoleh dari Balai Besar Pengembangan dan
Penelitian Vektor Reservoir Penyakit (B2P2VRP), Salatiga. Menurut WHO
pemilihan tempat perkembangbiakan larva didasarkan pada tempat habitat
dan lingkungan larva. Untuk menyesuaikan dengan kondisi alam bebas
dimana larva biasa hidup, maka telur dikembangbiakan untuk menjadi larva
di ruangan khusus milik peneliti di daerah Pondok Hijau, Ciputat dengan
mengondisikan suhu ruangan dengan Air conditioner portable.40
3.3 Populasi dan Sampel Penelitian
3.3.1 Populasi Penelitian
Populasi penelitian adalah larva Aedes aegypti dengan intstar III atau
IV yang didapat dari penetasan telur yang dikembangkan. Pertimbangan
penggunaan Larva instar III atau IV Aedes aegypti berdasarkan Departemen
Kesehatan R1 tahun 1987 karena relatif stabil terhadap pengaruh
eksternal.13
3.3.1 Sampel
a. Kriteria Inklusi
1. Larva Aedes aegypti
2. Larva Aedes aegypti yang telah mencapai instar III atau IV
2. Larva Hidup
b. Kriteria Eksklusi
1. Larva Aedes aegypti instar I dan II
2. Larva mati sebelum diberikan perlakuan
c. Besar Sampel
(t-1) (r-1) > 15 Keterangan :
n = besar sampel
t = jumlah kelompok perlakuan
(n-1)(t-1) ≥ 15 (n-1)(6-1) ≥ 15 5n – 5 ≥ 15 n ≥ 20 n ≥ 4
Jadi, besar sampel minimal yang digunakan sebanyak 4 ekor
larva. Di dalam penelitian ini digunakan sebanyak 25 larva
berdasarkan rekomendasi WHO tahun 2005. 40 Larva dimasukkan dalam 6 kontainer. Tiap-tiap kontainer berisi 25 ekor larva.
Jumlah sampel yang diambil dikalikan jumlah replikasi tiap
konsentrasi yang diteliti.
Banyaknya replikasi masing-masing larva dapat menggunakan
rumus berikut
Keterangan
t : jumlah perlakuan
r : jumlah replikasi
(6-1) (r-1) ≥ 15 5r-5 ≥ 15
jumlah larva per kontainer x jumlah replikasi x jumlah perlakuan
Maka, jumlah replikasi atau pengulangan perlakuan paling
sedikit dilakukan sebanyak 4 kali. Sehingga, jumlah seluruh besar
sampel adalah
25 x 4 x 6 = 600 larva.
d. Cara Pengambilan Sampel
Cara pengambilan sampel pada peneliitian ini dengan metode
purposive sampling terhadap larva Aedes aegypti sesuai kriteria
inklusi dan ekslusi.
3.5 Alat dan Bahan
3.5.1 Alat
Tabung reaksi, neraca timbang, aluminium foil, oven, rotatory
evaporator, corong buchner, kertas saring, batang pengaduk kaca, pipet,
gelas ukur 1000 cc, 30 gelas plastik (sebagai gelas perlakuan), gelas beker,
kertas label, botol 1,5 L, nampan plastik untuk medium pertumbuhan larva
dan saringan teh.
3.5.2 Bahan
Biji sirsak (Annona muricata L), etanol 96%, aquades, larva Aedes
aegypti instar III/IV dan makanan ikan (fish food) untuk makanan larva.
3.6 Cara Kerja
3.6.1 Pembuatan Ektrak Biji Sirsak (Annona muricata L)
Langkah pembuatan ekstrak biji sirsak sebagai berikut:
a. Biji sirsak yang diambil dan telah dideterminasi kemudian
dikeringkan selama + 7 hari dengan menggunakan oven pada suhu
40oC.
b. Biji sirsak yang sudah kering kemudian digiling dengan greender
dengan kehalusan 3mm.
c. Biji sirsak yang sudah halus tersebut direndam dalam pelarut
etanol 96% dengan perbandingan 1:3 (b/v)
d. Diaduk dengan mixer, selama 2-3 jam. Kemudian dibiarkan selama
24 jam dan disaring dengan corong buchner yang dialasi dengan
kertas saring.
e. Hasil dari penyaringan kemudian dimasukkan ke rotary evaporator
agar etanol menguap hingga dihasilkan ekstrak kental yang siap
Penggunaan etanol pada penelitian ini dikarenakan kandungan zat
aktif paling tinggi ditemukan pada ektrak etanol dibandingkan dengan
pelarut lain. Selain itu, etanol juga memiliki sifat toksisitas yang paling
rendah serta bersifat semipolar. 42-43
3.6.2 Pembuatan Larutan Stok
Satu part permillion (ppm) adalah konsentrasi 1 mg zat terlarut 1000
ml.8 Maka untuk membuat larutan stok sebesar 2000 ppm sebanyak 500 ml, dengan cara menimbang ekstrak 1000 mg lalu dilarutkan dalam 500 ml
aquades.
3.6.3 Pembuatan Larutan perlakuan
Dengan menggunakan rumus pengenceran: M1 x V1 = M2 x V2
M1 :Konsentrasi larutan stok
M2 : Konsentrasi larutan yang diinginkan
V1 : Volume larutan stok
Kelompok kontrol negatif (KN) M1 x V1 = M2 x V2
Semua kelompok dilarutkan dalam aquades hingga mencapai 100 ml.
Menurut Frank46, penentuan konsentrasi minimal didapatkan dari salah satu konsentrasi ektrak biji sirsak yang menunjukkan nilai LC10, atau LC50 atau LC90. Pada penelitian ini konsentrasi merupakan kelipatan yang diambil dari nilai LC50 pada penelitian sebelumnya yang dilakukan oleh Sri Tjahjani pada tahun 2000 dengan nilai LC50 503,230 ppm yang telah dibulatkan menjadi 500 ppm dan dibuat 2 kelompok di bawahnya dan 2 kelompok di
atasnya. Hal ini dimaksud agar konsentrasi uji merupakan konsentrasi
standar yang dapat membunuh larva dan masih dalam batas rekomendasi
3.6.4 Pembagian Kelompok Uji
Larutan yang telah disiapkan dengan berbagai konsentrasi ekstrak Biji
Sirsak (Annona muricata L) dipindahkan di dalam gelas plastik yang sudah
dipersiapkan kedalam 6 kelompok
a. Kelompok KN : ekstrak biji sirsak dengan konsentrasi 0 (0%)
b. Kelompok 1 : ekstrak biji sirsak dengan konsentrasi 100 ppm
(0,01%)
c. Kelompok 2 : ekstrak biji sirsak dengan konsentrasi 250 ppm
(0,025%)
d. Kelompok 3 : ekstrak biji sirsak dengan konsentrasi 500 ppm
(0,05%)
e. Kelompok 4 : ekstrak biji sirsak dengan konsentrasi 750 ppm
(0,075%)
f. Kelompok 5 : ekstrak biji sirsak dengan konsentrasi 1000 ppm
(0,1 %)
Percobaan di atas diulang sebanyak 5 kali.
3.6.5 Penetasan Telur
Telur Aedes aegypti direndam di nampan plastik yang sudah diberikan
aquades untuk tempat penetasan telur. Kemudian diletakkan di ruangan
khusus perkembangbiakan larva milik peneliti yang sudah diatur suhunya
dengan Air conditioner portable.
3.6.6 Pemindahan Larva pada Gelas Perlakuan
Telur yang telah menetas menjadi larva instar III dan IV kemudian
dipindahkan ke gelas yang berisi aquades, pindahkan 25 larva dengan
menggunakan pipet. Kemudian larva yang sudah dipindahkan ke gelas dan
sudah berisi ekstrak biji sirsak dengan masing-masing konsentrasi dengan
menggunakan saringan teh.40
3.6.7 Pemeliharaan Larva sebagai Bahan Uji
Telur dimasukkan ke dalam baki plastik yang berisi air untuk
dilakukan pembiakan. Jika telur sudah menetas menjadi larva, larva diberi
makan berupa fish food.40
3.6.8 Pemilihan Larva
Larva yang dipilih adalah larva instar III/IV yang ditandai dengan usia
larva 5-7 hari45 dan ukuran larva 4-8 mm.26
3.6.9 Pembuangan Limbah Penelitian
1. Limbah penelitian terutama larva yang telah digunakan setelah proses
penelitian kemudian dibunuh dengan menggunakan deterjen dan
ditunggu sampai larva benar-benar mati seluruhnya dengan tanda larva
tidak bergerak dengan rangsangan, kemudian dibuang didalam kloset.
2. Limbah alat-alat lepas pakai dibuang pada tempat sampah.
3.7 Managemen Data
3.7.1 Data yang Dikumpulkan
Data yang dikumpulkan merupakan data primer yakni diambil dari
jumlah larva yang mati setiap 24 jam pada setiap konsentrasi ekstrak biji
sirsak (Annona muricata L). Data yang dikumpulkan dicatat dalam bentuk
tabel.
3.7.2 Cara Pengumpulan Data
Data yang dikumpulkan adalah dengan cara menghitung jumlah larva
yang mati selama 24 jam pada masing-masing gelas perlakuan. Larva yang
mati merupakan larva yang tenggelam ke dasar kontainer, tidak bergerak,
meningggalkan larva lain yang dapat bergerak dengan jelas dan tidak
3.8. Analisa Data
Setelah semua data yang didapatkan dari jumlah larva Aedes aegypti
instar III/IV yang mati, selanjutnya dilakukan pengolahan dan analisis data
menggunakan software SPSS 16.0. Terdapat beberapa uji statistik yang
dilakukan, yaitu
1. Uji Analisis Varian (One Way ANOVA)
Digunakan untuk menemukan perbedaan jumlah kematian larva
Aedes aegypti antar kelompok uji.
2. Uji Least Significance Difference (LSD)
Digunakan untuk menemukan perbandingan pasangan mean yang
perbedaanya signifikan.
3. Kruskal-Wallis
Merupakan uji alternatif jika data tidak berdistribusi normal dan
homogen. Digunakan untuk menemukan perbandingan perbedaan
mean lebih dari dua kelompok.
4. Mann-Whitney
Merupakan uji alternatif jika data tidak berdistribusi normal dan
homogen. Digunakan untuk menemukan perbandingan perbedaan
mean antar kelompok.
5. Uji Korelasi Pearson
Digunakan untuk mengetahui korelasi pada masing-masing
variabel
6. Analisis Probit
Digunakan untuk menemukan efek mortalitas ekstrak biji sirsak
(Annona muricata L) terhadap larva Aedes aegypti yang dinyatakan
BAB IV
HASIL PENELITIAN DAN PEMBAHASAN
4.1 Hasil Penelitian
Jangka waktu penelitian Uji Efektivitas Ekstrak Biji Sirsak terhadap
Larva Aedes aegypti Instar III/ IV dilakukan selama 24 jam untuk melihat
efek larvasida. Didapatkan data primer sebagai berikut:
Konsentrasi (ppm)
Jumlah larva yang mati Rata-rata
Ulangan 1 2 3 4 5
rata-rata mortalitas larva menunjukan bahwa nilai tertinggi terdapat pada
konsentrasi 1000 ppm (0,1%) yaitu sebanyak 17,4 ekor (69,5%) sedangkan
nilai terendah terdapat pada konsentrasi 100 ppm (0,01%) dengan larva
yang mati sebanyak 3,8 ekor (15,2%).
Berdasarkan hasil uji pada tabel diatas, dibuat grafik untuk
Grafik 4.1 Rerata Mortalitas Larva Aedes aegypti.
Dari grafik di atas menunjukkan bahwa semakin tinggi konsentrasi
ekstrak biji sirsak maka semakin tinggi pula nilai mortalitas rerata larva
Aedes aegypti.
4.2 Analisis Data
4.2.1. Uji Distribusi Data
Sebelum melakukan uji One Way ANOVA, data yang didapat harus
memenuhi syarat yaitu data berdistribusi atau sebaran data normal. Dengan
menggunakan SPSS 16.0 , dilakukan uji normalitas Kolmogorov-Smirnov.
Pada tabel uji normalitas berikut yang sudah di transform dengan akar
kuadrat menunjukkan bahwa p > 0,05 pada seluruh konsentrasi coba, maka
dapat disimpulkan bahwa data berdistribusi normal.
Konsentrasi Kolmogorov-Smirnov
Statistic df P
value Trans2_Mortalitas 250/0,025% .249 5 .200
500/0,05% .341 5 .059 Tabel 4.2 : Hasil Uji Distribusi Data
Pada uji varian data dapat kita lihat pada tabel 4.3 yang menunjukkan nilai
p < 0,05. Dapat dismpulkan bahwa varian data tidak homogen.
Levene Statistic
df1 df2 p value
5.425 5 24 0.002
Karena data tidak homogen maka uji One Way ANOVA tidak dapat
digunakan. Sehingga dilakukan uji alternatif yakni Kurskal-Wallis.
4.2.3 Uji Kruskal-Wallis
Untuk mengetahui perbedaan jumlah mortalitas larva pada
masing-masing konsentrasi maka dilakukan uji Kruskal-Wallis. Hasil uji ini
ditunjukkan pada tabel 4.4 menunjukkan bahwa nilai signifikannya adalah
0,000 (p < 0,05) , maka dapat disimpulkan bahwa paling tidak terdapat
perbedaan mortalitas larva Aedes aegypti antara dua kelompok konsentrasi
uji.
Untuk mengetahui kelompok uji mana yang mempunyai perbedaan
secara signifikan maka dilakukan uji analsisis Pos Hoc. Alat untuk
melakukan analisis Pos Hoc untuk Kruskal-Wallis adalah uji
Mann-Whitney. Pada uji ini didapatkan data sebagai berikut: Tabel 4.3 Hasil Uji Variasi Data
Konsentrasi P value Kemaknaan
250 ppm (0,025%) dengan 1000 ppm (0,1%) .009 Signifikan
500 ppm (0,05%) dengan 750 ppm (0,075%) .036 Signifikan
500 ppm (0,05%) dengan 1000 ppm (0,1%) .036 Signifikan
750 ppm (0,075%) dengan 1000 ppm (0,1%) .917 Tidak signifikan
Pada tabel 4.5 menunjukkan bahwa kelompok yang memiliki perbedaan
jumlah mortalitas larva secara signifikan terdapat pada semua kelompok
perlakuan kecuali pada kelompok 0 ppm (0%) dengan 100 ppm (0,01%) dan 750
ppm (0,075%) dengan 1000 ppm (0,1%).
4.2.4 Analisis Probit
Untuk mengetahui konsentrasi yang dibutuhkan untuk mematikan
50% (LC50)dan 99% (LC99)populasi larva selama 24 jam, maka dilakukan uji analisis probit pada program SPSS 16.0. Dari hasil perhitungan analisis
No Point Exposure
Berdasarkan tabel diatas dapat disimpulkan bahwa nilai LC50 adalah 603 ppm (0,060%) danLC99 adalah 3713 ppm (0,371%).
4.2.5.Uji Korelasi Pearson
Berdasarkan hasil yang ditunjukkan pada tabel 4.2 bahwa data
berdistribusi normal, maka untuk menilai apakah terdapat korelasi antara
konsentrasi ekstrak terhadap jumlah kematian larva maka dilakukan uji
Korelasi Pearson. Hasil uji ini ditampilkan pada tabel berikut :
Trans2_mortalitas
Konsentrasi ekstrak R 0,919
P <0.001
N 30
Dari hasil di atas diperoleh nilai Sig 0,000 (p <0,001) yang
menunjukkan bahwa korelasi antara konsentrasi dan jumlah kematian larva
adalah bermakna. Nilai koefisien Korelasi Pearson sebesar 0,919
menunjukkan korelasi postif dengan kekuatan korelasi yang sangat kuat.
Hasil dari uji korelasi didapatkan koefisein korelasi (r) = 0,919, nilai p
<0,001 dan jumlah subjek 30.
4.3. Pembahasan
Pada penelitian ini dilakukan uji ekstrak biji sirsak (Annona muricata
L) sebagai efek larvasida terhadap larva Aedes aegypti dengan berbagai
konsentrasi uji. Ektrak biji sirsak ini didapatkan dengan metode maserasi
dengan menggunakan pelarut etanol. Penggunaan etanol pada penelitian ini
dikarenakan kandungan zat aktif paling tinggi diperoleh dari ektrak etanol
dibandingkan dengan pelarut lain. Selain itu, etanol juga memiliki sifat
toksisitas yang paling rendah serta bersifat semipolar sehingga dapat
menarik zat yang bersifat polar maupun nonpolar.42-43 Bahan aktif annonaceaous acetogenin yakni annonacin yang terkandung dalam biji
sirsak diduga memiliki potensi larvasida pada larva Aedes aegypti. Pada uji
coba ini digunakan larva Aedes aegypti instar III/IV karena larva pada
stadium ini memiliki ketahanan yang cukup baik terhadap lingkungan
eksternal.13 Selain itu, larva juga dikembangkan di dalam ruangan khusus dengan mengatur suhu sesuai suhu optimum bagi perkembangan larva yaitu
Pada penelitian ini, larva dikembangbiakan dengan suhu 30◦ C, suhu
ini masih dalam batas normal untuk perkembangbiakan larva, sehingga
dapat kita simpulkan bahwa kematian larva akibat suhu dapat disingkirkan.
Pada penelitian ini menggunakan 6 kelompok uji dengan konsentrasi
yang berbeda dengan masing-masing kelompok berisi 25 larva dalam 100
ml larutan. Kelompok KN (Kontrol Negatif) adalah 0 ppm (0%), kelompok
1 adalah 100 ppm (0,01%), kelompok 2 adalah 250 ppm (0,025%),
kelompok 3 adalah 500 ppm (0,05%), kelompok 4 adalah 750 ppm
(0,075%), dan kelompok 5 adalah 1000 ppm (0,1%. Konsentrasi ini diambil
berdasarkan kelipatan dari nilai LC50 503,230 ppm yang telah dilakukan oleh penelitian sebelumnya,16 hal ini dimaksud agar konsentrasi yang diuji merupakan konsentrasi standar yang dapat bersifat mematikan larva uji.
Pada kelompok 1 merupakan konsentrasi kontrol negatif yang hanya
mengandung 100 ml aquades dan tidak ada kandungan ektrak biji sirsak (0
ppm atau 0%), pada kelompok 1 pada perlakuan 24 jam tidak terdapat
kematian larva pada semua pengulangan. Hal ini menunjukkan bahwa tidak
terdapat efek larvasida dari aquades yang dijadikan medium plelarut dalam
penelitian ini.
Hasil penelitian pada tabel 4.1 menunjukkan bahwa pemberian ekstrak
biji sirsak mempunyai efek larvasida terhadap Aedes aegypti terutama pada
konsentrasi 250 ppm, 500 ppm, 750 ppm dan 1000 ppm dengan tingkat
mortalitas semakin tinggi pada konsentrasi ekstrak yang lebih tinggi (Grafik
4.1). Jumlah larva yang mati setelah pemberian ekstrak biji sirsak kemudian
diuji dengan menggunakan analisis probit untuk mengetahui nilai LC50 dan LC99. Hasil dari uji ini didapatkan nilai LC50 603 ppm yang artinya dibutuhkan konsentrasi ekstrak biji sirsak dengan nilai 603 ppm atau
0,060% untuk membunuh 50% populasi larva dan LC99 3713 ppm yang artinya dibutuhkan konsentrasi ekstrak biji sirsak sebesar 3713 ppm atau
0,371% untuk membunuh 99% populasi larva. Pada penelitian sebelumnya
nilai LC50 ini diduga diakibatkan oleh perbedaan ketahanan larva sebagai bahan uji. Selain itu, faktor-faktor dari tanaman juga dapat berpengaruh
seperti lokasi tumbuh asal tanaman, periode pemanenan, penyimpanan
bahan tumbuhan, kulalitas dan kuantitas zat aktif yang terkandung dalam
tanaman dan metode ekstraksi yang dilakukan.8
Untuk mengetahui perbedaan mortalitas larva terhadap perbedaan
pada masing-masing konsentrasi uji, maka dilakukan uji Kruskal-wallis
pada konsentrasi 0 ppm, 100 ppm, 250 ppm, 500 ppm, 750 ppm, dan 1000
ppm. Hasil uji ini menunjukkan bahwa dosis yang digunakan dalam
penelitian ini mempunyai besar rata-rata yang berbeda secara signifikan
dengan p =0,000.
Untuk melihat adanya dua kelompok yang memiliki perbedaan yang
signifikan maka dilakukanlah uji Mann-Whitney. Pada uji ini menunjukkan
bahwa semua kelompok uji berbeda secara signifikan terhadap kelompok
kontrol dengan nilai p <0,05 yaitu konsentrasi 250 ppm (p= 0,005), 500 ppm
(p= 0,005), 750 ppm (p=0,005), dan 1000 ppm (p=0,005). pada hasil uji ini
dapat disimpulkan bahwa konsentrasi minimal efektif yang dapat
membunuh larva adalah 250 ppm.
Kemudian, untuk mengetahui hubungan pada masing-masing variabel
yakni mortalitas larva dan konsentrasi ekstrak, maka dilakukan pengujian
dengan menggunakan metode Korelasi Pearson. Hasil pada uji ini
didapatkan bahwa terdapat hubungan yang bermakna dari perbedaan pada
setiap kelompok perlakuan yang telah dianalisis dengan metode
Kruskal-Wallis. Hasil dari Korelasi Pearson menunjukkan bahwa peningkatan
jumlah larva yang mati benar-benar diakibatkan oleh peningkatan
konsentrasi ekstrak biji sirsak (Annona muricata L) yang diberikan, hal ini
dikarenakan pada hasil uji menunjukkan nilai p = 0,000.
Biji sirsak (Annona muricata L) adalah tanaman golongan annonaceae
yang dari penelitian sebelumya diketahui memilii kandungan zat aktif yang
Mekanisme kerja zat aktif acetogenin dengan cara menghambat rantai
pernapasan pada NADH ubiquinone reduktase (complex 1) yang
menyebabkan penurunan ATP, menyebabkan secara langsung gangguan
transpor elektron di mitikondria sehingga memacu apoptosis sel. 8,12
4.4Keterbatasan Penelitian
1.Lokasi Penelitian
Adanya keterbatasan pengontrolan perkembangan larva maka
penelitian ini tidak dilakukan di laboratorium. Sehingga, protokol yang
dilakukan masih belum sempurna.
2.Fase Penelitian Larvasida
Fase penelitian ini merupakan fase II dan sebaiknya terlebih dahulu
diuji di laboratorium (fase I) sebelum dilakukan penelitian di lapangan
BAB V
PENUTUP
A. Kesimpulan
Berdasarkan hasil penelitian, dapat disimpulkan bahwa :
1. Ekstrak biji sirsak (Annona muricata L) memiliki efek larvasida
terhadap larva Aedes aegypti instar III atau IV.
2. Konsentrasi ekstrak biji sirsak (Annona muricata L) berpengaruh
terhadap mortalitas larva Aedes aegypti instar III selama 24 jam
dengan diperoleh nilai LC50 603 ppm atau 0,060% dan LC99 3713 ppm atau 0,371%.
B. Saran
1. Penelitian ini bisa dikembangkan dengan uji coba pada spesies larva
nyamuk lain.
2. Penelitian ini dapat dilanjutkan dengan menguji toksisitas pada ikan
dan manusia secara in vivo
3. Penelitian ini dapat dikembangkan dengan uji coba ekstrak dalam
bentuk sediaan zat ekstrak yang lain.
4. Penelitian selanjutnya dapat dilakukan mengenai senyawa-senyawa
lain yang terkandung dalam biji sirsak , selain yang sudah dijelaskan
DAFTAR PUSTAKA
1. Van den berg, Henk, dkk. Regional Framework for Surveillance and Control
of Invasive Mosquito vVctors and Re-emerging Vector-Borne Disease
2014-2020. WHO press. 2013: 9.
2. World Health Organization (WHO). Global Strategy for Dengue Prevention
and Control, 2012–2020. Geneva: WHO Press. 2012.
3. World Health Organization (WHO). Dengue Guidelines For Diagnosis,
Treatment, Prevention and control. Geneva : WHO press. 2009.
4. Setiati TE, Wangenaar JF, dkk. Changing Epidemiology of Dengue
Haemorrhagic Fever in Indonesia. [Artikel Ilmiah]. Indonesia: Dengue
Bulletin. 2006: 1-10.
5. Karyanti R, Mulya. Perubahan Epidemiologi Demam Berdarah Dengue di
Indonesia. [Artikel Karya Ilmiah]. Jakarta: Fakultas Kedokteran Universitas
Indonesia. 2009.
6. Ghosh, Anupam , dkk. Plant Extract as Potential Mosquito Larvicide. Indian
J Med Res 135. 2012 : 581-598.
7. Townson, H, dkk. Exploiting the Potential of Vector Control for Disease
Prevention. Bulletin of the World Health Organization. Geneva: WHO
press. 2005.
8. Aradilla, Sikka Ashry. Uji Efektivitas Larvasida Ekstrak Etanol daun
Mimba (Azadirachta indica) terhadap Larva Aedes aegypti. [Skripsi].
Semarang: Fakultas Kedokteran Universitas Diponogoro. 2011: 11.
9. Mulyaningsih, Budi. Deteksi Dini Status Resistensi Nyamuk Vektor
Daerah Endemis di Yogyakarta dengan Uji Biokemis. [Artikel Ilmiah].
Lembaga Penelitian UGM: Yogyakarta. 2001.
10. Ahmad, intan, dkk. Status Kerentanan Aedes aegypti (Diptera : Culicidae)
pada Tahun 2006-2007 terhadap Malation di Bandung, Jakarta, Suarabaya,
Palembang dan Palu. Sekolah Ilmu dan Teknologi Hayati.[Artikel Ilmiah].
Institut Teknologi Bandung. 2008.
11. Leatemia, Johanna Audrey. Development of a Botanical Insectide from
Ambon and Surrounding Area (Indonesia) for Local Use. [Tesis]. London:
The University of Brithis Columbia. 2003: 2.
12. Castillo-Sanchez, Enrique Luis, dkk. Secondary Metabolites of The
Annonaceae Solanaceae and Meliaceae Families Used as Biological Control
of Insect. Mexico: Tropical and Subtropical Agreoecosystems. 2010 :
445-452.
13. Komansilan, Alfarits, dkk. Isolation and Identification of Biolarvicide from
Soursop (Annona muricata Linn) Seeds to Mosquito (Aedes aegypti)
Larvae. International Journal of Engineering and Technology IJET-IJENS.
2012. Vol 12: 1.
14. Muharsini, sri, dkk. Uji Keefektifan Biji Sirsak (Annona muricata) dan Akar
Tuba (Deris elliptica) terhadap Larva Chrysomya bezziana secara In Vitro.
Bogor: Balai Penelitian Veteriner. 2006: 1.
15. A, Grzybowski, dkk. The Combined Action of Phytolarvacides for The
Control of Dengue Fever Vector, Aedes aegypti. 2013, No ISSN
0102-695X: 1.
16. Utami, B, T,Sri. Uji Toksisitas Ekstrak Biji Sirsak (Annona muricata Linn)
17. Augusto,
c
arlos, dkk. Insecticidal Activity of Annona muricata(Annonaceae) Seed Extract on Sitophilus zeamais (Coleoptera:
curculionidae). Bogota : Revista Colombiana de Entomologia. 2008. Vol
34: 1.
18. Abdullah, Fauziah, dkk. The Potential of Soursop Seed Extract Annona
muricata Linn as A Bipesticide Against Aphids Aphis Gossypii Glover
(Homoptera:Aphididae) on Chilly. Malaysia : Malaysian Journal of Science.
2003, Vol 22: 1.
19. Malar, Manorentitha, dkk. The Ecology and Biology of Aedes aegypti (L.)
and Aedes albopictus (Skuse) Diptera : Culcidae) and The Resistance Status
of Aedes albopictus (Field Strain) Against Organopshates in Penang,
Malaysia. [Tesis]. Malaysia. 2006.
20. Azani, Surya. Pemanfaatan Ekstrak Biji Bengkoang (Pachyrrhizas erosus)
sebagai Larvasida terhadap Larva nyamuk Aedes sp. [Skripsi]. Fakultas
Kedokteran Universitas Andalas. 2006: 1.
21. Supartha, Wayan I. Pengendalian Terpadu Vektor Virus Demam Berdarah
Dengue, Aedes aegypti (Linn.) dan Aedes albopictus (Skuse) (Diptera :
Culicidae). [Artikel Karya Ilmiah]. Denpasar: Dies Natalis Universitas
Udayana. 2008.
22. Yudhastuti, Ririh. dkk. Hubungan Kondisi Lingkungan, Kontainer, dan
Perilaku Masyarakat dengan keberadaan Jentik Nyamuk Aedes aegypti di
Daerah Endemis Demam Berdarah dengue Surabaya. [Artikel Karya
Ilmiah]. Surabaya: Kesehatan Lingkungan FKM Unair. 2005.
23. Adifian, dkk. Kemampuan Adaptasi Nyamuk Aedes aegypti dan Aedes
Ilmiah]. Bagian Kesehatan Lingkungan Fakultas Kesehatan Masyarakat.
Makasar: Universitas Hasanudin. 2013.
24. Chooi khim, Phon. Bionomics of Aedes aegypti and Aedes albopictus in
Relation to Dengue incidence on Penang Islang and The Application of
Sequential Sampling in the Control of Dengue Vectors. [Tesis]. Malaysia:
University Sains Malaysia. 2007: 8.
25. Rosdiana-safar. Entomologi Kedokteran Bagian Parasitologi. Surabaya:
Fakultas Kedokteran Universitas Airlaiga. 1996
26. Zettel, Catherine dkk. Yellow Fever Mosquito Aedes aegypti (Linnaeus)
(insecta :Diptera : culicidae). University of Florida : IFAS Extension. 2009.
EENY-434.
27. Bar, Ananya, dan Andrew, J. Morphology and Morphometry of Aedes
aegypti Larvae. Annual review and Research in Biology. 2013. ISSN:
2231-4776, Vol 3(1): 1-21.
28. Watson Ross, Ronald. dkk. Bioactive Foods in Promoting Health Fruits and
Vegetables. Oxford: Academic Press. 2009: 622.
29. Pinto, Q de. C. A. Annona Species. London : Cambridge University Press
2005 April, Vol 3 : 261.
30. Consolacion , Ragasa, dkk. Acetogenins from Annona muricata. Taipei:
National Research Institute of Chinese Medicine. 2012.
31. Southampton Center for undertilised Crops (ICUC). Annona (Annona
cherimola, A. Muricata, A. Reticulata, A. Senegalensis and A. Squamosa)
Field Manual for Extension Workers and Farmers. UK: Southampton Center
32. O, A fasakin, et al. Compositional Analyses of Seed of Soursop Annona
muricata L. as A Potential Animal Feed Supplement. Scientic Research and
Essay. 2008. vol.3 (10): 521-523.
33. S, Gajalakshmi, dkk. Phytochemical and Pharmacological Properties of
Annona muricata. India: International Journal of Pharmacy and
Pharmaceutical Science. 2012, vol 4 No ISSN-0975-1491.
34. Wagner, W.L, D.R. Harbest, dan D.H. Lorence. Flora of The Hawaiian
island website. 2011. Available from
http://botany.si.edu/pasificislandbiodiversity/hawaiianflora/index.htm
35. Kunz, Robert. Control of Post Harvest Disease (Botryodiplodia sp.) of
Rambutan and Annona species by Using a Bio Control Agent (Trichoderma
sp.). Sri Lanka: The International Centre for Underutilised Crops. 2007.
36. Mohamad Bte, Hasni Khaidatul. Physical Properties of Soursop (Annona
muricata) Powder Produced by Spray Drying. [Disertasi]. Malaysia:
University Malaysia Phahang. 2009.
37. Indriyani Putu, Luh Ni. The Growth Evaluation of Two Annona Species at
Seedling Phase. APRN Journal of Agricultural and Biological Science.
2012, Vol. 7, No 7. ISSN 1990-6145.
38. Zhou, Jiaju, dkk. Molecular Structures, Pharmacological Activities Natural
Sources and Application. London: Springer Heidelberg Dordercht. 2011,
Vol 4.
39. Sudigdo, S.,Ismael. Dasar-Dasar Metode Dalam Penelitian Klinis.[Artikel
Karya Ilmiah]. Jakarta: Bagian Ilmu Kesehatan Anak Fakultas Kedokteran
40. World Health Organization. Guidelines For Laboratory And Field Testing
Of Mosquito Larvacides. World Health Organization Communicable
Disease Control, Prevention, And Eradication WHO Pesticide Evaluation
Scheme. Geneva : WHO press. 2005: 10.
41. Agnetha, A.Y. Efek Ekstrak Bawang Putih (Allium sativum L.) Sebagai
Larvasida Nyamuk Aedes sp. [Skripsi]. Malang: Fakultas Kedokteran
Universitas Brawijaya. 2005.
42. Wurangian, L Freddy. Determination of Annonacyn Compound by High
Performance Liquid Chromotograhy on The Extract Annona muricata Linn
Seed for Pesticide Formula. Indonesia: Indo. J. Chem. 2005: 1.
43. Wele, Alassane, dkk. Annomuricatin C, an Novel Cyclohexapeptide from
The Seed of Annona muicata. Prancis: C.Rchimie . 2004, Vol 7: 982.
44. Urrahman-Atta. Studies in Natural Product Chemistry volume 7. USA:
Elsevier. 2005: 266.
45. Soegijanto, Soegeng. Demam Berdarah Dengue. [Artikel Karya Ilmiah].
Surabaya : Airlangga University Press. 2004.
46. C. Lu, Frank. Basic Toxcicology. Wasington: Hemisphere Publishing
Lampiran 1
Gambar Kegiatan
Proses penimbangan ekstrak biji sirsak (Annona muricata L)
Proses pengenceran ekstrak biji sirsak dengan menggunakan aquades
Larutan Stok 2000 ppm sebanyak 500 ml
Perendaman telur Aedes aegypti Larva Aedes aegypti pada tiap instar
Larva Aedes aegypti dengan panjang keseluruhan 6-7 mm
Larva Aedes aegypti Instar III/IV
Larva Aedes aegypti instar III/IV yang telah dimasukkan kedalam gelas
perlakuan pada masing-masing konsentrasi
