Undergraduate Theses dari JIPTUMMPP / 2006-02-28 10:16:04
TRANSFORMASI GENETIK PADA BEBERAPA JENIS ANGGREK
MELALUI Agrobacterium tumefaciens
Oleh: Hermida Achmad (01710005) AGRONOMI
Dibuat: 2006-02-28 , dengan 3 file(s).
Keywords: TRASNFORMASI, GENETIK, ANGGREK, Agrobacterium tumefaciens
Perkembangan teknologi in vitro telah sampai pada tahap introduksi gen-gen spesifik ke dalam tanaman dengan menggunakan Agrobacterium sebagai vektor. Meskipun anggrek merupakan tanaman monokotil, namun mempunyai peluang untuk dapat diinfeksi dengan Agrobacterium tumefaciens dengan catatan kondisi-kondisi teertentu terpenuhi. Penelitian ini bertujuan untuk mengkaji kemampuan agrobacterium tumefaciens dalam menginfeksi PLB dari beberapa jenis anggrek. Bakteri yang digunakan untuk infeksi adalah Agrobacterium tumefaciens galur EHA 105 (pCAMBIA 1303), yang mempunyai penanda resistensi terhadap kanamisin dan higromisin serta gen penanda -D-glucuronidase (GUS). PLB dari tiap jenis anggrek diterhadap enzim ko-kultivasi selama 3 hari pada medium Vacin and Went (VW) dengan tambahan 1 mg/L[100mM] Asetosiryngone. Setelah ko-kultivasi PLB dipindah pada media antibiotik I yang mengandung 250 mg/L cefotaxime selama 2 minggu. PLB yang resisten pada media antibiotik I dipindahkan pada media antibiotik II yang mengandung 100 mg/L cefotaxime selama 2 minggu. Beberapa PLB diambil untuk uji GUS dan sisanya di subkulturkan pada media regenerasi. Hasil penelitian menunjukkan bahwa PLB anggrek Dendrobium memiliki efisiensi transformasi paling tinggi di bandingka PLB anggrek Phalaenopsis dan Grammatophyllum. Hasil pengujian histokimia untuk gen GUS menunjukkan bahwa PLB dari anggrek Dendrobium, Phalaenopsis dan
Grammatophyllum cukup peka terhadap infeksi Agrobacterium tumefaciens. Hal ini di tunjukkan oleh adanya respon positif terhadap infeksi Agrobacterium t galur EHA 105
(pCAMBIA 1303), yang berupa spot biru pada PLB transformasi setelah direaksikan dengan X-gluc.
