Laporan Praktikum Hari/Tanggal : Jumat/ 19 Pebruari 2016
Biokimia Klinis Waktu : 13.00-16.00 WIB
PJP : dr. Husnawati, MSi Asisten : Hafiz Nalviando
Suharjono
Enni Prasetyoningtias
Morfologi Darah
(Penentuan Jumlah Eritrosit, Hemoglobin, dan Golongan Darah)
Kelompok 15
Neni Widowati G84130048
Widdya Kusuma K G84130008
M. Rifai Anugrah G84130016
Shinta Dewi N G84130025
DEPARTEMEN BIOKIMIA
FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM INSTITUT PERTANIAN BOGOR
1
PENDAHULUAN
Darah merupakan salah satu parameter dari status kesehatan hewan karena darah merupakan komponen yang mempunyai fungsi penting dalam pengaturan fisiologis tubuh. Fungsi darah secara umum berkaitan dengan transportasi komponen di dalam tubuh seperti nutrisi, oksigen, karbondioksida, metabolisme, hormon dan kelenjar endokrin, panas dan imun tubuh. Nutrisi yang diserap pada saluran pencernaan yang kemudian dibawa ke dalam darah guna memenuhi kebutuhan akan jaringan tubuh. Proses pembentukan sel-sel darah yang diproduksi setiap hari di dalam sumsum tulang memerlukan prekusor antara lain besi, mangan, kobalt, vitamin, asam amino dan hormon untuk mensintesis pembentukan sel darah (Ali et al .2013). Salah satu komponen dari darah adalah eritrosit. Rata-rata jumlah eritrosit pria adalah 29.8 ml/kg bb dan wanita 27 ml/kg bb. Jumlah hemoglobin dalam manusia berbeda-beda, hemoglobin pria adalah 13 g/100 mL sedangkan pada wanita 12 g/100 mL (Zarianis 2006).
Eritrosit atau sel darah merah adalah suatu sel yang berisi hemoglobin dan membawa oksigen dari paru-paru ke seluruh tubuh dan sel darah ini tidak memiliki inti sel dan mitokondria. Sel ini berbentuk lempeng bikonkaf yang meningkatkan area permukaan sel sehingga memudahkan difusi oksigen dan karbon dioksida. Bentuk ini dipertahankan oleh suatu sitoskeleton yang terdiri atas beberapa protein. Diameter eritrosit kira-kira 7,8 mikrometer, dengan ketebalan 2,5 mikrometer pada bagian yang paling tebal dan kurang lebih 1 mikrometer pada bagian tengah. Volume rata-rata eritrosit adalah 90 sampai 95 mikrometer kubik. Bentuk eritrosit dapat berubah-ubah ketika sel berjalan melewati kapiler. Selain mengangkut hemoglobin, eritrosit juga mempunyai fungsi lain. Contohnya, ia mengandung banyak sekali karbonik anhidrase, yang mengkatalisis reaksi antara karbon dioksida dan air (Amri 2007).
Hemoglobin adalah substansi yang berupa pigmen pembawa oksigen dalam eritrosit dan merupakan protein terkonjugasi yang terdiri atas sebuah protein disebut globin dan pigmen non protein heme yang mengandung besi. Satu molekul hemoglobin terdiri atas empat unit heme yang masing-masing berikatan dengan satu rantai polipeptida. Keempat rantai polipeptida tersebut disebut globin (Mulyani et al. 2012). Faktor-faktor yang dapat mempengaruhi konsentrasi hemoglobin yaitu umur, jenis kelamin, aktivitas otot, kondisi psikis, musim, tekanan udara dan kebiasaan hidup spesies. Eritrosit mengandung sekitar 270 juta molekul hemoglobin dimana tiap sel mengandung tepat 29 pg hemoglobin dengan masing-masing membawa empat kelompok heme (Amri 2007).
2
ditunjukkan oleh penurunan kadar hemoglobin, hematokrit dan hitung eritrosit. Tetapi yang paling lazim dipakai adalah kadar hemoglobin dan hematokrit (Arifin et al.2012).
Tujuan pratikum ini adalah menentukan jumlah eritrosit. Menentukan kadar hemoglobin dalam dalah. Menentukan golongan darah pada sample darah.
METODE
Praktikum ini dilakukan pada Jumat, 19 Pebruari 2016, pukul 13.00-16.00 WIB, bertempat di Laboratorium Pendidikan Biokimia, Departemen Biokimia, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, IPB.
Alat dan Bahan
Alat-alat yang digunakan dalam percobaan ini adalah pipet, tabung reaksi, spektrofotometer, pipet tetes, preparat, hemositometer, dan mikroskop. Bahan yang digunakan dalam percobaan ini adalah sampel darah, alkohol 70%, HCl, reagen hemoglobin, akuades, natrium sitrat 2.5%, serum anti A, dan serum anti B.
Prosedur
Darah segar untuk pemeriksaan. Ujung jari dibersihkan dengan alkohol. Jari ditusuk menggunakan lanset dengan arah tegak lurus pada garis sidik jari kulit. Tetesan darah pertama jangan digunakan untuk percobaan.
Kadar hemoglobin. Sebanyak 20 L darah dihisap menggunakan pipet. Setelah itu bagian ujung pipet diseka dan dimasukan kedalam tabung reaksi yang telah diisi dengan reagen hemoglobin sebanyak 5 mL. Blanko yang digunkan menggunakan akuades sebanyak 20 L dan dicampurkan menggunakan reagen hemoglobin sebanyak 5 mL. Sampel darah diukur nilai absorbansinya pada panjang gelombang 546 nm.
Kadar eritosit. Darah dihisap menggunakan pipet sampai tanda 0.5 pada pipet. Bagian ujung pipet diseka. Hisap natrium hidroksida 2.5% sampai tanda 101. Bagian ujung pipt ditutup dengan jari kemudian dikocok 15-30 detik sehingga darah dan natrium hidroksida tercampur. Cairan tersebut ditempatkan didalam celah hemositometer (3-4 tetes) dan ditutup dengan kaca penutup. Sampel tersebut diamati di mikroskop dengan lensa objektif kecil (10x) dan lensa objektif besar (40x). Eritrosit dihitung yang terdapat dalam 5 bidang yang tersusun dari 16 bidang kecil, yaitu dari kotak-kotak kecil pada setiap sudut dan pada pusak kotak besar.
3 terjadi gumpalan dikeduanya maka golongan darah tersebut AB, dan apabila tidak terjadi gumpalan dikeduanya maka golongan darh tersebut adalah O.
HASIL DAN PEMBAHASAN
Kadar hemoglobin ialah ukuran pigmen respiratorik dalam butiran-butiran darah merah. Kadar Hemoglobin (Hb merupakan parameter yang paling mudah digunakan dalam mementukan status anemia pada seseorang. Kadar hemoglobin dipengaruhi oleh konsumsi makanan yang kurang mengandung zat besi, aktifitas yang berlebihan, ataupun disebabkan oleh kecacingan. Konsentrasi hemoglobin darah diukur berdasarkan intensitas warnanya menggunakan fotometer dan dinyatakan dalam gram hemoglobin/seratus milliliter darah (g/100ml) atau gram/desiliter (g/dl) (Briawan 2011).
Terdapat berbagai cara menentukan kadar hemoglobin. Metode hemoglobin antara lain Tallquist yaitu menentukan kadar Hb tidak teliti, kesalahan antara 25 - 50%. Prinsip kerja cara ini adalah dengan membandingkan darah asli dengan suatu skala warna yang bertingkat-tingkat mulai dari warna merah muda sampai warna merah tua (mulai 10% sampai 100%). Metode selanjutnya yaitu Sahlih, Prinsip pemeriksaan Hb cara sahli yaitu hemoglobin oleh asam chlorida (0,1 N) diubah menjadi acid hematin yang warnanya sawo matang. Dengan air suling warna ini diencerkan sampai warnanya sama dengan warna standard pada hemometer. Kadar Hb dibaca pada tabung sahli (tabung pengencer). Tiap hemometer (sahli) terdiri dari alat pembanding warna, tabung pengencer, pipet darah (20µL), pipet pengencer darah (Dep Kes RI 1989).
Metode yang digunakan dalam pratikum ini adalah cyanmethemoglobin. Kadar hemoglobin dapat ditentukan dengan kolorimetrik seperti cianmethemoglobin (HiCN) dan cara oksihemoglobin (HbO2). Prinsip pemeriksaan hemoglobin dengan metode cyanmethemoglobin adalah hemoglobin darah diubah menjadi sianmethemoglobin (hemoglobin sianida) dalam larutan yang berisi kalium ferrisianida dan kalium sianida (Reagen Hb). Absorbansi larutan diukur pada gelombang 546 nm (filter hijau). Kelebihan dari metode ini adalah standar yang digunakan tetap stabil untuk waktu yang lama. Penentuan nilai hemoglobin tergantung pada kemampuan untuk mengabsorbsi cahaya pada ratio kuning hijau yang merupakan spectrum sinar tampak (Gandasubrata 2007). Kadar hemoglobin pada percobaan dapat dilihat pada Tabel 1.
Tabel 1 Kadar hemoglobin
Sampel Absorbansi (A) [Hb] (g/100 mL)
Blanko 0.000 0
Sampel 1 0.257 9.449
Sampel 2 0.281 10.332
4
Contoh perhitungan [Hb] [Hb] = 36.77 × Absorbansi
= 36.77 × 0.257
= 9.449 (dalam g/100mL)
Berdasarkan Tabel 1 kadar hemoglobin paling tinggi adalah sampel 3. Besarnya kadar hemoglobin berbanding lurus dengan nilai absorbansi yang diperoleh. Setiap masing-masing sampel, kadar hemoglobin lebih rendah dibandingakan dengan literatur yaitu hemoglobin pria adalah 13 g/100 mL sedangkan pada wanita 12 g/100 mL (Zarianis 2006). Hal ini dapat disebabkan oleh beberapa faktor yaitu kondisi probandus yang kurang sehat sehingga mempengaruhi kadar hemoglobin, atau reagen yang digunakan sudah tidak baik untuk digunakan. Faktor-faktor yang dapat mempengaruhi konsentrasi hemoglobin yaitu umur, jenis kelamin, aktivitas otot, kondisi psikis, musim, tekanan udara dan kebiasaan hidup spesies (Mulyani et al .2012).
Penentuan jumlah eritrosit dalam percobaan ini yaitu menggunakan metode hemasitometer Neubauer yaitu Isap darah dengan pipet toma (warna pengaduk di bagian gembung warna merah) sampai angka 0.5, kemudian dilanjutkan dengan menghisap larutan natrium nitrat sampai tanda 101. Hemasitometer diamati dengan mikroskop. Eritrosit dihitung pada lima ruang kecil (empat sudut dan tengah) (Siswanto 2011). Hasil penentuan jumlah eritrosit dapat dilihat pada Tabel 2. Berdasarkan tabel tersebut jumlah eritrosit adalah 580000 x 106 /Liter. Sedangkan jumlah eritrosit pada pria berkisar 4,7 juta - 6,1 juta sel/ l darah, sedangkan pada wanita berkisar 4,2 juta - 5,4 juta sel/ l darah (Simanjuntak 2003). Hasil tersebut lebih besar dibandingakan dengan literatur yang dipeoleh. Kesalah tersebut dapat disebabkan pada saat penghitungan sel eritrosit di hemasitometer.
Hemositometer adalah alat yang dipakai untuk menghitung jumlah sel darah dan terdiri dari kamar hitung, kaca penutupnya dan dua macam pipet. Mutu kamar hitung serta pipet-pipet harus memenuhi syarat-syarat ketelitian tertentu. Selain dengan menggunakan hemasitometer, metode lain yang digunakan untuk menghitung jumlah eritrosit adalah Cara Automatik BC-2600 Auto Analyzer Hematology. BC-BC-2600 adalah unit tunggal yang meliputi suatu penganalisis spesimen yang berisi perangkat keras untuk aspirasi dilusi dan menganalisis setiap spesimen darah secara keseluruhan serta bagian modul data yang meliputi komputer, monitor, keyboard, printer dan disk drives. Analyzer BC-2600 menggunakan mode sampler terbuka untuk menghisap sampel darah dari tabung EDTA yang kemudian dilarutkan dan dicampurkan sebelum pengukuran masing-masing parameter dilakukan (Gandasubrata 2007).
Tabel 2 Jumlah eritrosit
Sampel Jumlah eritrosit
5 Contoh perhitungan
jumlah sel yang dihitung
volume yang dihitung × Faktor Pengenceran 58
5×(0.2×0.2×0.1) × 200 x 10
6 /Liter 580000 x106 /Liter
Tabel 3 Penggolongan darah
Sampel Anti A Anti B Golongan Darah Gambar
Meja 5
- + B
- - O
Meja 6
+ - A
- + B
Meja 7
- - O
- + B
6
Golongan darah merupakan ciri khusus darah dari suatu individu karena adanya perbedaan jenis karbohidrat dan protein pada permukaan membran sel darah merah. Golongan darah ditentukan oleh jumlah zat (kemudian disebut antigen) yang terkandung di dalam sel darah. Golongan darah secara umum terbagi menjadi empat golongan darah yaitu A,B,O dan AB. Dalam darah terdapat antigen dan antibodi yang berada pada sel-sel darah merah dan berada dalam serum. Sel – sel yang hanya memiliki antigen A dan mempunyai anti-B didalam serum disebut golongan A. Sedangkan sel - sel yang hanya memiliki antigen B dan mempunyai anti-A dalam serum disebut golongan B. Sel – sel yang memiliki antigen A dan antigen B dan tidak mempunyai anti-A dan anti-B dalam serum disebut golongan AB. Sel-sel yang tidak memiliki antigen A dan antigen B, mempunyai anti-Adan anti-B dalam serum disebut golongan O (Azhar et al .2014).
Metode penentuan golongandarah dalam percobaan ini adalah menggunakan antibodi A dan antibodi B. Golongan darah ini dapat dibuktikan dengan menggunakan serum anti A dan serum anti B yang sifatnya sama dengan antibody pada plasma darah. Sebagai contoh, apabila darah yang diuji memberikan aglutinasi (penggumpalan) pada serum anti A, dan tidak memberikan aglutinasi pada serum anti B, maka dapat disimpulkan bahwa golongan darah tersebut adalah A. Hal ini disebabkan
cara kerja dari serum anti A adalah sama dengan agglutinin α, sehingga s
bertindak sebagai zat penggumpalan. Apabila agglutinin ini bertemu dengan antigen A yang justru memiliki agglutinin β, maka tidak lain akan terjadi penggumpalan. Berikut adalah tabel penentuan golongan darah berdasarkan aglutinasi (Azhar et al .2014).
.
SIMPULAN DAN SARAN
Simpulan
Kadar hemoglobin yang ditentukan dengan metode kalorimetri (cianmethemoglobin) pada setiap sampel memberikan nilai di bawah kadar hemoglobin pada literatur. Penentuan jumlah eritrosit menggunakan hemasitometer. Hasil menunjukan sampel memperoleh yang lebih tinggi dibandingkan dengan literatur. Penentuan golongan darah menggunakan anti A dan anti B, darah yang menggumpal pada bagian antibodi menunjukan darah bergolongan tersebut.
Saran
7 menggunakan alat elektronik/ digital. Menggunakan metode lain dalam penentuan jumlah eritrosit.
DAFTAR PUSTAKA
Ali AS, Ismoyowati, Diana I. 2013. Jumlah eritrosit, kadar hemoglobin dan hematokrit pada berbagai jenis itik lokal terhadap penambahan probiotik dalam ransum. J Ilmiah Peternakan. 1(3): 1001-1013
Amri E. 2007. Pengaruh konsumsi minuman bubuk kakao lindak bebas lemak terhadap sifat antioksidatif dan hemolisis eritrosit manusia [Skripsi]. Bogor (ID). Intstitut Pertanian Bogor
Arifin H, Nofiza Y, Elisma. 2012. Pengaruh pemberian jus buah naga
hylocereus undatus (haw.) britt&rose Terhadap jumlah hemoglobin, eritrosit dan hematokrit pada mencit putih betina. J. Sains dan Teknologi Farmasi. 17(2): 118-125
Azhar FN, Madona P, Tianur. 2014. Alat pembaca golongan darah dan Rhesus. J. Teknik elektro dan komputer. 2(2): 145-152
Briawan D. 2011. Faktor risiko anemia pada siswi peserta program suplementasi. J. Gizi dan Pangan. 6 (1): 74-83.
Depkes RI. 1989. Materia Medika Indonesia Jilid V. Jakarta (ID): Direktorat Jenderal Pengawasan Obat Dan Makanan.
Gandasoebrata. 2007. Penuntun Labiratorium Klinik. Jakarta (ID): Dian Rakyat
Mulyani GT, febrianto YH, Budipitijo T. 2012. Pengaruh penangkaran terhadap profil eritrosit lumba-lumba hidung botol dari perairan laut jawa. JSV. 30(1): 51-56
Simanjuntak MT.2003. Ketergantungan temperatur dan pH terhadap transpor sefaleksin ke dalam eritrosit manusia secara in vitro. J. Sains Kimia. 7(2): 44-50
Siswanto. 2011. Gambaran sel darah merah sapi bali (studi rumah potong). J. Veteriner Undayana. 3(2): 99-105
