SELEKSI IN VITRO KLON-KLON KENTANG HASIL
PERSILANGAN CV. ATLANTIK DAN CV. GRANOLA
UNTUK MENDAPATKAN CALON KULTIVAR
KENTANG UNGGUL
Oleh: Awang Maharijaya
A351050041
PROGRAM STUDI AGRONOMI
SEKOLAH PASCASARJANA
INSTITUT PERTANIAN BOGOR
PERNYATAAN MENGENAI TESIS
Saya menyatakan dengan sebenar-benarnya bahwa disertasi saya dengan judul Seleksi In Vitro Klon-Klon Kentang Hasil Persilangan cv. Atlantik dan cv. Granola Untuk Mendapatkan Calon Kultivar Kentang Unggul adalah benar-benar asli karya saya dengan arahan komisi pembimbing, dan bukan hasil jiplakan atau tiruan dari tulisan siapapun serta belum diajukan dalam bentuk apapun kepada Perguruan Tinggi mana pun.
Bogor, 24 Juni 2007
ABSTRAK
AWANG MAHARIJAYA. Seleksi In Vitro Klon-Klon Kentang Hasil Persilangan cv. Atlantik dan cv. Granola Untuk Mendapatkan Calon Kultivar Kentang Unggul. Dibimbing oleh AGUS PURWITO dan MUHAMMAD MACHMUD.
Pengembangan kentang di Indonesia dihadapkan pada kendala yaitu penyediaan bibit bermutu dalam jumlah cukup dan tepat kultivar, iklim kurang mendukung, serta gangguan hama dan penyakit yang berakibat pada rendahnya produksi kentang. Salah satu cara mengatasi permasalahan tersebut adalah merakit kultivar baru yang memiliki sifat unggul yaitu umur panen yang pendek, berdaya hasil tinggi, kandungan bahan kering tinggi, bentuk umbi yang baik, serta tahan terhadap penyakit utama kentang. Sifat-sifat tersebut terdapat pada kultivar yang adoptif di Indonesia yaitu kultivar Atlantik (2n=4X=48)dan Granola (2n=4X=48). Persilangan antara keduanya secara teoritis akan menghasilkan keragaman genetik yang tinggi untuk banyak karakter. Sebagai akibatnya kegiatan seleksi awal (screening) penting untuk dilakukan untuk mengurangi jumlah klon yang harus diseleksi di lapang.
Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui vigor, umur pengumbian dan produksi umbi mikro, tingkat ketahanan terhadap busuk lunak (E. carotovora pv. carotovora) dan layu bakteri (R. solanacearum) secara in vitro, dan mendapatkan calon klon-klon kentang unggul hasil seleksi in vitro untuk pengujian di lapangan. 24 klon hasil persilangan kultivar Atlantik dan Granola secara konvensional diuji vigor secara in vitro. Selanjutnya 12 klon yang memiliki vigor yang baik diuji produksi umbi mikro dan ketahanan penyakit layu bakteri (Ralstonia solanacearum) dan busuk lunak (Erwinia carotovora pv. carotovora) secara in vitro. Hasil penelitian menunjukkan bahwa terdapat perbedaan fenotipe dari klon-klon hasil persilangan kultivar Atlantik dan Granola. Beberapa klon-klon memiliki vigor, inisiasi umbi mikro, produksi umbi mikro dan ketahanan terhadap R. solanacearum dan E. carotovora pv. carotovora yang lebih baik dibandingkan tetua. Tidak adanya sifat-sifat yang berkorelasi terutama vigor, produksi dan ketahanan terhadap R. solanacearum dan E. carotovora pv. carotovora memungkinkan untuk klon yang memiliki sifat ketahanan terahadap penyakit dengan produksi yang tinggi dan karakteristik unggul lainnya.
between cv. Atlantic and cv. Granola to Obtain Putative Superior Potato Cultivars. Under supervisions of AGUS PURWITO and MUHAMMAD MACHMUD.
Development of potato in Indonesia facing many problems, such as supply sufficient of high quality seed, climatic condition, pests and diseases. Several bacterial pathogens can cause diseases of potato. Ralstonia solanacearum and Erwinia carotovora pv. carotovora are two of the world’s most important diseases of potato, especially in the tropics. One of the ways to solve the problems is breeding new potato cultivars having superior traits such as high yield, low water content, good tuber shape, tolerance to bacterial disesases. Theoritically, these traits are found in potato cv. Atlantic and cv. Granola, the most adopted cultivars in Indonesia. Both cv. Atlantic and cv. Granola are tetraploid (2n=4X=48). Due to large variations for a lot of characteristics of crosses between the tetraploid parentals, in vitro selection techniques are performed to speed up the selection process.
The experiments were aimed to obtain putative potato cultivars from crossing between cv. Atlantic (2n=4x=48) and cv. Granola (2n=4X=48). The conventional crossing technique was performed to generate botanical seeds (berries) from those cultivars. After that, in vitro selection technique was performed. Firstly, 24 clones from a single seed clonal progeny including cv. Atlantic and cv. Granola were evaluated for their vigors, then 12 selected clones from the vigor test were evaluated for their in vitro tuber production and tolerances to two bacterial diseases, namely bacterial wilt caused by Ralstonia solanacearum and soft rot caused by Erwinia carotovora pv. carotovora. All of the experiments were arranged in a Completely Randomized Design with a single factor. Results of the experiments showed that there are high diversities of phenotypes of the progenies. Some of the progenies showed better vigor, microtuber initiation, production of micro tuber, and resistant to both R. solanacearum and E. carotovora pv. carotovora than cv. Atlantic and cv. Granola. The lack of significant correlation between resistant to bacterial diseases and agronomic traits in the experiments suggested that it is possible to select clones which good resistances to the bacterial diseases, high yields, and superior tuber characteristics.
© Hak cipta milik Institut Pertanian Bogor Tahun 2007
Hak cipta dilindungi
Dilarang mengutip dan memperbanyak tanpa izin tertulis dari Institut Pertanian Bogor, sebagian atau seluruhnya dalam bentuk apapun, baik cetak, fotokopi,
SELEKSI IN VITRO KLON-KLON KENTANG HASIL
PERSILANGAN CV. ATLANTIK DAN CV. GRANOLA
UNTUK MENDAPATKAN CALON KULTIVAR
KENTANG UNGGUL
AWANG MAHARIJAYA
Tesis
salah satu syarat untuk memperoleh gelar Magister Sains pada
Program Studi Agronomi
SEKOLAH PASCASARJANA
INSTITUT PERTANIAN BOGOR
Persilangan cv. Atlantik dan cv. Granola untuk Mendapatkan Calon Kultivar Kentang Unggul Nama Mahasiswa : Awang Maharijaya
Nomor Pokok : A351050041 Program Studi : Agronomi
Menyetujui: Komisi Pembimbing
Dr. Ir. Agus Purwito, MSc.Agr Ketua
Dr. Ir. Muhammad Machmud, MSc, APU Anggota
Mengetahui, Ketua Program Studi Agronomi
Dr.Ir. Satriyas Ilyas, MSc
Dekan Sekolah Pascasarjana
Prof. Dr. Ir. Khairil Anwar Notodiputro
Alhamdulillah, segala puji dan syukur penulis panjatkan kehadirat Allah SWT atas segala rahmat dan karunia-Nya sehingga penulis dapat menyelesaikan tesis yang berjudul ”Seleksi In Vitro Klon-Klon Kentang Hasil Persilangan cv. Atlantik dan cv. Granola untuk Mendapatkan Calon Kultivar Kentang Unggul”. Penelitian ini merupakan pengembangan dari penelitian-penelitian yang telah banyak dilakukan pada tanaman kentang baik berupa metode maupun pengetahuan dalam persilangan dan seleksi in vitro kentang dengan harapan dari penelitian ini akan dihasilkan calon atau kandidat kultivar kentang unggul. Penulisan tesis ini merupakan salah satu syarat untuk memperoleh gelar Magister Sains pada Sekolah Pascasarjana Institut Pertanian Bogor.
Dalam melaksanakan penelitian dan penulisan tesis ini penulis banyak mendapatkan bimbingan dan bantuan dari berbagai pihak. Untuk itu penulis patut menyampaikan ucapan terima kasih yang sebesar-besarnya kepada Dr.Ir. Agus Purwito, MSc dan Dr.Ir. Muhammad Machmud, MSc, APU atas segala bimbingan dan pengarahan dalam perencanaan dan pelaksanaan penelitian serta penulisan tesis. Kepada Prof. G.A. Wattimena sebagai penguji luar komisi penulis ucapan terima kasih.
Ucapan terima kasih penulis disampaikan kepada Direktorat Jenderal Pendidikan Tinggi (DIKTI), Departemen Pendidikan Nasional yang telah memberikan beasiswa BPPS kepada penulis hingga penulis dapat menempuh dan menyelesaikan pendidikan S2. Demikian pula atas dukungan dana penelitian dari Lembaga Penelitian dan Pemberdayaan Masyarakat (LPPM) IPB yang telah mendanai sebagian dari penelitian yang dilakukan melalui Hibah Penelitian Dosen Muda IPB, serta khusus kepada Dr.Ir. Agus Purwito, MSc yang telah mengajak peneliti untuk bergabung dengan penelitian Hibah Bersaing. Ucapan terima kasih juga disampaikan kepada para senior di Bagian Bioteknologi Tanaman yang banyak memberikan dukungan dan pengetahuan bagi penulis, kepada teknisi dan laboran yang telah banyak membantu penulis dalam pelaksanaan penelitian di Laboratorium Kultur Jaringan, dan kepada rekan-rekan di Sekolah Pascasarjana khususnya Program Studi Agronomi atas segala dukungannya.
Terakhir penulis menyampaikan ucapan terima kasih yang tak putus-putusnya kepada orang tua penulis dan keluarga atas segala dukungan dan do’a selama ini khususnya selama penulis menempuh pendidikan dan menyelesaikan studi.
Penulis berharap semoga tesis ini bermanfaat bagi perkembangan ilmu pengetahuan dan pertanian pada khususnya.
Bogor, April 2007
Penulis dilahirkan di Blitar pada tanggal 8 September 1980 sebagai anak kedua dari bapak Noor Aminoto (Alm) dan ibu Umarjati. Pendidikan Dasar dan menengah ditempuh di kota kelahiran penulis. Pendidikan sarjana ditempuh oleh penulis di Program Studi Hortikultura, Jurusan Budidaya Pertanian, Fakultas Pertanian Institut Pertanian Bogor (IPB) pada tahun 1999 dan lulus pada tahun 2003. Setelah menamatkan pendidikan program sarjananya, penulis bekerja di laboratorium Kultur Jaringan Departemen Agronomi dan Hortikultura, Fakultas Pertanian IPB. Pada tahun 2005, penulis diterima sebagai staf pengajar di Departemen Agronomi dan Hortikultura, Fakultas Pertanian, IPB pada Bagian Bioteknologi Tanaman.
hal
Klon dan Kultivar Kentang ... 9
Penyakit Layu Bakteri... 11
Penyakit Busuk Lunak ... 13
Pemuliaan Tanaman Kentang ... 14
Seleksi Ketahanan Penyakit, Vigor dan Produksi Umbi Secara In Vitro... 18
METODOLOGI PENELITIAN ... 21
Tempat dan Waktu Penelitian ... 21
Alat dan Bahan... 21
Percobaan 2.b. Uji Ketahanan Penyakit pada Umbi ... 25
Percobaan 3. Uji In Vitro Ketahanan Terhadap Penyakit Bakteri ... 25
HASIL DAN PEMBAHASAN ... 28
Uji In Vitro Produksi Umbi... 35
Uji In Vitro Ketahanan terhadap Penyakit Bakteri ... 47
Uji Ketahanan Penyakit Busuk Lunak (E. carotovora pv. carotovora) pada Umbi Mikro ... 54
Korelasi Antar Karakter Klon-Klon Hasil Persilangan Berdasarkan Pengujian in Vitro... 56
KESIMPULAN DAN SARAN ... 59
DAFTAR PUSTAKA ... 60
No Teks hal Tabel 1. Pengelompokan tingkat ketahanan klon kentang terhadap
serangan bakteri layu R. solanacearum berdasarkan persentase kejadian penyakit (Thaveechai et al., 1989) ... 27
Tabel 2. Tinggi klon-klon kentang hasil persilangan cv. Atlantik dan cv. Granola yang ditumbuhkan secara in vitro pada media MS0 ... 31
Tabel 3. Jumlah daun klon-klon kentang hasil persilangan cv. Atlantik dan cv. Granola yang ditumbuhkan secara in vitro pada media MS0 ... 32
Tabel 4. Jumlah akar klon-klon kentang hasil persilangan cv. Atlantik dan cv. Granola yang ditumbuhkan secara in vitro pada media MS0 ... 34
Tabel 5. Hasil analisis korelasi antara tinggi tanaman, jumlah daun, dan jumlah akar pada klon-klon kentang hasil persilangan cv.
Atlantik dan cv. Granola berdasarkan pengujian vigor in vitro... 35
Tabel 6. Waktu inisiasi umbi dan selisih waktu antara waktu
pembentukan umbi mikro mencapai 100% dengan waktu inisiasi umbi klon-klon kentang hasil persilangan cv. Atlantik dan cv.
Granola... 36
Tabel 7. Jumlah umbi per tanaman dari klon-klon kentang hasil
persilangan cv. Atlantik dan cv. Granola berdasarkan pengujian in vitro... 40
Tabel 8. Bobot umbi dan bobot kering klon-klon kentang hasil
Tabel 9. Hasil produksi kentang cv. Atlantik dan cv. Granola oleh petani di Pengalengan Jawa Barat, Batur dan Tosari Jawa Timur
(Basuki et al., 2002). ... 44
Tabel 10. Diameter dan panjang umbi mikro klon-klon kentang hasil
persilangan cv. Atlantik dan cv. Granola berdasarkan hasil
pengujian in vitro... 47
Tabel 11. Periode inkubasi in vitro penyakit layu bakteri pada 12 klon kentang hasil persilangan konvensional antara cv. Atlantik dan cv. Granola ... 49
Tabel 12. Kejadian penyakit dan tingkat ketahanan klon-klon kentang
hasil persilangan cv. Atlantik dan cv. Granola terhadap penyakit layu bakteri (R. solanacearum) dan busuk lunak (E. carotovora pv. carotovora)... 51
Tabel 13. Tingkat ketahanan klon kentang terhadap serangan bakteri layu
(R. solanacearum)dan busuk lunak (E. carotovora pv.
carotovora) (modifikasi dari Thaveechai et al., 1989) ... 53
Tabel 14. Periode inkubasi, kejadian penyakit, dan tingkat ketahanan umbi
mikro kentang klon-klon hasil persilangan antara cv. Atlantik dan cv. Granola terhadap serangan bakteri layu (R.
solanacearum)dan busuk lunak (E. carotovora pv. carotovora) ... 56
Tabel 15. Matrik karakter klon-klon kentang hasil persilangan cv. Atlantik
No Teks hal Gambar 1. Diagram alur penelitian... 22
Gambar 2. Keragaman penampilan vigor in vitro klon-klon kentang hasil persilangan cv. Atlantik dan cv. Granola. (A) klon Atnola 1 memiliki pertumbuhan tinggi tanaman yang cepat, (B) klon Atnola 4 memiliki pertumbuhan yang cepat, kekar dan berdaun lebat, (C) Granola sebagai tetua, (D) klon Atnola 16 memiliki pertumbuhan yang lambat. ... 29
Gambar 3. Waktu inisiasi umbi klon-klon kentang hasil persilangan cv. Atlantik dan cv. Granola ... 37
Gambar 4. Selisih waktu antara waktu pembentukan umbi mikro mencapai 100% dengan waktu inisiasi umbi pada klon-klon kentang hasil persilangan cv. Atlantik dan cv. Granola ... 39
Gambar 5. Penampilan klon Atnola 12 (A) dan klon Atnola 24 (B) umur 10 minggu pada media pengumbian (MS + Alar 10 mg/L +
BAP 5 mg/L + air kelapa 150 ml/L + sukrosa 90 g/L) ... 41
Gambar 6. Keragaman penampilan umbi mikro cv. Atlantik, cv. Granola
dan klon-klon hasil silangan cv. Atlantik x cv. Granola ... 46
Gambar 7. Tanaman kentang yang terinfeksi bakteri patogen pada pengujian secara in vitro: (A) Ralstonia solanacearum, (B)
Erwinia carotovora pv. carotovora... 50
Gambar 9. Korelasi antara periode inkubasi dan kejadian penyakit busuk lunak pada klon-klon kentang hasil persilangan cv. Atlantik dan cv. Granola ... 52
Gambar 10. Penampilan umbi mikro kentang setelah diinfeksi E.
No Teks hal Lampiran 1. Komposisi media MS (Murashige & Skoog)... 68
Lampiran 2. Sidik ragam tinggi tanaman pada klon-klon kentang hasil
persilangan cv. Atlantik dan cv. Granola berdasarkan
pengujian in vitro... 69 Lampiran 3. Sidik ragam jumlah daun pada klon-klon kentang hasil
persilangan cv. Atlantik dan cv. Granola berdasarkan
pengujian in vitro... 69 Lampiran 4. Sidik ragam jumlah akar pada klon-klon kentang hasil
persilangan cv. Atlantik dan cv. Granola berdasarkan
pengujian in vitro... 70 Lampiran 5. Sidik ragam inisiasi umbi mikro pada klon-klon kentang
hasil persilangan cv. Atlantik dan cv. Granola berdasarkan
pengujian in vitro... 70 Lampiran 6. Sidik ragam keserempakan umbi mikro pada klon-klon
kentang hasil persilangan cv. Atlantik dan cv. Granola
berdasarkan pengujian in vitro... 70 Lampiran 7. Sidik ragam jumlah umbi mikro/tanaman pada klon-klon
kentang hasil persilangan cv. Atlantik dan cv. Granola
berdasarkan pengujian in vitro... 70 Lampiran 8. Sidik ragam bobot umbi mikro pada klon-klon kentang
hasil persilangan cv. Atlantik dan cv. Granola berdasarkan
pengujian in vitro... 71 Lampiran 9. Sidik ragam bobot kering umbi mikro pada klon-klon
kentang hasil persilangan cv. Atlantik dan cv. Granola
Lampiran 10. Sidik ragam panjang umbi mikro pada klon-klon kentang
hasil persilangan cv. Atlantik dan cv. Granola berdasarkan
pengujian in vitro... 71 Lampiran 11. Sidik ragam diameter umbi mikro pada klon-klon kentang
hasil persilangan cv. Atlantik dan cv. Granola berdasarkan
pengujian in vitro... 71 Lampiran 12. Sidik ragam periode inkubasi penyakit layu bakteri pada
klon-klon kentang hasil persilangan cv. Atlantik dan cv.
Granola berdasarkan pengujian in vitro... 71 Lampiran 13. Sidik ragam periode inkubasi penyakit busuk lunak pada
klon-klon kentang hasil persilangan cv. Atlantik dan cv.
Granola berdasarkan pengujian in vitro... 72 Lampiran 14. Hasil analisis korelasi periode inkubasi dan kejadian
penyakit penyakit layu bakteri dan busuk lunak pada klon-klon kentang hasil persilangan cv. Atlantik dan cv. Granola berdasarkan pengujian in vitro... 72 Lampiran 15. Hasil analisis korelasi pengumbian mikro dan ketahanan
penyakit layu bakteri dan busuk lunak pada klon-klon kentang hasil persilangan cv. Atlantik dan cv. Granola
Latar Belakang
Kentang merupakan bahan makanan yang digunakan sebagai pangan pokok bagi sebagian penduduk dunia. Di Indonesia, pemanfaatan kentang sebagai bahan pokok semakin tinggi setelah masyarakat mengetahui nilai gizi yang tinggi dari kentang (Rukmana, 1997). Perbandingan kalori dan gizi pada kentang cukup berimbang, sehingga sangat baik digunakan untuk diet keseimbangan (Burton, 1989). Selain sebagai makanan pokok, kentang dikonsumsi dalam bentuk non olahan maupun olahan atau untuk industri (Rukmana, 1997).
Salah satu cara mengatasi kerugian kentang akibat serangan Erwinia carotovora dan Ralstonia solanacearum adalah merakit kultivar yang tahan terhadap penyakit tersebut. Kultivar tersebut tetap harus memiliki pertumbuhan dan kualitas umbi yang baik. Secara umum sifat dari kultivar yang diharapkan menjadi kultivar unggul Indonesia diantaranya adalah memiliki umur panen yang pendek, berdaya hasil tinggi, kandungan bahan kering tinggi, bentuk umbi yang baik, serta tahan terhadap penyakit utama kentang (Wattimena, 2000). Dengan demikian untuk merakit kultivar kentang unggul diperlukan sumber tetua yang memiliki sifat-sifat tersebut.
adalah diploid (2n=2x=24) sehingga persilangan untuk mendapatkan sifat ketahanan perlu dilakukan pada tingkat diploid atau dihaploid. Teknik untuk menurunkan tingkat ploidi dapat dilakukan melalui pembentukan tanaman haploid, sedangkan untuk meningkatkan dapat digunakan teknik penggandaan kromosom atau melalui pembentukan diplogamet. Teknik semacam ini memerlukan keterampilan, tenaga dan biaya yang banyak. Oleh sebab itu, pada perkembangannya, perakitan kultivar baru kentang yang tahan penyakit dilakukan melalui hibridisasi somatik, fusi protoplas (Fock et al., 2000; 2001) atau pemanfaatan teknik-teknik rekayasa genetika. Namun demikian, teknik persilangan konvensional lebih diterima oleh sebagian masyarakat dan pemerintah terutama untuk pelepasan varietas.
persilangan diploid. Sebagai akibatnya kegiatan seleksi awal (screening) penting untuk dilakukan untuk mengurangi jumlah klon yang harus diseleksi di lapang.
Dalam program pemuliaan konvensional, kegiatan seleksi di lapang merupakan salah satu kegiatan utama yang membutuhkan curahan tenaga, waktu, dan dana yang besar. Pemanfaatan seleksi sifat tertentu pada kultur in vitro memiliki peluang untuk mempercepat kegiatan seleksi dan mengurangi kebutuhan tenaga dan dana. Pengujian dan seleksi in vitro memiliki kelebihan yaitu waktu relatif lebih singkat, biaya relatif lebih murah, tidak memerlukan lahan yang luas, tidak menimbulkan masalah pada lingkungan dan dapat dilakukan pada klon yang banyak dalam waktu yang singkat. Beberapa pengujian di lapang dan in vitro memiliki korelasi yang nyata. Pengujian yang telah dilakukan diantaranya pada ketahanan terhadap penyakit (Wattimena et al, 2001; Delfiani, 2003; Samanhudi, 2001) dan pengumbian (Lentini 1988; Alsadon, 1989; Gopal dan Minocha, 1998; Gopal, 2001; Tampubolon, 2002). Dengan demikian kombinasi dari persilangan konvensional dan seleksi in vitro diharapkan mampu menjadi alternatif tahapan awal yang baik dalam usaha mendapatkan kultivar unggul kentang.
Tujuan Penelitian
Tujuan dari penelitian ini adalah untuk:
1. mengetahui dan menyeleksi klon-klon kentang berdasarkan vigor dari hasil persilangan cv. Atlantik dan cv. Granola secara in vitro
3. mengetahui tingkat ketahanan klon-klon kentang hasil persilangan cv. Atlantik dan cv. Granola terhadap busuk lunak (E. carotovora pv. carotovora) dan layu bakteri (R. solanacearum) secara in vitro
4. mendapatkan calon klon-klon kentang unggul hasil seleksi in vitro untuk pengujian di lapangan.
Hipotesis
Hipotesis yang diajukan dalam penelitian ini adalah:
1. terdapat klon dengan vigor yang baik dari hasil seleksi in vitro terhadap klon-klon hasil persilangan cv. Atlantik dan cv. Granola secara konvensional
2. terdapat klon dengan umur pengumbian yang pendek dan produksi yang baik dari hasil seleksi in vitro terhadap klon-klon hasil persilangan cv. Atlantik dan cv. Granola secara konvensional
3. terdapat klon dengan tingkat ketahanan penyakit layu bakteri dan busuk lunak yang tinggi dari hasil seleksi in vitro terhadap klon-klon hasil persilangan cv. Atlantik dan cv. Granola secara konvensional
Botani Tanaman Kentang
Kentang (Solanum tuberosum L.) merupakan tanaman setahun (annual) yang berbentuk semak atau herba, dengan susunan utama terdiri atas stolon, umbi, batang, daun, bunga, buah dan biji, serta akar (Rukmana, 1997). Dalam sistematika tumbuhan, tanaman kentang diklasifikasikan ke dalam Kingdom Plantae, Divisi Spermatophyta, Subdivisi Angiospermae, Kelas Dicotyledoneae, Ordo Solanales, Famili Solanaceae, Genus Solanum, dan Spesies Solanum tuberosum (Rubatzky dan Yamaguchi, 1998).
Menurut Thomson dan Kelly (1957) tanaman kentang memiliki batang berwarna hijau dan ungu atau kemerahan apabila mengandung antosianin. Batang tanaman kentang memiliki dua tipe yaitu batang yang tumbuh di atas tanah (aerial) dan batang yang tumbuh di bawah tanah (underground). Batang yang tumbuh di bawah tanah terdiri dari stolon dan umbi. Batang di bawah tanah (stolon) memiliki fungsi serupa dengan batang di atas tanah, namun setiap stolon mengakhiri pertumbuhannya dengan bertambah besar atau membentuk umbi. Daun kentang merupakan daun majemuk dengan anak daun primer tersusun di kiri kanan tangkai dan membentuk delta sampai lonjong. Susunan daun primer diakhiri dengan daun tunggal pada ujung tangkai.
sehingga sebagian besar penyerbukan terjadi secara serbuk silang dengan perantara angin dan serangga (Sunarjono, 1975).
Kentang merupakan tanaman yang dipanen umbinya. Umbi kentang merupakan ujung stolon yang membesar dan merupakan organ penyimpanan karbohidrat yang tinggi (Burton, 1989). Stolon merupakan tunas lateral yang tumbuh dari ketiak daun di bawah permukaan tanah. Stolon tumbuh memanjang dan melengkung di bagian ujungnya, kemudian membesar atau membengkak untuk membentuk umbi sebagai tempat menyimpan cadangan makanan (Rukmana, 1997). Bentuk, ukuran dan jumlah mata umbi bervariasi pada setiap kultivar (Nonnecke, 1989)
Tanaman kentang berasal dari dataran tinggi Andes, Amerika Selatan (Hawkes, 1994; Rubatzky dan Yamaguchi, 1998). Menurut Rukmana (1997) kentang pertama kali ditanam di Indonesia pada tahun 1794 di Cisarua Bandung, dan mulai menyebar pada tahun 1811 di berbagai daerah di Indonesia terutama daerah-daerah pegunungan di Aceh, Tanah Karo, Padang, Bengkulu, Sumatera Selatan, Minahasa, Bali, Flores, Pengalengan, Lembang, Pacet, Wonosobo, Dieng, Tawangmangu, Batu dan Tengger.
Arti Penting Tanaman Kentang
Kentang merupakan komoditas pangan yang penting untuk dikembangkan, baik sebagai tanaman sayuran maupun tanaman sumber karbohidrat alternatif setelah gandum, jagung dan padi. Tanaman kentang merupakan komoditas yang penting bagi Indonesia karena: (1) merupakan tanaman yang mendatangkan sumber uang (cash crop), (2) komoditas ekspor non migas yang mendatangkan devisa bagi negara, (3) salah satu makanan cepat saji (fast food) di Indonesia pada saat ini dan (4) makanan bernilai gizi tinggi dan lengkap yang dapat digunakan sebagai pangan disamping beras (Wattimena, 1992).
1. Belum tersedia kultivar-kultivar standar yang sesuai dengan lingkungan tumbuh dan kebutuhan pasar.
2. Belum ada pengusaha/petani yang mengusahakan bibit kentang bermutu. Bibit kentang bermutu masih diimpor dari Belanda, Belgia dan Jerman.
3. Adanya beberapa penyakit yang belum dapat/sukar dikendalikan.
4. Ketersediaan teknik budidaya yang tepat untuk menjamin produksi dan kelestarian lahan usaha.
5. Teknologi pascapanen yang dapat memperpanjang masa simpan serta menjamin kualitas hasil.
6. Lahan usaha yang semakin menyempit karena bersaing dengan real estate dan vila-vila tempat peristirahatan.
Beberapa bakteri dapat menyebabkan penyakit pada kentang (Stead, 1999). Beberapa penyakit utama pada kentang yang sampai saat ini sukar dikendalikan diantaranya adalah (Phytopthora infestans), layu bakteri (Ralstonia solanacearum) dan busuk lunak (Erwinia carotovora pv. carotovora). Penyakit layu bakteri dan busuk lunak dapat menurunkan produksi kentang sampai 80 % (Wattimena, 1994).
Klon dan Kultivar Kentang
dilepaskan sedangkan kultivar merupakan nama lain dengan varietas, yaitu klon yang sudah dilepaskan dan diterima secara komersial (Chahal dan Gosal, 2006). Kultivar-kultivar kentang komersial yang ada saat ini berasal dari S. tuberosum subsp andigena, S. tuberosum subsp tuberosum, hibrida kedua spesies, atau hibrida kedua spesies dari spesies kentang lainnya. Solanum tuberosum subsp andigena berasal dari hibridisasi S. stenotonum (2n=2x) dengan S. sparsipilum (2n=2x) diikuti penggandaan kromosom secara alamiah. Sedangkan S. tuberosum subsp tuberosum berasal dari S. tuberosum subsp andigena yang telah beradaptasi pada lingkungan berhari panjang. Kentang yang sering ditanam merupakan tetraploid (2n=2x=48) (Hawkes, 1994).
Menurut Wattimena (1992), kultivar-kultivar kentang yang ditanam di Indonesia umumnya adalah kultivar impor dari Eropa yang telah beradaptasi dengan hari panjang. Di Indonesia, kebanyakan kultivar tersebut berumbi dan panen lebih awal akibat hari pendek. Kultivar yang bertahan cukup lama adalah kultivar Granola disamping kultivar baru yang diintroduksi khusus untuk kentang olahan, seperti Atlantik dan Bientje. Kultivar kentang yang saat ini banyak dibudidayakan adalah kultivar Atlantik dan kultivar Granola (Wattimena, 2002).
Kentang kultivar Atlantik dirakit pada tahun 1974 di Amerika Serikat sebagai hasil persilangan antara kultivar Wanseon dengan kultivar Venape. Keunggulan kultivar Atlantik adalah berumur sedang, memiliki umbi bulat dengan daging umbi berwarna putih, dan memiliki kandungan bahan kering yang tinggi. Kultivar Atlantik terhadap virus PVY dan PVX tetapi rentan terhadap serangan layu bakteri (Jossten, 1991).
Penyakit Layu Bakteri
Layu bakteri ditemukan secara luas di wilayah tropis dan subtropis, namun juga ditemukan pada daerah bersuhu dingin (Hayward et. al., 1998). Penyakit layu bakteri merupakan penyakit utama di kentang, tomat, terung, lada, jahe, cabai, kacang tanah, pisang dan tembakau baik di daerah tropis maupun di daerah sub tropis (Hayward, 1986). Pada 1991 dilaporkan bahwa inang layu bakteri telah mencakup 44 famili tanaman (Hayward, 1991), dan pada tahun 1994 meningkat menjadi 50 famili (Hayward, 1994). Layu bakteri pertama kali dilaporkan disebabkan oleh Pseudomonas solanacearum dan nama patogen terbaru adalah Ralstonia solanacearum (Kelman et al., 1994). Kerugian hasil tanaman akibat layu bakteri cukup tinggi. Layu bakteri bahkan dapat menurunkan produksi kentang sampai 80% (Wattimena, 2000).
(Ciampi et al., 1980; Semangun, 1989; Hayward, 1991). Menurut French (1994) perpindahan umbi kentang yang terinfeksi yang dipanen dari lokasi yang relatif panas ke lokasi yang lebih dingin termasuk dataran tinggi di daerah tropis juga merupakan salah satu sebab terjadinya infeksi secara laten pada umbi yang diproduksi oleh tanaman yang kelihatannya sehat di lapangan.
Bakteri R. solanacearum mempunyai ciri-ciri berbentuk batang, bereaksi gram negatif, aerobik, tidak membentuk spora, tidak berkapsul, sering bersifat tidak motil (Kelman, 1953; Martin dan French, 1996), dan berukuran 0.5 – 1.0 x 1.5 – 4.0 μm (Hildebrand, Schroth dan Sands, 1998). Menurut Mehan et. al. (1994) ukuran sel bakteri bervariasi, bergantung pada kondisi lingkungan pertumbuhan. Isolat yang virulen umumnya tidak berflagela dan tidak dapat bergerak. Sedangkan isolat yang tidak virulen biasanya memiliki 1-4 flagela polar dan dapat bergerak. Menurut Mehan et al. (1994) R. solanacearum memiliki variasi suhu optimum untuk pertumbuhan antara 25 – 35oC, dan menurut Kelman (1953) pada suhu 15oC penyakit tidak berkembang.
Gejala penyakit layu bakteri adalah kelayuan, tanaman kerdil, serta daun yang menguning (Kelman, 1953; Martin dan French, 1996). Daun-daun layu biasanya dimulai dari daun-daun muda. Apabila potongan batang dimasukkkan ke dalam tabung yang berisi air steril, akan terlihat aliran massa bakteri yang berwarna putih keluar dari berkas pembuluh, dan sifat ini yang dapat membedakannya dengan penyakit layu yang disebabkan oleh cendawan Fusarium sp. (Semangun, 1989).
Penyakit Busuk Lunak
Gejala penyakit adalah perubahan-perubahan yang ditunjukkan oleh tumbuhan itu sendiri sebagai akibat dari adanya penyebab penyakit. Gejala penyakit dicirikan oleh busuk lunak pada bagian dasar dari batang dan selalu berhubungan dengan kerusakan dari umbi bibit. Penyakit busuk lunak dapat terjadi pada setiap fase pertumbuhan tanaman dan akan menyebar, terutama bila kelembaban udara tinggi. Infeksi E. carotovora akan menyebabkan pembusukan pada jaringan parenkim. Luka berlendir seringkali menyebabkan batang menjadi lunak secara cepat karena umbi bibit yang membusuk. Infeksi pada tunas muda atau stolon yang lanjut biasanya menyebabkan kematian pada tanaman (French and Lindo, 1979).
Dalam penyimpanan, E. carotovora menyebabkan kerusakan pada umbi dengan terjadinya busuk lunak. E. carotovora menginfeksi lentisel melalui permukaan umbi yang basah dan menyebabkan permukaan tersebut tertekan secara melingkar (sirkular). Umbi busuk menyebar secara cepat pada saat pengangkutan atau penyimpanan di gudang atau lapangan. Busuk lunak sering dipicu oleh kerusakan mekanik atau kerusakan oleh serangan hama atau penyakit lainnya pada umbi. Jaringan yang terinfeksi menjadi basah, berwarna krem kehitam-hitaman dan lunak, sehingga mudah dibedakan dengan jaringan yang sehat (CIP dan Balitsa, 1999).
Pemuliaan Tanaman Kentang
tanaman. Kegiatan pemuliaan perlu dilakukan untuk mendapatkan kultivar kentang unggul di Indonesia yang memiliki sifat-sifat umur genjah, hasil tinggi, persentase bahan kering tinggi, gula reduksi yang rendah serta tahan terhadap penyakit layu bakteri (R. solanacearum), hawar daun (P. infestans), busuk lunak (Erwinia spp), busuk kering umbi (Fusarium spp) dan nematoda bengkak akar (Meloidogyne spp) (Wattimena et al., 2001). Penyakit virus tidak menjadi masalah karena petani dapat menggunakan umbi mini bebas virus (Wattimena, 2000).
Dalam program pemuliaan tanaman, keragaman genetik merupakan bahan utama yang digunakan dalam seleksi (Poehlman, 1987). Keefektifan seleksi diantaranya tergantung pada keberadaan keragaman genetik bahan yang diseleksi (Hallauer, 1981). Untuk mendapatkan keragaman genetik tersebut, beberapa metode pemuliaan tanaman kentang telah berkembang mulai dari cara persilangan konvensional sampai dengan pemanfaatan metode non konvensional antara lain hibridisasi somatik seperti fusi protoplas dan transformasi genetik. Selain itu dapat juga dilakukan eksploitasi variasi somaklonal (Mythili et al., 1997). Namun dengan metode somaklonal, pemulia mengalami kesulitan dalam memprediksi sifat yang akan didapatkan dan sering diragukan kestabilannya (Kumar, 1994).
terhadap hama berasal dari grandular trichomes dan bermacam kandungan alkaloid pada daun (Hawkes, 1990). Ketahanan terhadap layu bakteri teridentifikasi pada S. stenotomum, kerabat dekat yang berasal dari Peru dan Bolivia, yang dapat disilangkan dengan S. tuberosum (Martin, 1979). Beberapa species liar dan kerabat dekat yang memiliki sifat ketahanan atau toleransi tinggi terhadap penyakit bakteri telah digunakan sebagai sumber gen ketahanan seperti introgresi gen resisten ke S. tuberosum dari S. phureja (Fock et al., 2000) dan S. stenotomum (Fock et al., 2001).
memerlukan adanya gen kompeten androgenik yang tidak selalu ada pada kultivar kentang (Sonnino et al., 1989). Dengan demikian, pada perkembangannya, perakitan kultivar baru kentang yang tahan penyakit banyak dilakukan melalui hibridisasi somatik atau fusi protoplas (Fock et al., 2000; 2001) hingga pemanfaatan teknik-teknik rekayasa genetika.
Agar dapat dilakukan persilangan konvensial, sumber sifat ketahanan diharapkan dapat dicari dari kultivar tetraploid sehingga persilangan antara keduanya diharapkan kompatibel dan dapat menghasilkan benih. Namun secara teoritis persilangan antara tetraploid akan menghasilkan keragaman genetik yang tinggi untuk banyak karakter (Uijtewall, 1987) sehingga diperlukan populasi yang lebih besar jika dibandingkan persilangan diploid. Sebagai akibatnya kegiatan seleksi awal (screening) penting untuk dilakukan.
pemuliaan yang efektif sehingga metode seleksinya dapat disederhanakan (Provilaitis, 1965).
Seleksi Ketahanan Penyakit, Vigor dan Produksi Umbi Secara In Vitro
Seleksi/pengujian tanaman secara in vitro adalah kegiatan seleksi dengan memanfaatkan teknik in vitro. Bahan yang dapat digunakan untuk pengujian dapat berupa kultur organ, kalus atau sel dalam media dengan perlakukan. Beberapa keuntungan dari pengujian in vitro adalah (Niks dan Lindhout, 2006): 1) banyak individu yang dapat diuji dalam tempat yang lebih kecil, 2) seleksi dilakukan dibawah kondisi yang terkontrol dan terstandar. Agen penyeleksi dapat diberikan secara lebih seragam. Seleksi/pengujian tanaman secara in vitro memiliki beberapa kelebihan dibandingkan seleksi di lapang. Kelebihan tersebut adalah waktu yang dibutuhkan lebih cepat, biaya lebih murah, tidak memerlukan lahan yang luas, mengurangi kemungkinan terjadinya disease escape, tidak menimbulkan masalah pada lingkungan dan dapat dilakukan pada klon yang banyak dalam waktu yang sama (Samanhudi, 2001).
siram atau gunting. Menurut Delfiani (2003), metode gunting memiliki kisaran waktu yang lebih singkat dibandingkan dengan periode inkubasi pada perlakuan metode siram. Teknik kultur media ganda pada kentang telah digunakan untuk menguji ketahanan kultivar kentang terhadap P. infestans (Meulemans et al., 1986). Pada penelitian Meulemans et al. (1987), cara inokulasi bakteri dilakukan dengan teknik penyemprotan.
Gopal dan Minocha (1998), Gopal et al. (1997), dan Gopal (2001) meneliti efektifitas seleksi menggunakan umbi mikro. Hasil penelitiannya menunjukkan bahwa seleksi menggunakan umbi mikro efektif digunakan untuk beberapa karakteristik yaitu tinggi tanaman, bentuk batang, warna umbi, dan impresi secara umum lainnya. Gopal et al. (1997) menyimpulkan bahwa seleksi dapat dilakukan pada umbi mikro untuk impresi umum dan seluruh karakteristik penting umbi (warna, bentuk, hasil, dan bobot rata-rata). Selanjutnya, Naik et al. (1998), dengan menggunakan 37 genotipe kentang, menyatakan bahwa tidak semua karakter baik digunakan sebagai karakter seleksi untuk menentukan produksi umbi. Jumlah umbi dinyatakan sebagai karakter yang terbaik untuk menduga produksi umbi di lapangan.
Lentini (1988) yang menyatakan penampilan in vitro mencerminkan penampilan di lapangan untuk hasil dan karakter lain yang terkait pada tanaman kentang.
Tampubolon (2002) telah melakukan pendugaan umur secara in vitro pada beberapa kultivar kentang. Kriteria yang digunakan untuk penentuan umur kentang adalah kecepatan inisiasi umbi, keseragaman pembentukan umbi, dan persentase bahan kering umbi. Kriteria ini didasarkan bahwa kultivar kentang genjah memiliki inisiasi umbi yang cepat, waktu pengisian umbi cepat dan bahan kering umbi rendah. Sebaliknya kultivar kentang berumur dalam mempunyai sifat inisiasi umbi lambat, waktu pengisian umbi yang lama serta persentase bahan kering yang tinggi (Burton, 1989; Lisinska dan Leszcynski, 1989). Pengumbian kentang secara in vitro baik untuk keperluan penyebaran plasma nutfah kentang maupun untuk perbanyakan kentang telah banyak dilakukan (Wattimena, 1983; McCrown dan Wattimena, 1987).
METODOLOGI PENELITIAN
Tempat dan Waktu Penelitian
Penelitian dilaksanakan di Laboratorium Kultur Jaringan Tanaman, Departemen Agronomi dan Hortikultura, Fakultas Pertanian Institut Pertanian Bogor. Penelitian dilaksanakan dari bulan Mei 2006 sampai dengan bulan Maret 2007.
Alat dan Bahan
Bahan tanaman yang digunakan dalam penelitian ini berupa klon-klon hasil persilangan konvensional kultivar Atlantik dan Granola (cv. Atlantik X cv. Granola), kentang BF15 sebagai kontrol peka penyakit, dan S. stenotomum sebagai kontrol tahan. Bahan lain yang digunakan media kultur jaringan Murashige and Skoog (MS), air kelapa, Alar, BAP, sukrosa, media bakteri (LB), serta inokulum bakteri Erwinia carotovora pv. carotovora dan Ralstonia solanacearum koleksi departemen Proteksi Tanaman, Fakultas Pertanian IPB yang diisolasi dari kentang yang diambil di daerah Segunung Jawa Barat tanggal isolasi 24 Januari 2007.
Tahapan Penelitian
Penelitian dilaksanakan dalam tiga tahapan utama penelitian, yaitu: 1) uji in vitro vigor tanaman, 2.a.) uji in vitro produksi umbi, 2.b.) uji ketahanan umbi mikro terhadap busuk lunak, dan 3) uji in vitro ketahanan tanaman terhadap layu bakteri dan busuk lunak. Tahapan penelitian disusun sesuai dengan Gambar 1.
Metode Penelitian
Persiapan Percobaan
Pembuatan Media Perbanyakan
Media MS dibuat dengan larutan baku (Tabel Lampiran 1). Larutan baku yang telah dibuat dicukupkan volumenya hingga 1000 ml dengan menambahkan aquades, kemudian ditambah sukrosa sebanyak 30 gram dan diaduk rata. Keasaman larutan berikutnya diukur dengan kertas lakmus. Keasaman diatur dengan penambahan NaOH 0.1 N untuk menaikkan atau penambahan HCl 0.1 N untuk menurunkan. Sebagai bahan pemadat ditambahkan 8 gram agar. Setelah ditambahkan agar larutan dipanaskan hingga agar menjadi homogen. Larutan media yang sudah siap dimasukkan ke dalam botol kultur sebanyak 15-20 ml perbotol dan selanjutnya ditutup rapat dengan menggunakan plastik dan karet. Media berikutnya disterilkan dengan otoklaf selama 30 menit pada suhu 1200C dan tekanan 17.5 psi.
Percobaan 1. Uji In Vitro Vigor Tanaman
terdiri dari satu botol yang berisi dua eksplan. Vigor tanaman diamati dari beberapa peubah vegetatif, yaitu tinggi tanaman, jumlah daun, dan akar. Pengamatan dilakukan sampai minggu ke-5.
Percobaan 2.a. Uji In Vitro Produksi Umbi
Pengujian diawali dengan menanam klon kentang pada medium Murashige dan Skoog (MS) tanpa ZPT + 5 mg/l kalsium pentatonat. Eksplan yang dipakai adalah tunas samping. Klon-klon yang digunakan pada percobaan ini merupakan klon-klon yang memiliki vigor yang baik sesuai hasil percobaan 1.
Setelah kultur kentang berumur 4 minggu, medium pengumbian cair ditambahkan ke dalam medium kultur sehingga menghasilkan dua lapisan media. Media cair yang digunakan adalah MS + Alar 10 mg/L + air kelapa 150 ml/L + BAP 5 mg/L + 90 g/l sukrosa. Media cair ditambahkan sebanyak 30 ml per botol. Kultur diinkubasi pada ruang gelap (tanpa penyinaran) pada suhu 19-21oC.
Percobaan 2.b. Uji Ketahanan Penyakit pada Umbi
Bahan yang digunakan dalam percobaan ini adalah umbi-umbi mikro hasil Percobaan 2.a. Umbi diletakkan pada cawan petri steril dan diinokulasi dengan bakteri E. carotovora pv. carotovora. Rancangan lingkungan yang digunakan dalah Rancangan Acak Lengkap. Satu satuan percobaan terdiri dari 5 umbi dengan tiga ulangan. Pengamatan yang dilakukan meliputi saat kejadian penyakit, dan tingkat kejadian penyakit yaitu persentase dari jumlah umbi yang terserang penyakit dibagi dengan jumlah umbi yang diamati.
Percobaan 3. Uji In Vitro Ketahanan Terhadap Penyakit Bakteri
Inokulasi dengan bakteri dilakukan pada tanaman in vitro yang berumur 8 minggu dalam kultur. Kultur diinokulasi dari biakan murni yang diperoleh dari hasil isolasi Departemen Proteksi Tanaman Fakultas Pertanian IPB dari kentang di daerah Segunung Jawa Barat tanggal 24 Januari 2007. Isolat kemudian ditumbuhkan pada media LB (yeast 5 g/L + tripton 10 g/L + NaCl 10 g/L) selama 48 jam dan diinkubasi pada air steril dengan dikocok dengan menggunakan shaker berkecepatan 150 rpm. Selanjutnya dilakukan pengukuran sampai didapatkan konsentrasi 109 sel/ml. Inokulasi dilakuan dengan metode gunting pucuk, yaitu gunting dicelupkan kedalam suspensi bakteri kemudian digunting pada pucuk tanaman kentang (Samanhudi, 2001).
berisi dua eksplan. Setiap ulangan terdiri dari 20 botol dengan dua eksplan. Pengamatan dilakukan terhadap peubah:
1. Periode inkubasi. Periode inkubasi merupakan periode waktu yang dibutuhkan oleh patogen sejak penetrasi hingga timbul infeksi yang dapat dilihat pada tanaman.
2. Kejadian penyakit. Merupakan persentase tanaman yang mengalami layu (terserang patogen) terhadap jumlah tanaman yang diamati. Kejadian penyakit dihitung dengan menggunakan rumus sebagai berikut:
Dimana:
KP = Kejadian penyakit (%) n = Jumlah tanaman layu
N = Jumlah tanaman yang diamati
3. Ketahanan tanaman. Pengujian ketahanan dilakukan dengan membandingkan klon yang diuji dengan kontrol tetua Atlantik dan Granola, kontrol peka yaitu BF dan kontrol tahan yaitu S. stenotonum. Untuk mengetahui tingkat ketahanan masing-masing klon kentang yang diuji, nilai persentase kejadian penyakit dikonversikan ke derajat ketahanan menurut cara Thaveechai et al. (1989) (Tabel 1). Pengelompokan tingkat ketahanan dapat dimodifikasi sesuai dengan
KP =
n
keperluan dan didasarkan pada besarnya nilai persentase kejadian yang terjadi pada kontrol rentan dan kontrol tahan.
Tabel 1. Pengelompokan tingkat ketahanan klon kentang terhadap serangan bakteri layu R. solanacearum berdasarkan persentase kejadian penyakit (Thaveechai et al., 1989)
Kejadian Penyakit (%) Tingkat Ketahanan
0 – 20 Tahan (T)
21 – 40 Agak Tahan (AT)
41 – 60 Agak Rentan (AR)
HASIL DAN PEMBAHASAN
Uji In Vitro Vigor Tanaman
Hasil pengujian terhadap vigor tanaman yang dilakukan melalui pengamatan tinggi tanaman, jumlah daun, dan jumlah akar. Berdasarkan analisis sidik ragam, pada peubah tinggi tanaman, jumlah daun dan jumlah akar antar klon berbeda sangat nyata sejak pengamatan pertama yaitu 7 hari setelah tanam (Tabel Lampiran 1 - 3). Vigor tanaman dalam kultur in vitro dipengaruhi oleh eksplan yang digunakan, kondisi laboratorium, cahaya, suhu, media, dan Zat Pengatur Tumbuh (Pierik, 1987). Pada percobaan ini semua faktor tersebut relatif sama, sehingga perbedaan yang terjadi diharapkan disebabkan oleh perbedaan genotipe. Berdasarkan hal tersebut, persilangan antara cv. Atlantik dan cv. Granola memberikan turunan dengan genotipe yang beragam sesuai dengan pernyataan Uijtewall (1987) yang menyatakan bahwa persilangan antara tetraploid akan menghasilkan keragaman genetik yang tinggi untuk banyak karakter.
vigor yang baik di lapangan, sehingga dapat dilakukan seleksi secara in vitro dengan memilih klon-klon yang memiliki vigor yang baik.
Tinggi Tanaman
Tinggi awal seluruh eksplan rata-rata adalah 0.1 cm. Pada 7 HST sudah terjadi perbedaan dimana beberapa klon memiliki pertumbuhan tinggi yang cepat diantaranya klon Atnola 4 yang lebih cepat dibandingkan Atlantik dan Granola, sedangkan beberapa klon lain yaitu klon Atnola 13, Atnola 14, Atnola 15, Atnola 17, Atnola 18, Atnola 19, Atnola 20 dan Atnola 25 memiliki pertumbuhan yang sangat lambat (Tabel 2). Pertumbuhan dari klon-klon tersebut pada umumnya konsisten hingga akhir pengamatan terhadap tinggi tanaman. Akhir pengamatan adalah pada 35 HST dengan pertimbangan 35 HST merupakan umur planlet Atlantik dan Granola dapat diaklimatisasi. Pada 35 HST klon Atnola 11, Atnola 13, Atnola 14, Atnola 15, Atnola 16, Atnola 17, Atnola 18, Atnola 19, Atnola 20, Atnola 21, Atnola 23 dan Atnola 25 memiliki bentuk tanaman yang pendek.
Pada 35 HST terdapat klon yang memiliki tinggi melebihi kedua kultivar tetua yaitu klon Atnola 4, Atnola 1, Atnola 5, dan Atnola 8. Hal tersebut secara teoritis sangat mungkin terjadi akibat adanya efek heterosis terhadap tetua. Heterosis adalah keadaan dimana karakter turunan lebih baik atau superior dibandingkan tetuanya. Mekanisme terjadinya heterosis saat ini menurut Chahal dan Gosal (2006) masih banyak yang belum dipahami dengan baik. Salah satu asumsi terjadinya heterosis adalah gen dominan sifat yang diinginkan dari dua tetua terekspresi bersama pada turunan dan menekan alel sifat yang tidak diinginkan.
dicirikan dengan pertumbuhan organ yang baik. Klon-klon tersebut juga dapat diaklimatisasi lebih awal, sehingga produksi planlet secara in vitro lebih cepat.
Tabel 2. Tinggi klon-klon kentang hasil persilangan cv. Atlantik dan cv. Granola yang ditumbuhkan secara in vitro pada media MS0
No Klon 7 HST 14 HST 21 HST 28 HST 35 HST
Angka-angka yang diikuti huruf berbeda pada kolom yang sama berbeda nyata pada DMRT taraf 5%.
HST = Hari Setelah Tanam
Jumlah Daun
multiplikasi tanaman kentang secara in vitro. Hal ini dikarenakan pada perbanyakan kentang secara in vitro digunakan stek buku. Semakin banyak jumlah daun atau buku yang dihasilkan, maka semakin cepat laju multiplikasi in vitronya.
Tabel 3. Jumlah daun klon-klon kentang hasil persilangan cv. Atlantik dan cv. Granola yang ditumbuhkan secara in vitro pada media MS0
Klon 7 HST 14 HST 21 HST 28 HST 35 HST
Angka-angka yang diikuti huruf berbeda pada kolom yang sama berbeda nyata pada DMRT taraf 5%.
HST = Hari Setelah Tanam
dibandingkan kultivar Atlantik dan Granola, sedangkan klon Atnola 1, Atnola 5, Atnola 9, dan Atnola 26 memiliki jumlah daun yang tidak berbeda nyata dengan kultivar Atlantik dan lebih banyak dari kultivar Granola (Tabel 3).
Jumlah Akar
Klon-klon kentang hasil persilangan dalam penelitian ini memiliki jumlah akar yang berbeda nyata berdasarkan analisis sidik ragam. Pada akhir pengamatan yaitu pada 35 HST terdapat klon dengan jumlah akar yang tidak berbeda nyata dengan jumlah akar kultivar Atlantik yaitu Atnola 5, sedangkan Atnola 4, Atnola 8, Atnola 9, Atnola 24, Atnola 25, dan Atnola 26 memiliki akar yang lebih banyak dibandingkan kultivar Granola (Tabel 4). Pada aklimatisasi tanaman kentang dari planlet diharapkan klon dengan akar yang lebih banyak akan memiliki tingkat keberhasilan yang tinggi. Perbanyakan kentang di screen house pada umumnya dengan cara stek sehingga kemampuan tanaman untuk membentuk akar merupakan salah satu syarat utama agar tanaman memiliki vigor yang baik.
Atnola 10, Atnola 12, Atnola 22, Atnola 24 dan Atnola 26. Klon-klon yang terseleksi tersebut selanjutnya digunakan sebagai bahan yang digunakan pada pengujian produksi umbi mikro dan pengujian ketahanan terhadap R. solanacearum dan E. carotovora pv. carotovora.
Tabel 4. Jumlah akar klon-klon kentang hasil persilangan cv. Atlantik dan cv. Granola yang ditumbuhkan secara in vitro pada media MS0
Klon 7 HST 14 HST 21 HST 28 HST 35 HST
Angka-angka yang diikuti huruf berbeda pada kolom yang sama berbeda nyata pada DMRT taraf 5%.
Tabel 5. Hasil analisis korelasi antara tinggi tanaman, jumlah daun, dan jumlah akar pada klon-klon kentang hasil persilangan cv. Atlantik dan cv. Granola berdasarkan pengujian vigor in vitro
Tinggi tanaman Jumlah daun Jumlah akar
Tinggi tanaman - 0.67424** 0.56122**
Jumlah daun - 0.73398**
Jumlah akar -
Keterangan: ** = korelasi sangat nyata
Uji In Vitro Produksi Umbi
Beberapa peubah yang diamati dalam pengujian produksi umbi secara in vitro adalah inisasi umbi, keserempakan pengumbian, jumlah umbi per tanaman, bobot umbi, bobot kering umbi, dan ukuran umbi berupa panjang dan diameter. Kecepatan (inisasi umbi) dan keserempakan adalah peubah yang akan digunakan dalam menentukan umur suatu kultivar kentang. Jumlah umbi, bobot umbi, bobot kering umbi, dan diameter digunakan dalam menduga potensi hasil dan kualitas umbi. Menurut Gopal dan Minocha (1998) hasil pengujian in vitro terhadap beberapa karakter agronomi kentang memiliki korelasi yang sangat nyata diantaranya jumlah umbi, bobot umbi, dan jumlah mata.
Waktu Inisiasi Umbi dan Keserempakan
Inisiasi umbi diamati berdasarkan waktu yang diperlukan klon untuk membentuk umbi pertama kali. Inisasi umbi bervariasi berkisar dari 19,7 hari hingga 58,1 hari tergantung dari klon (Gambar 3). Pada percobaan ini seluruh klon yang diujikan dapat menghasilkan umbi atau dapat diartikan bahwa komposisi media yang digunakan mampu merangsang pengumbian 14 klon dengan baik.
Tabel 6. Waktu inisiasi umbi dan selisih waktu antara waktu pembentukan umbi mikro mencapai 100% dengan waktu inisiasi umbi klon-klon kentang hasil persilangan cv. Atlantik dan cv. Granola
Klon Inisiasi umbi
Angka-angka yang diikuti huruf berbeda pada kolom yang sama berbeda nyata pada DMRT taraf 5%.
yang muncul diharapkan disebabkan oleh faktor genotipe klon. Analisis sidik ragam inisiasi umbi menunjukkan perbedaan yang sangat nyata sehingga analisis data dilanjutkan dengan uji lanjut Duncan pada taraf 0.05 (Tabel 6).
0,0
Gambar 3. Waktu inisiasi umbi klon-klon kentang hasil persilangan cv. Atlantik dan cv. Granola
termasuk klon yang memiliki umur genjah atau sama dengan Granola. Sebaliknya klon-klon yang memiliki waktu inisiasi yang lebih lama dibandingkan kultivar Atlantik yaitu Atnola 8 dan Atnola 5 diduga akan memiliki umur panen yang lebih dalam (Gambar 3). Pernyataan tersebut diperkuat oleh hasil penelitian Alsadon et al. (1988) dan Alsadon (1989) yang menyatakan bahwa terdapat kaitan yang erat antara produksi umbi mikro in vitro dengan produksi umbi di lapangan. Keserempakan merupakan selisih waktu antara saat terjadi pengumbian 100% dengan inisiasi umbi. Semakin kecil nilai selisih tersebut pada penelitian ini maka dapat dianggap klon tersebut memiliki tingkat keserempakan yang tinggi. Keserempakan yang baik diperlukan dalam budidaya kentang karena umbi dapat dipanen pada saat tingkat pengisian dan kualitas umbi yang seragam. Dari hasil percobaan didapatkan selisih pembentukan umbi mikro mencapai 100% dengan inisiasi umbi berkisar antara 2.3 hari hingga 30.2 hari. Selisih terpendek pada klon Atnola 5 sedangkan selisih terpanjang pada klon Atnola 3 (Gambar 4).
0,0
Gambar 4. Selisih waktu antara waktu pembentukan umbi mikro mencapai 100% dengan waktu inisiasi umbi pada klon-klon kentang hasil persilangan cv. Atlantik dan cv. Granola
Jumlah Umbi
Tabel 7. Jumlah umbi per tanaman dari klon-klon kentang hasil persilangan cv. Atlantik dan cv. Granola berdasarkan pengujian in vitro
Klon Jumlah umbi/tanaman
Angka-angka yang diikuti huruf berbeda pada kolom yang sama berbeda nyata pada DMRT taraf 5%.
faktor yang lebih penting dibandingkan bobot umbi dalam menentukan produksi di lapangan dan lebih merekomendasikan jumlah umbi mikro dibandingkan bobot umbi untuk menduga tingkat produksi klon. Dengan demikian klon Atnola 1, Atnola 2, Atnola 3, Atnola 9, Atnola 10, Atnola 16, Atnola 22, dan Atnola 26 merupakan calon kultivar yang memiliki tingkat produksi yang baik.
Gambar 5. Penampilan klon Atnola 12 (A) dan klon Atnola 24 (B) umur 10 minggu pada media pengumbian (MS + Alar 10 mg/L + BAP 5 mg/L + air kelapa 150 ml/L + sukrosa 90 g/L)
Bobot Umbi, Produksi Umbi per Tanaman dan Bobot Kering Umbi
dibandingkan kultivar Granola. Klon Atnola 24 menghasilkan bobot rata-rata umbi yang tidak berbeda nyata secara statistik dengan kultivar Granola.
Bobot umbi/tanaman dihasilkan dari nilai bobot umbi rata-rata dikalikan dengan jumlah rata-rata umbi pertanaman. Dari hasil pengujian ini didapatkan bobot umbi/tanaman Atlantik lebih tinggi dibandingkan Granola. Hasil tersebut tampaknya kurang sesuai dengan hasil pengujian produksi di lapangan yang dilakukan pada tiga daerah yaitu Pengalengan, Batur dan Tosari (Tabel 9). Namun menurut data dari European Cultivated Potato Database (2006), tingkat produksi kultivar Granola adalah menengah hingga tinggi dan tingkat produksi Atlantik adalah tinggi hingga sangat tinggi. Lebih tingginya tingkat produksi Granola di Indonesia seperti ditunjukkan pada Tabel 9, diduga kuat terkait dengan tingkat serangan organisme pengganggu tanaman yang lebih banyak menyerang kultivar Atlantik dibandingkan dengan kultivar Granola. Sebagai contoh tingkat serangan virus MV yang menyerang kentang di Pengalengan (Basuki et al., 2002) lebih tinggi pada kultivar Atlantik yaitu sebesar 10 % pada kultivar Atlantik dan hanya sebesar 1.16 % pada kultivar Granola.
Tabel 8. Bobot umbi dan bobot kering klon-klon kentang hasil persilangan cv. Atlantik dan cv. Granola berdasarkan pengujian in vitro
Klon Bobot/umbi Bobot
Angka-angka yang diikuti huruf berbeda pada kolom yang sama berbeda nyata pada DMRT taraf 5%.
Tabel 9. Hasil produksi kentang cv. Atlantik dan cv. Granola oleh petani di Pengalengan Jawa Barat, Batur dan Tosari Jawa Timur (Basuki et al., 2002).
Hasil panen Lokasi Pengujian
cv. Atlantik cv. Granola ……….. ton/ha ……….
Pengalengan 28.5 34.2
Batur 9.1 17.2
Tosari 13.4 18.1
Bobot kering umbi berkaitan erat dengan pemanfaatan umbi kentang. Umbi kentang dengan kandungan bobot kering yang tinggi atau kadar air yang rendah lebih disukai sebagai bahan baku industri. Kultivar Atlantik memiliki kandungan bahan kering yang tinggi, sedangkan kultivar Granola memiliki kadar air yang tinggi dan kandungan bahan kering yang rendah sehingga tidak cocok untuk kentang olahan (Jossten, 1991).
memiliki bobot kering yang lebih rendah dibandingkan kultivar Granola, sehingga klon Atnola 4 kurang cocok untuk industri atau akan lebih baik digunakan sebagai kentang untuk campuran sayuran.
Diameter dan Panjang Umbi
Diameter umbi mikro yang didapatkan dari hasil pengujian bervariasi tergantung klon seperti terlihat pada Gambar 6 dan Tabel 10. Berdasarkan analisis sidik ragam (Tabel Lampiran 10 - 11)diameter dan panjang umbi mikro berbeda nyata menurut klon. Panjang umbi mikro berkisar dari 0.67 – 1.15 cm, sementara diameter umbi berkisar dari 0.31 – 1.15 cm.
Semakin panjang umbi mikro maka akan semakin besar diameter umbinya. Pernyataan ini didasarkan pada hasil analisis korelasi antara panjang dan diameter umbi mikro klon-klon hasil persilangan cv. Atlantik dan Granola (Tabel Lampiran 15). Diameter dan panjang umbi juga berkorelasi nyata positif dengan bobot umbi namun tidak berkorelasi nyata dengan bobot kering.
Tabel 10. Diameter dan panjang umbi mikro klon-klon kentang hasil persilangan cv. Atlantik dan cv. Granola berdasarkan hasil pengujian in vitro
Angka-angka yang diikuti huruf berbeda pada kolom yang sama berbeda nyata pada DMRT taraf 5%.
Uji In Vitro Ketahanan terhadap Penyakit Bakteri
Periode Inkubasi
seluruh faktor tersebut relatif seragam, sehingga perbedaan periode inkubasi yang terjadi disebabkan oleh perbedaan genotipe dan setiap klon kentang yang diuji.
Gejala layu bakteri dan busuk lunak dalam pengujian in vitro ini berbeda (Gambar 7). Gejala layu bakteri diawali dengan menguningnya daun, diikuti dengan kelayuan tanaman dan rebahnya tanaman. Secara umum gejala layu bakteri yang ditemui tersebut sama dengan gejala di lapangan. Gejala penyakit layu bakteri adalah kelayuan, tanaman kerdil, serta daun yang menguning (Kelman, 1953; Martin dan French, 1996). Gejala busuk lunak dalam pengujian in vitro diawali dengan adanya bagian tanaman yang membusuk berwarna hitam, kemudian diikuti dengan berubahnya warna tanaman menjadi pucat atau pudar dan berikutnya tanaman menjadi lemah. Menurut CIP dan Balitsa (1999) jaringan yang terinfeksi E. carotovora pv. carotovora menjadi basah, berwarna krem kehitam-hitaman dan lunak, sehingga mudah dibedakan dengan jaringan yang sehat.
Tabel 11. Periode inkubasi in vitro penyakit layu bakteri pada 12 klon kentang hasil persilangan konvensional antara cv. Atlantik dan cv. Granola
Gambar 7. Tanaman kentang yang terinfeksi bakteri patogen pada pengujian secara in vitro: (A) Ralstonia solanacearum, (B) Erwinia carotovora pv. carotovora
Kejadian Penyakit
Kejadian penyakit layu bakteri dan busuk lunak dari klon-klon hasil persilangan kultivar Atlantik dan Granola disampaikan pada Tabel 12. Kejadian penyakit layu bakteri pada klon-klon hasil persilangan berkisar antara 63,63% hingga 100% dan kejadian penyakit busuk lunak berkisar antara 17,05 %hingga 100%. Pembanding rentan (BF15) memiliki tingkat kejadian penyakit sebesar 100% untuk penyakit layu bakteri dan busuk lunak, sedangkan pembanding tahan (S. stenononum) memiliki kejadian penyakit sebesar 19,65% untuk layu bakteri, dan 23,00% untuk busuk lunak.
agak tahan sehingga peluang untuk mendapatkan turunan yang agak tahan lebih besar. Berdasarkan pengamatan, tidak terdapat klon-klon hasil persilangan dengan tingkat ketahanan yang lebih baik dari pembanding tahan untuk penyakit layu bakteri maupun untuk busuk lunak. Terdapat klon-klon yang memiliki tingkat ketahanan yang lebih baik dibandingkan Granola untuk layu bakteri yaitu klon Atnola 3 namun tidak ada klon yang memiliki tingkat ketahanan yang lebih baik untuk busuk lunak. Terdapat klon-klon yang memiliki kisaran tingkat ketahanan diantara Granola dan Atlantik.
R2 = 0.5955
Gambar 8. Korelasi antara periode inkubasi dan kejadian penyakit layu bakteri pada klon-klon kentang hasil persilangan cv. Atlantik dan cv. Granola
R2 = 0.6633
Gambar 9. Korelasi antara periode inkubasi dan kejadian penyakit busuk lunak pada klon-klon kentang hasil persilangan cv. Atlantik dan cv. Granola
r = -0.88479
Tingkat Ketahanan
Tingkat ketahanan diperoleh dengan mengkonversi besarnya angka kejadian penyakit ke dalam skala tingkat ketahanan yang tercantum pada Tabel 1. Seperti telah dijelaskan, Tabel tersebut dapat disesuaikan selangnya disesuaikan dengan hasil pengamatan terhadap kejadian penyakit pada pembanding rentan atau tahan. Berdasarkan hal tersebut maka dalam mengkonversi kejadian penyakit ke dalam tingkat ketahanan digunakan modifikasi dari Tabel tersebut menjadi seperti yang tertera pada Tabel 13.
Tabel 13. Tingkat ketahanan klon kentang terhadap serangan bakteri layu (R. solanacearum)dan busuk lunak (E. carotovora pv. carotovora) (modifikasi dari Thaveechai et al., 1989)
Persentase Kejadian Penyakit (X) Tingkat Ketahanan
X < 25% Tahan (T)
25% < X < 50% Agak Tahan (AT) 50% < X < 75 Agak Rentan (AR)
X > 75% Rentan (R)
diharapkan dapat menjadi kanditat klon-klon dengan sifat ketahanan yang lebih baik atau sama dengan Granola. Menurut Samanhudi (2001) teknik pengujian ketahanan penyakit secara in vitro berkorelasi sangat nyata dengan pengujian di lapangan, sehingga klon-klon yang memiliki tingkat ketahanan yang baik pada pengujian ini diharapkan akan memiliki tingkat ketahanan penyakit di lapangan yang baik pula.
Uji Ketahanan Penyakit Busuk Lunak (E. carotovora pv. carotovora) pada Umbi Mikro
Gejala penyakit busuk lunak pada umbi mikro ditunjukkan dengan warna umbi menjadi agak kecoklatan dan tekstur umbi menjadi lunak. Gejala ini dapat diamati secara visual tanpa pembelahan maupun dengan pembelahan (Gambar 10). Dari penelitian ini berhasil didapatkan data periode inkubasi penyakit busuk lunak yaitu dengan melihat waktu terjadinya gejala awal dan pengamatan tingkat kejadian penyakit. Hasil pengujian ketahanan penyakit pada umbi mikro disajikan pada Tabel 14.
carotovora, periode kejadian dan kejadian penyakit busuk lunak pada umbi mikro juga berkorelasi nyata negatif. Semakin cepat periode inkubasi penyakit busuk lunak pada klon tersebut maka semakin rendah tingkat ketahanannya.
Gambar 10. Penampilan umbi mikro kentang setelah diinfeksi E. carotovora pv. carotovora (A) umbi yang tahan; (B) umbi mengalami busuk lunak; (C) umbi sehat dibelah; dan (D) umbi sakit dibelah
Tabel 14. Periode inkubasi, kejadian penyakit, dan tingkat ketahanan umbi mikro kentang klon-klon hasil persilangan antara cv. Atlantik dan cv. Granola terhadap serangan bakteri layu (R. solanacearum)dan busuk lunak (E. carotovora pv. carotovora)
Klon Periode
Korelasi Antar Karakter Klon-Klon Kentang Hasil Persilangan Berdasarkan Pengujian in Vitro
Berdasarkan hasil tersebut terdapat harapan untuk dapat merakit klon kentang tahan terhadap layu bakteri dan busuk lunak dengan kombinasi karakter unggul lain yaitu vigor, umur pendek, produksi tinggi, dan kandungan bahan kering yang tinggi. Dalam pengujian pada penelitian ini, belum didapatkan klon yang memiliki seluruh sifat yang diinginkan tersebut, namun terdapat beberapa klon yang memiliki sifat yang lebih baik dari Granola dan Atlantik (Tabel 15). Menurut Wattimena (2002) agar dapat dibudidayakan oleh para petani, minimal kentang Indonesia harus mempunyai sifat yang sama atau lebih baik dari Granola.
Tabel 15. Matrik karakter klon-klon kentang hasil persilangan cv. Atlantik dan cv. Granola berdasarkan pengujian in vitro
peri
Keterangan: * = lebih baik atau tidak berbeda nyata dengan tetua yang memiliki sifat yang baik
DAFTAR PUSTAKA
Alsadon, A.,A.1989. Micropropagation techniques as a tool for studying plant growth, tuberization and sprouting of potatoes. Diss Abst Int Biol Sci & Eng 50: 810-811.
Alsadon, A.A., Knutson K.W., Wilkinson J.C. 1988. Relationshop between microtuber and minituber production and yield characteristics of six
potato cultivars. Am Potato J 65: 468
Asnawati. 2002. Skrining klon terhadap penyakit layu bakteri dan busuk lunak secara in vitro dan manipulasi media kultur sumber protoplas pada tanaman kentang. Tesis Program Pascasarjana. Institut Pertanian Bogor. Bogor. Basuki R.S., Kusmana, Dimyati A., Hartuti N., Sofiari E., Jayasinghe U. 2002.
Evaluation of processing potato clones in Indonesia. In Funglie, K.O. Progress in Potato and Sweetpotato Research in Indonesia. International Potato Center East, Southeast Asia and Pasific Region and Indonesian Agency for Agricultural Research and Development. Indonesia. 54p. Burton, W.G. 1989. The Potato3rd Edition. John Willey and Sons. New York. Chahal, G.S., Gosal S.S. 2006. Principle and Procedures of Plant Breeding:
Biotechnological and Conventional Approaches. Alpha Science International Ltd. Harrow, U.K. 247, 345p
Chozin, M.A. 2006. Peran Ekofisiologi Tanaman dalam Pengembangan Teknologi Budidaya Pertanian. Orasi Ilmiah Guru Besar Tetap Ilmu Agronomi. Fakultas Pertanian IPB.
Ciampi, L., Sequeira L., French E. R. 1981. Latent infection of potato tubers by P. solanacearum. Amer. Potato J. 57:377-386.
Delfiani, D. 2003. Evaluasi ketahanan 28 klon kentang (Solanum tuberosum) terhadap penyakit busuk lunak (Erwinia carotovora L.R. Jones) secara in vitro. Skripsi. Jurusan Budidaya Pertanian. Fakultas Pertanian IPB. Bogor Fock I., Collonier C., Luisetti J., Purwito A., Souvannavong V., Vedel F., Servaes
A., Ambroise A., Kodja H., Ducreux G., Sihachakr D. 2001. Use of Solanum stenotomum for introduction of resistance to bacterial wilt in
somatic hybrids of potato. Plant Physiol. Biochem. 39: 899-908.
Fock, I., Colloner C., Purwito A., Luisetti J., Souvannavong V., Vedel F., Servaes A., Ambroise A., Kodja H., Duscreux G., Sihachakr D. 2000. Resistance to bacterial wilt in somatic hybrids between Solanum tuberosum and
Solanum phureja. Plant Sci. 160: 165-176
French E.R., Anguiz R., Aley P. 1998. The usefulness of potato resistance to Ralstonia solanacearum, for integrated control of Bacterial Wilt, in: Prior Ph., Allen C., Elphinstone J. (Eds.), Bacterial Wilt Disease, Molecular and Ecological Aspects, Springer-Verlag, Berlin. p. 381-385.
Gopal J, Minocha J.L. 1997. Effectiveness of selection at microtuber crop level in potato. Plant Breed 116:293-295
Gopal J, Minocha J.L., Sidhu J.S. 1997. Comparative performance of potato crops raised from microtubers induced in the dark versus microtubers
induced in light. Potato Res 40:407-412
Gopal J., and Minocha J.L. 1998. Effectiveness of in vitro selection for agronomic characters in potato. Euphytica 103: 67-74
Gopal, J. 2001. In vitro and in vivo genetic parameters and character associations in potato. Euphytica 118:145-151.
Hakim, L. 1999. Kajian komponen pengendalian terpadu penyakit layu bakteri Ralstonia (Pseudomonas) solanacearum pada kentang. Disertasi. Program Pascasarjana. Institut Pertanian Bogor. Bogor. 162 p.
