Isolasi, pengklonan, dan konstruksi RNAi Gen Penyandi H+ ATPase membran plasma dari Melastoma malabathricum L

L.

MUZUNI

SEKOLAH PASCASARJANA

INSTITUT PERTANIAN BOGOR

PERNYATAAN MENGENAI DISERTASI DAN

SUMBER INFORMASI

Dengan ini saya menyatakan bahwa disertasi Isolasi, Pengklonan, dan

Konstruksi RNAi Gen Penyandi H

+

-ATPase Membran Plasma dari

Melastoma

malabathricum

L. adalah karya bersama saya dan pembimbing yang belum pernah

diajukan dalam bentuk apapun kepada perguruan tinggi manapun. Sumber

informasi yang berasal atau dikutip dari karya yang diterbitkan maupun tidak

diterbitkan dari penulis lain telah disebutkan dalam teks dan dicantumkan dalam

Daftar Pustaka.

Bogor, Februari 2011

ABSTRACT

MUZUNI. Isolation, Cloning, and RNAi construct of Gene coding Plasma

Membrane H

+

-ATPase from

Melastoma malabathricum

L. Under supervised of

SUHARSONO, DIDY SOPANDIE, and UTUT WIDYASTUTI SUHARSONO.

Melastoma malabathricum

L. is an Al-accumulating plant that grows in

acidic soils with high level of soluble aluminum in the tropics. One of the important

proteins in the detoxifying aluminum is a plasma membrane H

+

-ATPase, a most

abundant protein on the plasma membrane, encoded by

pma

gene. The objective of

this research is to isolate and characterize the gene encoding plasma membrane H

+

-ATPase from

M. malabathricum

L. (

Mmpma

) and to construct RNAi by using 3’UTR

of

Mmpma

.

Total cDNA had been successfully isolated by using reverse

transcription with total RNA as template. Full length cDNA of

Mmpma

had been

successfully

isolated through a gradual isolation of the gene. The 5’ end and

middle gene of

Mmpma

had been successfully

isolated by PCR (

polymerase chain

reaction

) by using total cDNA as template and

pma

primers designed from some

plants, while the 3’ end of

Mmpma

had been isolated by 3’ RACE. The parts of the

gene had been successfully joined by PCR. The joining product was successfully

inserted into pGEM-T Easy and the recombinant plasmid was successfully introduced

into

E. coli

DH5α. Nucleotide sequence analysis showed that the length of

Mmpma

coding sequence was sized 2871 bp encoding 956 amino acids with a predicted

molecular weight of 105.29 kDa and p

I

value of 6.84. MmPMA has 10 transmembran

domains, 4 cytoplasm loops, 6 functional domains and 3 autoregulatory domains. In

the second cytoplasm loop (C2) contained conserved sequence TGES (phosphatase

activity domain); in the C3 contained conserved sequences DKTGTLT

(phosphorylation and transduction domain), KGAP (ATP-binding and/or kinase

activity domain), DPPR (ATP-binding domain), MITGD (ATP-binding domain) and

GDGVNDAPALK (ATP-binding domain); in the C4 contained 3 autoregulatory

domains: QKDFGKEQRELQWAHAQRTLHGL, NHIAEEAKRRAEIARL, and

YTV. Local alignment analysis based on nucleotide of mRNA showed that

Mmpma

is

82% identical to

pma Vitis vinifera

; 81% to

pma Juglans regia

,

pma Populus

tricocarpa

,

pma Sesbania rostrata

, and

pma Prunus persica

and 80% to

pma

Lycopersicon esculentum

. Based on deduced amino acid sequence, MmPMA is 94%

identical to PMA

Vitis vinifera

and PMA

Juglans regia

; 93% to PMA

Populus

trichocarpa

; 92% to PMA

Vicia faba

,

Lycopersicon esculentum

,

Solanum tuberosum

,

and

Arabidopsis thaliana

, AHA4.

RINGKASAN

MUZUNI. Isolasi, Pengklonan, dan Konstruksi RNAi Gen Penyandi H

+

-ATPase

Membran Plasma dari

Melastoma malabathricum

L. Dibimbing oleh

SUHARSONO, DIDY SOPANDIE, dan UTUT WIDYASTUTI SUHARSONO.

Melastoma malabathricum

L. adalah suatu tanaman akumulator Al yang

tumbuh pada tanah asam dengan tingkat kelarutan aluminium tinggi di daerah

tropis. Salah satu enzim penting dalam detoksifikasi Al adalah H

+

-ATPase

membran plasma, suatu protein yang paling melimpah pada membran plasma,

yang disandikan oleh gen

pma

. Tujuan penelitian ini adalah mengisolasi dan

mengkarakterisasi gen yang menyandikan H

+

-ATPase membran plasma dari

Melastoma malabathricum

L. (

Mmpma

) dan mempelajari peranan gen

Mmpma

melalui konstruksi RNAi dengan menggunakan fragmen 3’UTR

Mmpma

. cDNA

total telah berhasil disintesis dengan menggunakan transkripsi balik dengan RNA

total sebagai cetakan. cDNA

Mmpma

utuh telah berhasil diisolasi melalui isolasi

gen secara bertahap. Bagian ujung 5’ dan tengah gen

Mmpma

telah diisolasi

dengan PCR (

polymerase chain reaction

) menggunakan cDNA total sebagai

cetakan dan primer

pma

yang didesain dari beberapa tanaman, sedangkan bagian

ujung 3’gen

Mmpma

telah diisolasi dengan 3’ RACE. Bagian-bagian gen tersebut

telah berhasil digabung menggunakan PCR dan telah disisipkan ke dalam

pGEM-T Easy. Plasmid rekombinan tersebut telah berhasil diintroduksikan ke dalam

E.

coli

DH5α. Analisis sekuen nukleotida menunjukkan bahwa panjang sekuen

penyandi (CDS)

Mmpma

adalah 2871 pb yang menyandikan 956 asam amino

dengan prediksi berat molekul 105.29 kDa dan prediksi nilai p

I

sekitar 6.84.

MmPMA mempunyai 10 domain transmembran, 4

loop

sitoplasma, 6 domain

fungsional dan 3 domain autoregulator. Pada

loop

sitoplasma kedua (C2) terdapat

sekuen terkonservasi TGES (domain aktivitas fosfatase); pada C3 terdapat sekuen

DKTGTLT (domain fosforilasi dan transduksi), KGAP (domain pengikatan ATP

dan/atau aktivitas kinase), DPPR (domain pengikatan ATP), MITGD (domain

pengikatan ATP) dan GDGVNDAPALK (domain pengikatan ATP); pada C4

terdapat 3 domain autoregulator yang masing-masing mempunyai sekuen:

QKDFGKEQRELQWAHAQRTLHGL, NHIAEEAKRRAEIARL, dan YTV.

Analisis kesejajaran lokal berdasarkan nukleotida mRNA menunjukkan bahwa

Mmpma

mempunyai kemiripan 82% dengan

pma Vitis vinifera

; 81% dengan

pma

Juglans regia

,

pma Populus tricocarpa

,

pma Sesbania rostrata

, dan

pma Prunus

persica

dan 80% dengan

pma Lycopersicon esculentum

. Berdasarkan deduksi

sekuen asam amino, MmPMA mempunyai kemiripan 94% dengan PMA

Vitis

vinifera

dan PMA

Juglans regia

; 93% dengan PMA

Populus trichocarpa

; 92%

dengan PMA

Vicia faba

,

Lycopersicon esculentum

,

Solanum tuberosum

, dan

Arabidopsis thaliana

.

© Hak Cipta milik IPB, Tahun 2011

Hak Cipta dilindungi Undang-undang

1. Dilarang mengutip sebagian atau seluruh karya tulis ini tanpa

mencantumkan atau menyebutkan sumber.

a. Pengutipan hanya untuk kepentingan pendidikan, penelitian,

penulisan karya ilmiah, penyusunan laporan, penulisan kritik atau

tinjauan suatu masalah.

b. Pengutipan tidak merugikan kepentingan yang wajar bagi IPB.

2. Dilarang mengumumkan dan memperbanyak sebagian atau seluruh

ISOLASI, PENGKLONAN, DAN KONSTRUKSI RNAi GEN

PENYANDI H

+

-ATPase MEMBRAN PLASMA DARI

Melastoma malabathricum

L.

MUZUNI

Disertasi

sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar

Doktor pada

Program Studi Biologi

SEKOLAH PASCASARJANA

INSTITUT PERTANIAN BOGOR

Penguji Luar Komisi pada Ujian Tertutup, 18 Januari 2011:

1. Dr. Ir. Aris Tjahjoleksono, DEA

2. Dr. Ir. Nurul Khumaida, M.Si.

Penguji Luar Komisi pada Ujian Terbuka, 10 Februari 2011:

Judul Disertasi : Isolasi, Pengklonan, dan Konstruksi RNAi Gen Penyandi H

+

-ATPase Membran Plasma dari

Melastoma malabathricum

L.

Nama

: Muzuni

NIM

: G361050051

Disetujui

Komisi Pembimbing

Dr. Ir. Suharsono, DEA

Ketua

Prof. Dr. Ir. Didy Sopandie, M.Agr.

Dr. Ir. Utut W. Suharsono, M.Si.

Anggota

Anggota

Diketahui

Ketua Program Studi Biologi

Dekan Sekolah Pascasarjana

Dr. Ir. Dedy Duryadi S., DEA

Prof.Dr.Ir. Khairil Anwar Notodiputro, MS.

PRAKATA

Alhamdulillah, segala puji hanya untuk Allah SWT yang telah

memberikan rahmat dan kemudahan sehingga penulis dapat menyelesaikan

penelitian maupun penulisan disertasi ini. Disertasi ini disusun berdasarkan hasil

penelitian yang dilakukan selama tiga tahun di Laboratorium

Biotechnology

Research Indonesia – The Netherland

(BIORIN) Pusat Penelitian Sumberdaya

Hayati dan Bioteknologi (PPSHB) IPB dan Laboratorium

Plant Molecular

Genetics

(PMG),

Nara Institute of Science and Technology

(NAIST), Japan.

Disertasi ini memuat hasil penelitian tentang isolasi, pengklonan, dan konstruksi

RNAi gen penyandi H

+

-ATPase membran plasma dari

Melastoma malabathricum

L., dan selanjutnya diajukan sebagai syarat untuk memperoleh gelar Doktor pada

Sekolah Pascasarjana Institut Pertanian Bogor.

Pada kesempatan ini, penulis menyampaikan penghargaan dan terima

kasih yang tak terhingga kepada Bapak Dr. Ir. Suharsono, DEA selaku ketua

komisi pembimbing, Bapak Prof. Dr. Ir. Didy Sopandie, M.Agr. dan Ibu Dr. Ir.

Utut Widyastuti Suharsono, M.Si selaku anggota komisi pembimbing, atas segala

jerih payah dan waktu yang telah disediakan dengan penuh keikhlasan, kesabaran,

dan kelembutan hati dalam memberi bimbingan, nasehat, arahan, dan dorongan

mulai dari tahap perencanaan, pelaksanaan, hingga penulisan hasil penelitian.

Demikian pula penulis menyampaikan terima kasih dan penghargaan yang tinggi

kepada Prof. Dr. Ko Shimamoto dan Dr. Wong Hann Ling dari

Nara Institute of

Science and Technology

(NAIST), Japan atas bantuan alat dan bahan penelitian

serta teknis pelaksanaan penelitian biologi molekuler selama penulis

melaksanakan penelitian di Laboratorium

Plant Molecular Genetics

(PMG),

NAIST, Japan. Kepada Tim Beasiswa Pendidikan Pascasarjana (BPPS) dan

Program Sandwich dari Ditjen Dikti Depdiknas, serta Tim Hibah Kompetensi a/n

Dr Suharsono, terima kasih atas bantuannya dalam menyediakan biaya

pendidikan.

Biologi SPs IPB, atas kesempatan yang diberikan kepada penulis untuk mengikuti

pendidikan di SPs IPB Bogor. Kepada seluruh staf pengajar dan administrasi SPs

IPB, penulis menyampaikan banyak terima kasih atas ilmu dan kelancaran

administrasi selama penulis menjadi mahasiswa di SPs IPB. Penulis juga

menyampaikan terima kasih kepada staf PPSHB IPB dan PMG NAIST, atas

bantuannya dalam kelancaran pelaksanaan penelitian di laboratorium.

Penulis juga menyampaikan terima kasih kepada rekan-rekan mahasiswa

Indonesia di NAIST; rekan-rekan mahasiswa seperjuangan yang masih aktif di

laboratorium BIORIN, yaitu Ibu Sri Listyowati, Ibu Yohana, Bu Hannum, Pak

Ulung, Pak Radite, Bu Ratna, Muhdar, Anita, Nurul, Lita, Ila, Fajri, dan Indah,

serta yang sudah lulus, yaitu Firdaus, Pa Hadi, Yasinta, Niken, Yassier, Ulfa, dan

Jaya; rekan-rekan mahasiswa seperjuangan pada program studi Biologi dan

Agronomi; serta rekan-rekan yang tergabung dalam

Under Tree Badminton Club

,

atas dorongan dan kerjasamanya. Terima kasih disampaikan kepada Pak Abdul

Mulya, Pak Adi, Mbak Pepy Elvavina, Mbak Nia, Mbak Sarah, Pak Asep, dan

Pak Iri atas bantuan dan kerjasamanya.

Secara khusus, penulis sampaikan terima kasih yang tulus ikhlas kepada

istri tercinta, Nun Santi, SE dan ananda tercinta Nurul Fitriah Muzuni, atas segala

bentuk pengorbanan, kesetiaan, kesabaran, pengertian, dorongan moril, dan doa

sehingga penulis mempunyai semangat kerja yang tinggi untuk menyelesaikan

pendidikan S3. Kepada keempat orang tua penulis: Ibunda Wakanima dan

Ayahanda Laubi Mane (almarhum), serta Ibunda Zamlia dan Ayahanda Amin

Indi, yang tanpa mengenal lelah selalu memanjatkan doa demi keberhasilan

puteranya; penulis menyampaikan rasa hormat dan terima kasih yang tulus.

Semoga Allah SWT menyayanginya seperti menyayangi penulis. Kepada seluruh

keluarga yang berada di Mawasangka, Bau-Bau, dan Kendari, penulis

mengucapkan terima kasih atas segala perhatian, kasih sayang, dan simpati yang

diberikan kepada penulis selama ini.

Akhirnya, penulis berharap semoga tulisan ini bermanfaat dan dapat

memberikan sumbangan bagi perkembangan biologi molekuler di Indonesia.

Bogor, Februari 2011

RIWAYAT HIDUP

Penulis dilahirkan di Mawasangka, Buton, Sulawesi Tenggara pada

tanggal 7 April 1971 sebagai anak pertama dari pasangan Laubi Mane (almarhum)

dan Wakanima. Pendidikan sarjana ditempuh pada Jurusan Kimia, Fakultas

Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Institut Pertanian Bogor, lulus tahun

1996. Pada tahun 1998, penulis diterima sebagai mahasiswa program magister

sains pada Program Studi Bioteknologi dan lulus pada tahun 2001. Selanjutnya,

pada tahun 2005 penulis diterima kembali sebagai mahasiswa program doktor di

Program Studi Biologi, Sekolah Pascasarjana, Institut Pertanian Bogor.

Sejak tahun 2002, penulis bekerja sebagai staf pengajar pada Fakultas

MIPA Universitas Haluoleo Kendari. Mata kuliah yang menjadi tanggung jawab

penulis adalah pengantar bioteknologi, genetika molekuler, mikrobiologi terapan,

dan biokimia.

Selama mengikuti program doktor, penulis pernah menjadi Ketua

Himpunan Mahasiswa Pascasarjana Sulawesi Tenggara (tahun 2006-2007), dan

pengurus HIWACANA IPB (tahun 2006). Sebuah artikel ilmiah telah diterbitkan

pada Jurnal Agronomi Indonesia Volume 38, No. 1, Tahun 2010, sedangkan dua

artikel lainnya telah penulis siapkan untuk diterbitkan pada jurnal ilmiah yang

terakreditasi. Ketiga artikel tersebut ialah:

1. Muzuni, Didy Sopandie, Utut Widyastuti Suharsono dan Suharsono. 2010.

Isolasi dan pengklonan fragmen cDNA gen penyandi H

+

-ATPase membran

plasma dari

Melastoma malabathricum

L.

J. Agron. Indonesia

. 38 (1): 67-74.

2. Muzuni, Didy Sopandie, Utut Widyastuti Suharsono, Wong Hann Ling, Ko

Shimamoto, Suharsono. Isolasi dan pengklonan gen penyandi H

+

-ATPase

membran plasma dari

Melastoma malabathricum

L.

3. Muzuni, Didy Sopandie, Utut Widyastuti Suharsono, Wong Hann Ling, Ko

Shimamoto, Suharsono. Konstruksi RNAi dari fragmen 3’UTR gen penyandi

H

+

-ATPase membran plasma dari

Melastoma malabathricum

L.

DAFTAR ISI

Halaman

DAFTAR TABEL ... xv

DAFTAR GAMBAR ... xvi

DAFTAR LAMPIRAN ... xviii

PENDAHULUAN

Latar Belakang ... 1

Tujuan Penelitian ... 4

Strategi Penelitian ... 4

Manfaat Penelitian ... 5

TINJAUAN PUSTAKA

Toksisitas Aluminium ... 6

Penyerapan dan Distribusi Al pada Akar dan Daun ... 7

Lokalisasi Al Subseluler ... 8

Sensitivitas Seluler terhadap Al ... 9

Mekanisme Utama Toksisitas Al ... 10

Gejala dan Pengaruh Umum Toksisitas Aluminium pada Tanaman ... 12

Mekanisme Seluler Toleransi Aluminium ... 13

Eksudasi Senyawa-senyawa Pengkelat Aluminum ... 14

Ekspresi Gen-gen yang Diinduksi oleh Cekaman Al ... 17

Penyerapan Aluminium pada Tanaman

M. malabathricum

L. ... 18

Pengaruh yang Ditimbulkan oleh Penyerapan Aluminium pada

Tanaman

M. malabathricum

... 20

H

+

-ATPase Membran Plasma ... 23

Peranan Fisiologi H

+

-ATPase Membran Plasma ... 25

Struktur H

+

-ATPase Membran Plasma ... 27

Siklus Katalitik ... 30

Regulasi Enzim ... 32

Pengaruh Logam terhadap Aktivitas Enzim ... 33

RNA Interference (RNAi) ... 35

ISOLASI DAN PENGKLONAN FRAGMEN cDNA GEN PENYANDI

H

+

-ATPase MEMBRAN PLASMA DARI

Melastoma malabathricum

L.

Abstrak ... 38

Abstract ... 38

Pendahuluan ... 39

Bahan dan Metode ... 40

Hasil dan Pembahasan ... 43

ISOLASI DAN KARAKTERISASI GEN PENYANDI H

+

-ATPase

MEMBRAN PLASMA DARI

Melastoma malabathricum

L.

Abstrak ... 51

Abstract ... 51

Pendahuluan ... 52

Bahan dan Metode ... 54

Hasil dan Pembahasan ... 59

Kesimpulan ... 65

KONSTRUKSI RNAi DARI FRAGMEN 3’UTR GEN PENYANDI

H

+

-ATPase MEMBRAN PLASMA DARI

Melastoma malabathricum

L.

Abstrak ... 66

Abstract ... 66

Pendahuluan ... 67

Bahan dan Metode ... 69

Hasil dan Pembahasan ... 74

Kesimpulan ... 82

PEMBAHASAN UMUM ... 84

KESIMPULAN DAN SARAN UMUM ... 89

DAFTAR TABEL

Halaman

1 Kompartementasi dan bentuk Al di daun dari beberapa tanaman

akumulator Al ... 23

2 Hasil penyejajaran sekuen asam amino beberapa domain dari

DAFTAR GAMBAR

Halaman

1 Diagram alir percobaan isolasi, pengklonan, dan konstruksi

RNAi gen penyandi H

+

-ATPase membran plasma dari

Melastoma malabathricum

L ... 5

2 Interaksi A1

3+

dengan saluran yang permeable terhadap efluks

malat pada membran plasma ... 16

3 Peranan asam organik dalam pertumbuhan melastoma ... 22

4 Transport primer dan sekunder melintasi membran plasma ... 25

5 Skema H

+

-ATPase membran plasma AHA2 ... 28

6 Motif sekuen yang terkonservasi pada

loop

kecil dan besar sitoplasma

H

+

-ATPase membran plasma

N. plumbaginifolia

PMA2 ... 29

7 Situs pengikatan Mg-ATP (substrat H

+

-ATPase membran plasma)

pada loop besar sitoplasma yang melibatkan motif III, IV, V, dan VI ... 30

8 Siklus reaksi H

+

-ATPase membran plasma ... 31

9 Hasil PCR menggunakan cDNA total sebagai cetakan dan pasangan

primer

ActF

–

ActR

untuk mendapatkan fragmen aktin yang berukuran

450 pb dan AF2 – AR2 untuk mendapatkan fragmen

Mmpma

... 43

10 Urutan nukleotida fragmen cDNA

Mmpma

... 44

11 Deduksi asam amino fragmen Mmpma ... 44

12 Situs pemotongan enzim restriksi endonuklease fragmen

Mmpma

... 45

13 Model topografi transmembran dan loop sitoplasma dari H

+

-ATPase

membran plasma... 46

14 Profil hidrofobisitas PMA

Sesbania rostrata

, srha5 (A), fragmen

PMA

Sesbania rostrata

(B) dan fragmen MmPMA (C) ... 49

15 RNA Total dari daun

Melastoma malabathricum

... 59

16 Hasil amplifikasi cDNA menggunakan primer

Act

F dan

act

R... 60

17 Hasil isolasi bagian-bagian gen penyandi H

+

-ATPase membran

plasma dari

M. malabathricum

... 60

18 Hasil pengurutan nukleotida utuh (

full length

) gen penyandi

H

+

-ATPase membran plasma dari

M. malabathricum

(

Mmpma

)

yang diperoleh dari penggabungan urutan nukleotida

Mmpma

5’,

Mmpma

m, dan

Mmpma

3’ berukuran 3155 pb ... 61

19 Peta plasmid pMmpma (6141 pb) yang terdiri dari vektor

pGEM-T Easy (3015 pb) dan cDNA

Mmpma

(3126 pb) ... 62

21 Deduksi asam amino gen penyandi H

+

-ATPase membran plasma

dari

M. malabathricum

... 64

22 Profil hidrofobisitas MmPMA dan PMA

Juglans regia

(AHA1)

menggunakan skala Kyte & Doolittle... 64

23 Vektor pANDA digunakan untuk konstruksi RNAi berukuran 20 kb ... 70

24 Peta fisik plasmid dan situs pengklonan pENTR

TM

/D- TOPO

®

... 71

25 Hasil amplifikasi pMmpma3’ dengan menggunakan primer 3’UTR-F

dan 3’UTR-R... 74

26 Hasil rekombinasi antara vektor pANDA dan pENTR/D- TOPO

®

yang

membawa fragmen 3’UTR dari

M. malabathricum

L. menghasilkan

vektor RNAi, pANDA/3’UTRMmpma ... 75

27 Hasil PCR menggunakan pANDA/3’UTRMmpma sebagai cetakan

dan pasangan Ubq-F dan Gus-R serta Gus-F dan Nos-R sebagai

primer... 75

28 Penyejajaran hasil sekuensing dari 6 konstruksi 3’UTR Mmpma ke

dalam vektor pANDA yang menggunakan primer Gus-R... 76

29 Penyejajaran hasil sekuensing dari 6 konstruksi 3’UTR Mmpma ke

dalam vektor pANDA yang menggunakan primer Gus-F ... 76

30 Fragmen 3’UTR gen penyandi H

+

-ATPAse membran plasma dari

M. malabathricum

L. membentuk orientasi berulang terbalik yang

diselingi oleh fragmen dari gen

gus

... 77

31 Hasil PCR terhadap koloni

A. tumefaciens

hasil elektroporasi... 78

32 Hasil PCR menggunakan 4 tanaman transgenik independen

(kolom 2-5), DNA tanaman kontrol (kolom 1), dan DNA vektor

RNAi sebagai cetakan dan pasangan UbiF1 – GusR1 sebagai primer... 79

33 Tanaman trangenik hasil transformasi RNAi yang membawa

fragmen 3’UTRMmpma dengan konstruksi berulang terbalik

(A1 – A4) dan tanaman non-transgenik (B) yang berumur 3

bulan setelah aklimatisasi... 79

34 Akar tanaman transgenik (A) dan non-transgenik (B) setelah

perlakuan 3.2 mM Al dan pH 4 dalam larutan hara selama 6 hari... 81

35 Pertumbuhan akar tanaman transgenik dan non-transgenik

pada media hara yang mengandung 3.2 mM AlCl3.6H2O dan

pH 4 selama 7 hari... 82

36 Tanaman transgenik yang diperlakukan dengan 3.2 mM AlCl3.6H2O

dan pH 4 (A) dan tanaman non-transgenik (B) dalam larutan hara

selama 5 hari (A1) dan 7 hari (A2, A3, A4, dan B)... 82

37 Strategi yang digunakan untuk mengisolasi gen penyandi H

+

-ATPase

DAFTAR LAMPIRAN

Halaman

1 Kromatogram pengurutan DNA fragmen

Mmpma

m dengan

menggunakan primer T7 dan SP6 ... 109

2 Hasil pengurutan DNA fragmen

Mmpma

m menggunakan primer

T7 dan SP6 ... 112

3 Kromatogram pengurutan DNA fragmen

Mmpma

5’ dengan

menggunakan primer T7 dan SP6 ... 113

4 Hasil pengurutan DNA fragmen

Mmpma

5’ menggunakan primer

T7 dan SP6 ... 116

5 Kromatogram pengurutan DNA fragmen

Mmpma

3’ dengan

menggunakan primer T7 dan SP6 ... 117

6 Hasil pengurutan DNA fragmen

Mmpma

3’ menggunakan primer

T7 dan SP6 ... 120

7 Kromatogram pengurutan DNA gen

Mmpma

dengan menggunakan

!

! " # $%" & ' () *+,, -./ ! "

! 0 !1 "%

-2 3 0 ! / " % % ! 4 %

5 " !/ % 5 -

* " 6 $ +,, 7. 8! "

" % 9 /

% " %! !

9 " / %!

" % % ! !% !

/ ! 0 : ;< + 0 !

9*=! /; >>3. 9 % "/ %! %

! % / 0 0 ! %!

% % 0

% ! !

%

? " "

@ A9 %

? ! % " %"

! ! 9 / !

@ A9 % "

! ! 9 4! " !

! < " %

! ! 9 %

% " B% " % !

9 ! ! % ! C< %

! " D&'() )E'FGEH&GHIG J&KL E'&GH*#4. /M ENO(H MGLJ

KL E'&GH(P&

Superoxide Dismutase

Catalase

Reticuline Oxygen

Oxidoreductase

a_`b ^ cc de f_ dc ^_ gc b_`^hi ^_ ` j g_ kc^e ldcd V [`e m^ n ` ^_`

o_g^`n gpqq rs tcuv_g^d

et al.

pqq w Yx y_^_ b_`^hi Z [_d_ zc

et al

x VU{{| Ykngv_ dcf

i n ` bcdef_ dc bn `

almt

p a_ ` b i n`a_ ` ^c

aluminium-activated malate transporter

x

y_^_ }ni k_ z_ h bn` ln `a_ ` ^c o [~Z ynge c ^_dn Vy € tY ^_ ` o ]y ]cddeuc_ }ce`

y ge}n c `_dn  `vc kc}e gd Vo]Y }nf_ v ^cc def_dc V € ‚_z c

et al

x pq q ƒ YZ dn ^_ ` bz_` l_ ^_

}_`_i _ ` zn^nf_ cZ _`}_ g_ f_c`

„g_bi n`…„g_bi n`

gmali

p V

Glycine max aluminum

induced

YZ

gmali

p|Z

gmali

|q ^_ `

gmali

ƒ{Z

i_dc`b…i _dc`b

i n `a_`^c z_` †

‡ …

j~ y_ dn i n i k g_` l f_ di_Z l ge}n c ` vcd }e ` †rZ ˆj]†…^nv c ^ge bn `_dn ^_`

Auxin-induced Protein

}n f_v ^ccde f_dc e fnvj ` m_gV pqqqYxy _ ^_ b_ ` ^h iu‰ y~Š|p a_ `b

}efng_`}n gv_^_ljf}nf_v^c cde f_dcbn `ln`a_ ` ^clge}n c `d ln dc„czknghz h g_`ƒpz]_

a_`b }c^_ z _^_ l_^_ zh f }c‰_gdn`dc}c„j f V†_i c f}e `

et al

x U{ {pYx y_^_

Melastoma

malabathricum

‹ xbn `a_ `b}n gfck_ }^_ f_iunz_i_`_d_i^_`jf}c `bbcZ_`}_ g_f_c`

bn `ln `a_`^c

multidrug resistance associated protein

VŒtyYV[hv_gde `e

et al

xU{{ws

c g ^_ hd U{{Ž YZ

metallothionein type

U V

Mt

UY V[hv_ gde`e

et al

x U{{qYZ † ‡

…j~y_dn

inikg_ ` lf_di_ V

Mmpma

Y VŒh‚h `c

et al

x U{p{YZ

major facilitator superfamily

V

Mamfs

Y V  c ^a_g}c`c U{ {ŠYZ ^_ ` dc } g_} dc`}_dn V

Mmsc

Y VŒ hdve„_ U{ ppY }nf_v

kn gv_dcf^ccdef_dcx

[_f_ v d_}h bn` a_`b}ngfck_}^_ f_i }e fng_`dc }_`_i _ `}ngv_^_l }_ `_v _ d_i

^_` jf }c `b bc _ ^_ f_v bn` ln`a_ ` ^c † ‡

…j~ y_ dn i ni k g_ ` lf_di_ Vj ` m_g pqqq s

jv `

et al

x U{{|Yx on` c`c knghz h g_` r ƒ{{…_ ` lk ^_ ` in`a_ ` ^c z_` q ƒŽ _ d_i

_i c`ex † ‡

…j~ y_ dn inik g_ ` lf_ di_ inghl_ z_` l ge }nc` a_`b l_fc`b i nfcil_v

l_^_ i nikg_` l f_ di_ ^_` }n g fc k_} ^_ f_i k_ `a_ z gnd le `d un z_ i _`x y ge }nc` c `c

i n ` b_ z }c‰_ dc

dn g_`bz_ c_` }g_`d le g}n g dn zh ` ^ng ^n ` b_` i n`bv _dcfz _ `

proton

motive force

a_`b ^_l_} in`bbng_ zz_` k_`a_ z de fh}Z _dc icf_ }Z _}_ h in }_ kefc }

i n fc ` }_ dcini k g_ `lf_ di _V [hddi _`pq q| Y x† ‡

…j~ y_ dnini kg_`lf_ di_ }ngfck_}

^_f_ignbhf_ dcgnd le `d}ngv_^_lk n gk_b_ cg_ ` bd_`b_`fc ` bz h ` b_ `Zdnlng}cun z_ i_`

j f V j `m_ g pqqq s jv` U{ {| YZ un z_ i_ ` ˆ_Xf Vˆch

et al

x pqqŽYZ ^n„cdcn`dc „ed„_ }

V _`

et al

x U{{UYZ ^_` un z_ i_ `_ ii e`chi V ‘ng`n’u “ ‹n bcd_ U{{ pYx [n f_ c ` c }hZ

† ‡

…j~ y_ dn

i ni k g_ `lf_di _’ h b_}n g fc k_}^_ f_ilni _ `’_`b_`dnfa_`b

^c„_dcfc}_ dc

e fnv _ hzdc` dn f_i _ ln gzni k _ ` b_` n i k gc e b_`^hi Vtek n g…”fn kng

et al

x U{ {r YZ

Arabidopsis thaliana

§ –¨ —  £ ™ £™ ©Ÿ —˜ ª «— ™— ¬§¤§•­ œ—ª — ž ™£™ ª£ Ÿ © — ® ª £Ÿž¯™©¯° —˜ ª — œ— ª ¤

Ÿ£ ˜ œ —°  £«—™ — ª£Ÿ ®£™©—˜›—˜®£ ±—™©—° ¬² ¢¯˜›

et al

³ ´µµ ¶­³ §¤§• ™ £ Ÿ¯ª—®—˜

›£ ˜ š—˜ › ž£Ÿ £® ªŸ£  ª — œ—  £ « ¦  £« ® ¢™ ª —˜  ¢˜ ¡ « ¢£ ™· š—ž¯ œ—£Ÿ —° š—˜ ›

©£ Ÿ ž —˜ ››¯ ˜ › ¸—¹—© œ— «—™ ª£ ˜›—˜›®¯ ž —˜ ¸—Ÿ —® ¸—¯° œ—Ÿ ›¯ «—· °—Ÿ — œ—˜ ° ¢Ÿ™¢˜ ³

º «¢£™ ™£ ™ ª¯˜š— ª ¤ ¶·»— ž—¯ «£© °  £ ° ˜›› — «£©° £˜  ž¡ ž£ Ÿ° — œ—ªª¤Ÿ £˜œ—°·

 £° ˜ ››— œ—£Ÿ —° ˜ ™£Ÿ¯ª—®—˜ ž—Ÿ›£ ž ¯ ž —™ — ª¤ Ÿ£ ˜ œ —°³

¼®  ª Ÿ£  ›£˜

§¤§•

™ £˜ ›° —   «®—˜ £˜½ ™

š—˜› œ —ª—ž ™ £™ ¢™ ª — ¤ ¥

®£«¯—Ÿ  £«  £° ˜ ››— ª ¤ œ —ª—ž

œ ª£ Ÿ ž—°—˜® —˜ ª— œ—®¢˜œ   ©—  —³ ¨£ ˜› —™ — ž—˜ž£ Ÿ  £©¯ž™£ ˜¯˜ ¸¯ ®®—˜ª£Ÿ—˜—˜¤ ¥

¦

§ –¨ —  £ ™ £™©Ÿ —˜ ª «—  ™ — œ— « —™ ° ¢™£¢ ž—   ª ¤   ž ¢ª «— ™ — ž—˜—™ —˜ ¬²¢¯ ˜›

et

al

³´µµ ¶­³

–¯™©¯° —˜

M. malabathricum

¾³š—˜›œ ž£™ ¯ ® —˜ž£Ÿ ¯ ž —™—œœ—£ Ÿ—°žŸ ¢ª   

œœ¯› — ™ £™ ª ¯˜ š—   ž£ ™ œ£ ž¢®   ¡®—  §«  £°˜ ››— œ —ª—ž œ›¯˜ —®—˜  £ © —› —

 ¯™©£ Ÿ ›£ ˜ ¯ ˜ ž¯ ® ž¢ «£Ÿ —˜   ž—˜—™ —˜ ž£ Ÿ°—œ—ª ž—˜—° — —™ œ—˜ § « ž˜› › ³

–¯™©¯ ° —˜ ž£Ÿ  £©¯ žœ —ª —žž¯™©¯ °œ£˜ ›—˜ ©—®ª —œ —ž—˜ —°—  —™  £°˜ ››—™ £˜¸ — œ

˜œ®—ž ¢Ÿž—˜—° — —™ · œ—˜ œ—ª — ž ™£ ˜›—®¯ ™¯«—   —«¯™ ˜ ¯™ œ— «—™¸ ¯™ «—° ž˜ ››

œ œ —¯ ˜ œ —˜ —®—Ÿ  £ ° ˜›› — œ £ ©¯ ž  £ © —› — ° ª£ Ÿ —®¯ ™ ¯ «— ž ¢Ÿ § « ¬¿ — ž—˜ — ©£ À

Á  —® »»  —­³ ¨ — œ— ª¤ ó »· ª£ Ÿ ž¯™©¯°—˜ —® —Ÿ

M. malabathricum

¾³ ž œ —®

ž£ Ÿ› —˜ ››¯ · ®£±¯—« ª— œ— ª¤ •³» š—˜› °—˜š— —œ— œ «—© ¢Ÿ — ž¢Ÿ ¯™ ¬Ä¯ ° —£™˜

» » ¶­ ³ Ä£ ˜¯Ÿ ¯ ž ¿ —ž —˜ —©£

et al

³ ¬´µ µ ¶—­·

M. malabathricum

¾³ ™—™ ª¯

™ £˜ ›—®¯™ ¯«—  «£© ° œ—Ÿ ´Ã ³ à › §«Å®› œ—¯˜ ž¯— œ—˜ «£ ©° œ —Ÿ  ¶ › §«Å®› œ —¯ ˜

™ ¯ œ—ž—˜ ª —™£ ˜› —« —™ ®£ Ÿ —±¯ ˜ —˜³ § ˜ —«   —® ¯™ ¯ « —  § «ª— œ—

Melastoma affine

Ƴ Æ¢˜³

¬  ˜¢˜™œ£˜›—˜

Melastoma malabathricum

¾³ ­š—˜ ›™ £ ˜ œ—ª —ž±£®—™ —˜ •³Â

™ Ä § « ª — œ— ª ¤ à œ—« —™ ™ £œ — ±—Ÿ ™ £˜ ¯˜¸¯® ® —˜ © —° ¹ —

M. affine

Ƴ Æ¢˜³

™—™ ª¯ ™£ ˜›—®¯ ™ ¯ «—   ¶ ³¶´ › § «Å® › œ —¯ ˜ ž¯ —  £ž£ «—°  ©¯«—˜ ª£Ÿ«—®¯ —˜

¬Ä¯ž— —ŸÂ» » ¶­³

Ç£ ©£Ÿ—ª— ® —¸—˜ž£ ˜ ž—˜ ›£®¢¡  ¢ «¢› — œ—ª ž— Ä£«— ž¢™ —ª— œ— ž—˜ —° — —™

œ£ ˜› —˜ ® £ «—Ÿ ¯ ž—˜ § « š—˜› ž˜›› ž£«—° œ«—®¯®—˜ ¢ «£ ° Á  —®

et al

³ ¬´µµ ¶­ œ—˜

¿ —ž—˜—©£ À Á  —® ¬ »»Â—­·  £ œ—˜›®—˜ ®—¸—˜  £±—Ÿ — ™¢«£®¯«£Ÿ ž£«—° œ«—®¯® —˜

¢«£° į ° ¢¡ — ¬Â» ´ ´­·

į½¯˜

et al

³ ¬Â»´»­· ȯ° —Ÿ ¢˜¢

et al

³ ¬Â»»¶É »»µ­·

¿ œ š—Ÿ ž ˜ ¬Â» » Ê­· œ—˜ º Ÿ œ —¯  ¬Â» » Ë­ œ£˜›—˜ ™£˜› ¢«—  ›£˜¦›£˜ š—˜› ž£Ÿ« ©—ž

Ï×ÕÎÏÑ ØÎÕ Ð ×Û Ü ÎÍÎÏ ÏÔØÐÎ ÓÎ Ú× Õ ÙÖ ÍÎÕ ÏÔ ØÐÎÓ Î ÝÞ ßàá â ã äåæâ ç

Reverse

Transcription-Polymerase Chain Reaction

èá ÍÎÕ â àæ é ç

Rapid Amplification

cDNA Ends

èêâàæ éÎÍ ÎÒÎÜ ØÑ ÕÐ× ØÑ Ø ÝÞ ßàÍ×ÕÚÎ ÕÖ ×ÕÚÚÔ Õ ÎÓÎ Õ Ö â ßàØ× ë ÎÚÎÑ

Ý× Ð ÎÓÎ Õ ÍÎ Õ Ø× ÓÔ×Õ Ñ ÕÐ× Û ÕÎ Ò ìÎ ÕÚ ØÔ Í ÎÜ ÍÑÓ× ÐÎÜÔÑ ÔÛÔ ÐÎ Õ ÕÔÓÒ×ÙÐ ÑÍ ÎÕìÎ Ø× ÛÐÎ

ÎÍÎÏ Ð× Û Ï ÎÍ Î Ôí ÔÕÚ îï ÎÐÎÔ ðï Ø×ëÎ ÚÎÑ ÏÛÑ Ö ×Û ê â ßàÑ ØÎ ÕÚÎÐ ë×Û Ö Î Õñ ÎÎÐ ÔÕÐÔÓ

Ö ×Ö Ï×Ò ÎíÎÛ Ñ ñÔÕÚØÑ ØÔ ÎÐÔÚ× Õ êâ ß àÑÖ ×Õì× ë Îë ÓÎÕ Ö â ßàÐ× ÛÍ×ÚÛÎÍÎØÑØ×Ü Ñ ÕÚ ÚÎ

Ú×ÕÖ ×ÕíÎÍÑÐÑÍÎÓë× Û ñ Ô ÕÚØÑ êå ÎÍ ÎÏ × Õ× ÒÑÐ ÑÎ ÕÑÕÑ áÓÎÖ ÑÐ×ÒÎÜÖ× ÒÎ ÓÔÓÎ ÕÑ ØÙ ÒÎ ØÑÍÎÕ

Ï×ÕÚÓÒÙ ÕÎ Õ Ú×Õ Ï× Õ ìÎ ÕÍÑ ò ó

ä àãå Î Ø× Ö × ÖëÛÎ Õ Ï ÒÎ ØÖÎ Í ÎÛÑ

M. malabathricum

Ö × ÒÎÒÔ Ñâ ã äåæâÍÎÕÖ×ÐÙÍ× â àæé Ø× ÛÐ Î Ó ÙÕØÐ ÛÔ Ó ØÑô×ÓÐÙÛÔ ÕÐÔÓ× Ó ØÏÛÎØÑâ ß àÑ

Í Î ÕÐ Û Î ÕØñ ÙÛÖÎ ØÑ

Melastoma malabathricum

õêÍ×ÕÚÎ Õ â ßàÑ Ô ÕÐ Ô ÓÖ ×ÖÏ×Ò ÎíÎÛ Ñ

Ï× Û Î ÕÎ ÕÚ× ÕÐ×Û Ø×ëÔÐÍ Î ÒÎÖÐ ÙÒ× ÛÎÕ ØÑÐ Î ÕÎÖÎ ÕÍÎÛÑÝ×ÓÎÖ ÎÕàÒÍ Î ÕÛ×ÕÍ ÎÜÏòê

ö

ujuan Penelitian

å×Õ×ÒÑ ÐÑ ÎÕÑÕÑë×Û ÐÔí ÔÎ Õ÷

ø ê ù×ÕÚÑ ØÙ ÒÎ ØÑ Í Î Õ Ö×ÕÚÓ ÒÙ Õ ñÛ Î ÚÖ ×Õ Ú×Õ Ï × Õ ìÎ ÕÍ Ñ ò ó

äà ãå Î Ø× Ö×Ö ëÛÎÕ

Ï Ò ÎØÖ ÎÍ ÎÛÑ

M. malabathricum

õê

ú ê ù×ÕÚÑ ØÙ ÒÎ ØÑ Í Î Õ Ö× Õ ÚÓ ÒÙÕ Ú×Õ Ï×ÕìÎ ÕÍ Ñ ò ó

äàãå Î Ø× Ö × ÖëÛ Î Õ ÏÒÎØÖ Î

ç

Mmpma

èÔÐÔ ÜÍ ÎÛÑ

M. malabathricum

õê

îê ù× Ö Ï×ÒÎí ÎÛÑ Ï× ÛÎ ÕÎ Õ Ú×Õ

Mmpma

Ö ×ÒÎ ÒÔ Ñ Ó ÙÕØÐÛÔÓØÑ ô×ÓÐ ÙÛ × Ó ØÏÛ×ØÑ Ô ÕÐ Ô Ó

â ß àÑë×Û Í ÎØÎÛÓÎ Õîï û ãâÚ×Õ Ï×ÕìÎ ÕÍ Ñò ó

äàãå Î Ø×Ö×ÖëÛ ÎÕÏ ÒÎ ØÖÎÍ ÎÛÑ

M.

malabathricum

õê

Ìê ù×ÒÎ ÓÔÓÎ ÕÐ ÛÎ ÕØñ ÙÛÖ ÎØÑÐ Î ÕÎÖÎÕ

M. malabathricum

õê Í × Õ ÚÎ Õ Ú×Õ Ï × Õ ìÎ ÕÍÑ

â ß àÑ

Mmpma

Ö × ÒÎ ÒÔÑ

Agrobacterium tumefaciens

éòàøüøê

Strategi Penelitian

ýÐ Û ÎÐ×ÚÑ ìÎÕ Ú ÍÑÚÔ Õ ÎÓÎ Õ Ô ÕÐÔ Ó Ö× Õ ÝÎÏ ÎÑ ÐÔí Ô ÎÕ ÎÍÎ ÒÎÜ Ö× ÖëÎ ÚÑ

Ï×Õ×ÒÑ ÐÑ ÎÕÖ×ÕíÎÍÑîçÐÑÚÎ èÎ ØÏ×ÓÓÎíÑÎÕçþÎÖ ë ÎÛø èáìÎÑÐ Ô÷

ø ê ÿØÙ ÒÎ ØÑ ÍÎ Õ Ï×ÕÚÓ ÒÙÕ ÎÕ ë ÎÚÑ Î Õ Ð ×ÕÚÎÜ Ú×Õ Ï× ÕìÎ ÕÍ Ñ ò ó

äàãå Î Ø× Ö×ÖëÛÎÕ

Ï Ò ÎØÖ ÎÍ ÎÛÑ

Melastoma malabathricum

õêòÎÒ ÑÕÑÍÑ Ò Î ÓÔ ÓÎÕÔ ÕÐ Ô ÓÖ ×ÕÍ×ØÎÑÕ

ÏÛ ÑÖ × Û ØÏ × ØÑ ñÑ Ó ÎÚÎÛ Ö× ÕÍ ÎÏÎÐ ÓÎÕ ëÎ ÚÑÎÕ ÔíÔ ÕÚ ðï ÍÎÕ îï Ú×Õ Ø× ÜÑÕÚ ÚÎ

! " # $ % "

Mmpma

&

' ()

faat Penelitian

*

+ , & -

- .#

/012 0345 67 083 01 09 73 :;3 <=200> 7 ?=90?7 @ :;>8A 9 =>0>@ B0> A =>?C 3DA ?7 EFG7 8;> :;>H0>B7 I

J

KGLM0?; 1 ;1 23 0> :9 0?10 B03 7

Melastoma malabathricum

N5 EGOP @

Rapid amplification cDNA ends

Q RS TLE@ RS

untranslated region

Q EF G7@

RNA interference

5

Disain primer

spesifik

PM H

+

-ATPase bagian

tengah

PM H

+

-ATPase bagian

ujung 5’

3’RACE

Konstruksi RNAi

Pembentukan cDNA

melalui transkripsi balik

Isolasi RNA total

PCR dengan

primer spesifik

Disain primer spesifik

untuk isolasi ujung 5’

Disain primer spesifik

untuk isolasi ujung 3’

PM H

+

-ATPase bagian

ujung 3’

PM H

+

-ATPase

Full Length

3’UTR

Transformasi

pada Melastoma

Uji toleransi tanaman terhadap

cekaman aluminium

Percobaan I

Percobaan II

^

oksisit

_`

Aluminium

abc d ef ecd dg hc ij kjf blmj d njfmdg d icfn je kgbed ijo jf p ef mm e kgpem j

q e kc b eprc d e

(

s hte m

1993).

ugv j hj f l hdjb

,

jbcdef ec d

(

ab

)

rghjqj q jbj d rg fpck lkw eq jqjf kld ibgkwjb cd eflw eb ekjpnjfmp eq j kbjhc pq jfp eqj kp l kwekxab cd ef ecd

dg d ic fn je dc jp jf elf ek pef mme qjf hjq ecw elf ek hgf q jo

,

qg fmjf hjw el dc jpjf

pghojq ji hjq ecw

(

y

/

h

)

wgrg w j h

5.9

wg o efmm j ab q jijp dgd ilbj hewjw e dlbg kcb j eh

.

ab c d efec d dgd rg fp c k ek jp jf k llhq ef jw e q gfmjf g f j d d lbg kcb je h q jbj d

klfzemc h jw el kp jo gqhjb

.

{ g h j| jpi lbj hew jwee kjpjfs

-

}njf mp efmm eq j ijpq eo jw eb kjf pghm jf pcf mi jq ji}dg q ej

,

dgbjb ceq ew lw ejw ewjp cjpjcbgreoi hlplf~

ab

(

}

2

s

)6

3+



ab

(

}

2

s

)5

2+

+

}

+

ab c d efec d wgb jf|c pf nj dg fmjb j de wg h e o eq hlb ewew njf m p g hmjfpc f m i}

(

shtem

1993).

gf pckabpg hwg rcpwg h efmqew ef mkjpdgf |jqeab

3+

jpjcab

(

s}

)

€

3-

€

.

jq ji}fgphjb

,

abdgdrgf pckkld ibgkwq gf mjfe lfo eq h lkw eq j

,

ab

(

s}

)3,

njfm p eq j k bjhcp

,

wg q jfmk jf ijqj i} jwjd

,

ab rg h jq j qjb j d rg fpck ab

3+

n jf m

dg hc ij kjf rg fp c k ab n jfm i jbef m p lkw ekx jqj bj hcpjf q gf mjf i} n jfm bgreo

hg fqjo qj he

5.0,

elf ab rghjqj qjbjdrgf pck l kp jo gqhjbogkw jo eq hjp

,

ab

(

}

2

s

)6

3+

,

wg h ef m q ew ef mkjp qg fmjf ab

3+

.

jqj b j hc pjf n jf m kgjw jd jffn j rghkchjf m

,

ab

(

}

2

s

)6

3+

dgf mjb j d eqgihlp lfjw edg f|jq eab

(

s}

)

2+

qjfab

(

s}

)2

+

.

jqjb j hcp jf

fg p h jb dg fng r jr kjf ab

(

s}

)3

dg fmg fqji q jf b jhc p kg d rjbe ijqj bj hc pjf rjwj qg fm jf dgd rg fp c k zlh d jw e pgp h jo gqhjb

,

ab

(

s}

)4

-

(

{g bo j e yg

&

‚n jf

1995;

ƒj hw vofgh

1995).

jq jklfqew e hjw el ab

3+

/

s}

-p e fm me

,

w igw egw ilbef c kb gj hwgighpe

ilb ek jpelfpheqgkjdghe k

,

ab

13,

pghrg fp c kq j heab

(

s}

)

2+

(

j hkgh

&

g hpwvo

1992).

u igw egw ke dej ab n jf m plkw ek jq jbjo ab

3+

q jf dlf lfc kbg jh o eq h lkw eq j

,

ab

(

s}

)

2+

q jf ab

(

s}

)2

+

(

„efhj eq g

1991).

grg hj ij wpcq e p gbjo dgf cf| c k kjf rjo …jilbekjpelfpheq g kjdghe k

,

ab

13,

dghc i jkjfw igw egwabnjf m|cm jdgd ic fnj e p l kw ew epjwpefmme

.

abc d ef ecd dg hc ij kjf k jpelf hgj kpez p ef mm e q gf mjf hjw el e lf e k pg ho jqj i

† ‡ˆ ‡‰ Š‹ˆŒ  Ž ‰‹ ‘‹ ˆ ˆ ŽŒ‹ ‘ ’“

.

”• ‡ ‰’† ‹

,

‹ ˆ ’‡ˆ Š‹ ˆŒ –‹ • ’ˆ Œ Ž• Ž—‘ ‰‡ˆ ŽŒ‹ ‘ ’“

,

 Ž‰ –‹—‹ ˆ • ’Œ‹ˆ  ‡ˆ ‡† Žˆ‘ ‹‘ Š‹ ˆŒ † ’˜—‹’

.

™—‹ ˆ ‘ Ž‘ ‹ –’

,

™ • •Ž ’š › Žˆ†Ž‰ˆŒ

 Žˆ Œ’—‹‘ •’Œ‹ ˆ Š‹ ˆŒ ŽˆŒ‹ˆ †ˆ Œ ‡— ˜’Œ Žˆ œ ˜Ž–Ž‰‘ ’

–

žž Ÿ

(

—‹‰ ‡ —˜’•

), –

ž Ÿ

(

š ’† ‰ ‡—˜’ •

), –

ž

(

—‹‰ ‡ˆ ’ •

),

†‹ˆ

–

 ž

3 (

“‡˜“‹ ‘

) (

ž ‰¡’Œ

1993).

™  ’ˆ ‹’‹ ˜‹ ˆŠ‹ ¢  Œ‹

 Ž‰ –‹—‹ ˆ – Žˆ Œ’ —‹ ‘™ • –Žˆ‘’ˆŒ

,

‹ˆ‘‹‰‹ •‹’ˆ –‹ †‹‹ Œ’‹ ˆ •’Œ‹ˆ  •‘ ’†Žˆ ‘‹ ‘˜Ž –Ž ‰‘’ ˆ ’‘ ‰’ •‡‘ ‰’‹›Ž‘ ’›‹›’†

(

£¤™

)

† ‹ˆŽ‘šŠ•Žˆ† ’‹  ’ˆŽ‘Ž‘ ‰‹‹ ›Ž‘ ’›‹›’†

(

¥ ¦¤™

).

§— ‰‹ˆ

—‹ ‘ ’‡ˆ Ž ‰ –‹ —‹ˆ “ ‹ —‘ ‡ ‰Š‹ ˆŒ–‹•’ˆ Œ– Žˆ ‘ ’ˆ Œ†‹•‹  ˜˜‘ ’‘ ˜’ ’‡ˆ

•‡Œ‹

(

¨’• •’‹  ˜

, 2002).

§— ‰‹ˆ

’‡ˆ ™ •

(

‰

= 0,054 nm) hampir sama dengan

ukuran ion Mg

2+

(r = 0,072 nm) dan Fe

3+

(r = 0,065 nm). Aluminium dapat

mengikat nukleosida trifosfat dengan tingkat asosiasi 10

7

kali dibandingkan

dengan Mg

2+

. Disamping itu, Al juga lebih kompetitif dalam pembentukan

kompleks dengan ligan-ligan kecil. Al mempunyai kecepatan pertukaran yang

rendah untuk masuk dan keluar lingkaran koordinasinya (Orvig 1993). Kecepatan

pertukaran ligan untuk Al adalah 1,3 per detik, 10

5

kali lebih rendah dibandingkan

dengan Mg

2+

(Martin 1992). Oleh karena itu, bila dalam sitoplasma mengandung

Al maka proses metabolisme menjadi terganggu karena posisi Mg

2+

sebagai

kofaktor dalam beberapa enzim akan tergantikan oleh Al

3+

sehingga aktivitas

enzim tersebut menjadi terganggu.

Berdasarkan konsentrasi kation dan ligan dalam sistem biologi, dalam

sitoplasma dengan pH sekitar 7.3, konsentrasi ion Al bebas terbatas sekitar 10

-10

M, sedangkan konsentrasi ion Mg, Ca, dan Fe bebas masing-masing 10

-3

, 10

-7

,

dan 10

-17

M (Williams 2002). Konsentrasi ion Al dalam sitoplasma lebih rendah

dibandingkan dengan ion Mg dan Ca. Hal ini disebabkan karena pH dalam

sitoplasma adalah netral dan Al mengendap pada kondisi tersebut, sedangkan ion

Mg dan Ca tetap larut. Pengikatan Al terhadap ligan dalam sitoplasma menjadi

terbatas selain disebabkan karena konsentrasinya sangat rendah, juga disebabkan

karena terjadi kompetisi dengan kation-kation lain.

© ª

nyer

«¬ «­

d

«­

Distri

®

usi Al p

«¯«

Ak

«°

d

«­

D

«±

n

1993;

¶·¸¹º» ¼ ¸¼ ½¾ ¿ À

.

1996).

Á  ü ÃÄŻƹ Ç ÄŸ Æ ÷ È ¹ ÄÇ· É·Æ Ç· ÅÅ Æ ÄÅ

,

¹ÄÊ ÆÂÉÉ·

Ë ÄÂÉ·Â ÉȺ¸· ÂÌÍÈÄ˺ κ È÷ Â÷ ºÂ» ÄÂÏ·ÃÆÍÄÇ ÆÊÈÄÎÆÍ

.

Ì È·  ¸Ä¸·Ë Æ

,

Ç·  з È ¹ËĹ Æ Ä¹ ¸· · »·  з ÂÉ »ÄÂɷȺ »º Í· ¹ Æ ÌÍ ÃÆ Ë ºÎº È

(

Ñ· ¹ Ä ½¾¿ À

. 2002;

Ò·¸· · ÇÄ

&

Ó¹·ÈÆ

2002

Ç

).

Ô»º »  з

,

¸·Â·»· Â

-

¸·Â·» ·  Æ Æ

Ç ÄÅ· ¹·Í Ã·Å Æ Ã·ÄÅ· Ê ¸Å¼ ËÆ È ·¸· º ¹ºÇ ¸Å¼ Ë ÆÈ Ã·  ¹ ÄÅÆÂ É Ã Æ¹ ÄǺ ¸ ¹ ÄÇ· É·Æ ¸·Â· » ·Â

Ê ÆË ÄŷȺ» ºÍ·¸¼Å

.

ռ¸¼ ʸ· · »·ÂÊ ÆË ÄŷȺ» º Í·¸¼Å· ÷ Í ·Ê¸·Â ·» · ¸ÄÊ

(

Ö¿ ×½ ÀÀØ¿ ÙØÚ½ÚÙØÙ

),

ÊÐÃÅ ·Â ÉÄ· Ã·Â Ç ÄÇÄÅ· Ë·

Û· » ÆÍÆ ÜºÇÆ·ÎÄ·Ä

.

Ý·» º Â

ÃÄ»ÆÈÆ· Â

,

ÇÄͺ » Ç·  з È

ÆÂۼŻ · ¹ Æ

» Ä ÉÄÂ·Æ » Ä È·  ƹ»Ä

,

ͼȷ Í Æ¹· ¹ Æ ¹Äͺ ÍÄÅ

,

Ã·Â Ç Ä¸ºÈ

-

ÇĸºÈ ÈÆ» Æ· ÌÍ Ð· ÂÉ ¸ ÄÅ · Ⱥ»ºÍ ·¹ Æ Ã· Í·» ¸· · »·Â ¸ÄŹ ÄǺ¸

.

Þ· ÷ ¹· ¸º ËÄ ɷ » ·¸·Â ¸Ä ¸·Â É Ç Ä ¸º È ÈƻƷ ÌÍ Ë·Ã· ÷ ºÂ ¸ ÄÊ

,

Ç· Â Ð·È ÌÍ Ã ÆÈ ÄÍ · ¸ ¼ ÍÄÊ ÉºÉº ¹ ˼ÍÆÛļ Í

(

Ý· É·¸· ½¾ ¿À

. 1992).

Þ· ÷÷º Â Ê ÐÃÅ· ÂÉÄ·

,

ÌÍ Ã Æ¸ Ä» º È·Â »Ä» Ç Ä¸º È È¼» ËÍÄȹ

ÃÄÂÉ·Â ¹ Æ ¸Å ·¸

(

¶· ½¾ ¿ À

. 1997

·

)

÷  ˷÷ Ê ÆËÄÅ· Ⱥ» ºÍ · ¸¼Å ß½À¿Ù¾à׿

׿ À¿ ῾ âãØ äå ×

,

ÌÍÇ ÄÅ ÆÈ· ¸· ÂÃÄÂÉ· ¼ ȹ·Í·¸

(

Ò·¸· · ÇĽ¾¿ À

. 1998

·

).

æ

ok

çè

is

çé

i Al

ê

u

ë

seluler

ìÄÇ ÄÅ ·Ë ·

¹ ¸º ÃÆ »Äº ÂϺÈÈ·Â

Ç· Êí·

¹ ÄÇ·É Æ·  ÇĹ· Å ÌÍ ÃÆÍ ¼ È·Í Æ¹·¹ Æ Ë·Ã·

ÃÆ ÃÆÂɹ ÄÍ

(

¶· Å Æ ÄÂÛÄÍ Ã

&

î ¸ÄÍ ïÄÅ

1993;

ÓíÂ Ç Ð

1993;

¶·ÅÆÄÂÛÄÍý¾¿À

. 1995).

ÌÍ Ç ÄÅ Æ È·¸·  ÃÄÂÉ·  » ¼Í ÄÈºÍ ËÄÈ ¸Æ ÃÆ ÃÆÂÉ ¹ ÄÍ ·¸· º ȼ »Ë ¼ÂÄ à Æ à ÆÂ É ¹ ÄÍ Ð·Â É

Ç ÄÅ» º·¸·   ÄÉ· ¸ ÆÛË· ÷¹ÄÍ

-

¹ ÄÍÄË Æà ÄÅ » ƹ÷ Âȼ Å ¸Äȹ ·È· Å

(

ð ÄÍ Ê·ÆïĽ¾¿ À

. 1993;

¶· Å Æ ÄÂÛÄÍÃ ½¾ ¿ À

. 2000;

î ÎÊ »¼ ÊÍ

&

ñ¼Å ¹ ¸

2000;

îÎÊ» ¼Ê Í ½¾ ¿ À

. 2000).

òºÉº¹ È· ÅÇ ¼ ȹ ÆÍ Ç ÄÇ ·¹» ¼ÍÄ Èº Í ËÄÈ ¸ÆÂÐ·Â É Ç ÄÅ» º·¸·Â  ÄÉ·¸ÆÛ » ÄÂÉÆ È·¸Æ¼Â· Í º»ÆÂƺ»

»ÄÂÐÄÇ· Ç È·  à ÆÂÃÆÂ É ¹ ÄÍ » ÄÂÏ·ÃÆ È·Èº ¹ ÄÊ ÆÂÉÉ· Ë Ä»· ÂÏ· ÂÉ·  ·È· Å »ÄÂÏ·Ã Æ

¸ÄÅÊ ·» Ç·¸

(

îÎÊ» ¼Ê Í

&

ñ¼ Ź ¸

2000).

¶Äº ź ¸ îÎÊ» ¼ÊÍ ½¾ ¿ À

.

(2000),

Ë ÄÅÍ · Ⱥ·  ÄÂïÆ» ËÄÎ ¸Æ » Ä¸Ê ÐÍ Ä¹ ¸ÄÅ· ¹ Ä

(

Þ¶Áó ˷÷ ¹º ¹Ë Ĺ Æ ¹ ÄÍ ô½¿ ׿õÙ »Ä ÐÄÇ ·ÇÈ· Â Ë Äº ź ·Â ¸¼ÍÄÅ· ¹ Æ ·Í º»Æ ƺ »

.

îÄÍ· ÂϺ ¸Â з

,

¼öÄÅ Ä È¹Ë Å Ä¹ Æ Þ¶Á ˷÷ ¸· ·» ·Â ÈÄ ¸·Â É ¸Å· Â¹É ÄÂÆÈ ¸ÄÅǺȸ Æ ÍÄÇ ÆÊ ¹Ä¹ Æ ¸ÆÛ ¸ ÄŠʷ÷ Ë ·Í º»ÆÂƺ» ÷ Å ÆË· ÷ Ⱥ͸Æö· Å

¸¼ Í ÄÅ·  ÷ Â

¹ ÄÂ¹Æ ¸ÆÛ

· ͺ »Æ ƺ»

.

ìÄŠ÷ ¹· Å È·Â

Ë ÄÂÏÄÍ·¹·  ¸ÄŹÄǺ¸ ÷ Ë·¸

Ãƹ Æ» ˺ Í È·  Ƿ Êí· » · ¸Å Æȹ ËÄÈ ¸Æ ˷÷ · ˼ ËÍ·¹ ¹ ÄÍ

-

¹ÄÍ · Ë ÆÈ·Í ·È· Å ÇÄÅËÄÅ ·Â·Â Ë Ä ¸ ÆÂÉ Ã· Í· » »Ä»Û· ¹ ÆÍƸ· ¹Æ ¹ ÆÂ Ð·Í ¹ ¸Å Ĺ¹ ˷÷ ¹ Ƹ¼ ¹ ÈÄÍ Ä ¸¼  ¹ÄÍ

-

¹ ÄÍ ¸ÄÅ ¹ ÄÇ º ¸

.

ÌȺ » ºÍ ·¹ Æ · ͺ» Æ ƺ » з ÂÉ ¸ Æ ÉÉÆ Ã·Í ·» ·Ë ¼ËÍ ·¹ · È·Å »Äź˷ ȷ ȷŷȸ ÄÅƹ ¸ ÆÈ

ø ùú ûü ýþüýÿ ýÿ þ ùþ þü ûüÿ ùþüþ þ üþüýÿþ û üýýþ û ùúþ

úþ þûû þ

(

þ üû

1995).

ÿúùþüÿ ýþûü ÿüÿþ üþ þ ø ùú ûÿþ ü þ úþûþ ü ûùþüý

úþ þ ûü ûþ þü ûÿ þ þ ü þ þÿ û ÿ þþü þ û ûþ ù þ ûþ ü û ù

.

ûûþ ù þ û þü û ù þüý ûüüýþ þúþ ûü úþ û û ùþ úûüýþ ü

ûü ûþ þ ü ø ù

(

þþ

. 2001;

û

-

þ ü ÿ

. 2001).

þú þûþ ü û ù

þ þ þ ùû

,

øù ú ûÿþ ü û þ þ úûü ýþü ýÿýÿ ù ú ûþü þ ü ý ûüû þþ ü û ÿ þ þ ü ÿ ÿ ûþ ü þ þ ÿ û ÿ þ þ ü ú þùþ û ûþ ù þ

û þü

.

þù ü ûü ûþ þ ü ûü û þþü þ þ þ ü ý úþþ ù ùû þ üûü þú û þ þ

(

þ ÿ

1991).

üøùþüý û ÿþ þ ü úþ þ ûþ þ ú ûüýþ ü ýÿýÿ þ úþ ø þþÿ ù ú þúþ ûþü þ üý

þ þü û ûüýþ ÿ û û þ þ ü ü

.

øùÿü ÿúûÿþüúþ ùþü ÿ ùûÿ ûþþ üúûü ýþüø

(

þ ÿ

. 1976).

ûúþ ü ý þüûü ÿ ÿ ùþ

. (2000)

þ þ ø ùú þþ ûþ ÿÿùþ

úþùþü ÿ ùû ÿ úûü ýþ ü ü ûüþ þ ü ý ûü úþ ø þ þ ü þ þø ù úûü ýþüø

úþ þ ûü ý ûü þ ü û ûûùþ þ ü û ù û û þ þ ù

(

þ ÿ

1991).

ø ù úþùþ ûü ÿ ù û ûù ÿþ þü þ ü ý û þ û þ û ù

þ ü þ ÿ ûüýþþ ü

.

ù û øù ü úþ þ ûü ýþ þ þ ü ý þú þ þú þ ûú ÿþ ÿþ ø

,

ûü ýþþþüýþ ýþ ùü þ ûú ÿþ ÿþ øû þ

(

þ ÿ

1991).

nsitivit

!

eluler terh

" #

Al

þ úþ þ üþ þü

,

ýûþùþ þ ûùþ ü ý ÿü ý ú ÿÿüý þ þ

(

$ þ ü

.

1993).

þýÿ ÿ

&

(1998)

ûü ÿü ÿþü þ þ úþ û þ þ þ þüý þ ù üý

ûü û þ úþ øù þ úþùþ þ ýþ ü ú þ ù úþ %ü þ þ ü

(

&

).

û ù

-

û ù þ ü ý

þùü ý ûü û þ úþ ø ù þ úþùþ û úû

(

' þ þ

2000;

'þ þ

2002).

$þ ÿ þþ ú þü ûù

-

û ù ûú û þù þüý ûú ûþþü ÿýþ ûü ÿü ÿþ ü

ûü þ ü þ û þ úþ ø ù

(

(ü û

. 1995

).

$þ ÿ þ þ ÿÿüþ þüýþ ûü û þú þ øù

,

üþ ÿü ü ýþ ûü þ ü þ þ ü ýþ û ýþ ü ÿü ý þú þ þ þ ù ý üþ

(

'þ û

1995;

(ü û

. 1998).

$þ ÿ þ þ þüý

û þüþ ü ýþ üüþ û ùþ

ù ûüýþ )

*+, - +.// 0 1+0 123 2423 / 1 56 /0 3/ ,/ 7870 9 ./0 ./1/, / :/ , ./ , 2 :+;/ <-/=

:/ ;/ 0 9

-

: /; / 0 9/ 0

(

>= +0 ?@ AB

. 2004)

./0 :+; /< -/= C/.2

(

D/9/1/ :/ ?@ AB

. 2003)

3 + 6/ = .278 2

.

*+, - +.// 0 3+,1+- 73 <+0 E/09:73 +:17./12 /1/<

-

/ 1/ < F, 9/02: G *+, -+ .//0 1+0 1232423 / 1 5 6 1+C/ 08 /09 C F,F1 / :/, 32./ : ./ C/ 3 . 28+6/ 1: /0 .+0 9/0

C +, - +./ / 0 +:17./12 / 1/<F,9/ 0 2:G H/+, /=/ :/ , E/09 C / 6 209 1+0 123 2I 3+,=/./ C 56

,

<+09+: 17./ 12/ 1/< F, 9/02: C/620 9- +1/ , . 2/ C +:1/ :/ ,0E/

(

H + 6= / 2J+ ?@ AB

. 1993;

*+ 66+3 ?@ AB

. 1995;

K/,2/ 0 F

&

L+638+01

2003).

M: 17./ 12

/ 1/ < F , 9/ 0 2: ./ C/3

<+08 + 6/ 1:/ 0 C +, - +.// 0 3 F 6+,/ 0 12 56 /0 3/ , 9+0F 32C+

,

3+3/ C 2 32./: / 03 /,/ 3 2C + 1+ 6 ./6/</ :/ ,E/ 0 91/ </

.

*+, - +.// 0 1+0 123 2 423 /1 56 ./C/3 87 9/ .23+< 7:/ 0 C/./ :7637, 1+6 3/ 0/ </0

1+=2099/ ./C /3 <+<-+,2:/ 0 /63 +, 0/ 3 2I 70 3 7: / :/ ,

.

>+6

-

1+6 3 +<-/ :/7 C/./ I/1+ C +,37<-7=/ 0 6F 9/ , 23 <2: / ./ 6/ = 1+0 1232I 3+,= / ./C 56

,

3+3/C2 1+6

-

1+6 C/ ./ I/1+

13/12F 0+, 3 2 ./ : 1+0 123 2I 56

(

N/ </< F3 F ?@ AB

. 1994;

O23F , + 66F

&

P/ 7 9

1996;

>24/97,7 ?@ AB

. 1999).

>+01232423/1 56 87 9/ 3+,8 /.2 .+0 9/0 < +</02C76/ 12 :/ 0 . 70 9/0C +:320./0/ :3 2 423/1C+: 3 20<+326+ 13 +,/ 1+C/./:7637,1+6Q? AR AS T./ 0

U VB AWXR@X Y?Z VTXR

(

>;= <F = 6

&

PF, 13

2000;

>= < F= 6?@AB

. 2000).

[ \

k

] ^

isme

_

t

] `]a

oksisit

] b

Al

*+0 + 623 2/0 3+03/ 0 9 3/ , 9+3 73/ < / :+, 7 1/:/0 3/ 0/ </0 F6+= 56 ./0

C +< /=/ </0 E/09 6+0 9:/ C 3 +03/ 0 9 < +:/ 0 2 1< + 3F: 12 123/1 56< +, 7C /:/0 =/ 6 E/09

C +0320 9 ./6/ << +<C +6/8 /,23 F:12123/156

.

P2CF3+ 12 1 3+0 3/ 0 9< +:/ 0 2 1< +3 F:12123 /1 56 C / 6 20 9 32./: <+0E/ 0 9: 73 C +09/ , 7=0E/ 3+, =/./ C IF 1I/ 3

,

<+3/ -F62 1< +

0 7: 6+F32./

,

13,7:37, ./ 0 I70 912 . 20.209 1+6

,

. 20 /<2:/ 123 F 1:+ 6+3/6

,

3 ,/01.7: 12 1290/6

,

./ 013 , + 11F: 12 ./3 2I

.

5 67<20 27< </ < C 7 <+0 92:/ 3 HD 5 . +09/ 0 : 7/3 C / ./ 376/ 0 9 C7099709

I F1I/3/ 3/7C/././+,/ =E/ 0 9-+,/1F 12/ 12.+0 9/0= 213F 0

(

K/ 3 17<F 3F

1991).

P/620 2 <+0E+ -/-:/ 0C+< - +6/ =/01+ 63+, 9/ 0 997:/ , +0//./0E/ 20 3+,/ : 12/0 3/ ,/56. +09/ 0

HD 5 203 2

.

5687 9/ < +<C70 E/ 2 / I2023/1 3 20 992 3 +,= / ./C 0 7: 6+F 3 2 ./ 3,2I F1I /3 -+ -/ 1

.+0 9/0 < F.+ 6 3F : 12123/1 -+, ./1/ ,:/ 0 C / ./ C +0 92: /3/0 0 E/ 3+,= / ./C 5c * ./ 6/ <

efg h ij igh k g lm nm om p hq rg sm t uprgv pg r hqhsrm j ofm uhm

(

wtm x y z {|

.

1987)

nmjsqroq j lm rg t squmromnmoqrlqrm vm j i xjhq fijpm uihqhsrm j

,

v tguguj }m

oq j}q rmom j ~m

2+

(

ig

&

gm j

2001).

€ xvu iu i pmu ef uqrij l sqrtg sgjlm j nqjlm j ~m

2+

(

qjlq f

&

w tm j l

2003)

vmrq jm ef hq j llmjllg hqpm s xf iu hq ~m

2+

uqf gf q r

,

m pm gvm rqjmefhq j llmjpivm j~m

2+

nmf mhuqf

(

‚ijrminq

&

ƒmrv q r

1987).

„qsqrmom oq j lm hmpm j n ipq hgvmj smt…m ef hq rgsmt u prgv pg r vm f h xngfij

,

ugmpg hq n impx r

u iljm f~m

2+

ij p rmuq fgfqrg pmhmnmfm huq f

(

†mg l

&

‡ip xrq ffxˆ‰‰ Š‹

.

ƒq j lm hmpm jfmij

hqj gjkgv vm j sm t …m prmj u ngv u i u iljm f }m j l

niŒm u ifipmu i xfqt

 Ž Ž‘ ’‘z‘ “y

,

ugmpg k mf g r}m j lkg lmhqf is m pvm j ~m

2+

uqs m lm ioqrm j pmrm ij p rm uqf gf q r

(

‘ ’z”{•y ||–|{” —yy’˜y”

),

hq rg om vm jumf m tumpgu i pgug pm hm p xvu iu ipmuefsmivomnmuq fhm hm f im

(

†m g ly z{|

.

1994)

hm g ogjom nmuqfpmjm hm j

(

™xjqu

&

‚xštimj

1995;

™xjquy z {|

.

1995

m

).

ƒmnm vqngm vmugu pq ruqs g p

,

oqrfm vgmj ef nmomp hq j ltmhsm p m v p i›i pm u

ot xu ot xf i om uq~mpm ghqjltmhsmpm vuio rxpq ijp rihqrivœ

.

efg h ij igh nmom phq j ij lv m pvm ju prquuxvu i nmpiŒnm fm h uqf

.

ƒmnm pm jmhmj

,

sg v pi pqjpm j l ijihq fi ogpioq j ij lvmpm j oq r xv ui nm ui f i oi n

(

~m v hmv

&

†xru p

1991;

mhm h xp xyz{ |

. 2001),

nmjq vu o rqu ilqj

-

lqju prquuxvu i nmpiŒ

(

ištmrny z{|

. 1998;

ž iff m y z { |

. 2002).

ƒqrs m ivm j p xfqrm ju i pqrtm nmo p xv uiu ipmu ef omnm pmjmhmj nifm vgvmjxf qtlqj

-

lq jup rq uuxv u inmpiŒ

(

Ÿ  m v iyz{|

. 2000).

¡p rq uu xv u inm u i }m j l niijngv u i ef omfijl ghgh sqrtgsg j lm j nq j lm j

oqrg smtmju p rg v pgrhqhs rmjxf qtef

.

enmj }m ¢qnmomphq jij lvmpvm joqrxvu inmu i hq hs rmj }mjl n iij ng v u i xf q t ef

(

£j x y z {|

. 1995;

mhm h x px yz { |

. 1997).

ƒq j lmrgt ef omnm u iu pqh m j p ixv u inm j uq f pinmv nmomp n itifm j lvm j

(

¤q›i yz {|

.

2003;

œ g x y z {|

. 2004).

evpi›mu i u iu pqh m j pi xvuinm j uqf gfq r hqrg omvmj uq sgmt

rq u oxjup rq uug hghnmjpinm v

u oq u iŒiv

pqrtmnmop xv uiu ipmuef

.

†iox pq u iu fmij }m j l hqj m r iv mnmfmt pqh omp gpm hm pxvu iu ipm u ef pq rfqpmv

omnm rm j lvmim j ¥y|| ¦ {| |

–

§ |{—{ ¨y—©”{’y

–

¥

y

zªy|yz’

(

~«

-

ƒž

-

~¡ ‚

)

(

†x ru p yz { |

. 1999).

†mf ijiniuq sm svmj vmrq jmnijnijl uq f

,

hqhsrm j ofm uhm nmj

u ip xuvq fqp xj um f ijl sqrtgsg j lm j umpg umhm fmij

,

uq t ijllm lm j l lgm j }m jl pqrkm ni omnm umfm t um pg v x h oxjqj nmomp hq j llmjllg vx ho xj qj fmijj }m

.

†m f ij i nm om p

hqjkq fmuvm j Œm vpm

smt…m ef s q r ijpqrm vu i nqjlm j nij nij l uq f

(

­ ®¯ °±­ ²­ ®³ ® ´µ

.

¶· ¸¹¯±¸º »¼ ½ ½

w

¾½½

–

¾¿¿À» Á ¾Â¼Ã ļ »¼ Å ÀÄ ÆÁ Ç ¾¿¼

(

È´É

)

Ê ² °® Ë º ºÌË ²·¸ºÍµ± δµ

(

Ï ºÐ® °²¯ ²¼Â¾½

. 2003).

Ñ Ò

j

ÓÔ Ó

d

ÓÕÖ Ò

n

× ÓØ

uh

Ù

mum

Ú

oksisit

ÓÛ

Aluminium p

ÓÜÓÚÓÕÓ

m

Ó Õ

ݱʮµ ® ­ Í·¸º¸º­® ¸ ®µ ²³ ºÌ º² ³ Þ® Ì° ¹®µ º Ì° ²³ ²³ ®Ë®µ®Î ¹± Ì °Î®³ß®­®Ì

¹± ¯­ ²³ß² Î ® Ì ®· ®¯

,

Þ® Ì° ­ ±¯Ë ±­ ± · ¸º Ë®µ®³

30

³ ±Ìº­ Î º Ì°°®

2

Ê®³

,

Ë ®µ ®³ · Í Ì¸±Ì­¯®¸º ³ º·¯Í³Íµ®¯ ´µ

(

à ®¯á ±µÍ

&

âÍ ¸áÎ ± ̯ º± ˱ ¯

2002).

´· ® Ì ­ ±­®¹º

,

³ ±·®Ìº¸³± ¹±Ì°Î®³ß®­ ®Ì ºÌº ß± µ² ³ ˺·±­®Î² º

.

´Ë®ÌÞ® ·± ¯² ¸®·® Ì ®·®¯ ͵± Î ´µ Ë º­² Ìʲ · · ® Ì Íµ±Î ß± Ì­²· ®·®¯ Þ ®Ì ° ³ ± ÌÊ ®Ë º ¹± Ì˱ · Ë ® Ì °± ³ ²·

,

¸± ¯­ ® ¸± ¯ º Ì° ß± ¯ 㮯 Ì ® áÍ·µ ®­

.

ä² ³ µ®Î ¹± ¯á ® ß® Ì°® Ì Ë ® Ì ¯®³ ß² ­ ®·®¯ ³±Ì² ¯² Ì ¸±¯ ­ ® ¸º¸­± ³

¹± ¯ ®·®¯ ® Ì ³ ± Ì°²³¹² µ

.

â®Ë ® ® ¹± · ¸ ®·®¯

,

·± ¯± ­®· ® Ì ®· ®¯ ³ ² Ë ®Î Ë º®³®­ º ¹®Ë ® ± ¹ ºË ±¯ ³º ¸

.

â± ¯µ ² ® ¸®Ì¸± µ

-

¸± µ · ͯ ­± · ¸ ¸±á®¯ ®¯ ® Ë º®µË ® Ì ­ ºË®· ³±¯®­ ® ³±ÌÞ±ß ®ß· ® Ì ¹±Ì±ß®µ® Ì®· ®¯Ë ® ̸­ ¯±¸¸³±·®Ìº·¹®Ë®±¹ºË ±¯ ³º¸

(

庮³¹Í¯ ÍЮ

2002).

ϱ µ

-

¸±µÞ ®Ì °Ëº¹±Ì°®¯²ÎºÍµ± δµ®Ë®µ ®Î®Ì­®¯ ®µ ®ºÌ­ ²Ë ² Ì°®· ®¯

,

³± ¯ º ¸­± ³

,

¸±µ

-

¸±µ ¹± ³ ®ÌÊ® Ì°® Ìæ ¯®³ß²­ ®·®¯

,

Ë® Ì ­ º­ º· ¹±¯á ® ß® Ì°®Ì

(

ç± Ì °± µ

1996).

èʲ̰

®· ®¯ ³± ¯²¹®·®Ì Ë®± ¯ ®Î Þ® Ì° ¹®µ º Ì°

¸± Ì ¸º­ºé

­± ¯Î®Ë®¹ á ±· ®³ ® Ì ´µ

(

çÞ® Ì

¼ Â ¾½

.

1993).

ê ®µ ®³ ¹±Ì°²Ê º®Ì Þ ®Ì ° µ±ßºÎ Ë ±­ ®ºµ

,

Ë®± ¯®Î ˺¸­ ®µ ëÍÌ® ­¯ ® ̸º¸º

(

ìÁ ¿Â ¾½

ÂÄ ¾Ç¿Á ÁÀ Ç

z

ÀǼ

,

êí î

)

³ ± ¯² ¹ ®· ®ÌË®± ¯ ®Î®¹º·®µ®·®¯Þ ®Ì °¹®µ ºÌ °¸± Ì ¸º­ºé­± ¯Î®Ë ®¹ ´µ

(

Ï ºÐ® °²¯²

&

ï ͯ ¸­

1998).

â®Ë ®­ ®Î ®¹® 㮵­Í·¸º ¸º­®¸

,

®·­ º к­ ® ¸¹± ³ ß±µ ®Î®Ì¸±µ ³ ± ̲¯²Ì Þ ®Ì °®· ® Ì ß± ¯ ®· º ß®­­ ±¯ Î®Ë ® ¹¹±Ì°Î ®³ ß®­ ® Ì ¹± ³® ÌÊ® Ì°®Ì¸±µ Ë® ̹ ®Ë®

®· Î º¯ ÌÞ ® ³ ±Ì°Î®³ß®­ ¹±¯ ­²³ß²Î® Ì ®· ®¯

(

ÉÍá Î º ®Ì

1995;

à ®¯á± µ Í

&

â͸á α̯º± ˱ ¯

2002;

庮³¹Í¯ ÍЮ

2002).

È®µ®² ¹² Ì °± Ê ®µ® ­Í·¸º ¸º­® ¸ ´µ Ê ² °® ­±¯ Ê ®Ë º ¹®Ë ® ¹²á ²·

,

Î ®µ ºÌ º ß º® ¸®ÌÞ® Ë º ¹® ÌË ® Ì° ¸±ß® °®º ·Í̸± ·² ± Ì ¸º Ë®¯ º ·± ¯²¸®· ®Ì Þ® Ì° ­± ¯ ʮ˺ ¹®Ë® ¸º¸­± ³

¹± ¯ ®·®¯ ® Ì

.

籸¹ÍÌ ¸Þ® Ì°¹ ®µºÌ°²³ ² ³ ¹®Ë®¹²á² · ­± ¯Î ®Ë® ¹ ­ Í·¸º¸º­® ¸ ´µ®Ë ®µ ®Î ³ÍË ºéº·® ¸º ¸±µ ²µ±¯ ¹ ®Ë® Ë®²Ìæ ³± ̲¯ ² ÌÌÞ® ¹±³ß²· ® ® Ì ¸­ ͳ®­®

,

¹± ̲¯²Ì® Ì

®· ­ º к­ ® ¸

éÍ­ ͸º Ì­± ¸º ¸

,

·µÍ¯ ͸º ¸

,

Ë ® Ì Ì±· ¯ ͸º ¸

.

Ɐ µ ®·²®Ì ´µ Ë®µ®³ ã®· ­² µ®³® ³ ± Ìޱ߮ ß·® Ì ¹±Ì°Î ®³ ß®­® ̹±¯ ­²³ß²Î ® Ì®·®¯Ë® ̳±Ì°®¯ ®Î·±Ë±éº ¸º±Ì¸º² Ì ¸²¯

Î ®¯ ®

,

­ ±¯ ²­®³ ® â

,

É

,

å®

,

Ë®Ì ð°

(

ï ®²°

&

ñº­Í¯ ± µµÍ

1996).

â®Ë®­ ® Ì®³ ®Ì ß®¯µ ±Þ Þ® Ì° ˺­®Ì ®³ ¹®Ë ® ³ ± Ë º® Þ® Ì° ³ ±Ì°® ÌË ² Ì° ´µ

,

·®Ì˲ Ì °® Ì å®

2+

Ë ® Ì É

+

Î ® ÌÞ®

ó ôóõôö÷ø ù úø û÷ø ùüóýþôùú ÿû ö ó ôóýø öÿû ûö ÷ûú ÷ ö ÷ô û ûý üùú ôö

û÷ ûø û

(

üú ü ö

&

û öú

1995).

ö ÷ô û ùú û ö÷ ûû þ ôö ûö û ö üö ÷ô úô õø÷

õô ý ü÷ôöú ø ö ÷øù óôö ö ù û÷ ùû ö ý ýô ûù û ûö úôùûþ øú ûý û÷ óô óõø û÷ û ö ø

ýôö ûø ÷ üùú ú ÷ ûú þ ô ö û ö ôúôöú ø öúø ÷ô÷ôö÷ø

(

úôýô ÷ üúû÷

)

ùûôöû ÷ô õô ö ÷øùöÿûùüóýþôùúþ

-

üú û÷

(

õ û ùþûø ÷ûö÷û öû óûø ýø öûþ ûóúôþ

)

ÿû ö ÷ û ù ÷ôúôû õ û ÷ ûöûóû ö

.

ôóûó ýøû ö ÷ ûöûóû ö ø ö ÷øù û ýû ÷ ó ôóûöûû÷ ùû ö

ùû öø ö ûö

ÿû ö ôö ûúô û ûôúôöúôþ ûþø øõøö ù ûöôö ûöú û÷÷üþ ôûöú

÷û öûóûö ÷ô ûûý ôùûóû ö þ

.

û ÷ü ö ÷ ûþôö þ

3+

óôö ûó õ û÷ ÷ûöúýü û

2+

úô û û ô ôù÷ ùô ûþ ûó ûùû

,

ý ü÷ üýþûúóûû öóôóõ û öôú ùô þ

.

ûú þú ÷ø ýû û

y

óôöø öøùùûö õû û þ ûý û÷óô óõþ ü ù û

2+

ûö úûþø ûö

+

(

ÿû ö

.

1997).

û û û ùû õûþ ô ÿ

,

ýô þ û ùø ûö þ ó ô öøøöùû ö ùû öø ö ûö û ý û û ó ôóõûö úô þ ö û

50% (

û÷úøóü÷ ü

&

ûóû ÿû

1988)

û ö óôöÿô õ ûõ ùû ö

ýôöø ø ö ûöûù ÷÷ ûú

+

-ûúô

ûþûóóô ö üþ ú ú

(

ö

. 2001).

k

!

isme

"

eluler

#

oler

!

si

Aluminium

$ô ûû øó øó

,

û ÿþ ü

(1991)

óôö ôþüóýü ùù ûö ó ôùû öúóô ÷ üþôûöú ÷ô ûûý ô ùûó û ö þ óôöû ø û ùô þ üóý üù

,

ÿû ÷ø óô ù ûö úó ô ôùú÷ô ö ûþ ûö ó ô ù ûöúóô ö ÷ô ö ûþ

.

ôù ûö úóô ô ùú ÷ô ö ûþ ÷ô û

: (1)

ó óüõþ ú ûú þ ö ö úô þ

, (2)

úô þôù÷ ÷ûúóôóõûöýþûúó û÷ô û ûýþ

, (3)

öø ùúýôöö ù û÷ ûö ý ûô û ýôûùû ûö û÷ ûø û ýüýþûú û ùû

, (3)

ôùúøûú úôöÿûû

-

úô öÿûû

ýôö ùô þ û ÷

,

û ö

(4)

û û öÿû ó ôùû öúóô þ

-

%% & '

.

$ô ûö ùû ö ó ô ù ûö úó ô ö÷ô ö ûþ ÷ô û

: (1)

ùô þ û÷ úûú þ ú ÷üúüþ

, (2)

ùüó ýû ÷ô óô ö ÷ûú þ ûùø üþ û

, (3)

ýôö ùû ÷û ö þ üþô ý ü÷ô ö

(

( ) )*

-

+ )

), (4)

ú ö ÷ô ú ú ôö,ó ÷ô ÷ô ö÷ø

,

û ö

(5)

ýôö ö ùû ÷û öû ù÷ ÷ûúôö,ó

.

û öûóû ö ÿûö ÷ üþ ôûö þ ó ôóýø öÿû ùô óûóýøûö óôöúôùô ú ù ûö

úô ö ÿûû

-

úôöÿûû ü û öù úô ýô÷ ûú ûó ú ÷û ÷

,

ûúûó ó ûþû ÷

,

ûúûó üùúûþ û÷

,

ûúûó

ø þû ÷

(

ÿû ö

.

1995;

$ü ýû öô

.

1996;

û

.

1998;

-ô ö

1998;

ûú ó

2000

û öö üüý

.

2003)

û öúôöÿûû ôöþý ü ýû öü úôýô ÷ûúûóùû ô û ÷û ö

ûú ûóùþü ü ôöû ÷

(

ûóûóü÷ ü

.

1998)

ùô ûþûó ûô ûýô û ùûûö óôóõôö÷ø ù ùüó ýþôùúôö ûöþû öó ô öô û úô ûý ûöþüþô ÷ ûöûó û ö

.

$ô þû ö ÷ø

,

÷ûöûó û ö

./ 01 2 3/ 456 47 89.6 :/ 46 459 21 2 4 :; :/02920 24 7 24 2 :<:= 2. 29 20

(

> <: 2476 / ? @ A B

.

1996)

./ C6 4552D=3 / 4E 276F/4189G2 4516 7 291<9.6 9F2561 2 4232 4

.

H2 423 24G2 45

1 <=/02 4 D= E852 323:8 3/ 4.1638=60 :/ 46 459 21 2 4 291 6 I61 2. ./4G2 J2 2 416<9 .6 7 2 4

,

./ :/ 016

:

:/ 0<9.6 72./

(

KL M

),

. 8:/0<N67 /76.381 2./

(

>OP

),

5=8121 C6 < 4.

-

1 0 24.Q /02./

(

R>H

)

7 2 4 S 21 2= 2./

(

> 4< J7/4

&

R2 074/0

1993)

./ 01 2 T5

2+

U VW BX

x

3 /= 2=86

:/464592124 2916I6 1 2. T5

-

102 4. :< 01/0

(

TS P62036 7

&

R207 4/ 0

1998).

>/ = 264 6 1 8

,

1 2 42324 1 <= / 024 D= 323: 8 3/46459 2192 4 2916 I6 1 2. / 4Y6 3

;

+

-DHK 2./ 3/ 3 F 0 24

:=2.3 2 G2 45 F/0:/ 0 24 24 7 2=23 :/3 F/4189 24 5 0276 /4 / =/ 910<9 63 6 2 8 4189

3 / 47 < 0<45 6<4 3/ =641 2.6 3 /3 F024 72 4 3/4G/F2F 9 2 4 ./ 9 0/ .6 ./4G 2J 2

-

./4G 2J2 <052 469

(

D 4<< :?@A B

. 2003;

>C/4?@A B

. 2005

2

).

>/ 382 3 / 92 46 .3/ 1<= /0 24.6 G2 45 7 6E/= 2.9 24 76 21 2. F /=83 F 2 4G 29

76:/ =2E2 06 ./S2 02 3/ 47 2= 23

,

1/ 12 :6 :2=645 ./7 696 1 7 82 3 / 92 46.3/ G2 45 1/ =2C

76 9/ 12C 86 7/ 452 4 F26 9

,

G 26 1 8 ./90/ .6 2. 23 <05 2469

(

Z<SC 6 2 4 ? @ A B

. 2004)

7 2 4 :/464592124/9 .: 0/ .65/4

-

5/4 1/01 / 418

(

> 4 <J7 / 4

&

R2 074/0

1993;

M6S C 2 07.?@A B

.

1998;

72 4> 2. 296?@A B

. 2004).

[\ ]

ksud

i

^

en

_\ ` \

-sen

_\`\a b

ngkel

\c

Aluminum

d891 6 G2 45 3 /4E /= 2.9 24 3/ 9246.3/ / 9. 872.6 ./4G 2J 2 :/459 /=21 D=

F/02.2= 7 206 1 65 2 9/ = <3 : <9 :/4/=6 16

,

G2618 P/= C26Y/ ? @ A B

. (1993),

d2.8 ? @ A B

.

(1994),

7 2 4 K/ ==/ 1 ?@ A B

. (1995)

G2 45 3/48 4E89924 F 2C J2 ./ 9 0/.6 2.23 32=21

3 / 46 459 21 :27 2 9 8= 16I20 G2 45 1 <= / 0 24 D= 76F247645924 7 / 452 4 9 8=16I20 G 245

./ 4.61 6QD=

.

L 9. : 0/ .6 5/4 .6 1 021 .6412./ 212 8 32=21 7/ C6 7 0<5/42./ G2 45 76 69816 7/452 4

/9 . 872.6 2.23 <05 2469 72: 21 3/4645921 24 1<=/ 0 24.6 1 2 42324 1/0C 272 : D=

(

7/ = 2 e 8/41 / ? @ A B

. 1997;

Z<G232 ?@ A B

. 2000;

D4 <<: ?@ A B

. 2003).

>187 6 = 26 4 7/452 4

3 / 45/ 9. : 0/ .692 4 5/ 4

-

5/4 .1 0/ .. 8383 3 / 45C 2.6= 9 2 4 :/46459 212 4 1 <= / 024.6 D= G2 45. 2 45 210/ 47 2C212 8:/46459212 44G 216 729f? gfh iX jU k B?

(

P/ =C26Y/? @A B

. 2001;

LY296 ?@ AB

. 2000;

d2. 8 ?@ AB

. 2001).

;2= 646 3/ 4 84E89 9 2 4 F2CJ2 1<=/02 4.6 D= 76 1/41892 4<=/ C/9 . 872.62. 23< 052 46 9l

>187 6 = 26 4 3 /48 4E 89924 F2CJ2 12 423 24 F 20=/ G G2 45 7 6102 4.Q< 032.6

7/45 245/ 4

ABm@

-1,

n op qrs t oup rvnw orw xyn zp{p nuwqvq|}p n}pq w }ry zp rv np q{pu wuwo~y }pq { woy xppq

}tqrwqn oprvu wn p xt ~vnrvnt{ ~prup

.

€rp u t o|p qv} uw u{ yqpv zyp {wopqpq pq| rpq|p n {wqn v q | zp~pu

u w q |v~pq|}pq nt} rvrv npr € ~

,

p vn y {wqt~p}p q € ~ u w ~p ~yv {w ~w{prpq €~ zpov p }po zpq zw nt }rvsv}prv €~ zp~p u rv u{~p r uw~p~y v {wq|} w ~p npq €~ t ~w  p rpu t o|p qv}

rw v q ||p {wq|p oy op‚y qq p zp {p n zvow zy}rv pnp y zv‚w|p { pzp nvq|}p n rw~y ~w o

(

ƒw~~wn „… †‡

. 1995;

ˆprv u

2000;

€qtt {

„ … †‡

.

2003).

‰wxwop {p rwqpŠp

t o|p qv}

pq| zv prv~} p q t ~w  npqp u p q zpq zp {pn uwq|}w ~p n € ~ pqnp op ~pvq‹

prp u up~pn

,

prpurv n opn

,

p rp ut }rp~p n

,

p rpus y ~sp n

,

prp uyu pnzpqsw qt ~pn

.

Œprv~ {wqw~vnvp q {p zp np qp u p q  †ŽŽ † … … † ‘

.

uw u {wo~v p n}p q yxy q |pq p qnpop w} ryzp rv p rpu rvn op n zw q |pq Šp }n y {wu xwov p q €~

.

’} ryzp rv p rpu rv n opn rp q |p n ~p uxpn rw ~p up wu {pn “p u {won pup { wuxwov p q €~

,

qp uyq rw nw ~p  vn y

u w qv q|}p n zwq|p q

n p“pu

.

”yu~p  p rpurvnop n pq| zv w} ryzp rv u wqv q |}p n zwq|p q

{wqp uxppq} t qrwqnop rv€ ~p q |z v xw ov}pqrw ‚p opw} rnwoqp~

(

•p„…†‡

. 1998).

ƒp zp npqp up q n p ot

(

 †‡–† Ž† „Ž– —‡„˜… †

(

‘

.)

™ ‚t tn n

)

“y|p xp q p } zv nw u y}pq prp u t}rp~pn

.

€rp u t} rp ~pn v qv p q | u w uxyp n npqp up q npot nt~wopq nwopzp{‚w}pupq€~

,

}powqp nwo“p zv{ wuxw qny}p q} tu { ~w} r€ ~

-

t} rp ~pnz vov štrsv o

(

•p

&

•v prp }p

1998).

› pq„ …†‡

. (1995)

u wqyq“y }}pqxpŠp ws~y} rup~pnpq|zvopq|rpq|t~ w

€~ zp {p n u woy{p} p q ryp ny u w }pqv ruw nt~wopqrv €~ pq| yu yu xp |v np qpupq

|pqz yu

.

•p~p npq|zv w} ryzp rvp }pquw~v qz y q|vnpqp up qz w q |pq‚pop uwq|} w ~pn zpq uwqz wn t}rvs v }prv €~ { pzp xp |vpq p q | { w} p zv y“y q| p }po

.

‰y} nv pq| u w qzy} y q | xp Šp u p ~pn xw o{wop q zp~p u u w }pqvruw n t ~w opqrv €~ p zp~p‹

(1)

w s ~y }r u p~p n z v opq|rp q | rw‚pop r{w rvsv} t ~w € ~

, (2)

up~p n u w~vqzyq|v xp|v p q npqpu p q |pqz yu p q | { w} p €~ zv y“y q | p }po } wn v}p zvnpuxp }pq { pzp ~poyn pq

pop pq|nw~p zvxwov{w o~p }y p q€~

, (3)

up~pnpq |}w~y p ozpovp }poz v}wqz p ~v}p q t ~w  |w q p q | n wozp {p n {p zp ~t}y r € ~u n

1.

ƒp zp { t{ y ~p rv |pqz yu ˜„ †œ Ž„˜–

,

u p ~pn pq| zv~w {p r}pq t ~w  |wqt nv {w n t ~w opq €~ ~wxv nvq||v zpov {p zp |w qt nv {w

pq| { w} p € ~

.

€} nv žvn pr rp~yop q p qvtq pq| zvp }vxp n} p q t~w €~ u w oy{p }pq

u w} p qvruw pq | } wu y q |}vqpq xw o{wopq nw opzp{ {w~w {p rpq p rpu t o |pqv } pq|

¢ £¤¥ ¦§ ¨ ©ª « ¬£ª ¨

,

­ ¦ ¨®ª ¯§ °ª¥¯ ª ¨ ¯¤¨± ¤£­ª ©§¨²ª °¦£ ¬ ° ª ³ ©¦ ³§ ¨®®ª ´ª¯ ¥¬ ¢ ¦ ­° ¬¯ ªª¨ ©ª « ¬£ª ¨ ­¦ ¨µª ¶§ «ª­ª

; (2)

·« °¦ £§ ¨¥¦ £ª ¯ ©§ ¶¦¨®ª¨ £¦ ©¦¢ ¥¤ £ ©¢ ¦©§± § ¯

¢ª¶ª ¢ ¦ £­ ¬¯ªª¨ ­ ¦­°£ª¨ ª¥ ª ¬ ¶¦ ¨®ª¨ ­¦ ­°£ª ¨ §¥¬ ©¦ ¨¶§£§

,

²ª¨® ©¦«ª ¨µ¬¥¨²ª ­ ¦«ª«¬§ ©¦ £ª¨®¯ ª§ª ¨ ¯¬£§£ ©¦¯¬¨ ¶¦ £ ¶§ ©§¥ ¤¢«ª ©­ª

,

­¦ £¬°ª³ ª¯ ¥§ ¸§¥ ª ©©ª « ¬£ª ¨¹

(3)

·« ­ª©¬¯ ¯¦ ©§ ¥¤ ¢«ª©­ª ¶ª¨ ­ ¦£ ¬° ª ³ ª¯¥§ ¸§¥ ª © ©ª « ¬ £ª¨ ©¦ºª£ª «ª¨® ©¬¨® ¶¦ ¨®ª ¨

µª «ª¨ ­ ¦¨¦­¢ ¦« ¯ ¦ ©ª «¬£ª¨ ª¥ ª ¬ ©¦ºª£ª ¥§ ¶ª¯ « ª¨®©¬¨ ® ­ ¦« ª«¬§ ©¬ª ¥ ¬ « §¨¥ª©ª ¨

¥ £ª ¨ ©¶¬¯©§©§¨²ª«

.

»¦ µ¬­«ª³ ©¥ ¬¶§ ¥¦«ª³ °ª ¨ ²ª ¯ ¶§« ª¯¬¯ª¨ ¬¨¥¬¯ ­ ¦¨ ¶¬¯¬¨® ­ ¦¯ ª ¨§ ©­¦

¥¤ « ¦ £ª¨©§ ²ª¨® ­ ¦« §°ª ¥¯ª ¨ ª ©ª­ ¤ £®ª ¨§¯¼ ½¦£¨ ²ª ¥ª

,

¥§¶ª ¯ ©¦ ­ ¬ª ¥ª¨ª­ª ¨ ²ª ¨®

¥¤ « ¦ £ª¨ ·« ­ ¦­¢¬¨²ª§ ­ ¦¯ª¨§ ©­¦ ¢ ¦£¥ª³ª¨ª¨ ¶¦ ¨®ª¨ ­ ¦ ¨§ ¨®¯ª ¥¯ª ¨ ¦¯ ©¬ ¶ª©§

ª ©ª ­¤ £®ª¨§¯¼ ¾¦° ¦£ª¢ª¥ ª ¨ª­ª¨ ²ª¨® ©¦¨ ©§¥ §± ·«­ ¦ ­¢ ¬¨ ²ª § «¦¸ ¦«©¦¯£¦ ©§ª©ª ­

¤ £®ª¨§¯ ²ª¨® ¥§¨® ®§

(

¿¤º ³§ª¨ ÀÁ ÂÃ

. 2