Pemurnian dan Karakterisasi Enzim Glukoamilase dari Koji Merah (Monaseus anka IFO 3403)

(1)

, r, .', , l r· ,

PEMURNIAN DAN KARAKTERISASI ENZIM GLUKOAMILASE DARI

KOJI MERAH (Monascus anka IFO 3403)

Oleh

MARGARETA SEPTYANI ARIESTA

F02497033

2003

FAKULTAS TEKNOLOGI PERTANIAN

INSTITUT PERTANIAN BOGOR

(2)

Margaretta Septyani Ariesta. F02497033. Pemnian dan Karakterisasi Enzim Glukoamilase dari Koji Merah (Monaseus anka IFO 3403). Di bawah bimbingan : Anton Apriyantono dan Hanifah Nury�i Lioe. 2003

INGKASAN

Enzim giukoamiiase merupakan enzim komersiai yang memecah pati menjadi gula. Dalam penelitian ini, enzim glukoamilase yang diisolasi merupakan enzim yang diproduksi oleh kapang Monascus anka yang digunakan untuk memproduksi koji merah.

Penelitian terdahulu (Yoza, 1999) berbasil mengisolasi dan memperoleb enzim mumi dengan berat molekul 50 kDa. Pene

�

itian ini disamping mendeteksi ulang keberadaan enzim dengan berat molekul 50 kDs, juga mencoba mengisolasi enzim glukoamilase dengan erat molekul yang bereda. Setelah eksraksi enzim dari samel menggunakan bufer McIlvaine 10 mM (PH 5.0), dilakukan pemisahan dengan kromatorai DEAE Cellulose a

balch,

kromatofi koloID butil TOYOPEARL, High-S prepacked, fenil TOYOPEARL hingga tahap iltrasi gel menggunakan Sepbadex 0-100 superfine. Dari penelitian ini dapat diisolasi enzim glukoamiiase mumi dengan berat molekul 66.8 kDa.

(3)

PEMURNIAN DAN KARAKTER!SASI ENZIM GLUKOAMILASE DAR! KOJI MERH (Monascus

ana

IFO 3403)

SKRIPSI

Sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar SARJANA TEKNOLOGI PERTANIAN Pada Jurusan Teknologi Pangan dan Gizi

Fakultas Teknologi Pertanian Institut Peranian Bogor

Oleh

MARGARETTA SEPTYANI AR!ESTA F02497033

2003

FAKULTAS TEKNOLOGI PERTANIAN

INSTITUT PERTANIAN BOGOR

(4)

INDN RSI M KOE D!

KIH

_{(�_003)}

SSI

i

b

_{u t IIk Ib r}

SAJANA OGI

IN

a Jn

_Toi

i n,

Fs

_{Toi n.}

t an r

Olh

RGAETTA STYANI ASTA

0247033

lm a gl2 mr

199 i oko

gllulus :

16 Jni 203

003

(5)

KATA PENGANTAR

Puji syukur penulis panjatkan ke hadirat Tuhan Yang Maha Esa, karena atas erkat dan rahmatNya yang erlimpah, penulis dapat menyelesaikan "perjalanan panjang" ini n _{merangkumnya dalam suatu tulisan.} _{Penulis juga ingin}

menghaturkan banyak terima

sh

kepada pihak-pihak yang telab membantu penulis dalam menempuh "perjalanan" ini, yakni ;

1. Dr. Ir. Anton Apriyantono, MS, selaku dosen pembimbing yang telab banyak membimbing dan membantu penulis

2. Mami, Papi, Monik n _{Yohan, atas kasih sayangnya yang tulus dan}

dukungan yang tiada hentinya pada penulis

3. Prof. Yasuda Masaaki, yang telab memberi kesempatan pada penulis untuk melakukan peneiitian di laboratoriumnya, Naoko, Naohito, Tachibana-san, Megumi-san, Kumi, yang banyak memberi dukungan selama penelitian. :.

)\

"

_I

v '0 b Ot b I:: tt > C, I" 5 v : 5 I:: b � ll : 5 :: gv'' L

t.o

4.

Dr.lr. Nurheni Sri Palupi, MSi dan r. _{Nur Wulandari, Msi, selaku dosen}

enguji yang banyak membantu memerikan saran pada penulis

5. _{Ir. Hanifah N. Lioe, Msi, atas bantuan}n _{banyak nasehat}n _{saran yang}

diberikan kepada enulis

6. Bapak Wien Gunawan, atas dukungan dan bantuan yang diberikan selama penulis nelakukan penelitian yang pertama

7 . Devin dan Sugi, yang selalu jadi tenan berbagi suka dan duka selama penulis melakukan penelitian, and also for URSEP students, I wll _{never forget our} laughr, songs and even bad moments in Okinawa. Thank you for this lovely and unforgettable friendship

8. Semua tenan-tenan yang banyak nemberikan dukungan pada penulis, yang tidak dapat disebutkan satu per satu

Penulis erharap semoga penelitian yang telah dilakukan ini dapat bermanfaat bagi yang membutnnya. Penulis mohon naaf bila terdapat beberapa kekurangan didalamnya dan penulis senantiasa terbuka terhadap saran membangun yang diberikan. Atas perhatiannya penulis ucapkan terima kasih yang sebesar-besamya.

Bogor, 11 Januari 2003

(6)

DAfARISI

Hln

KATA PENGANTAR . . . . ... . . . ... . . .. ... ... ... .. . . .. 111

DAFfAR TABEL. . . . ... . . .... .... ... . . . .. ... . . . .. .. .. .. ... VI DAFTAR GAMBAR. . . ... . . . . ... ... . . . ... .. . . . .... ... Vl1 DAFTAR LAMPIRAN... ... . . . . .. ... . . . . ... ... ... . . ... V111 I. PENDAHULUAN.. ... ... . . . ... . . . ... . . . ... 1

11. _{TINJAUAN PUSTAKA.. . . ... . . . .... ... . . . ... .. . . .}

4

A. ENZIM.. . .. . .. . . . ... . . .. . . .. . ... ... ... . . . .. . . . ... . 4

B. KOJI MERAH.... . ... . . . .... ... ... .. . . .. . . .. 6

C. ENZIM GLUKOAMILASE... . . .... ... . . . ... 8

D. ISOLASI ENZIM GLUKOAMILASE .. . . ... 10

III. METODOLOGI PENELITIAN. . . ... ... .... . .. . .. ... ... ... 12

A. BAHAN DAN ALAT .... . . . .. . ... . .. ... ... ... . . . ... ... .... ... 12

B. METODE PENELITIAN... .. . .. ... ... ... ... ... ... 13

IV. HASIL DAN PEMBAHASAN.... . . ... .... ... ... ... . ... ... 27

A. ISOLASI ENZIM GLUKOAMILASE... . .. ... . . . .. .. ... 27

(7)

V. KESIMPULAN DAN SARAN . . . . .. '" .... .... .... ... ... ... 57

A. KESIMPULAN.. . . . .. ... .. . . . ... . . .. . 57

B. SARAN... . ... . . . .. . .. . . .. . ... . . . . ... 58

(8)

DAfAR TABEL

Halaman

Tabel!. Tahap isolasi enzim glukoamilase dari -fonascus ana _IFO_3403. ₃₉

Tabel 2. Spesiisitas substrat enzim glukonilase... 52

Tabel3. Pati sebagai spesiisitas subsrat enzim glukoamilase... ... 52

(9)

DAfAR GAMBAR

HaJaman Gambar 1. _{Koji merah dalam cawan eri dan toyo... ...}... 27

Gambar 2. Hasil SDS PAGE dari enzim mumi... 4 1

Gambar 3. Berat molekul dari enzim glukoamilase mlUTli... 41

Gambar 4. Pengaruh pH pada aktivitas enzim glukoamilase... ... 43

Gambar 5. _{Pengaruh pH pada stabilitas enzim glukoamilase...} ₄₅

Gambar 6. Pengaruh suhu pada aktivitas enzim glukoamilase... ... .... 4 7

Gambar 7 . Pengarub suhu pada stabilitas enzim glukoamilase... 48

(10)

Halaman

Lampiran 1. Cara embuaan ereaksi Somogyi-Nelson... ... 63

Lampiran 2. Gambar kromatosisten yang digunakan untuk. ... .. ... ... .. ... 64

isolasi enzim glukoamilase dengan kolom kromatograi

Lampiran 3. Cara embuatan bufer yang digunakan dalam evaluasi.. .... 65

parameter pH optimum n _{stabilitas pH}

Lampiran 4. Cara embuatan macam-macam substrat yang digunakan.... 66

dalam evaluasi sesiikasi substrat

Lampiran 5. _{Oraik raksi kolom filrasi gel Sephadex}0-100

_superine.

₆₇

Lampiran 6. Tabel dan k standar penentuan berat molekul... 68

enzim glukoamilase dari analisis SDS PAGE dengan Scion

Image

_sofware

(11)

(12)

(13)

(14)

(15)

(16)

(17)

(18)

(19)

(20)

(21)

(22)

(23)

(24)

(25)

(26)

(27)

(28)

(29)

(30)

(31)

(32)

(33)

(34)

(35)

(36)

(37)

(38)

(39)

(40)

(41)

(42)

(43)

(44)

(45)

(46)

(47)

(48)

(49)

(50)

(51)

(52)

(53)

(54)

(55)

(56)

(57)

(58)

(59)

(60)

(61)

(62)

(63)

(64)

(65)

(66)

(67)

(68)

(69)

(70)

(71)

(72)

(73)

(74)

(75)

(76)

(77)

(78)

(79)

(80)

(81)

(82)

(83)

(84)

(85)

(86)

(87)

(88)

(89)