Mempelajari Pengaruh Senyawa Kimiawi terhadap Stabilitas Protease BAcillus pumilus y1 selama Penyimpanan

(1)

Bertnmbnhfnh kemrrIirmn orang y m g

sen n n b n

himdp

penair senrangot, ibnspadn.

Berdndd hnjik d m bijrksmn, m q u mengendtaiknn

(2)

MEMPEkGadBBI PENGWRUH

SENYAW4

KIIMIAWI TERHWDWP

STABBLITAS

PROPEfkSE

Bacillus pumilus y I

SELAMA PENVI

MPAWAN

Oleh

WANSEN WQNG

F

28. 1762

1 9 9 5

FAKULTAS TEKNOLOGI PERTANIAN

INSTITUT PERTANIAN BOGOR

(3)

I I A N S E N WONG. F 2 8 . 1 7 6 2 . M e m p e l a j a r i P e n g a r u h S e n y a w a K i m i a w i T e r h a d a p S t a b i l i t a s P r o t e a s e Bari l l r r s pumi l u s y l

S e l a m a l'cnyimpanan. I)i bawah t)imbirlgan Maggy 'I'henawi j a y a

S u h n r t o n o .

R 1 NGKASAN

Enzim p r o t e a s e Bacillus pumilus y l m e m i l i k i a k t i v i t a s

enz1.m yartg t i n g g i d a n m e r u p a k a n e n z i m p r o l e a s e y a n g pot.en-

s i a l u n t u k d i a p l i k a s i k a n d a l a m p e m b u a t a n p r o d u k k o m e r s i a l .

L3ac.illns pumilus y l y a n g d i g u n a k a n a d a l z i t l Raci.llus y a n g

d i i s o l a s i d a r i l i m b a h c a i r t a h u . P e n e l i t i a n i n i . b e r t u j u a n

u n t u k m e m p e l a j a r i p e n g a r n h l i n g k u n g a n l t i m i a w i ( k a t i o n d i v a -

I cri d a n m o n o v a l e n , a l . k o h o 1 , d e t e r g e n d a n s e n y a w a p e r e d u l i s i . )

t e r h a d a p s t a b i l i t a s e n z i m p r o t e a s e s e l a m a p e n y i m p a n a n .

Media y a n g d i g u n a k a n u n t u k p r o d u k s i e n z i m p r o t e a s e d a r i

m i k r o b a i n i a d a l a h l i m b a h c a i r t a h u d e n g a n p e ~ l a m b a h a n s k i m

s e b e s a r 0 . 5 % . P r o d u k s l e n z i m p r o t e a s e d i l a k u k a r ~ p a d a stihu

3 7 " ~ d e n g a r t pI-I o p t i m u m s e k i t a r 7 d a l a m i n k u b a t o r g o y a n g

d e n g a n k e c e p a t a n 200 rpm. P e m i s a h a n e n z i m d a r i s e l b a k t e r i

d a n s i s a m e d i a c i i . l a k u k a n d e n g a n c a r a s r r t t r i f u g a s i d e r t g a n

k e c e p a t a n 3 0 0 0 rpm p a t l a s u h u r e n d a h ( 4 " ~ ) . I ' e n g e r t d a p a n

e n z i m y a n g t e r d a p a t d a l a m s u p e r n a t a n d i l . a k u k a n d e n g a n meng-

g u n a k a n g a r a m ammonium s u l f a t 3 5 . 1 % ( w / v ) d a n a s e t o n d e n g a n p e r h a n c l i r t g a n 1 : 3 . I5ndapan enz:im s e 1 a n . j u t i t y a ( 1 i l a r u t . k a n t1;tlam b u f f e r f o s f a t 0 . 0 1 M pi1 8 a t a u b u f f r . r b o r i l t 0 . 0 1 ?f [>II

(4)

E n z i m a d a l a h seriyawa alami y a n g mudah m e n g a l a m i k e r u -

s a k a n s t r u k t u r . S t a b i l i s a s i e n z i m d a p a t d i l a k u k a n d e r ~ g a n

j a l a n mc:rigubatr s t r u k t r r r k i m i a w i e n z i m s r t l e m i k i a n r i r p a s e -

h i r r g g a e n z i m t e t a p a k t i f t e t a p i t i d a 1 i r a p u t r t e r h a t l a p

p e n g a r u h - p e n g a r u h o k s i d a s i

.

p e r u b a h a n pIi, s u h u , kemungk i n a n

p r o t e o l i s i s , h i d r o 1 . i s i . s d a n p e n g a r u h l i n g k u n g a n l a i n n y a .

P e n a m h a h a n s e n y a w a k i m i a w i t e r h a d n p e k s t r a k e n z i m

mc:rupakarr sa1.ah s a t 1 1 u s a h a u n t u k mempct-I ;1hankar1 a l i t i v i t a s

d a n s t a h i 1 . i t a s e n z i m selama p e n y i m p a n a n .

S e n y a w a k i m i a w i y a n g d i g u n a k a n a d a l a h N a C l 2 m M ,

Na2SZO3 1 mM, CaC12. b u t a n o l 10%. p r o p a n o l 5%. s o r b i t o l 15%.

'Tween 5% d a n p o l i e t i l e n g l i k o l . 6 mM. E k s t r a k e n z i m d e n g a n

p e n a m b a h a n s e n y a v a k i m i a w i d i u k u r a k t i v i t a s n y a d e n g a n mrng-

g u n a k a n m e t o d a B e r g m c y e r . Erizim yarlg tl i e n d a p k a n d e r l g a n

g a r a m a m o n i c ~ m s u l f a t m e m i l i k i a k t i v i t a s y a r l g l c b i t r t ) n g r ~ s

d i b a n d i n g k a n e n z i m y a n g d i . e n d a p k a n d e n g a n a s e t o n . B a h a n -

b a h a n k i m i a w i y a n g b a i k u n t u k m e m p e r t a h a n k a n a k t i v i t a s

p r o t e a s e d a r i B n c i 1 l u . s p t l m i l u s y l s e l a m a p e n y i m p a n a n pacla sutrti r u a r r g darr strhrr 4°C a d a l a h NaCl 2 m?t, C a C J 2 6 mM [Ian

p r o p a n o l 5 % . P e n a m h a h a n C a C 1 2 b a i k u n t u k m e m p e r t a h a n k a n

k e s t a b . i l a n p r o t e a s e selama p c m a n a s a n patla s u h u 50°C, 6 0 ' ~ .

70°(: d a n 0 4 ' ~ . Ijatian ki.miawi. y a n g (1itantt);thkan h a n y a miunpu

m e n j a g a l t e s t a b i l a n p r o t e a s e y a n g d i s i m p a n p a d a s u h u r u a n g

selama l e b i h k u r a n g s e p u l u h h a r i . s e c i a n g k a n p e n y i m p a n a n p a d a

s u l ~ u 4 " ~ , ttatran k i m i a w i y a n g d i t a m b a h l c a n masitb e f r k t i f

(5)

C a C I Z 6 mM d a n p e n y i m p a n a n p a d a 4 % t e r h a d a p p r o t e a s e y a n g

d i . e n d a p k a n d e n g a n g a r a m amonium s u l f a t d a n d i l a r l ~ t k a n d e n g a n

b u f f e r f o s f a t m e r r ~ p a k a n p e r l a k u a n y a n g p a l i n g b a i k u r i t u k

(6)

M B M S I D E L R J A R B: P 3 3 N G h R e ) B H

S E N Y A W A

K I M I A W I

T E R W A D A Q S T A B I

L I T A S

I ? R C + T B R S I I X Z 3 a c Z _Z 2

u s

p z x m . 2 d z l r s g7 1

S E L A M R

P E N Y J M P A N A N

O l e h I I A N S E N WON(;

F 28.1762

SKRIPSI

S e b a g a i s a l a h s a t u s y a r a t u n t u k m e m p t r o l e h g e l a r SARJANA 'I'I<KNOI,OG I PEWTAN1 AN

p a d a J u r u s a n T e k n o l o g i P a n g a n d a n G i z i

F a k u l t a s T e k n o l o g i P e r t a n i a n

(7)

INSTITUT PERTANIAN

BOGOR

m P E t A J m l PEIVGARW1

S m A N A K I M I A W I T W h V i D A P S T A I 3 I L I T A S

P R S E

Bacillus

purnilus yP S PENIIIMPWm

Oleh

PIANSEN WQMG

F 28.1762

Sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar

SARJAMA m K N O L W I P E R T M I A E I

pada Jurusan Teknologi Pangan dan Gizi

Fakultas Teknologi Pertanian

Institut Pertanian Bogor

Dilahirkan Tanggal

28

April

1972

d i Medan

(8)

KATA I'ENGAN'I'AR

Puji syukur kepada Namo Sanghyang Adi Huddhaya atas

penyertaan-Nya selama peneliti.an dan penulisan skripsi

ini. Adapun penel

i.

tian yang berjudul.

M E M P E L A J A R I PENGARIIII SENYAWA KIM1 AWI TERttADAP S T A f l I L I T A S PROTEASE

Bacillus pumilus

yl

SELAMA

PENY

IMPANAN i

ni dil

akukan di

PAU

B.ioteknol.ogi.

l...ab.

Mikroba dan Biokimia, Bogor.

Penelitian dan penul isan skripsi

i

ni adalah sebagai

salah satu syarat untuk memperoleh gelar Sarja~la Tek-

nologi Pertanian pada jurusan Teknologi Pangan dan Gizi,

Fakultas Teknol.ogi Pertanian, Institut i'ertanian Bogor.

Pada kcsempatan ini penulis mengucapkan terima kasih

kepada

:

-

Kedua orang tua, kakak-kakak, adik serta famili-

famili yang telah banyak memberikan dorongan baik

materil maupun nonmateril hingga selcsainya pen.ulisan

skripsi ini.

-

Dr. Ir. Maggy T . Suhartono

yang telah memberi.kan

bimbingan dan fasilitas selama ini sampai. selesainya

skripsi ini.

-

Dr. Ir. Ratih Dewanti Haryadi.

MSc.

sebagai dosen

penguji yang telah memberikan masukan yang cukup

(9)

-

I r . E n d a n g P r a n g d i m u r t i s e b a g a i d o s e n p e n g u j i y a n g

t e l a h m e m b e r i k a n m a s u k a n y a n g e u k u p b e r a r t i d a l a m

p e n y e m p u r n a a n p e n u l i s a n s k r i p s i i n i .

-

I b u I k a , I b u E n i . P a k S e l a m a t , T h e r e s i a , M e l i a n a ,

Yono, I r e n e . Bang Won, N i k e n , S r l v i . b a n g Wenu, c i

S i s k a ,

c i

E l i s a b e t h , mbak I r i n a t a s s a r a n , w a k l u ,

t e n a g a d a n s e g a l a b a n t u a n y a n g d i b e r i k a n s r l a m a

p e n u l i s b e k e r j a d i l a b . M i k r o b i o l o g i d a n B i o k i m i a .

-

D a r w i s , L i m a h l . O e n t a r i , J u l i a n a . M e d i , S a n i a t a s

s e g a l a b a n t u a n y a n g d i b e r i k a n .

-

Semua p i h a k y a n g t i d a k d a p a t d i - s e b u t k a n s a t u p e r s a t u

Semoga k a r y a s e d e r h a n a i n i d a p a t menambah k h a s a n a h

p e n g e t a h u a n d a l a m b i d a n g e n z i m k h u s u s n y a p r o t e a s e .

I3r,gor, 0 k t o t ; c r 1 9 9 5

(10)

KATA PENGANTAR

. . .

i

DAIZTAR IS1

. . .

i i i

DAFTAR TABEL

. . .

v

DAFTAR GAMBAR

. . .

vi

DAFTAR LAMPIRAN

. . .

x

I.

PENDAHULUAN

. . .

1

-

11.

TINJAUAN PUSTAKA

. . .

a r

A. Enzim protease

. . . >

1.

Defenisi umum

. . .

5

2.

Protease mikroba

. . .

8

B.

Bacillus pumilus

Hasil Isolasi dari

Limbah Cair Tahu

. . .

; . . . I 1

C. Pengaruh Senyawa Kimiawi Terhadap Aktivitas

. . . .

Enzim Protease dari

Bacillus plfn~ilus

y1.

. 1 2

111. BAHAN DAN METODA PENELITIAN

. . .

20

A. BAHAN DAN ALAT.

. . .

20

B. METODA PENELITIAN

. . .

21

I .

Penyiapan Kultur Inokulum

. . .

21

2.

Produksi Protease

. . .

21

3.

Pengaruh Lingkungan Kimiawi

. . .

22

(11)

(12)

(13)

(14)

(15)

(16)

(17)

(18)

(19)

(20)

(21)

(22)

(23)

(24)

(25)

(26)

(27)

(28)

(29)

(30)

(31)

(32)

(33)

(34)

(35)

(36)

(37)

(38)

(39)

(40)

(41)

(42)

(43)

(44)

(45)

(46)

(47)

(48)

(49)

(50)

(51)

(52)

(53)

(54)

(55)

(56)

(57)

(58)

(59)

(60)

(61)

(62)

(63)

(64)

(65)

(66)

(67)

(68)

(69)

(70)

(71)

(72)

(73)

(74)

(75)

(76)

(77)

(78)

(79)

(80)

(81)

(82)

(83)

(84)

(85)

(86)

(87)

(88)

(89)

(90)

(91)

(92)

(93)

(94)

(95)

(96)

(97)

(98)

(99)

(100)

(101)

(102)

(103)

(104)

(105)

(106)

(107)

Bertnmbnhfnh kemrrIirmn orang y m g

sen n n b n

himdp

penair senrangot, ibnspadn.

Berdndd hnjik d m bijrksmn, m q u mengendtaiknn

(108)

MEMPEkGadBBI PENGWRUH

SENYAW4

KIIMIAWI TERHWDWP

STABBLITAS

PROPEfkSE

Bacillus pumilus y I

SELAMA PENVI

MPAWAN

Oleh

WANSEN WQNG

F

28. 1762

1 9 9 5

INSTITUT PERTANIAN BOGOR

(109)