PENGARUH PEMBERIAN MINYAK GORENG BEKAS YANG DIMURNIKAN DENGAN BUAH MENGKUDU (Morinda citrifolia) TERHADAP GAMBARAN HEPATOSIT TIKUS WISTAR JANTAN
Oleh
ANDRE PRASETYO MAHESYA
Skripsi
Sebagai Salah Satu Syarat untuk Mencapai Gelar SARJANA KEDOKTERAN
Pada
Jurusan Pendidikan Dokter Umum Fakultas Kedokteran Universitas Lampung
FAKULTAS KEDOKTERAN UNIVERSITAS LAMPUNG
ABSTRACT
THE EFFECT OF USED COOKING OIL PURIFIED BY NONI FRUIT (Morinda citrifolia) ON THE OVERVIEW OF MALE WISTAR RAT
HEPATOCYTES By
ANDRE PRASETYO MAHESYA
Cooking oil is a basic needs in the hausehold. The use of cooking oil is increasingly higher day by day and becomes less affordable for fried foods merchants. To save costs, the merchants tend to use cooking oil that is used repeatedly. This can damage the quality of cooking oil and make it decomposites the composition of the oil and can damage the hepatocyte. The aim of this study is to know the effect of using cooking oil purified by noni fruit to the liver.
This research is experimental study with a long 4 weeks treatment by using 20 Wistar rats which divided into 4 groups. In group A (control). In group B given by 3 hours cooking oil. In group C given by 6 hours used cooking oil. In group D given by 6 hours used cooking oil which purified with noni fruit as the antioxidant. Each treatment was given with 10 ul/g BW/day in dose.
hepatocye into 26,06+6,03%. It showed that giving used cooking oil can damage hepatocyte and noni fruit can lowering the damage of hepatocyte.
ABSTRAK
PENGARUH PEMBERIAN MINYAK GORENG BEKAS YANG DIMURNIKAN DENGAN BUAH MENGKUDU (Morinda citrifolia) TERHADAP GAMBARAN HEPATOSIT TIKUS WISTAR JANTAN
Oleh
ANDRE PRASETYO MAHESYA
Minyak goreng merupakan kebutuhan pokok. Penggunaan minyak goreng semakin hari semakin tinggi dan kurang terjangkau bagi para pedagang makanan gorengan. Untuk menghemat biaya, para pedagang cenderung untuk menggunakan minyak goreng yang dipakai berulang kali. Hal ini dapat merusak kualitas minyak goreng dan terjadi dekomposisi komponen penyusun minyak yang dapat menyebabkan kerusakan hepar. Tujuan dari penelitian ini adalah untuk melihat efek pemurnian minyak goreng bekas dengan buah mengkudu terhadap kerusakan hepar.
dimurnikan dengan buah mengkudu. Setiap kelompok menggunakan dosis 10 ul/gr BB perhari.
Hasil penelitian ini menunjukan kerusakan sebesar 27,14+3,62% pada kelompok B, 35,00+2,69% pada kelompok C dan terjadi penurunan kerusakan di kelompok D menjadi 26,06+6,03%. Simpulan, pemberian minyak goreng bekas dapat menyebabkan kerusakan hepatosit tikus dan pemberian sari buah mengkudu dapat mengurangi kerusakan hepatosit tikus.
DAFTAR ISI
Halaman DAFTAR ISI ... DAFTAR TABEL ... DAFTAR GAMBAR ... DAFTAR LAMPIRAN ... I. PENDAHULUAN ... A.Latar Belakang ... B.Perumusan Masalah ... C.Tujuan Penelitian ... D.Manfaat Penelitian ... E. Kerangka Pemikiran ...
1. Kerangka Teori ... 2. Kerangka Konsep ... F. Hipotesis ... II. TINJAUAN PUSTAKA ...
A.Minyak Goreng ... 1. Gambaran Umum ... 2. Minyak Goreng Bekas ... B.Radikal Bebas ... C.Mengkudu ... 1. Deskripsi Tanaman ... 2. Taksonomi …... 3. Kandungan Mengkudu ... 4. Antioksidan ... 5. Antioksidan dalam mengkudu...
D.Hepar ... 1. Anatomi Hepar ... 2. Fisiologi Hepar ... 3. Histologi Hepar ... 4. Histopatologi Hepar ... 5. Proses Kerusakan Sel Hepar Akibat Radikal Bebas yang
Ditimbulkan oleh Minyak Goreng Bekas... E. Tikus Putih... 1. Taksonomi……... 2. Jenis ………... 3. Biologi Tikus Putih ... III. METODE PENELITIAN ... A.Desain Penelitian ... B.Tempat dan Waktu ... C.Populasi dan Sampel ... D.Bahan dan Alat Penelitian ... E. Prosedur Penelitian ... F. Identifikasi Variabel dan Definisi Operasional Variabel ... G.Analisis Data ...
H.Etika Penelitian ………
DAFTAR GAMBAR
Gambar Halaman
1. Kerangka Teori Pengaruh Pemberian Minyak Goreng Bekas dengan Sari Buah Mengkudu terhadap Hepatosit... 2. Kerangka Konsep Pemberian Aquades, Minyak Bekas, dan
Minyak Hasil Pemurnian Terhadap Tikus Wistar Jantan yang Dilihat pada Gambaran Hepatosit... 3. Buah Mengkudu ... 4. Gambaran Makroskopik Hati Manusia dari Anterior ... 5. Lobulus Hepatik ... 6. Pembengkakan Sel Disertai Vakuolisasi ... 7. Diagram Alur Pengolahan Buah Mengkudu ... 8. Diagram Alur Penelitian ... 9. Gambaran Histopatologi Hepar Tikus Kelompok A (kontrol) dan
Kelompok B, C, D (perlakuan) dengan Pewarnaan HE
(Perbesaran 400x) ………...
6
7 17 21 23 26 38 44
DAFTAR TABEL
Tabel Halaman
1. Syarat mutu minyak goreng ... 2. Data biologi Tikus putih (Rattus norvegicus) ... 3. Hasil pengamatan kerusakan hepatosit hepar Tikus ...
4. Hasil Uji Statistik Perbandingan Antar Kelompok (uji Mann-Whitney)...
10 31 49
i DAFTAR LAMPIRAN
Lampiran 1
Lampiran 2
Lampiran 3 :
:
:
Uji Statistik
Dokumentasi Peralatan dan Cara Kerja
I. PENDAHULUAN
A. Latar Belakang dan Masalah
Minyak goreng merupakan salah satu kebutuhan pokok penduduk Indonesia dengan tingkat konsumsi yang mencapai lebih dari 2,5 juta ton per tahun atau lebih dari 12 kg/orang/tahun. Berdasarkan perkembangan berbagai variabel terkait seperti peningkatan konsumsi minyak goreng untuk keperluan rumah tangga maupun industri diperkirakan total konsumsi minyak goreng dalam negeri mencapai 6 juta ton (Anonim, 2006). Penggunaan minyak goreng yang cukup tinggi ini tidak didukung dengan harga yang terjangkau bagi para pedagang makanan gorengan, sehingga para pedagang cenderung untuk tidak sering mengganti minyak dan menggunakan minyak goreng bekas dalam kurun waktu yang lama.
gorengannya. Beberapa komponen hasil dekomposisi minyak tersebut dapat membahayakan kesehatan karena menyebabkan kerusakan, terutama pada organ yang terkait dengan metabolisme minyak (Rukmini, 2007).
Kerusakan minyak atau lemak akibat penggunaan secara terus menerus akan mengakibatkan berbagai macam penyakit, misalnya diare, pengendapan lemak dalam pembuluh darah, kanker dan menurunkan nilai cerna lemak. Beberapa penyakit seperti PJK (penyakit jantung koroner), rasa gatal pada tenggorokan, dislipidemia, obesitas, atheroskerosis, juga disebabkan oleh penggunaan minyak goreng bekas. Ironisnya, masyarakat Indonesia saat ini cenderung menitikberatkan nilai ekonomis daripada nilai kesehatan yang saat ini lebih cenderung diabaikan (Widayat, 2006).
3
Berdasarkan penelitian yang sudah ada, penulis menjadi termotivasi untuk melakukan penelitian mengenai penjernihan minyak goreng bekas dalam upaya perbaikan kualitas minyak dengan menggunakan buah mengkudu sebagai zat antioksidan. Untuk mengetahui efek minyak goreng bekas yang telah diberikan mengkudu terhadap organ, maka penulis menggunakan Tikus Wistar sebagai sampel. Kegiatan penelitian ini dilakukan untuk menguji pengaruh diet yang mengandung minyak goreng bekas atau minyak hasil pemurniannya terhadap histopatologis organ tubuh yang berhubungan dengan metabolisme lipid, yaitu hepar. Tikus Wistar dipilih sebagai model hewan coba, karena memiliki tipe metabolisme yang sama dengan manusia. Dengan menggunakan Tikus Wistar, hasilnya diharapkan dapat digeneralisasi pada manusia. Disamping itu, dengan menggunakan Tikus Wistar sebagai hewan coba, maka pengaruh diet dapat benar-benar dikendalikan dan dikontrol.
B. Perumusan Masalah
Adapun perumusan masalah dari penelitian ini adalah:
1. Apakah ada pengaruh pemberian minyak goreng bekas terhadap gambaran hepatosit Tikus Wistar jantan?
C. Tujuan Penelitian
Adapun tujuan dari penelitian ini adalah:
1. Untuk mengetahui pengaruh pemberian minyak goreng bekas terhadap gambaran hepatosit Tikus Wistar jantan.
2. Untuk mengetahui pengaruh pemberian minyak goreng bekas yang dimurnikan dengan buah mengkudu (Morinda citrifolia) terhadap gambaran hepatosit Tikus Wistar jantan.
D. Manfaat Penelitian
Manfaat dari penelitian ini adalah sebagai berikut. 1. Bagi Penulis
Penelitian ini diharapkan dapat menambah ilmu pengetahuan, dan pengalaman.
2. Bagi Masyarakat
5
E. Kerangka Penelitian
1. Kerangka Teori
Keterangan :
Gambar1. Kerangka Teori Pengaruh Pemberian Minyak Goreng Bekas dengan Sari Buah Mengkudu terhadap Hepatosit.
Penyerapan warna
Minyak Goreng Bekas
Polimerasi Oksidasi Browning Hidrolisis Kerusakan Membran Hepatosit Pembentukan VDP dan
NVDP
Peningkatan Kekentalan Minyak Reaksi fisi
Dehidrasi Pembentukan Radikal bebas Pembentukan Gliserol dan Asam lemak bebas Senyawa Peroksida Lemak
Kerusakan Mitokondria, DNA, Protein, dan Peningkatan
Permeabilitas. Antioksidan sekunder Asam Askorbat dan Beta Karoten Sari Buah Mengkudu
7
2. Kerangka Konsep
Gambar2. Kerangka Konsep Pemberian Aquades, Minyak Bekas, dan Minyak Hasil Pemurnian Terhadap Tikus Wistar Jantan yang Dilihat pada Gambaran Hepatosit.
Cekok 10 ul/g BB Minyak goreng bekas
lele 3 jam penggorengan
Cekok 10 ul/g BB Minyak goreng bekas
lele 6 jam penggorengan
KelompokD KelompokC KelompokB Cekok Aquades 10
ul/g BB
Gambaran hepatosit
Dianalisis
Cekok 10 ul/g BB Minyak goreng bekas
lele 6 jam penggorengan yang
telah dimurnikan dengan sari buah
mengkudu
F. Hipotesis
Berdasarkan rumusan masalah yang telah dipaparkan sebelumnya, hipotesis dalam penelitian ini sebagai berikut:
1. Pemberian minyak goreng bekas terhadap gambaran hepatosit Tikus Wistar jantan menyebabkan edema dan nekrosis.
II. TINJAUAN PUSTAKA
A. Minyak Goreng
1. Gambaran Umum
Minyak goreng berfungsi antara lain sebagai penghantar panas, penambah rasa gurih dan penambah nilai kalori bahan pangan. Lemak yang terkandung dalam minyak goreng merupakan sumber energi yang efektif dibandingkan dengan karbohidrat dan protein. Lemak juga merupakan pelarut vitamin A, D, E, dan K yang sangat diperlukan tubuh (Winarno, 2004).
2. Minyak Goreng Bekas
Menurut Winarno (2004) mutu minyak goreng ditentukan oleh titik asapnya (yang ditentukan oleh kadar gliserol bebas). Makin tinggi titik asap, makin baik mutu minyak goreng tersebut. Pemanasan minyak akan menghidrasi gliserol membentuk aldehida tidak jenuh atau akrolin. Senyawa akrolin tersebut dapat menimbulkan rasa gatal pada tenggorokan. Minyak yang telah digunakan untuk menggoreng titik asapnya akan turun. Bila minyak mengalami pemanasan yang berlebihan, maka molekul gliserol akan mengalami kerusakan dan minyak tersebut segera mengeluarkan asap biru yang sangat mengganggu lapisan selaput mata. Syarat mutu minyak goreng menurut SNI dapat dilihat pada Tabel 1.
Tabel 1. Syarat Mutu Minyak Goreng
11
pula dilihat terjadinya penurunan bilangan iod dan penurunan kandungan asam lemak tak jenuh.
Menurut Lawson (1995), minyak yang digunakan untuk proses penggorengan akan mengalami 4 perubahan besar yang terjadi yaitu; (1) perubahan warna, (2) oksidasi, (3) polimerisasi dan (4) hidrolisis. Pembentukan flavor yang menyimpang juga sering terjadi pada minyak yang telah digunakan selama proses penggorengan.
a. Perubahan Warna Minyak Goreng
dengan pigmen karotenoid yang akan turut rusak oleh proses oksidasi. Oksidasi karoten akan mulai terjadi pada periode induksi. Perubahan warna pada minyak selama proses menggoreng menjadi lebih gelap merupakan indikator proses awal dari oksidasi minyak. Komponen-komponen yang tak tersabunkan, berbagai jenis gums, lecithin dapat mempercepat proses penggelapan warna minyak. Terbentuknya warna gelap pada minyak disebabkan karena keberadaan komponen phenolik. Kecepatan perubahan warna minyak juga sangat tergantung dari proses oil turn over system. Banyaknya minyak yang diserap oleh produk yang digoreng harus segera digantikan oleh minyak baru yang berarti juga penghambatan terhadap proses perubahan warna pada minyak goreng.
b. Oksidasi Minyak Goreng
13
yang ada di udara akan bereaksi dengan minyak yang ada dalam fryer. Beberapa produk hasil reaksi ada yang langsung menguap dan ada yang tertinggal dalam minyak. Pada suhu kamar biasanya proses oksidasi berjalan sangat lambat dan mulai mangalami peningkatan ketika proses sedang berjalan terutama pada suhu penggorengan yang tinggi (≥177oC).
c. Polimerisasi
Proses oksidasi yang berlanjut pada minyak goreng akan menyebabkan terbentuknya polimer-polimer yang dapat digolongkan dalam Non Volatile Decomposition Product (NVDP) dan Volatile Decomposition Product (VDP) (Suhadi, 1968). Senyawa-senyawa yang bersifat volatil termasuk di dalamnya peroksida, mono dan disliserida, aldehid, ketone dan asam karboksilat. Sedangkan senyawa-senyawa non volatil termasuk komponen polar, monomer (siklik dan non siklik), dimer, trimer dan komponen lain yang memiliki bobot molekul besar (Lawson, 1995).
Menurut Ketaren (2008) ada 3 macam reaksi utama yang menyokong terbentuknya senyawa-senyawa NVDP ini. Reaksi-reaksi tersebut ialah auto-oksidasi, thermal polimerization dan thermal oxidation. Terbentuknya senyawa polimer dapat ditandai dengan meningkatnya kekentalan minyak goreng. Hubungan antara kenaikan kandungan senyawa yang molekulnya tinggi dengan nilai gizi minyak yang telah dipanaskan dapat memberikan efek penurunan kesehatan pada Tikus percobaan.
d. Hidrolisis
Hidrolisis merupakan reaksi yang terbentuk antara air dari produk dengan minyak goreng yang dapat membentuk asam lemak bebas. Menurut Lawson (1995), kecepatan pembentukan asam lemak bebas sangat tergantung dari beberapa faktor di bawah ini :
15
2) Suhu penggorengan yang digunakan selama proses. Semakin tinggi suhu yang digunakan kecepatan pembentukan asam lemak bebas semakin meningkat.
3) Kecepatan dari oil turn over system.
4) Jumlah partikel/ remah-remah rontokan dari produk yang digoreng. 5) Bilangan heating / cooling cycles dari minyak.
Menurut Winarno (1999) minyak yang digunakan lebih dari sekali menggoreng akan lebih cepat berasap pada suhu yang lebih rendah. Minyak seharusnya dipanaskan tidak lebih tinggi dan tidak lebih lama dari yang diperlukan untuk menjaga agar proses hidrolisis hanya terjadi secara minimal. Permukaan wajan atau ketel pemanas juga mempengaruhi titik asap. Semakin kecil diameter ketel akan menyebabkan lebih cepat menjadi panas dan berasap.
B. Radikal Bebas
Radikal bebas adalah suatu atom atau molekul yang tidak stabil dan sangat reaktif karena memiliki satu atau lebih elektron yang tidak berpasangan pada orbital terluarnya. Untuk mencapai kestabilan atom atau molekul, radikal bebas akan bereaksi dengan molekul di sekitarnya untuk memperoleh pasangan elektron (Harjanto, 2004). Oleh karena itu radikal bebas bersifat sangat reaktif, dapat merusak berbagai makro molekul yang terdapat di dalam sel seperti lemak, protein dan DNA (Orrenius, 1993; Nanji & Sturmhofel, 1997)
17
C. Mengkudu
1. Deskipsi tanaman
Tanaman mengkudu merupakan tananman hijau yang tumbuh di sekitar kawasan pantai terbuka dan hutan sampai ketinggian 1.300 kaki di atas permukaan laut. Tanaman ini sering ditemukan di daerah aliran lava. Tanaman mengkudu dapat dicirikan dengan batang yang tegak, bercabang banyak, daun lebar berbentuk lonjong dengan warna hijau tua mengkilap dan bunganya bewarna putih tubular dengan bentuk buah yang khas pada granat. Mengkudu adalah tanaman perdu yang tumbuh membengkok pada ketinggian pohon mencapai 4-8 m, bercabang banyak dengan bentuk ranting yang bersegi empat. Letak daun berhadap-hadapan secara bersilang, bertangkai dengan bentuk daun yang bulat telur melebar menyerupai bentuk elips atau oval dengan panjang daun 10-40 cm, lebar daun 5-17 cm, tebal dan terlihat mengkilap. Tepi daun rata, ujungnya meruncing, dengan pangkal daun yang menyempit, tulang daun menyirip, dengan warna daun hijau tua (Hembing, 2001).
2. Taksonomi
Mengkudu memilki nama lmiah Morinda citrifolia atau biasa disebut dengan Indian Mulberry. Mengkudu merupakan tanaman kopi-kopian (Rubiaceae) dan juga termasuk tanaman tahunan. Taksonomi tanaman mengkudu:
Kingdom : Plantae
Subkingdom : Tracheobionta Superdivisi : Spermatophyta Divisi : Magnoliophyta Kelas : Magnoliopsida Subklas : Asteridae Ordo : Rubiales Familia : Rubiaceae Genus : Morinda L
Spesies : Morinda citrifolia L
3. Kandungan Mengkudu
Kandungan mengkudu antara lain:
19
2. Terpenoid merupakan senyawa hidrokarbon isometrik terdapat pada lemak esensial, dapat membantu tubuh dalam proses sintesis organik dan pemulihan sel-sel tubuh.
3. Zat anti bakteri. Aktivitas antibakteri acubin, L-asperuloside, dan alizarin dalam buah mengkudu, serta beberapa antrakinon dalam akar mengkudu, terbukti sebagai agen antibakteri, melawan strain bakteri menular seperti Pseudomonas aeruginosa, Proteus morgaii, Staphylococcus, Baciillis
subtilis, Escherichia coli, Salmonella, dan Shigela.
4. Scolopetin adalah senyawa fitonutrien yang dapat mengikat serotonin dan berfungsi memperlebar saluran pembuluh darah yang mengalami penyempitan, dapat bekerja sinergis dengan netraceuticals lain untuk mengatur tekanan darah tinggi menjadi normal, tetapi tidak menurunkan tekanan darah yang sudah normal, dapat meningkatkan kelenjar paneal di dalam otak untuk menghasilkan hormon melatonin, juga bersifat fungisida.
5. Damnacanthal dalam ekstrak mengkudu mampu menghambat pertumbuhan sel-sel kanker.
6. Xeronine dan Proxeronine. Heinicke, menyatakan bahwa buah mengkudu mengandung prekursor alami untuk xeronine yang bernama proxeronine menjadi xeronine alkaloid di dalam tubuh bersama degan enzim proxeroninase yang mampu memodifikasi molekul struktur protein.
8. Polisakarida antara lain: galaktosa, arabinosa, ahamnosa dan asam glukoronat. (Palu et al., 2008; Bangun & Sarwono, 2004; Wang & Su, 2001).
4. Antioksidan
Antioksidan merupakan senyawa yang dapat melindungi sel melawan radikal bebas, seperti: oksigen singlet, superoksida, radikal peroksil, radikal hidroksil dan peroxynitrite. Antioksidan menstabilkan radikal bebas dengan melengkapi kekurangan elektron yang dimiliki radikal bebas dan menghambat terjadinya reaksi berantai dari pembentukan radikal bebas yang dapat menimbulkan stres oksidatif. Ketidakseimbangan antara antioksidan dan hasil spesies oksigen reaktif dalam stres oksidatif menyebabkan kerusakan sel (Waji & Surgani, 2009; Buhler & Miranda, 2000).
5. Antioksidan dalam mengkudu
1. Selenium merupakan ko-factor dari enzim glutathione peroksidase selain membantu mencegah kerusakan sel yang disebabkan oleh radikal bebas, juga dapat menurunkan sintesis dan pelepasan dari leukotrine B4 yang merupakan mediator proses peradangan. Selenium bersama vitamin C dapat meningkatkan proses peradangan oleh sitokin.
21
3. Beta karoten sebagai antioksidan yang larut dalam lemak, dapat menjaga dari proses pengerusakan oksidasi dinding sel yang terdiri dari lemak.
4. Flavonoid adalah senyawa metabolik sekunder yang lazim ditemukan pada tanaman angiospermae, merupakan senyawa fenolik alam yang potensial sebagai antioksidan dan mempunyai bioaktifitas sebagai obat. Potensi flavonoid sebagai antioksidan dan kemampuannya dapat mengurangi aktivitas radikal hidroksi, anion superoksida, dan radikal peroksida (Hidajat, 2005; Waji & Surgani, 2009; Djauhariya & Rosman, 2000).
D. Hepar
1. Anatomi hepar
[image:33.595.206.428.529.713.2]Dalam tubuh manusia hepar merupakan kelenjar terbesar dengan berat kurang lebih 1,5 kg (Junqueira & Carneiro, 2007). Hepar terletak pada kuadran atas cavum abdominis dan terbagi menjadi 2 lobus yaitu lobus hepatis dextra dan lobus hepatis sinistra (Moore & Agur, 2002).
2. Fisiologi hepar
Menurut Sherwood (2001), Hepar adalah organ metabolik terbesar dan terpenting di tubuh. Organ ini penting bagi sistem pencernaan untuk sekresi garam empedu, tetapi hepar juga melakukan berbagai fungsi lain, mencakup hal-hal berikut:
a. Pengolahan metabolik kategori nutrient utama (karbohidrat, lemak, protein) setelah penyerapan mereka dari saluran pencernaan.
b. Detoksifikasi atau degradasi zat-zat sisa dan hormon serta obat dan senyawa asing lainnya.
c. Sintesis berbagai protein plasma, mencakup protein-protein yang penting untuk pembekuan darah serta untuk megangkut hormone tiroid, steroid dan kolesterol dalam darah.
d. Penyimpanan glikogen, lemak, besi, tembaga dan banyak vitamin
e. Pengaktifan vitamin D, yang dilaksanakan oleh hepar bersama dengan ginjal f. Pengeluaran bakteri dan sel darah merah yang usang, berkat adanya
makrofag residen
g. Eksresi kolesterol dan bilirubin, yang terakhir adalah produk penguraian yang berasal dari destruksi sel darah merah yang sudah usang.
3. Histologi hepar
23
organ. Secara mikroskopis, didalam hepar manusia terdapat 50.000-100.000 lobuli. Setiap lobulus berbentuk heksagonal yang terdiri atas lembaran sel hepar berbentuk kubus yang tersusun radial mengelilingi vena sentralis. Diantara lembaran sel hepar terdapat kapiler-kapiler yang disebut sinusoid, sinusoid merupakan cabang vena porta dan arteri hepatika, selain itu juga terdapat saluaran empedu yang membentuk kapiler empedu, dinamakan kanalikuli empedu yang berjalan diantara lembaran sel hepar (Price & Wilson, 2006). a. Lobulus hepar
[image:35.595.179.471.518.714.2]Lobulus hepar sebagai kesatuan histologis berbentuk prisma poligonal, diameter 1-2 mm, penampang melintang tampak sebagai heksagonal, dengan pusatnya vena sentralis dan di sudut-sudut luar lobuli terdapat kanalis porta. Lobulus-lobulus ini dipisahkan oleh jaringan pengikat dan pembuuh darah. Daerah ini disebut trigonum portae yang berisi cabang arteri hepatika, cabang vena porta, cabang duktus biliferus dan anyaman pembuluh limfe (Junqueira & Carneiro, 2007).
b. Parenkim hepar
Parenkim hepar terdiri atas sel-sel hepar (hepatosit) yang tersusun berderet secara radier dalam lobulus hepar. Sel-sel hepar ini berbentuk polihedral dengan ukuran yang berbeda-beda, nukleusnya lebar, bulat, berada di tengah, mengandung satu atau lebih nukleoli serta terdapat bercak-bercak kromatin. Pada sel hepar Tikus dapt juga ditemui polipoid nukleus, binukleus dan multinukleus. Sitoplasma sel hepar bervariasi dalam penampakan, tergantung dari nutrisi dan status fungsionalnya.
Lempeng-lempeng sel-sel hepar atau hepatosit ini secara radial bermula dari tepian lobulus menuju ke vena sentralis sebagai pusatnya. Lembaran-lembaran ini bercabang-cabang dan beranastomose secara bebas sehingga diantara lempeng-lempeng tersebut terdapat ruangan sinusoid. Permukaan sel hepar berkontak dengan permukaan sel hepar lain (Junqueira & Carneiro, 2007).
c. Sinusoid hepar
25
membawa darah kaya nutrisi dari saluran pencernaan dan juga kaya oksigen dari jantung (Eroschenko, 2010; Junqueira & Cameiro, 2007)
d. Kanalikuli Biliferus
Merupakan celah tubuler yang hanya dibatasi oleh membran plasma hepatosit dan mempunyai sedikit mikrovili pada bagian dalamnya. Kanalikuli biliferus membentuk anastomosis yang kompleks di sepanjang lempeng-lempeng lobulus hepar dan berakhir dalam daerah porta. Oleh karena itu, empedu mengalir berlawanan arah dengan aliran darah, yaitu dari tengah ke tepi lobulus. Beberapa kanalikuli biliferus membentuk duktulus biliferus yang bermuara dalam duktus biliferus dalam segitiga porta (Junqueira & Cameiro, 2007)
e. Daya regenerasi hepar
4. Histopatologi hepar
Jejas sel yang dapat terjadi pada hepar dapat bersifat reversibel atau ireversibel. a. Jejas Reversibel
1) Pembengkakan Sel
[image:38.595.176.503.342.546.2]Pembengkakan merupakan manifestasi pertama yang ada hampir pada semua bentuk jejas sel, sebagai akibat pergeseran air ekstraseluler ke dalam sel, akibat gangguan pengaturan ion dan volume karena kehilangan ATP.
Gambar 6. Pembengkakan sel disertai vakuolisasi; Ket.: 1. Sel yang mengalami vakuolisasi, 2. Inti sel menggeser ke tepi (Robbins & Kumar, 2007)
Bila air berlanjut tertimbun dalam sel, vakuol-vakuol kecil jernih tampak dalam sitoplasma yang diduga merupakan retikulum endoplasma yang melebar dan menonjol keluar atau segmen pecahannya. Gambaran jejas nonletal ini kadang-kadang disebut degenerasi hidropik atau degenerasi vakuol. Selanjutnya hepatosit yang membengkak juga akan tampak 1
27
edematosa (degenerasi balon) dengan sitoplasma ireguler bergumpal dan rongga-rongga jernih yang lebar (Robbins & Kumar, 2007).
2) Perlemakan Hepar
Perlemakan hepar merupakan akumulasi trigliserida dalam sel-sel parenkim hepar. Akumulasi timbul pada keadaan berikut:
a) Peningkatan mobilisasi lemak jaringan yang menyebabkan peningkatan jumlah asam lemak yang sampai ke hepar.
b) Peningkatan kecepatan konversi dari asam lemak menjadi trigliserida di dalam hepar karena aktivitas enzim yang terlibat meningkat.
c) Penurunan oksidasi trigliserida menjadi asetil-koA dan penurunan bahan keton.
d) Penurunan sintesis protein akseptor lipid.
b. Jejas Ireversibel 1) Nekrosis
Nekrosis sel dapat terjadi langsung atau dapat mengikuti degenerasi sel (jejas reversibel). Gambaran mikroskopik dari nekrosis dapat berupa gambaran piknosis, karioreksis, dan kariolisis.
muda. Selain itu dapat dikenali juga pada daerah lisis sel hepar yang dikelilingi oleh kumpulan sel kupffer dan sel radang. Nekrosis zona sel hepar adalah nekrosis sel hepar yang terjadi pada regio-regio yang identik disemua lobulus hepar, sedangkan nekrosis submasif merupakan nekrosis sel hepar yang meluas melewati batas lobulus, sering menjembatani daerah portal dengan vena sentralis (bridging necrosis).
2) Fibrosis
Fibrosis merupakan akumulasi matriks ekstraseluler yang merupakan respon dari cedera akut atau kronik pada hepar. Pada tahap awal, fibrosis mungkin terbentuk di dalam atau di sekitar saluran porta atau vena sentralis atau mungkin mengendap langsung didalam sinusoid. Hal ini merupakan reaksi penyembuhan terhadap cedera.
Cedera pada hepatosit akan mengakibatkan pelepasan sitokin dan faktor solubel lainnya oleh sel kupffer serta sel tipe lainnya pada hepar. Faktor-faktor ini akan mengaktivasi sel stelata yang akan mensintesis sejumlah besar komponen matriks ekstraseluler (Robbins & Kumar, 2007).
5. Proses Kerusakan Sel Hepar Akibat Radikal Bebas yang Ditimbulkan oleh Minyak Goreng Bekas
29
senyawa toksin. Radikal bebas sangat tidak stabil dan mudah bereaksi dengan zat kimia anorganik atau organic. Tiga reaksi yang paling relevan dengan jejas sel yang diperantarai radikal bebas yaitu peroksidasi lipid membran, fragmentasi DNA dan ikatan silang protein (Robbins & Kumar, 2007).
Membran sel hampir seluruhnya terdiri dari protein dan lipid. Struktur dasarnya ialah sebuah lapisan lipid bilayer dan diantar lapisan lipid bilayer tersebut terdapat molekul besar protein globular. Sedangkan struktur dasar dari lapisan lipid bilayer sendiri terdiri atas molekul-molekul fosfolipid (Guyton & Hall, 2008). Molekul fosfolipid yang memiliki ikatan rangkap antara beberapa atom karbon. Ikatan ini mudah diserang oleh radikal bebas yang berasal dari oksigen sehingga terbentuk senyawa peroksida lipid yang dapat merusak membran sel, akibatnya membran sel menjadi lebih permiabel terhadap beberapa substansi dan memungkinkan substansi tersebut melewati membran secara bebas (Robbins & Kumar, 2007).
E. Tikus Putih
1. Taksonomi
Klasifikasi
Kingdom : Animalia
Filum : Chordata
Kelas : Mamalia
Ordo : Rodentai
Subordo : Odontoceti
Familia : Muridae
Genus : Rattus
Spesies : Rattus norvegicus
(Natawidjaya, 1983)
2. Jenis
Tikus putih (Rattus norvegicus) merupakan hewan pengerat dan sering digunakan sebagai hewan percobaan atau digunakan untuk penelitian, dikarenakan Tikus merupakan hewan yang mewakili dari kelas mamalia, karena kelengkapan organ, kebutuhan nutrisi, metabolisme biokimianya, sistem reproduksi, pernafasan, peredaran darah dan ekskresi menyerupai manusia. Galur Tikus yang sering digunakan dalam penelitian antara lain Wistar, Sprague-Dawley, Long Evans, dan Holdzman.
31
pertumbuhannya cepat, tempramennya baik, kemampuan laktasi tinggi, dan tahan terhadap perlakuan (Isroi, 2010).
3. Biologi Tikus Putih
[image:43.595.134.479.406.758.2]Di Indonesia hewan percobaan ini sering dinamakan Tikus besar. Dibandingkan dengan Tikus liar, Tikus laboratorium lebih cepat menjadi dewasa dan umumnya lebih mudah berkembang biak. Berat badan Tikus laboratorium lebih ringan dibandingkan dengan berat badan Tikus liar. Biasanya pada umur empat minggu beratnya 35-40 gram, dan berat dewasa rata-rata 200-250 gram (FKH UGM, 2006). Data biologi Tikus putih pada tabel 2:
Tabel 2. Data Biologi Tikus Putih (Rattus norvegicus) (Isroi, 2010)
DATA BIOLOGI KETERANGAN
Lama hidup 2,5 – 3,5 tahun
Berat badan
Newborn 5 - 6 gr
Pubertas 150 - 200 gr
Dewasa jantan 300 - 800 gr
Dewasa betina 200 - 400 gr
Reproduksi
Kematangan seksual 65 - 110 hari
Siklus estrus 4 - 5 hari
Gestasi 20 - 22 hari
Penyapihan 21 hari
Fisiologi
Suhu tubuh 35,90– 37,50 C
Denyut jantung 250 - 600 kali/menit
Laju nafas 66 - 144 kali/menit
Tekanan darah diastole 60 - 90 mmHg
Tekanan darah sistol 75 - 120 mmHg
Feses Padat, berwarna coklat tua,
bentuk memanjang dengan ujung membulat
Urine Jernih dan berwarna kuning
Konsumsi makan dan air
Konsumsi makan 15 – 30 gr/hari atau 5 – 6 gr/100
grBB
Konsumsi air 24 – 60 ml/hari atau 10 -12
III. METODE PENELITIAN
A. Desain Penelitian
Penelitian ini merupakan penelitian eksperimental dengan metode acak terkontrol. Menggunakan 20 ekor Tikus Wistar jantan berumur 10-16 minggu yang dipilih secara random dan dibagi menjadi 4 kelompok.
B. Tempat danWaktu
C. Populasi dan Sampel
Populasi penelitian ini adalah Tikus Wistar jantan berumur 10-16 minggu yang diperoleh dari Fakultas Kedokteran Hewan Institut Pertanian Bogor. Jumlah sampel yang digunakan berdasarkan kriteria sampel Frederer Menurut Frederer, rumus penentuan sampel untuk uji eksperimental adalah:
T(n-1)>15
Dimana t adalah jumlah kelompok percobaan dan n merupakan jumlah sampel tiap kelompok. Penelitian ini akan menggunakan lima kelompok perlakuan sehingga penghitungan sampel menjadi:
4(n-1) >15 4n-4 >15 4n >19 n >4,7
Jadi sampel yang digunakan minimal 5 ekor per kelompok perlakuan. Pada penelitian ini digunakan sampel sebanyak 20 ekor dan dipilih secara random sampling. Untuk keperluan penelitian ini digunakan 4 kelompok Tikus dengan masing-masing kelompok terdiri dari 5 Tikus Wistar. Adapun keempat kelompok Tikus ini terdiri dari:
35
2. Kelompok B merupakan kelompok Tikus yang diberi minyak goreng bekas penggorengan lele dengan pemanasan selama 3 jam secara terus-menerus.
3. Kelompok C merupakan kelompok Tikus yang diberi minyak goreng bekas penggorengan lele dengan pemanasan selama 6 jam secara terus-menerus.
4. Kelompok D merupakan kelompok Tikus yang diberi minyak goreng bekas penggorengan lele dengan pemanasan selama 6 jam secara terus-menerus yang telah dimurnikan menggunakan sari buah mengkudu sebagai antioksidan.
Adapun Tikus yang digunakan pada penelitian ini memenuhi kriteria inklusi sebagai berikut:
Sehat
Memiliki berat badan antara 200-250 gram
Jenis kelamin jantan
Berusia sekitar 10-16 minggu (dewasa)
Kriteria ekslusi pada penelitian ini diantaranya :
Penampakan rambut kusam, rontok, botak dan aktivitas kurang/tidak aktif Keluarnya eksudat yang tidak normal dari mata, mulut, anus, genital
setelah masa adaptasi
Terdapat penurunan berat badan >10 % setelah masa adaptasi selama di
D. Bahan dan Alat Penelitian
1. Bahan penelitian
Bahan penelitian yang digunakan yaitu : 1) Minyak goreng bekas
2) Sari buah mengkudu 3) Ketamine-xylazine 4) Formalin
5) Aquades
2. Alat penelitian
1) Neraca analitik Metler Toledo dengan tingkat ketelitian 0,01 g, untuk menimbang berat Tikus
2) Spuit oral 3 cc
3) Minor set, untuk membedah perut Tikus (laparotomy) 4) Kapasal kohol
5) Mikrotom 6) Sonde 7) Kompor 8) Penggorengan 9) Tabung erlenmeyer 10)Saringan
37
E. Prosedur Penelitian
Penelitian ini dilakukan untuk mengetahui pengaruh minyak hasil pemurnian dengan buah mengkudu terhadap histopatologi hepar pada hewan coba.
1. Pemilihan hewan coba
Penelitian ini dilakukan untuk menguji keamanan minyak hasil pemurnian pada hewan coba. Sebagai model dipilih Tikus Wistar. Tikus Wistar dipilih sebagai model hewan coba karena merupakan mamalia yang mempunyai tipe metabolisme sama dengan manusia. Dengan menggunakan Tikus, hasilnya dapat digeneralisasi pada manusia. Di samping itu, dengan menggunakan Tikus sebagai hewan coba, maka pengaruh diet dapat benar-benar dikendalikan dan terkontrol. Akan tetapi, hal ini juga mempunyai kelemahan karena manusia makannya lebih beragam, sehingga kondisi yang dicapai pada penelitian kemungkinan akan berbeda dengan kenyataan pada manusia. Namun demikian, hal ini merupakan pendekatan yang paling dapat dilaksanakan.
2. Prosedur pemberian minyak goreng bekas dan minyak hasil pemurnian a. Pemilihan sampel minyak goreng bekas
memilih minyak goreng bekas lele yang digunakan selama 3 jam penggorengan dan 6 jam penggorengan secara berturut-turut.
b. Prosedur pemurnian miyak goreng bekas
Regenerasi minyak goreng bekas lele 6 jam penggorengan dengan menggunakan sari buah mengkudu dilakukan di Laboratorium Farmakologi FK Unila.
[image:50.595.152.487.296.693.2]Cara pengolahan buah mengkudu adalah sebagai berikut :
Gambar 7. Diagram Alur Pengolahan Buah Mengkudu (Mahmudatussa, 2013)
Buah mengkudu dicacah
Buah mengkudu dihaluskan dengan menggunakan blender
Empat (4) sendok makan sari buah mengkudu dimasukan kedalam tabung erlenmeyer yang sudah diisi 100 ml minyak goreng bekas,
lalu aduk dengan menggunakan sendok atau batang pengaduk
Diamkan selama 10-15 menit
Kompor dimatikan, diamkan selama 10-15 menit
Minyak goreng bagian atas disaring dengan menggunakan penyaring dan endapanya dibuang
Masukkan ke dalam wajan lalu dipanaskan hingga suhu 50-60 0C (diraba dengan tangan terasa hangat) atau dibiarkan 5 menit setelah
39
c. Perhitungan dosis
Penelitian Thadeus (2005) menggunakan minyak goreng bekas secara oral dengan dosis 10uL/g BB/hari terbukti tidak toksik pada Tikus. Pada penelitian Rukhmini (2007) pemberian minyak goreng yang dicampur makanan dengan kadar minyak 20% dari jumlah pakan v/v, pengambilan sampel histopatologi hepar Tikus dilihat pada minggu ke 4 perlakuan, minggu ke 8 perlakuan dan minggu ke 12 perlakuan menunjukan adanya kerusakan pada gambaran histopatologis hepar Tikus. Berdasarkan penelitian terdahulu tersebut, peneliti menggunakan dosis 10uL/g BB agar dapat diukur intake diet lemaknya dan dengan lama perlakuan 4 minggu.
Misalkan berat badan Tikus 200g maka perhitunganya adalah: 10uL/gBB/hari x 200g = 2000uL= 2ml= 2cc/hari.
3. Prosedur Operasional Pembuatan Slide a). Fixation
1. Spesimen berupan potongan organ telah dipotong secara representatif kemudian segera difiksasi dengan formalin 10% selama 3 jam.
2. Dicuci dengan air mengalir sebanyak 3−5 kali.
b). Trimming
1. Organ dikecilkan hingga ukuran ± 3 mm.
c). Dehidrasi
1. Mengeringkan air dengan meletakkan tissue casette pada kertas tisu. 2. Dehidrasi dengan :
• Alkohol 70% selama 0,5 jam
• Alkohol 96% selama 0,5 jam
• Alkohol 96% selama 0,5 jam
• Alkohol 96% selama 0,5 jam
• Alkohol absolut selama 1 jam
• Alkohol absolut selama 1 jam
• Alkohol absolut selama 1 jam
• Alkohol xylol 1:1 selama 0,5 jam
d). Clearing
Untuk membersihkan sisa alkohol, dilakukan clearing dengan xilol I dan II masing–masing selama 1 jam.
e). Impregnansi
Impregnansi dilakukan dengan menggunakan parafin selama 1 jam dalam oven suhu 65oC.
f). Embedding
1. Sisa paraffin yang ada pada pan dibersihkan dengan memanaskan beberapa saat di atas api dan diusap dengan kapas.
41
3. Paraffin cair dituangkan ke dalam pan.
4. Dipindahkan satu per satu dari tissue casette ke dasar pan dengan mengatur jarak yang satu dengan yang lainnya.
5. Pan dimasukkan ke dalam air.
6. Paraffin yang berisi potongan hepar dilepaskan dari pan dengan
dimasukkan ke dalam suhu 4−60
C beberapa saat.
7. Paraffin dipotong sesuai dengan letak jaringan yang ada dengan menggunakan skalpel/pisau hangat.
8. Lalu diletakkan pada balok kayu, diratakan pinggirnya dan dibuat ujungnya sedikit meruncing.
g). Cutting
1. Pemotongan dilakukan pada ruangan dingin.
2. Sebelum memotong, blok didinginkan terlebih dahulu di lemari es. 3. Dilakukan pemotongan kasar, lalu dilanjutkan dengan pemotongan
halus dengan ketebalan 4−5 mikron. Pemotongan dilakukan
menggunakan rotary microtome dengan disposable knife.
5. Lembaran jaringan dipindahkan ke dalam water bath pada suhu 600C selama beberapa detik sampai mengembang sempurna.
6. Dengan gerakkan menyendok, lembaran jaringan tersebut diambil dengan slide bersih dan ditempatkan di tengah atau pada sepertiga atas atau bawah.
7. Slide yang berisi jaringan ditempatkan pada inkubator (Suhu 370C) selama 24 jam sampai jaringan melekat sempurna.
h). Straining (Pewarnaan) dengan Prosedur Pulasan Hematoksilin–Eosin: Setelah jaringan melekat sempurna pada slide, dipilih slide yang terbaik selanjutnya secara berurutan memasukkan ke dalam zat kimia di bawah ini dengan waktu sebagai berikut.
1. Dilakukan deparafinisasi dalam:
• Larutan xylol I selama 5 menit
• Larutan xylol II selama 5 menit
• Ethanol absolut selama 1 jam
2. Hydrasi dalam:
• Alkohol 96% selama 2 menit
• Alkohol 70% selama 2 menit
• Air selama 10 menit
3. Pulasan inti dibuat dengan menggunakan:
• Haris hematoksilin selama 15 menit
• Air mengalir
43
4. Lanjutkan dehidrasi dengan menggunakan:
• Alkohol 70% selama 2 menit
• Alkohol 96% selama 2 menit
• Alkohol absolut 2 menit
5. Penjernihan:
• Xylol I selama 2 menit
• Xylol II selama 2 menit
i). Mounting dengan entelan lalu tutup dengan deck glass
Setelah pewarnaan selesai, slide ditempatkan di atas kertas tisu pada tempat datar, ditetesi dengan bahan mounting yaitu entelan dan ditutup dengan deck glass, cegah jangan sampai terbentuk gelembung udara. j). Slide dibaca dengan mikroskop
4. Prosedur penelitian
[image:56.595.138.562.129.709.2]Adapun rancangan penelitian dari penelitian ini adalah sebagai berikut:
Gambar 8. Diagram Alur Penelitian
Kelompok A Kelompok B Kelompok C Kelompok D
Tikus diadaptasikan selama 7 hari
Cekok 10 ul/g BB air
Cekok 10 ul/g BB Minyak goreng bekas lele 3 jam
penggorengan
Cekok 10 ul/g BB Minyak goreng bekas lele 6 jam
penggorengan
Cekok 10 ul/g BB Minyak goreng bekas lele 6 jam penggorengan yang
telah dimurnikan Pemisahan per populasi
Tikus diberikan perlakuan selama 4 minggu
Tikus dianestesi dengan ketamine-xylazine 75-100mg/kg + 5-10mg/kg secara IP
Lakukan laparotomi lalu ambil hepar
Fiksasi sampel dengan formalin 10%
Pembuatan sediaan Hematoxylin-Eosin
Pengamatan
Interpretasi hasil pengamatan
45
F. Identifikasi Variabel dan Definisi Operasional Variabel
1. Identifikasi Variabel
Pada penelitian ini terdapat 2 variabel yakni variabel dependen (variabel terikat) dan variabel independen (variabel bebas). Adapun variabel penelitian pada penelitian ini adalah:
a. Variabel Bebas
Pemberian minyak goreng bekas yang dimurnikan dengan buah mengkudu (Morinda citrifolia)
b. VariabelTerikat
Gambaran hepatosit Tikus Wistar jantan
2. Definisi Operasional Variabel
Berikut definisi operasional dari variabel yang digunakan:
a. Pemberian minyak goreng bekas yang dimurnikan dengan buah mengkudu (Morinda citrifolia)
1. Kelompok A merupakan kelompok Tikus yang tidak diberi minyak. Kelompok ini digunakan sebagai kelompok kontrol hanya diberikan air.
2. Kelompok B merupakan kelompok Tikus yang diberi minyak goreng bekas penggorengan lele yang telah digunakan selama 3 jam penggorengan secara terus-menerus.
4. Kelompok D merupakan kelompok Tikus yang diberi minyak goreng bekas penggorengan lele yang telah digunakan selama 6 jam penggorengan secara terus-menerus dan telah dimurnikan dengan sari buah mengkudu sebagai antioksidan.
b. Gambaran histopatologi hepar Tikus Wistar jantan. Setiap Tikus dibuat preparat jaringan hepar dengan pewarnaan HE dan tiap preparat dibaca menggunakan mikroskop perbesaran objektif 400x. Kemudian dilakukan penilaian kerusakan hepar menggunakan 5 lapangan pandang. Setiap lapangan pandang yang di dalamnya terdapat edema/nekrosis hepatosit dianggap lapangan pandang tersebut mengalami kerusakan. Persentase kerusakan adalah jumlah hepatosit yang rusak dibandingkan dengan semua hepatosit yang ada pada lapangan pandang yang diamati.
G. Analisis data
47
H. Etika Penelitian
BAB V. SIMPULAN DAN SARAN
A.SIMPULAN
1. Terdapat rerata kerusakan hepatosit pada Tikus yang diberi minyak goreng bekas 3 jam penggorengan adalah 27,14%, dan pada Tikus yang diberi minyak goreng bekas 6 jam penggorengan adalah 35,00%.
2. Rerata kerusakan hepatosit pada Tikus yang diberi minyak goreng bekas 6 jam penggorengan yang dimurnikan dengan mengkudu lebih rendah 25,54% dari rerata kerusakan hepatosit yang hanya diberi minyak goreng bekas.
B.SARAN
1. Perlu penelitian lebih lanjut dengan jumlah pemurnian yang berbeda pada minyak goreng bekas.
2. Perlu penelitian lebih lanjut agar ditemukan dosis pemberian sari buah mengkudu yang efektif pada pemurniaan minyak goreng bekas.
DAFTAR PUSTAKA
Aprilia L. 2010. Efek Protektif Ekstrak Etanol Mahkota Dewa [Phaleria macrocarpa (Scheff.) Boerl] Terhadap Gambaran Histopatologi Hati Mencit (Mus musculus L.) Jantan Galur BALB/C yang Diinduksi oleh Etanol. [Skripsi]. Universitas Lampung.
Amanda. 2007. Minyak Jelantah pun Bisa Dijadikan Sabun Mandi. http/pikiran_rakyat/ai_ms/Minyak%20jelantah%20pun%20pun%20Bisa%2 0Dijadikan%20Sabun%20Mandi.htm. Diakses 30 september 2013.
Anonim. 2006. Jakarta Future Excange Olein. http://www.bbj-jfx.com/product. Diakses 3 oktober 2013.
Bangun AP dan Sarwono B. 2004. Khasiat dan Manfaat Mengkudu. Jakarta: Agro Media Pustaka. Hlm: 6-24.
Buhler DR and Miranda C. 2000. Antioxidant activities of flavonoids. Oregon State University. USA.
Corwin EJ. 2000. BukuSaku Patofisiologi. Jakarta: EGC.
Djauhariya E dan Rosman R. 2000. Status Perkembangan Teknologi Tanaman Mengkudu. http://balitttro.litbangdeptan.go.id/ind/images/stories/edsus/vol 19 no 1/2000. Diunduh tanggal 25 Agustus 2011.
Eroschenko VP. 2010. Atlas Histologi diFiore dengan Korelasi Fungsional Edisi 11. Jakarta: EGC. Hlm: 324-6, 331, 342.
Fakultas Kedokteran Hewan UGM. 2005. Tikus Laboratorium. Universitas Gajah Mada. Yogyakarta.
Gartner LP and Hiatt JL. 2007. Color Textbook of Histology 3rd Ed. USA: Elsevier Saunder. pp: 526.
Guyton AC dan Hall JE. 2008. Buku Ajar Fisiologi Kedokteran Edisi 11. Jakarta: EGC. Hlm: 843-8, 871-907.
Heineeke JW. 2003. Oxidative stress: New approaches to diagnosis and prognosis in atherosclerosis. A Symposium: Closed roundtable on atherosclerosis. Am J Cardiol. 91:12-6.
Hidajat B. 2005. Penggunaan antioksidan pada anak. Continuing education XXXV. Surabaya.
Isroi. 2010. Biologi rat (Rattus norvegicus).http://isroi.wordpress.com. Diakses 14 februari 2011.
Junqueira LC dan Carneiro J. 2007. Histologi Dasar Teks dan Atlas Edisi 10. Jakarta: EGC. Hlm: 318-33.
Ketaren S. 2008. Pengantar Teknologi Minyak dan Lemak Pangan. Jakarta: Penerbit Universitas Indonesia. Hlm: 1-185.
Larasati ND. 2011. Efek Protektif Madu Terhadap Kerusakan Hepar Tikus Putih (Rattus norvegicus) Jantan Dewasa Galur Sprague Dawley yang Diinduksi oleh Etanol. [Skripsi]. Unversitas Lampung.
Lawson H. 1995. Food Oils And Fats : Technology Utilization and Nutrition. an Chapman and Hall. New York: ITP an International Thomson Publishing Company.
Mahmudatussa AI. 2013. Modul minyak. Bandung: Universitas Pendidikan Indonesia. Hlm: 1-35.
Moore KL dan Agur AMR. 2002. Anatomi Klinis Dasar. Jakarta: Hipokrates. Hlm: 54-79.
Nanji AA and Sturmhofel SH. 1997. Apoptosis and necrosis. Two Types of Cell Death in Alcoholic Liver Disease. Alcohol Health Res World. 21:325-30. Natawidjaya P dan Suparman. 1983. Mengenal Beberapa Binatang Di Alam
Sekitarnya. Jakarta: Pustaka Dian.
Orrenius S. 1993. Mechanisms of oxidative cell damage. Free Radicals: From basic science to medicine. Mol Cell Biol. 47-64.
Pantzaris TP. 1999. Palm Oil Frying. Di dalam: Boskou, D. dan I. Elmadfa, Frying of Food: Oxidation, Nutrient and Non Nutrient Antioxidants, Biologically Active Compounds and High Temperature. Basel: Technomic Publishing. Pp: 223-52.
Perkins EG and MD. Erickson. 1996. Deep Frying : Chemistry, Nutrition and Practical Aplications. Illionis: AOCS Press.
Price S dan Wilson L. 2005. Patofisiologi Konsep Klinis Proses-Proses Penyakit. Edisi: Ke-5. Jakarta:EGC. Hlm: 2:472-511.
Putz R and Pabst R. 2007. Sobotta Atlas Anatomi Manusia Edisi 22. Jakarta: EGC. Hlm: 2:142.
Purboyo A. 2009. Efek Antioksidan Ekstrak Etanol Daun Jambu Biji (Psidium Guajava L) pada Kelinci yang Dibebani Glukosa. [Tesis]. Surakarta.
Rasjidin I. 2006. Pembuatan Arang Aktif Dari Tempurung Biji Jambu Mede (Anacardiumoccidentale) Sebagai Adsorben pada Pemurnian Minyak Goreng Bekas. [Skripsi]. Institut Pertanian Bogor.
Robbins SL dan Kumar V. 2007. Buku Ajar Patologi II 7th ed. Jakarta: EGC. Hlm: 1:4-33, 2:663-710.
Rukmini A. 2007. Regenerasi Minyak Goreng Bekas Dengan Arang Sekam Menekan Kerusakan Organ Tubuh. Seminar Nasional Teknologi. Program Studi Teknologi Pertanian. Universitas Widya Mataram Yogyakarta.
Setiawan B dan Suharton E. 2005. Stres oksidatif dan peran antioksidan pada diabetes melitus. Majalah Kedokteran Indonesia. 55(1):8.
Shah AM and Channon KM. 2004. Free radicals and redox signalling in cardiovascular disease. Heart. 90:486-7.
Sherwood L. 2011. Fisiologi Manusia dari Sel ke Sistem. Jakarta: EGC. Hlm: 669-73.
Sloane E. 2004. Anatomi dan Fisiologi Untuk Pemula. Jakarta: EGC. Hlm: 291-2. Suhadi H. 1968. Chemical Reaction in Heated Fats and Their Toxicity. Di dalam
Djatmiko, B. danA. B. Enie. 1985. Proses Penggorengan dan Pengaruhnya Terhadap Sifat Fisiko-Kimia Minyak dan Lemak. Bogor: Agro Industri Press.
Wang MY and Su C. 2001. Cancer proventive effect of morindacitrifolia (noni). Ann. NY Acad. Sci. 952:161-68.
Wang MY, West BJ, Jensen J, Diane N, Chen SU, Palu AK. 2002. Morindacitrifolia (noni): A literature reviev and recent advances in noni research. ACTA Pharmacol. 23(12):1127-41.
Widayat, Suherman, Haryani K. 2006. Optimasi Proses Adsorbsi Minyak Goreng Bekas dengan Asorbent Zeolit Alam :Studi Pengurangan Bilangan Asam. Jurnal Teknik Gelagar. 17(1).
Winarno FG. 1999. Minyak Goreng dalam Menu Masyarakat. Bogor: Pusbangtepa.
