Ana Laporan Glukosa Dalam Darah

(1)

LAPORAN PRAKTIKUM BIOKIMIA I LAPORAN PRAKTIKUM BIOKIMIA I

Penentuan Kadar Glu

Penentuan Kadar Glukosa Dalam Darahkosa Dalam Darah II.. JJUUDDUUL L PPEERRCCOOBBAAAANN : : PPeenneennttuuaan n KKaaddaar r GGlluukkoossa a DDaallaa  DDaarraa!!

II

II.. "A"ARIRI# T# TAANGNGGAGAL PL PERERCOCOBABAANAN :: M

Muullaa$$ :: Senin, 24 Oktober 2016, pukul 13.00Senin, 24 Oktober 2016, pukul 13.00 %elesa$ :

%elesa$ : Senin, 24 Oktober 2016, Senin, 24 Oktober 2016, pukul 15.30pukul 15.30

IIIIII..TTUUJJUUAAN N PPEERRCCOOBBAAAANN ::

Menentukan kadar glukosa yang ada pada sampel darah Menentukan kadar glukosa yang ada pada sampel darah

II&&.. DDAA%%AAR R TTEEOORRII ::

arbohidrat banyak terdapat di alam, diantaranya dalam bentuk pati, kapas, gula arbohidrat banyak terdapat di alam, diantaranya dalam bentuk pati, kapas, gula pasir, dan kay

pasir, dan kayu. arbohidrat adalah polihidroksi dari aldehida atau keton. !amau. arbohidrat adalah polihidroksi dari aldehida atau keton. !ama karbohidrat atau "hidrat dari karbon# adalah istilah yang dilontarkan pada masa a$al karbohidrat atau "hidrat dari karbon# adalah istilah yang dilontarkan pada masa a$al dipela%arinya kimia karbohidrat. &anyak dari senya$a ini mempunyai bobot molekul dipela%arinya kimia karbohidrat. &anyak dari senya$a ini mempunyai bobot molekul kelipatan '(

kelipatan '(22O, misalnya 'O, misalnya '66((1212OO66 dan ' dan '55((1010OO55..

arbohidrat digolongkan men%adi monosakarida, disakarida, dan polisakarida. arbohidrat digolongkan men%adi monosakarida, disakarida, dan polisakarida. Salah satu )ontoh monosakarida ialah glukosa. *lukosa merupakan senya$a penting di Salah satu )ontoh monosakarida ialah glukosa. *lukosa merupakan senya$a penting di alam karena perannya yang penting dalam proses biologis. *lukosa merupakan molekul alam karena perannya yang penting dalam proses biologis. *lukosa merupakan molekul paling sederhana hasil hidrolisis dari semua karbohidrat dalam tubuh sebelum proses paling sederhana hasil hidrolisis dari semua karbohidrat dalam tubuh sebelum proses

oksidasi. oksidasi.

*lukosa +suatu monosakarida, adalah salah satu karbohidrat terpenting yang *lukosa +suatu monosakarida, adalah salah satu karbohidrat terpenting yang digunakan sebagai sumber tenaga bagi he$an dan tumbuhan. *lukosa merupakan salah digunakan sebagai sumber tenaga bagi he$an dan tumbuhan. *lukosa merupakan salah satu hasil selama -otosintesis dari a$al bagi respirasi. &entuk alami glukosa disebut %uga satu hasil selama -otosintesis dari a$al bagi respirasi. &entuk alami glukosa disebut %uga dekstrosa, terutama dalam industri pangan. *lukosa +'

dekstrosa, terutama dalam industri pangan. *lukosa +'66((1212OO66 memiliki berat molekul memiliki berat molekul 10.1, termasuk dalam heksosa yaitu

10.1, termasuk dalam heksosa yaitu monosakarida yang mengandung enam atommonosakarida yang mengandung enam atom karbon +/ehninger 12.

karbon +/ehninger 12.

*lukosa merupakan kelompok senya$a karbohidrat sederhana atau *lukosa merupakan kelompok senya$a karbohidrat sederhana atau

monosakarida. i alam, glukosa terdapat dalam buahbuahan dan madu lebah. *lukosa monosakarida. i alam, glukosa terdapat dalam buahbuahan dan madu lebah. *lukosa ber-ungsi sebagai sumber energi untuk selsel otak, sel sara-, dan sel darah merah. arah ber-ungsi sebagai sumber energi untuk selsel otak, sel sara-, dan sel darah merah. arah

manusia normal mengandung glukosa dalam %umlah atau konsentrasi yang tetap, yaitu manusia normal mengandung glukosa dalam %umlah atau konsentrasi yang tetap, yaitu antara 0100 mg tiap 100 ml darah. *lukosa darah ini dapat bertambah setelah kita antara 0100 mg tiap 100 ml darah. *lukosa darah ini dapat bertambah setelah kita makan makanan sumber karbohidrat, namun setelah kirakira 2 %am setelah makan, makan makanan sumber karbohidrat, namun setelah kirakira 2 %am setelah makan, %umlah darah akan kembali seperti semula. ada orang yang menderita diabetes melitus, %umlah darah akan kembali seperti semula. ada orang yang menderita diabetes melitus, %umlah glukosa darah lebih besar dari 130 mg100

%umlah glukosa darah lebih besar dari 130 mg100 ml darah. ml darah. gar dapat ber-ungsi se)aragar dapat ber-ungsi se)ara optimal, tubuh hendaknya dapat mempertahankan konsentrasi darah gula +dalam bentuk optimal, tubuh hendaknya dapat mempertahankan konsentrasi darah gula +dalam bentuk

1 1

(2)

LAPORAN PRAKTIKUM BIOKIMIA I LAPORAN PRAKTIKUM BIOKIMIA I

Penentuan Kadar Glu

Penentuan Kadar Glukosa Dalam Darahkosa Dalam Darah glukosa dalam batasbatas tertentu, yaitu 0120 mgml dalam keadaan puasa. &ila gula glukosa dalam batasbatas tertentu, yaitu 0120 mgml dalam keadaan puasa. &ila gula darah naik di atas 10 mg100ml, gula akan dikeluarkan melalui urine. Sebaliknya bila darah naik di atas 10 mg100ml, gula akan dikeluarkan melalui urine. Sebaliknya bila gula darah turun hingga 4050 mgml, kita akan merasa gugup, pusing, lemas dan lapar gula darah turun hingga 4050 mgml, kita akan merasa gugup, pusing, lemas dan lapar +/estari

+/estariet al et al . 2013.. 2013.

alam tubuh manusia, kadar glukosa darah normal adalah 00 mgdl +1 dl7 alam tubuh manusia, kadar glukosa darah normal adalah 00 mgdl +1 dl7 100 m/. !amun, kadar glukosa darah tersebut tergantung dengan $aktu setelah makan 100 m/. !amun, kadar glukosa darah tersebut tergantung dengan $aktu setelah makan dalam satu %am pertama setelah makan, kadar gula darah meningkat sekitar 130 mgdl dalam satu %am pertama setelah makan, kadar gula darah meningkat sekitar 130 mgdl darah, lalu menurun setelah 23 %am berikutnya setelah glukosa tersebut digunakan dalam darah, lalu menurun setelah 23 %am berikutnya setelah glukosa tersebut digunakan dalam berbagai %aringan. Se%umlah glukosa diubah m

berbagai %aringan. Se%umlah glukosa diubah men%adi glikogen dan disimpan dalam hatien%adi glikogen dan disimpan dalam hati dan otot. &ila glukosa diperlukan

dan otot. &ila glukosa diperlukan untuk energi atau glikogen, kelebihan glukosa akanuntuk energi atau glikogen, kelebihan glukosa akan diubah men%adi lemak. *likogen merupakan sumber

diubah men%adi lemak. *likogen merupakan sumber energi )adangan yang akanenergi )adangan yang akan dikon8ersi kembali men%adi glukosa pada

dikon8ersi kembali men%adi glukosa pada saat dibutuhkan lebih banyak energi. Meskipunsaat dibutuhkan lebih banyak energi. Meskipun lemak simpanan dapat %uga men%adi sumber energi )adangan, lemak tidak pernah se)ara lemak simpanan dapat %uga men%adi sumber energi )adangan, lemak tidak pernah se)ara langsung dikon8ersi men

langsung dikon8ersi men%adi glukosa. 9ruktosa dan %adi glukosa. 9ruktosa dan galaktosa lain yang dihasilkan galaktosa lain yang dihasilkan daridari peme)ahan karbohidrat, langsung diangkut k

peme)ahan karbohidrat, langsung diangkut ke hati e hati yang mengkon8ersinya men%adiyang mengkon8ersinya men%adi glukosa +Suarsana 2010.

glukosa +Suarsana 2010.

*lukosa adalah suatu aldoheksosa dan sering disebut dekstrosa, karena *lukosa adalah suatu aldoheksosa dan sering disebut dekstrosa, karena mempunyai si-at dapat memutar )ahaya terpolarisasi ke arah kanan. i alam, glukosa mempunyai si-at dapat memutar )ahaya terpolarisasi ke arah kanan. i alam, glukosa terdapat dalam buahbuahan dan madu lebah. arah manusia normal mengandung terdapat dalam buahbuahan dan madu lebah. arah manusia normal mengandung

glukosa dalam %umlah atau konsentrasi tetap, yaitu antara 0 : 100 mg tiap 100 ml darah. glukosa dalam %umlah atau konsentrasi tetap, yaitu antara 0 : 100 mg tiap 100 ml darah. *lukosa darah dapat bertambah setelah kita makanmakanan sumber karbohidrat, namun *lukosa darah dapat bertambah setelah kita makanmakanan sumber karbohidrat, namun kirakira 2 %am setelah itu, %umlah glukosa darah akan kembali pada keadaan semula. kirakira 2 %am setelah itu, %umlah glukosa darah akan kembali pada keadaan semula. ada penderita diabetes melitus, %umlah glukosa darah lebih besar dari 130 mg per 100 ml ada penderita diabetes melitus, %umlah glukosa darah lebih besar dari 130 mg per 100 ml darah + oed%iadi, 14.

darah + oed%iadi, 14.

*lukosa merupakan sumber tenaga yang terdapat di manamana dalam biologi. *lukosa merupakan sumber tenaga yang terdapat di manamana dalam biologi. (al itu ter%adi karena glukosa dibentuk dari -omaldehida pada keadaan abiotik, sehingga (al itu ter%adi karena glukosa dibentuk dari -omaldehida pada keadaan abiotik, sehingga akan mudah tersedia bagi sistem biokimia primiti-. (al yang lebih penting bagi

akan mudah tersedia bagi sistem biokimia primiti-. (al yang lebih penting bagi organisme tingkat atas adalah

organisme tingkat atas adalah ke)enderungan glukosa dibandingkan dengan gula heksosake)enderungan glukosa dibandingkan dengan gula heksosa lainnya yang tidak mudah bereaksi se)ara nonspesi-ik dengan gugus amino suatu protein. lainnya yang tidak mudah bereaksi se)ara nonspesi-ik dengan gugus amino suatu protein. ;eaksi ini +glikosilasi mereduksi atau bahkan merusak -ungsi berbagai en<im +/ehninger ;eaksi ini +glikosilasi mereduksi atau bahkan merusak -ungsi berbagai en<im +/ehninger 12.

12.

2 2

(3)

LAPORAN PRAKTIKUM BIOKIMIA I

Penentuan Kadar Glukosa Dalam Darah *lukosa dapat mereduksi ion kupri men%adi kupro sehingga reaksi ini dapat digunakan sebagai dasar di dalam penentuan glukosa dan dilakukan dengan berbagai metode antara lain= /u-- S)hrool, Munson>alker, /ane?ynon, dan Somogy!elson.

Metode Somogy!elson didasarkan pada hasil reduksi ion kupri oleh glukosa +gula reduksi dalam suasana basa dengan arsenomolibdat yang memberikan $arna biru +molybdenium blue. @ntensitas $arna yang terbentuk bergantung pada konsentrasi glukosa. bsorbansi diukur pada pan%ang gelombang ter tentu dengan spektro-otometer. engan menggunakan larutan standar maka konsentrasi glukosa dapat diketahui.

Spektro-otometri merupakan metode analisis yang didasarkan pada absorpsi radiasi elektromagnet. 'ahaya terdiri dari radiasi gelombang dengan pan%ang berlainan akan menimbulkan )ahaya yang berlainan sedangkan )ampuran )ahaya dengan pan%ang pan%ang ini akan menyusun )ahaya putih. 'ahaya putih meliputi seluruh spektrum

nampak yaitu terdapat pada 40060 mm. Spektro-otometer ini hanya ter%adi bila adanya perpindahan elektron dari tingkat energi yang rendah ke tingkat energi yang lebih tinggi.

erpindahan elektron tidak diikuti oleh perubahan arah spin, hal ini dikenal dengan sebutan tereksitasi singlet. rinsip ker%a spektro-otometri berdasarkan (ukum /ambert &eer, bila )ahaya monokromatik melalui suatu media, maka sebagian )ahaya disebut diserap, sebagian dipantulkan, dan sebagian diteruskan +Sabrina 2012.

*lukosa darah akan mereduksi ion 'u2A_{dalam suasana basa, yang hasil}

reduksinya akan bereaksi dengan arseno molibdat menghasilkan $arna biru. /arutan ini diukur absorbansi absorbansinya pada pan%ang gelombang maksimum yaitu 660 nm. engan menggunakan /ambert&eer menyatakan=

A = k × c× l

imana =

 = absorbansi +serapan )ahaya k = koe-isien ekstinksi molar larutan l = tebal ku8et

) = konsentrasi sampel

&erdasarkan hukum /ambert&eer, serapan )ahaya berbanding lurus dengan konsentrasi. onsentrasi glukosa darah merupakan -aktor yang sangat penting untuk kelan)aran ker%a tubuh. adar normal glukosa dalam darah adalah 00 mg100 m/.

(4)

Penentuan Kadar Glukosa Dalam Darah eadaan dimana kadar glukosa berada diba$ah 00 mg 100 m/ disebut hipoglisemia, sedangkan diatas 0 mg 100 m/ disebut hiperglisemia.

Metode pemeriksaan darah meliputi metode induksi en<imatik dan lainnya. Metode yang paling sering digunakan adalah metode en<imatik, yaitu metode *lukosa Oksidase +*O dan metode heksokinase. Metode *O banyak digunakan pada saat ini. kurasi dan presisi yang baik + karena en<im *O spesi-ik untuk reaksi pertama. Betapi reaksi kedua ra$an inter-en + tak spesi-ik. @nter-en yang bisa menggangu antara lain bilirubin, asam urat dan asam askorbat. (arga normal dalam menentukan kadar glukosa

darah adalah = 1. adar gula darah se$aktu = 60 : 120 mgdlC 2. adar gula darah puasa = 50 : 100 mgdl + (endromartono, 1.

9aktor-aktor yang mempengaruhi kadar glukosa darah =

1 iet

adar glukosa darah dipengaruhi oleh beberapa -aktor seperti usia, penyakit lain, makanan, latihan -isik, obat hipoglikemia oral, insulin, emosi dan stress. Makanan atau diet merupakan -a)tor utama yang berhubungan dengan peningkatan kadar glukosa darah pada pasien diabetes terutama setelah makan +(olt, 2010. ;espon peningkatan kadar glukosa darah setelah makan berhubungan dengan si-at

monosakarida yang diserap, %umlah karbohidrat yang dikonsumsi, tingkat penyerapan dan -ermentasi kolon.

2 kti8itas 9isik

kti8itas -isik yang kurang %uga dapat menyebabkan peningkatan kadar glukosa darah. kti8itas -isik merupakan gerakan yang dihasilkan oleh kontraksi otot rangka yang memerlukan energi melebihi pengeluaran energi selama istirahat. /atihan merupakan bagian dari akti8itas -isik yang teren)ana dan terstruktur dengan gerakan se)ara berulang untuk meningkatkan atau mempertahankan kebugaran -isik.

(5)

Penentuan Kadar Glukosa Dalam Darah

3 enggunaan Obat

adar glukosa darah %uga dapat dipengaruhi oleh penggunaan obat hipoglikemia oral maupun dengan insulin. Mekanisme ker%a obat dalam menurunkan kadar glukosa darah antara lain dengan merangsang kelen%ar pankreas untuk

meningkatkan produksi insulin, menurunkan produksi glukosa dalam hepar,

menghambat pen)ernaan karbohidrat sehingga dapat mengurangi absorpsi glukosa dan merangsang re)eptor. @nsulin yang diberikan lebih dini dan lebih

agresi-menun%ukkan hasil klinis yang lebih baik terutama berkaitan dengan masalah

glukotoksisitas yang ditun%ukan dengan adanya perbaikan -ungsi sel beta pankreas. 4 Stress

Stress dapat meningkatkan kandungan glukosa darah karena stress menstimulus organ endokrin untuk mengeluarkan ephine-rin, ephine-rin mempunyai e-ek yang sangat kuat dalam menyebabkan timbulnya proses glikoneogenesis di dalam hati sehingga akan melepaskan se%umlah besar glukosa ke dalam darah dalam beberapa menit +*uyton and (all, 200. (al ini yang menyebabkan peningkatan kadar glukosa darah pada saat stress atau tegang. enyakit ini hanya dapat dikendalikan sa%a tanpa bisa diobati dan komplikasi yang ditimbulkan %uga sangat besar seperti penyakit %antung, stroke, dis-ungsi ereksi, gagal gin%al dan kerusakan sistem syara-.

iabetes ter%adi %ika tubuh tidak menghasilkan insulin yang )ukup untuk mempertahankan kadar gula darah yang normal atau %ika sel tidak memberikan respon yang tepat terhadap insulin. iabetes tipe 1 adalah diabetes yang bergantung pada insulin dimana tubuh kekurangan hormon insulin, dikenal dengan istilah @nsulin ependent iabetes Mellitus +@M. (al ini disebabkan hilangnya sel beta penghasil insulin pada pulaupulau langerhans pankreas. iabetes tipe 1 banyak ditemukan pada balita, anak

anak, dan rema%a +Munadi dan rdinata 200. Sedangkan diabetes tipe 2 ter%adi %ika hormon insulin dalam tubuh tidak dapat ber-ungsi dengan semestinya, dikenal dengan istilah !on@nsulin ependent iabetes Mellitus +!@M. (al ini dikarenakan berbagai kemungkinan seperti ke)a)atan dalam produksi insulin, resistensi terhadap insulin atau berkurangnya respon sell dan %aringan tubuh terhadap insulin yang ditandai dengan

meningkatnya kadar insulin di dalam darah +dnan et al . 2013.. edua %enis diabetes ini mengakibatkan terlalu banyaknya glukosa yang terdapat dalam tubuh.

(6)

Penentuan Kadar Glukosa Dalam Darah roses sintesis glikogen dari glukosa disebut glikogenesis, Se)ara garis besar proses pembentukan glikogen sebagai berikut. Bahap pertama adalah pembentukan

glukosa6-os-at dari glukosa, dengan bantuan en<im glukokinase dan mendapat tambahan energi dari B dan -os-at. *lukosa6-os-at dengan en<im glukomutase men%adi glukosa 1-os-at. *lukosa1-os-at bereaksi dengan DB +Dridin Bri hospat dikatalisis oleh uridil trans-erase menghasilkan uridin di-os-at glukosa +Dglukosa dan piro-os-at +i. Bahap terakhir ter%adi kondensasi antara Dglukosa dengan glukosa nomor satu dalam rantai glikogen primer menghasilkan rantai glikogen baru dengan tambahan satu unit glukosa +(a$ab 2005.

&. AlAT DAN BA"AN Alat :

Spektronik 20 1 set

Sentri-uge 2 buah

Babung reaksi  buah

;ak tabung 1 buah

enangas air 1 buah

*elas ukur 10 m/ 1 buah

ipet 8olume 1 buah

*elas kimia 1 buah

/abu ukur 10 m/ 1 buah

ipet tetes 5 buah

Ba!an :

Sampel darah

(7)

1 ml darah

Dimasukkan ke dalam tabung sentrifuge yang telah berisi 3 ml aquades

Dicampur dengan baik menggunakan pengaduk

Ditambah 1 ml Ba(O!2 "#3 $

Ditambah 2 ml %n&O4'2O

Ditambah 2 ml ($4!2&O4

Didiamkan selama 15 menit

Disentrifuge selama 15 menit 35"" rpm

Didekantasi dan disaring

)esidu

*iltrat

Diambil 1 ml

Ditambah 15 tetes reagen Biuret

+arna larutan

LAPORAN PRAKTIKUM BIOKIMIA I Penentuan Kadar Glukosa Dalam Darah /arutan &a+O(2 0,3 !

/arutan 'ualkalis

/arutan EnSO4.(2O 5F

/arutan standar glukosa

ereaksi arseno molibdat

/arutan +!(42SO4

&I. ALUR KERJA:

'. De(rotenas$ )$ltrat Dara!

(8)

1 ml ,ltrat darah bebas pr-tein

Dimasukkan dalam tabung reaksi

Ditambah 2 ml pereaksi .u alkalis

Dimasukkan ke dalam air mendidih selama 1" menit kemudian dimasukkan ke dalam air dingin s

Ditambah 5 tetes pereaksi arsen-m-libdat

Diaduk hingga merata

Dibaaca abs-rbansinya pada / 0 66" nm

bs-rbansi sampel

1 ml larutan gluk-sa k-nsentrasi "#3 mgml

1 ml larutan gluk-sa k-nsentrasi "#5 mgml

1 ml larutan gluk-sa k-nsentrasi "# mgml

1 ml larutan gluk-sa k-nsentrasi "# m

Dimasukkan dalam tabung reaksi

Ditambah "#5 pereaksi .u alkalis

Dimasukkan dalam air mendidih selama 5 menit kemudian dimasukkan dalam air ,ngin

Ditambah 2 tetes pereaksi arsen-m-libdat

Diaduk hingga merata

Dibaca abs-rbansinya pada / 0 66" nm

bs-rbansi

2 ml aquades

Dimasukkan dalam tabung reaksi

Ditambah 1 ml pereaksi .u alkalis

Dimasukkan ke dalam air mendidih selama 1" menit kemudian dimasukkan ke dalam air dingin s

Ditambah 2 tetes pereaksi arsen-m-libdat

Diaduk hingga merata

Dibaaca abs-rbansinya pada / 0 66" nm

bs-rbansi

blank-LAPORAN PRAKTIKUM BIOKIMIA I Penentuan Kadar Glukosa Dalam Darah

*. Penentuan Kadar Glukosa dala Dara!

+. Penentuan Kadar %tandar

,. Penentuan A-sor-ans$ Larutan Blanko

(9)

(10)

Dimasukkan ke dalam tabung sentrifuge yang telah berisi 3 ml aquades Dicampur dengan baik menggunakan pengaduk

Ditambah 1 ml Ba(O!2 "#3 $ Ditambah 2 ml %n&O4'2O Ditambah 2 ml ($4!2&O4 Didiamkan selama 15 menit

Disentrifuge selama 15 menit 35"" rpm Didekantasi dan disaring

1 ml darah

)esidu *iltrat

Diambil 1 ml

Ditambah 15 tetes reagen Biuret

+arna larutan

Penentuan Kadar Glukosa Dalam Darah &II. "A%IL PENGAMATAN

No. Per

Prosedur Pero-aan "as$l Pen/aatan Du/aan 0 Reaks$ Kes$(ulan %e-elu %esuda!

1. eprotenasi 9iltrat arah ₋arah= larutan ber$arna merah pekat −&a+O(2= larutan tidak ber$arna −EnSO4.(2O= larutan tidak ber$arna −+!(42SO4= larutan tidak ber$arna −Guades= tidak ber$arna −arah A aGuades= larutan ber$rna merah bata −itambah &a+O(2 A EnSO4.(2O A +!(42SO4= larutan ber$arna merah bata +A

−isentri-uge= terdapat dua lapisan. 9iltrat= )airan tidak ber$arna ;esidu= endapan merah −9iltrat ditambah 15 tetes reagen &iuret= larutan

 adar glukosa normal dalam darah antara 0100 mgm/

engu%ian -iltrat darah dengan reagen &iuret menghasilkan -iltrat darah bebas protein

1"

1 ml ,ltrat darah bebas pr-tein Dimasukkan dalam tabung reaksi

Ditambah 2 ml pereaksi .u alkalis

Dimasukkan ke dalam air mendidih selama 1" menit kemudian dimasukkan ke dalam air dingin selama 1" menit Ditambah 5 tetes pereaksi arsen-m-libdat

Diaduk hingga merata

Dibaaca abs-rbansinya pada / 0 66" nm

bs-rbansi sampel

Penentuan Kadar Glukosa Dalam Darah tidak ber$arna

sedikit keruh. 2. enentuan adar *lukosa dalam arah ₋9iltrat darah bebas

protein= )airan tidak ber$arna −'u alkalis= larutan ber$arna biru −ereaksi arsenomolibdat= larutan ber$arna kuning −9iltrat darah ditambah 'u alkalis= larutan ber$arna biru −ipanaskan= larutan ber$arna biru muda −itambah pereaksi arsenomolibdat= larutan ber$arna biru muda  'u2A_{A HsMo12O4I}3_J 'u2A_{A HsMo12O4I}3  *lukosa akan mereduksi ion 'u2A yang menghasilkan 'u2O dari hasil reduksi yang bereaksi dengan arsenomolibdat dan menghasilkan $arna hi%au  ersamaan reaksi = glukosa A 2'u2A_J asam glukonat A 'u2O A 3(2O −bsorbansi darah bebas protein sebesar 0,546 −adar glukosa darah sebesar 0,6 mgml 11

(11)

1 ml ,ltrat darah bebas pr-tein Dimasukkan dalam tabung reaksi

bs-rbansi sampel

Penentuan Kadar Glukosa Dalam Darah tidak ber$arna

sedikit keruh. 2. enentuan adar *lukosa dalam arah ₋9iltrat darah bebas

protein= )airan tidak ber$arna −'u alkalis= larutan ber$arna biru −ereaksi arsenomolibdat= larutan ber$arna kuning −9iltrat darah ditambah 'u alkalis= larutan ber$arna biru −ipanaskan= larutan ber$arna biru muda −itambah pereaksi arsenomolibdat= larutan ber$arna biru muda  'u2A_{A HsMo} 12O4I3J 'u2A_{A HsMo} 12O4I3  *lukosa akan mereduksi ion 'u2A yang menghasilkan 'u2O dari hasil reduksi yang bereaksi dengan arsenomolibdat dan menghasilkan $arna hi%au  ersamaan reaksi = glukosa A 2'u2A_J asam glukonat A 'u2O A 3(2O −bsorbansi darah bebas protein sebesar 0,546 −adar glukosa darah sebesar 0,6 mgml 11

1 ml larutan gluk-sa dengan k-nsentrasi "#3  "#5  "#5  "# mgml

Dimasukkan dalam tabung reaksi Ditambah "#5 ml pereaksi .u alkalis

Dimasukkan dalam air mendidih selama 5 menit kemudian dimasukkan dalam air dingin selama 5 menit Ditambah 2 tetes pereaksi arsen-m-libdat

Dibaca abs-rbansinya pada /066" nm

bs-rbansi

Penentuan Kadar Glukosa Dalam Darah 3. enentuan adar Standar ₋/arutan glukosa

konsentrasi 0, mgml= larutan tidak ber$arna −/arutan glukosa konsentrasi 0, mgml= larutan tidak ber$arna −/arutan glukosa konsentrasi 0,5 mgml= larutan tidak ber$arna −/arutan glukosa konsentrasi 0,3 mgml= larutan tidak ber$arna −'u alkalis= larutan ber$arna biru −ereaksi arsenomolibdat= larutan ber$arna kuning −/arutan glukosa konsentrasi 0, C 0, C 0,5 C 0,3 mgml ditambah 'u alkalis= larutan ber$arna biru −ipanaskan dalam air mendidih= −/arutan konsentrasi 0, mgml= larutan )oklat kehi%auan +A −/arutan konsentrasi 0, mgml= larutan )oklat kehi%auan + −/arutan konsentrasi 0,5 mgml= larutan A 2'u2A +aG A 5O( +aG J A 'u2O+s A 3(2O+l −Semakin besar konsentrasi maka semakin besar nilai absorbansi gra-iknya −&erdasarkan gra-ik yang terbentuk pada kur8a standar diperoleh persamaan regresi y 7 0,33 K A 0,322 ; 2_{7 0,} 12

(12)

1 ml larutan gluk-sa dengan k-nsentrasi "#3  "#5  "#5  "# mgml

Dimasukkan dalam tabung reaksi Ditambah "#5 ml pereaksi .u alkalis

Dimasukkan dalam air mendidih selama 5 menit kemudian dimasukkan dalam air dingin selama 5 menit Ditambah 2 tetes pereaksi arsen-m-libdat

Dibaca abs-rbansinya pada /066" nm

bs-rbansi

Penentuan Kadar Glukosa Dalam Darah 3. enentuan adar Standar ₋/arutan glukosa

konsentrasi 0, mgml= larutan tidak ber$arna −/arutan glukosa konsentrasi 0, mgml= larutan tidak ber$arna −/arutan glukosa konsentrasi 0,5 mgml= larutan tidak ber$arna −/arutan glukosa konsentrasi 0,3 mgml= larutan tidak ber$arna −'u alkalis= larutan ber$arna biru −ereaksi arsenomolibdat= larutan ber$arna kuning −/arutan glukosa konsentrasi 0, C 0, C 0,5 C 0,3 mgml ditambah 'u alkalis= larutan ber$arna biru −ipanaskan dalam air mendidih= −/arutan konsentrasi 0, mgml= larutan )oklat kehi%auan +A −/arutan konsentrasi 0, mgml= larutan )oklat kehi%auan + −/arutan konsentrasi 0,5 mgml= larutan

A 2'u2A_{+aG A 5O(} +aG J A 'u2O+s A 3(2O+l −Semakin besar konsentrasi maka semakin besar nilai absorbansi gra-iknya −&erdasarkan gra-ik yang terbentuk pada kur8a standar diperoleh persamaan regresi y 7 0,33 K A 0,322 ; 2_{7 0,} 12

Penentuan Kadar Glukosa Dalam Darah )oklat kehi%auan + −/arutan konsentrasi 0,3 mgml= larutan hi%au −idinginkan

dalam air dingin=

−/arutan konsentrasi 0, mgml= larutan )oklat kehi%auan ada endapan −/arutan konsentrasi 0, mgml= larutan )oklat kehi%auan ada endapan −/arutan konsentrasi 0,5 mgml= larutan )oklat kehi%auan ada endapan 13

(13)

Penentuan Kadar Glukosa Dalam Darah )oklat kehi%auan + −/arutan konsentrasi 0,3 mgml= larutan hi%au −idinginkan

dalam air dingin=

−/arutan konsentrasi 0, mgml= larutan )oklat kehi%auan ada endapan −/arutan konsentrasi 0, mgml= larutan )oklat kehi%auan ada endapan −/arutan konsentrasi 0,5 mgml= larutan )oklat kehi%auan ada endapan 13

−/arutan

konsentrasi 0,3 mgml= larutan biru ada endapan

−itambah pereaksi arsenomolibdat= −/arutan konsentrasi 0, mgml= larutan biru kehitaman +AA −/arutan konsentrasi 0, mgml= larutan biru kehitaman +A −/arutan konsentrasi 0,5 mgml= larutan biru kehitaman −/arutan konsentrasi 0,3 mgml= larutan 14

(14)

−/arutan

konsentrasi 0,3 mgml= larutan biru ada endapan

−itambah pereaksi arsenomolibdat= −/arutan konsentrasi 0, mgml= larutan biru kehitaman +AA −/arutan konsentrasi 0, mgml= larutan biru kehitaman +A −/arutan konsentrasi 0,5 mgml= larutan biru kehitaman −/arutan konsentrasi 0,3 mgml= larutan 14 2 ml aquades Dimasukkan dalam tabung reaksi

bs-rbansi

blank-LAPORAN PRAKTIKUM BIOKIMIA I

Penentuan Kadar Glukosa Dalam Darah biru −(arga absorbansi= −0, mgml= 0,6 −0, mgml= 0,53 −0,5 mgml= 0,464 −0,3 mgml= 0,423

4. enentuan bsorbansi /arutan &lanko ₋Guades= )airan tidak ber$arna −'u alkalis= larutan ber$arna biru −rsenomolibdat= larutan ber$arna kuning −Guades A 'u alkalis= larutan ber$arna biru −ipanaskan= larutan ber$arna biru −idinginkan= larutan ber$arna biru −rsenomolibdat= larutan ber$arna biru /arutan blanko digunakan sebagai pembanding /arutan blanko digunakan sebagai pembanding yang merupakan larutan ber$arna biru + dan tidak mengandung glukosa. 15

(15)

2 ml aquades Dimasukkan dalam tabung reaksi

bs-rbansi

blank-LAPORAN PRAKTIKUM BIOKIMIA I

Penentuan Kadar Glukosa Dalam Darah biru −(arga absorbansi= −0, mgml= 0,6 −0, mgml= 0,53 −0,5 mgml= 0,464 −0,3 mgml= 0,423

4. enentuan bsorbansi /arutan &lanko ₋Guades= )airan tidak ber$arna −'u alkalis= larutan ber$arna biru −rsenomolibdat= larutan ber$arna kuning −Guades A 'u alkalis= larutan ber$arna biru −ipanaskan= larutan ber$arna biru −idinginkan= larutan ber$arna biru −rsenomolibdat= larutan ber$arna biru /arutan blanko digunakan sebagai pembanding /arutan blanko digunakan sebagai pembanding yang merupakan larutan ber$arna biru + dan tidak mengandung glukosa. 15

(16)

LAPORAN PRAKTIKUM BIOKIMIA I Penentuan Kadar Glukosa Dalam Darah

16

LAPORAN PRAKTIKUM BIOKIMIA I Penentuan Kadar Glukosa Dalam Darah &III. ANALI%I% PEMBA"A%AN

er)obaan Lenentuan adar *lukosa alam arah ini bertu%uan untuk menentukan kadar glukosa pada sampel darah yang di u%i.. D%i dilakukan dengan menggunakan pereaksi 'ualkalis dan pereaksi arseno molibdat. Sedangakan untuk mengetahui kadar glukosa dalam darah dapat dilakukan dengan menggunkan u%i spektro-otometer DNNis.

De(rote$nas$ 1$ltrat dara!

ertama, melakukan perr)obaan deproteinasi pada sampel darah yang diambil. (al tersebut dilakukan untuk mendapatkan sampel darah yang bebas protein, sehingga ketika diu%i dengan spektro-otometer DNNis hasil yang terba)a hanya kompleks glukosa sa%a. /angkah pertama yaitu mengambil sampel darah sebanyak 1 m/, dan dimasukkan dalam tabung sentri-uge yang berisi 3 m/ aGuades. Guades ber-ungsi untuk mengen)erkan darah dan melarutkan albumin dalam darah. lbumin

merupakan protein yang dapat larut dalam air serta dapat terkoagulasi oleh panas dan

biasanya terdapat dalam serum darah. emudian ditambah dengan 2 m/ EnSO4.(2O

5F dan 2 m/ +!(42SO4 0,5M. Setelah semua larutan ter)ampur rata, didiamkan

selama 15 menit, kemudian disentri-uge selama 15 menit dengan ke)epatan 3500 rpm. 9ungsi penambahan &a +O( yaitu untuk memberikan suasana basa pada larutan

(17)

&III. ANALI%I% PEMBA"A%AN

er)obaan Lenentuan adar *lukosa alam arah ini bertu%uan untuk menentukan kadar glukosa pada sampel darah yang di u%i.. D%i dilakukan dengan menggunakan pereaksi 'ualkalis dan pereaksi arseno molibdat. Sedangakan untuk mengetahui kadar glukosa dalam darah dapat dilakukan dengan menggunkan u%i spektro-otometer DNNis.

De(rote$nas$ 1$ltrat dara!

ertama, melakukan perr)obaan deproteinasi pada sampel darah yang diambil. (al tersebut dilakukan untuk mendapatkan sampel darah yang bebas protein, sehingga ketika diu%i dengan spektro-otometer DNNis hasil yang terba)a hanya kompleks glukosa sa%a. /angkah pertama yaitu mengambil sampel darah sebanyak 1 m/, dan dimasukkan dalam tabung sentri-uge yang berisi 3 m/ aGuades. Guades ber-ungsi untuk mengen)erkan darah dan melarutkan albumin dalam darah. lbumin

merupakan protein yang dapat larut dalam air serta dapat terkoagulasi oleh panas dan biasanya terdapat dalam serum darah. emudian ditambah dengan 2 m/ EnSO4.(2O

5F dan 2 m/ +!(42SO4 0,5M. Setelah semua larutan ter)ampur rata, didiamkan

selama 15 menit, kemudian disentri-uge selama 15 menit dengan ke)epatan 3500 rpm. 9ungsi penambahan &a +O(2 yaitu untuk memberikan suasana basa pada larutan serta mengendapkan albumin yang terlarut dalam air. enambahan EnSO4.(2O ber-ungsi untuk mengendapkan protein dalam darah, sehingga -iltrat darah bebas protein. EnSO4 bertindak sebagai katalisator untuk memper)epat reaksi albumin oleh

&a+O(2. 9ungsi dilakukannya sentri-uge yaitu agar endapan albumin yang terbentuk se)ara sempurna dan larutan tidak ber$arna yang dihasilkan merupakan -iltrat darah yang bebas protein. ?ndapan merah bata yang terbentuk merupakan protein yang terkoagulasi. Dntuk mengu%i -iltrat yang bebas protein, ditambahkan 2 tetes biuret. (asilnya berupa larutan ridak ber$arna dan sedikit keruh, hal ini menun%ukkan bah$a larutan +-iltrat telah bebas dari protein.

Penentuan kadar /lukosa dara!

ertama, ambil 1 m/ darah yang telah bebas dari protein +dari per)obaan

sebelumnya dimasukkan dalam tabung reaksi. emudian ditambahkan dengan 3 m/ pereaksi 'ualkalis dan dipanaskan selama 10 menit, lalu dimasukkan air dingin

selama 10. 9ungsi 'ualkalis yaitu sebagai pereduksi glukosa dalam sampel. /arutan dipanaskan bertu%uan untuk memper)epat la%u reaksi, dan dimasukkan air dingin untuk menghentikan la%u reaksi 'ualkalisSetelah itu ditambah dengan pereaksi arsenomolibdat dan diba)a absorbansinya pada  660 nm. . ereaksi arseno molibdat

(18)

ber-ungsi untuk melarutkan endapan 'u2O. !ilai absorbansi yang diperoleh yaitu

0,546. ari nilai absorbansi, dapat dihitung kadar glukosa dari sampel darah, didapat sebesar 0.6 mgm/ atau 6. mg100 m/.

Pe-uatan kur2a standar dan larutan -lanko

/angkah pertama yaitu larutan standar diambil dari larutan baku yang

mengandung glukosa sebanyak 2 mgm/. emudian larutan dien)erkan dengan )ara pengen)eran bertingkat sehingga diperoleh larutan standar dengan kadar glukosa 0,C

0,C 0,5C 0,3 mgm/. Selan%utnya, masingmasing larutan standar dimasukkan ke tabung reaksi dan ditambahkan dengan 0,5 m/ pereaksi 'ualkalis. Ber%adi perubahan $arna, dari larutan tidak ber$arna men%adi larutan ber$arna biru.

enambahan dengan 'ualkalis mengakibatkan ion 'uA_{akan direduksi oleh glukosa}

men%adi 'u2A_{dan mengendap sebagai 'u}

2O. Setelah itu semua tabung reaksi

dipanaskan selama 10 menit, sampai timbul endapan ber$arna %ingga. *lukosa akan bereaksi dengan 'u2A_{membentuk senya$a kompleks. emudian larutan didinginkan}

dan ditambah dengan pereaksi arseno molibdat sehingga $arna larutan berubah men%adi biru +0,3 mgm/, biru kehitaman +0,5 mgm/, biru kehitaman +A +0, mgm/, biru kehitaman +AA +0, mgm/. andungan glukosa dapat dilihat dari tingkat kepekatan $arna larutan. Semakin pekat $arna larutan maka kandungan glukosa semakin besar. emudian semua larutan diu%i dengan spektro-otometer DN 8is sehingga didapat nilai absorbansi sebesar=

onsentras i bsorbans i 0,3 0,423 0,5 0,464 0, 0,53 0, 0,6 " "'5 1 " "'5 1 f(6! 0 "'336 7 "'32 )8 0 "'

Grafk Absorbansi

Konsentrasi Absorbansi 1

(19)

ari gra-ik di atas, didapat persamaan garis lurus yang dapat digunakan untuk

menentukan kadar glukosa pada sampel darah = y 7 0,33K A 0,322, dengan ; 2_{7 0,3.} engan = y 7 nilai absorbansi

K 7 konsentrasi glukosa

I3. KE%IMPULAN

ari per)obaan ini, dapat disimpulkan bah$a kandungan glukosa yang terdapat pada sampel darah yang diu%i sebesar 6. mg100m/.

3. JA4ABAN PERTAN5AAN

1. Bentukan kadar glukosa darah dalam mg glukosa100m/ darahP Qa$ab =

y 7 0,33K A 0,322

dengan y7nilai absorbansi sampel, diperoleh = y 7 0,33K A 0,322

0,546 7 0,33K A 0,322 K 7 0,546

−

0322

0,33 K 7 0,6 mgm/

%ika dalam 100 m/, kadar glukosa dalam sampel darah sebesar 6. mg100m/.

2. pa -ungsi proses pendidihan pada per)obaan di atasR Qa$ab =

roses pendidihan +dimasukkan air mendidih pada per)obaan ini ber-ungsi untuk memper)epat la%u reaksi 'ualkalis dan ber-ungsi untuk menghidrolisis adanya kandungan gula.

3. Qelaskan peranan hormon insulin dalam proses pengaturan kadar gulaP Qa$ab =

(ormon insulin berperan pada proses perpindahan glukosa dari darah ke dalam sel tubuh. i dalam sel tubuh, glukosa kemudian dimetabolismekan sehingga menghasilkan kalori +energi. Menurunnya e-ekti-itas hormon insulin

mengakibatkan menurun pula kadar glukosa yang masuk ke dalam sel. kibatnya sel tubuh kekurangan glukosa dan berusaha mendapatkan kalori

(20)

LAPORAN PRAKTIKUM BIOKIMIA I Penentuan Kadar Glukosa Dalam Darah dari peme)ahan lemak. eme)ahan lemak akan menghasilkan benda keton yang dapat mengakibatkan ter%adinya ketoasidosis.

3I. DA)TAR PU%TAKA

dnan M, Mulyati B, @s$oro QB. 2013. (ubungan indeks massa tubuh dengan kadar gula darah penderita diabetes mellitus tipe 2 ra$at %alan di rumah sakit tugure%o semarang. Jurnal Gizi Universitas Muhammadiyah Semarang . 2 +1= 11. (a$ab (M. 2005. Pengantar Biokimia. Malang +@= &ayu Media.

/ehninger, . 12. Dasardasar Biokimia. Ber%emahan Maggy Bhena$id%aya. Qakarta = ?rlangga

/estari , ur$anto S, aligis S(M. 2013. *ambaran kadar glukosa darah puasa pada mahasis$a angkatan 2011 -akultas kedokteran uni8ersitas sam ratulangi

dengan indeks massa tubuh 1,5 22, kgm2_._{Jurnal e Biomedik}_{. 1 +2= 14.} oed%iadi, . 14. DasarDasar Biokimia. Qakarta +@= D@ ress.

Sabrina . 2012. erbandingan metode spektro-otometri DNNis dan 'B

+romatogra-i 'air iner%a Binggi pada analisis kadar asam ben<oat dan ka-ein dalam teh kemasan.HSkripsiI. Malang +@= Dni8ersitas !egeri Malang.

Suarsana @!. 2010. Sintesis glikogen hati dan otot pada tikus diabetes yang diberi ekstrak tempe. Jurnal !eteriner . 11+3=1015.

Bim osen &iokimia. 2016. Petun"uk Praktikum Biokimia #$ Surabaya = Qurusan imia 9M@D!?S

(21)

LAMPIRAN A. PER"ITUNGAN

y 7 0,33K A 0,322

dengan y7nilai absorbansi sampel, diperoleh = y 7 0,33K A 0,322

0,546 7 0,33K A 0,322 K 7 0,546

−

0322

0,33

K 7 0,6 mgm/

%ika dalam 100 m/, kadar glukosa dalam sampel darah sebesar 6. mg100m/. B. DOKUMENTA%I

!o .

okumentasi eterangan

eprotenasi 9iltrat arah

(22)

1. Sampeldarah ber$arna

merah pekat.

2. Sampeldarah setelah

ditambah &a+O(2, EnSO4. (2O dan +!(42SO4 ber$arna merah bata +A.

3. Setelah disentri-uge selama

15 menit dengan ke)epatan 3500 rpm terbentuk 2

lapisan, yaitu =

 9iltrat = larutan tidak ber$arna

 ;esidu = endapan merah +beku

(23)

4. 9iltratdiambil 1 m/

ditambah dengan 15 tetes reagen biuret larutan tidak ber$arna sedikit keruh yang

menun%ukkan bah$a -iltrate darah bebas protein.

enentuan adar *lukosa alam arah

1. 1 m/ -iltrat larutan tidak ber$arna bebas protein

dimasukkan dalam tabung reaksi.

2. itambah dengan 2m/'u alkalis larutan berubah $arna men%adi biru.

(24)

3. /arutan dipanaskan dalam

air mendidih selama 10 menit larutan ber$arna biru muda.

4. Setelah dipanaskan dalam air mendidih kemudian

didinginkan dengan air

dingin selama 10 menit tidak ter%adi perubahan.

5. itambah dengan 3tetes

arseno molibdat larutan ber$arna biru muda dan di

absorbansi pada 7660 nm, hasil absorbansi 0.546

(25)

Penentuan Kadar Glukosa Dalam Darah enentuan adar Standar

1. 1 m/larutan glukosa

konsentrasi 0,3C0,5C0,C0, mgm/ dimasukkan dalam tabung reaksi.

2. /arutan standar ditambah

dengan 'u alkalislarutan berubah $arna men%adi ber$arna biru muda.

3. Setelah dipanaskan 5 menit

ter%adi perubahan $arna =  0, mgm/ = larutan )oklat kehi%auan +A  0, mgm/ = larutan )oklat kehi%auan +  0,5 mgm/ = larutan )oklat kehi%auan +  0,3 mgm/ = larutan ber$arna hi%au 25

(26)

4. Setelah didinginkan 5 menit

ter%adi perubahan $arna =  0, mgm/ = larutan )oklat

kehi%auan, ada endapan.  0, mgm/ = larutan )oklat

kehi%auan+, ada endapan  0,5 mgm/ = larutan )oklat

kehi%auan +, ada endapan.

0,3 mgm/ = larutan

ber$arna biru, ada endapan.

5. itambah dengan 3tetes

arseno molibdat, ter%adi perubahan $arna =  0, mgm/ = larutan biru kehitaman +AA  0, mgm/ = larutan biru kehitaman +A  0,5 mgm/ = larutan biru kehitaman 0,3 mgm/ = larutan ber$arna biru,.

6. iba)a absorbansinya pada

7660 nm, harga absorbansi =

−

0, mgml= 0,6

−

0, mgml= 0,53

−

0,5 mgml= 0,464

−

0,3 mgml= 0,423 26

(27)

enentuan bsorbansi /arutan &lanko

1. 2 m/ aGuades dimasukkan

dalam tabung reaksi.

2. itambah dengan 'u alkalis

larutan berubah $arna men%adi biru muda.

3. Setelahdipanaskan dan

didinginkan tidak ter%adi perubahan $arna, larutan

tetap ber$arna biru.

4. Setelah ditambah arseno

molibdat larutan ber$arna biru muda.