STUDI TENTANG ORGANISME PENYEBAB BERCAK MERAH PADA BAK PEMELIHARAAN LARVA UDANG WINDU (Penaeus monodon)

STUDI TENTANG ORGANISME

PENYEBAB BERCAK

MERAH

PADA

BAK PEMELIHARAAN

LARVA

UDANG

WINDU

(Penaeus nxonodon)

Des Roza"), Zafrant'), dan

Isti

Koesharvani.)

ABSTRAK

Vibrio harueyi salah satu jenis bakteri yang sering menyebabkan kematian masal larva pada panti benih udang windu. Selain menyebabkan larva udang yang terinfeksi kelihatan menyala dalam keadaan gelap (kunang-kunang) V. harueyijuga dapat menyebabkan bercak merah pada bak pemeliharaan. Dua isolat bakteri telah diisolasi dari bercak merah yang terjacli pada bak pemeliharaan larva udang windu. Karakteristik dari kedua isolat

ini

aclalah bersifat gram-negatif, oksidase dan katalase positif, fermentatif, sensitif terhadap agen vibriostatik (07129), novobiocin, aminobenzil _{penisilin, eritromisin, dan klorarnfenikol. Kedua isolat tumbuh baih pada} media TCBSA dengan membentuk koloni berwarna kuning, dan diidentifikasi sebag ai Vibrio

harueyi. Dari uji tingkat keganasan terbukti bahwa kedua isolat ini bersifat mematikan terhadao larva udang windu (Penaeus monodon).

ABSTRACT:

Study on Organisln Causing

of

Red Spot

in

Larvae Rearing Tank

of

Penaeu,s ntortodott. /ly : Dcs Roza, Zafran, ancl

Isti

Kgcsha"yotri. Mass mortality cases of Penaeu,s nutnod.on larvae in hatcheries is mainly causecl by Vibrio harueyi infection. In dark condition, show luminescent ancl the bacteria also lbr'r.r red spots ir.r

rearing tank. Two isolates of bacteria were isolatecl from the red spot at the bottom of p. ntinoclol larvae rearing tank. The isolates are gram-negative _{rocl-shaped, gave positive oxiclase and catalase} reaction, utilized glucose fermentatively in Hugh-Leifson's semi solid mecliurn. The isolates were sensitive to vibriostatic agent (0/129), novobiocin, aminobenzyl penicillin, erithromycin ancl chloramphenicol. Growth occurred on TCBSA with yellow colony. These isolates were classifiecl as Vibrio harueyi ancl by infectivity trials the isolates were prorrecl to cause mortalities of p. ntonodon larvae.

KEYWORDS: Penaeu.s ntonodon, red, spot, Vibrio harueyi.

PENDAHULUAN

Penyakit bahteri, terutama yang disebabkan oleh kelompok Vibrio merupakan kendala yang sering dihadapi pada panti _{benih udang windu.} Salah satu yang sudah dikenal secara umum

ada-lah penyakit kunang-kunang atau "luminescent uibriosis" (Baticados et

al.,lggo;

Lavilla-Pitogo et

al.,

1992;

Lightner

et

al.,

19g2; Rukyani et al., 1992;Zafran, i992 dan Zafran et al., lgg4).

Belakangan

ini

di panti benih udang banyak

ditemui kematian larva dengan gejala yang

ber-beda

dari

kasus penyakit

kunang-kunang. Penyakit tersebut ditandai dengan terbentuknya

bercak

merah pada dasar

bak

pemeliharaan

larva. Bila

bcr<:al< nrcrirh srrdal.r tin.rbr.rl nral<n biasanya

diikuti

oleh

l<ematian mussal larva dalam waktu singkat, umumnya kurang dari 4g

jam.

Karena

beluil

adauya

informasi

r,enr,ang penyebab _{maupun penanggulangannya, biasanya} pengelola hatcheri _{Iangsung membuang semua}

larva pada bak saat bercak merah cliketahui. Berdasarkan permasalahan

di

atas maka di

Lolitkanta

Gondol

telah dilakukan

penelitian

untuk mengetahui organisme penyebab penyakit

bercak merah

serta tingkat

patogenisitasnya terhadap larva udang windu. Selain

itu,

dilaku-kan juga uji sensitivitas beberapa jenis antibiotik

terhadap

organisme penyebab

bercak

merah tersebut.

Roza, D.; Zafran and Koesharyani, I.

BAHAN DAN METODE

Dari bercak merah yang terdapat pada dasar

bak pemeliharaan

larva

udang windu telah di-ambil sampel untuk diamati di bawah mikroskop sebagai diagnosis awal. Dari bercak merah juga

dilakukan

kultur

bakteri

menggunakan media

MA

(Marine

Agar) dan

TCBSA

(Thiosulfate Citrate Bile Salt Sucrose Agar) dan isolasi jamur

menggunakan

media

PYGSA (Pepton 7,25 g; Yeast extract I,25 g; Glucose 3,0 g; dan Agar 1b g

dalam

1

I air

laut).

Media

MA dan

PYGSA

disterilkan dengan autoclave pada

suhu

lZl"C

selama 15 menit, sedangkan TCBSA dipanaskan

dalam glas beker yang

berisi

air

sampai

larut

sempurna.

Kultur

selanjutnya

diinkubasikan pada suhu 25oC selama 48

jam.

_Setelah masa inkubasi 48 jam bakteri akan tumbuh baik pada

media

MA

maupun

TCBSA, sedangkan pada media PYGSA akan kelihatan hifa jamur. _Isolat

murni bakteri

diperoleh

melalui

pemindahan koloniyang tumbuh baik pada MA dan TCRSA ke media MA baru. 'lcrhadap isolat

murni

bal<Lcri yang diperoleh

dilakukan

uji

guna mengetahui

isolat

yang

menyebabkan

bercak merah. Uji

dilakukan dengan

menginfeksikan

suspensi masing-masing isolat ke dalam botol kaca yang

berisi dua

liter air laut

steril

dan sedikit pakan

buatan

(Frippak) sebanyak 0,0b gram sebagai

media tumbuh bakteri. Efek

bercak

merah

diamati setelah 24 dan 48 jam perlakuan, yakni

dengan mengamati ada

atau tidaknya

bercak merah pada dasar botol. Selama penelitian suhu diusahakan stabil +30'C dengan menggunakan

pemanas

atau

"heater".

Isolat yang

diketahui sebagai penyebab bercak merah selanjutnya diuji

tingkat

patogenisitasnya terhadap larva uclang windu. Ke dalam botol kaca yang berisi dua

liter

air laut steril dimasukkan hewan uji yakni rrdang

windu

stadia pascalarva-2 dengan densitas b0 ekor/I. Kepadatan bakteri yang diujikan berkisar

dari 1,25 x 10 hingga 1,25 x 107 cfu,/ml, penelitian

ini

menggunakan

rancangan

acak

lengkap

dengan

tiga

ulangan.

Pengamatan clilakukan terhadap mortalitas larva setelah 24, 48 clan 72

jam

perlakuan,

kemudian

terhadap

larva

uji

dilakukan isolasi

bakteri. Isolat yang

suclah

terbukti

sebagai penyebab bercak merah pacla dasar _{bak pemeliharaan larva selanjutnya}

cliiden-tifikasi

berpedoman pada Baumann et at.

(lgg4)

dan Holt et

o1.099$.

HASIL DAN PEMBAHASAN

Dari

isolasi

menggunakan

media

tumbuh

untuk

bakteri (MA dan

TCBSA)

dan

jamur

(PYGSA) _{ternyata hanya}

bakteri

yang tumbuh

setelah

48 jam

inkubasi pada

suhu

25"C. Selanjutnya terhadap koloni bakteri yang tumbuh

baik

pada

MA

maupun TCBSA

dilakukan

pemurnian

menggunakan

media

MA,

dan diperoleh empat isolat murni. Pada media TCBSA

bakteri yang tumbuh

semuanya membentuk

holoni berwarna

kuning dan

tidak

bercahaya.

Untuk

mengetahui penyebab timbulnya bercak

merah, maka

heempat

isolat

tersebut

secara lerpisah diinfeksikan ke dalam botol kaca yang diisi air laut steril serta pakan buatan (Frippak). Setelah ,18 jam perlakuan ternyata hanya _{2 isolat}

yang menimbulkan efek bercak merah.

Karak-teristik _{dari kedua isolat penyebab bercak merah}

disajikan

pada Table 1. Kedua

isolat

ternyata

memiliki karakteristik

yang sama dan

bila

di. bandingl<an dengan Vibrio _{sp. .yang} dikcnrul<al<an olch llauma nn aL ol. ( lgU,l) clan Holt, cl o1. ( l9t)4)

kedua

isolat

tersebut

diidentifikasi

sebagai I/. lrarueyi. Karakteristik _{khas yang membeclakan}

Z

harueyi

dari

Vibrio lainnya adalah

mampu tumbuh pada suhu 35"C dan mampu

memanfaat-kan

D-manosa, selobiosa

tetapi

negatif

untuk arginin dehidrolase dan sorbitol.

Saat

ini

belum ada

data

mengenai bercak

merah pada

lingkungan pemeliharaan

larva

udang

windu.

Bercak

merah pada

clasar bak

dilaporkan

terjadi

pada

bak

bandens (Clranos chanos) dan penyebabnya

diidentifikasi

sebagai V. angu,illarrrnr (Huang,

lg77).

V. angu.illarunt

memang

sudah banyak dilaporhan

_sebagui

patogen

pada

ikan

laut

(Tajima

et

al.,

lggl)

maupun pada _{budidaya ikan air tawar (Muroga el} al., 1976;1986).

Antara kedua isolat yang diisolasi dari TCBSA dan MA tersebut ternyata setelah dilakukan

uji

karakter

memperlihatkan kesamaan karakter dan diidentifikasi sebagai Vibrio harue1,i, maka

untuk uji selanjutnya digunakan satu isolat saja. Patogenisitas

bakteri

terhadap

larva

udang

windu juga

diuji

yakni

dengan menginfeksikan isolat bakteri dengan berbagai tingkat kepadatan ke dalam air pemeliharaan larva (Table A.

Table

1-

Chsracteristics of two isolqtes as agent of red spot disease in Penaeus ntonod,on hateheries in

comparisons with Bauntann et al. (1984) _and Holt et al. (1gg4).

Characteristics

Isolate

I

Isolate

2

V.

harueyi

(Bauman

et al., V.

harueyi

(Holt

et al., Growth on TCBSA Crant stain Oxydase Cotalase O-F test

Motility

Indole production Methyl red Voges-Proshauer KCN, growth HlS

Gas _from glucose

Arginin

dehydrolase

O r

nithin

decarb oxy lase Lysin decarboxylase Growth in

NaCl:

0% 3% 6% 8% 10% Sensitiuity to: Vibriostatic agent Nouobiocin

A nrinob enzy I pe

nicillin

Erith,romycin Chloramphenicol Oxytetracycline Acid from : Cellobiose Glu,cose Mannose Sorbitol Sucrose Trehalose Rhqmnose Sorbose Inositol Arabinose Glu.tamin Melibiose Mqnnitol Arbu.tin Y -t T

F

T T T + + Y + +

F

T + f + + r

s

s

S

s

s

R 1 T + T + +

s

s

s

s

s

R + + + + +

s

s

s

s

s

R

s

s

s

s

s

R ? T + T +

G/Y

+ T

F

+ + + T

G/Y

-L +

F

+ 1-+ + J. + + + + + +

Roza, D.; Zafran and Koesharyani, I.

Charq,cteristics

Isolate

I

Isolate

2

V,

harueyi

(Baum.an et al., I 9841 V.

harueyi

(Holt

et aL, |

99/l

Growth at temperature ('C): 4 30 35 40 Nitrate reduction

Na" requiredfor growth Organic growthfactor

requiremenl

Ace t o i n and/or diacety I production Amylase Gelcttinase Lipase Algina.se Chitinu.re Acetat Citrate Ethanol + + 't-+ + + +

Table

2.

Pathogenicity of bacteria isolate on Penaeus monodon laruae and deuelopntent

of

recl spot itt. the bottorn tanh.

+ + T + + T + T + + d + + T No, of

bacteria

(cfu/ml)

Averages

mortality

(%) 48

Hours

Red spot d,evelopment 24

llours

72

Hours

1.25 x 107 1.25

x

106 1.25 x

t0

1.25 x 104 1.25 x 101 1.25 x

Id

1.25 x 10 Control 79.9

t

2.193 64.5 x 0.800 3.3

t

0.4 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 100.0 100.0 88.0

t

1.053 44.5 x 0.953 13.3

t

0.458 4.6

!

0.264 4.6

t

1.044 4.6

t

0.754 100.00 100.00 90.6

t

0.608 44.7

t

0.3,16 17.3

t

0.818 16.6 x 0.100 16.0

t

0.100 6.0

t

0.173 T +

Remarh: + = red spot obserued; _{- = no} red spot obserued

Dalam waktu 24 jam hanya kepadatan bakteri 106

dan

10

cfu/ml yang

sudah menyebabkan kematian larva lebih besar dari 60%. Setelah 48

jam

perlakuan

terlihat

adanya

peningkatan jumlah kematian larva pada perlakuan 1Os cfu/ml

ke atas. Diduga setelah 72 jam, populasi bakteri baik pada _{air pemeliharaan maupun dalam tubuh} larva, sudah mencapai ambang

kritis

bagi larva

itu

sendiri sehingga

larva

sebagian mengalami kematian.

Dibandingkan V. harueyi yang diisolasi dari

larva

udang

windu yang terinfeksi

penyakit kunang-kunang, maka isolat yang diisolasi dalam

penelitian

ini

kurang patogen. V. harueyi sudah dapat menyebabkan kematian masal zoea udang

windu

dalam

waktu

24

jam

_{dengan tingkat}

kepadatan bakteri 8,35

x

10'' cfu/ml (Zafran dan Roza, 1993). Hal lain yang membedakan isolat

ini

dengan

bakteri

penyebab

penyakit

kunang-kunang adalah warna koloninya pada

media

TCBSA

dan

kemampuannya

menghasilkan cahaya. V. harueyi penyebab

penyakit

kunang kunang tumbuh pada media TCBSA membentuk

koloni

berwarna

hijau dan

bercahaya dalam kondisi gelap, sedang bakteri yang diisolasi dari bercak merah membentuk

koloni

kuning

dan

tidak bercahaya pada media yang sama.

Dalam upaya pencegahan dan penanggulang-an penyakit bercak merah, maka telah dilakukan uji sensitivitas beberapa jenis antibiotik terhadap isolat bakteri penyebab bercak merah. Dalam

uji

ini

diketahui

bahwa

isolat

tersebut

sensibif

terhadap agen

vibriostatik

(0/129), novobiocin, aminobenzil penisilin, eritromisin, dan kloram-fenicol.

KESIMPULAN

DAN SARAN

Telah diisolasi dua

isolat bakteri

penyebab penyakit bercak merah pada panti

benih

udang

windu

dan keduanya

diidentifikasi

sebagai V. harueyi. Sedangkan jumlah kritis bakteri tersebut bagi larva udang windu adalah 106 cfr.r/ml clalam

air

pemeliharaan.

Bakteri

penyebab penyakit

bercak merah sensitif tcrhadap age n vibrioslatil< (01 I29), novobiocin, _{a m inobenzil penis i lin,}

eritro-misin, dan kloramfenicol.

Perlu dicari dosis yang efektif masing-masing antibiotik tersebut untuk menekan

perkembang-an

populasi

bakteri

penyebab

bercak

merah melalui uji MIC (Minintunt Inhibitory Concentrat-ion).

DAFTAR PUSTAKA

Baticados, _{M.C.L., F.R. Cruz-Lacierda, M.C. de la} Cruz, R.C. Duremdez-Fernandez, _R.R. Gacutan, C.R.Lavilla-Pitogo, and G.D.Lio-Po. 1g90. Diseases

of penaeid shrimps in the Philippines. SEAFDEC. Aquaculture Extension Manual (16):46 p.

Baumann,

P.,

A.L.

Furnis, and

J.V.

Lee. 1984. Facultatively an aerobic gram-negative rods. Noel R. Krieg (Eds.), Bergey's Manual of Systematic Bacteriology.

Vol. l.

Williams

&

Wilkins, Baltimore-USA:5 1 8-538.

I-Iolt, J.G, Noel It. Krieg, Peter H. A. Sneath, James T.

Staley and Stanley T. Williams. 1994. Facultatively

an

aerobic gram-negative rods. pp.2Sg-274. Bergey's Manual of Determinative Bacteriology.

Ninth

Edition. Williams

&

Wilkins. Baltimore, USA.

I{uang, Y.H. L977. Preliminary report of the studies on bacterial diseases

of

milkfish,

Chanos chanos during winter. JCRR Fish. Series, No.2g:S0.54. Lavilla-Pitogo, C.R., L.C. Albrighr, M.C. paner and

N.A.

Sunaz. 1992. Studies

on the

sources of lutnir-rescent Vibri<t horut')'i irt Pcnaeus ntonodon hatcheries. M. Sharitl R.P. Subasinghe, and J.R.

Arthur (Eds.), Diseases

in

Asian Aquaculture L

Fish

Health Section, Asian Fisheries Societv. Manila, Philippines: 1 57 - LO4.

Lightner, D.V., T.A. Bell, R.M. Redman, L.L. Mohnev.

J.M. Nativitlatl,

A.

ltrrl<.yar.ri, an<l

A.

Irocrnoruo. L992.

In

M.

Shariff, R.P. Subasinghe, ancl J.R.

Arthur (Eds.), _A review of some major diseases of economic significance in penaeid prawns/shrimps of the Americas and Indopacific. Diseases in Asian Aquaculture L Fish Health Section, Asian Fisheries Society, Manila, Philippines:b2.80.

Lio-Po, G. 1983. In J .Y . Juario, R.P. Ferraris and L.V. Benitez (Eds.), Diseases of milkfish : Advances in milkfish biology ancl cultures. proceeding _{of the} Second

International

Milkfish

Aquaculture Conference. Iloilo, Philippines, 4-8 October 1gg3:

I 45.153.

Muroga, K., Jo Y., and M. Nishibuchi. 1976. Vibrkt angu,illaru,nt _{isolated from europe an eel (An,guilla} ott.gttilkt) r:rrlturc<l in .llpun. .J. of t,lrr. I,.ircrrll..,t, ol'

Irish. and

Animal

.Flusbandly, lliroshima

Univelsity, l5:24-34.

Muroga, K., M. Iida, H. Matsumoto, and T. Nakai. 1986. Detection of Vibrio anguillaru,nt from waters. Bull. Soc. Sci. Fish., 52(4):64I-647.

Rukyani, A., P. Taufik. dan Taukhid. 1992. penyakit kunang-kunang (luminescent _{vibriosis) dan cara} penanggulangannya

di

_{hatchery udang windu.} Prosiding _{Seminar Sehari Upaya penanggulangan}

Penyakit

Benur

Pacla Hatchery

_Udang,

Sr.rrabaya:4 7-60.

Tajima, K., M. Yoshirnizu, Y. Ezura and T. Kimura. 1981. Studies

on the

causative organism of Vibriosis among the pen-culturecl coho salmon. Oncorhynchu.s hisutch,

in

_{Japan. Bull. Jap. Soc.} Sci. Fish. 47:35-42.

Roza, D.; Zafran and Koesharyani, I.

Zafran. 1992. Pencegahan penyakit kunang-kunang pada

larva

udang

windu

(Penaeu,s _monodon). Prosiding Seminar Sehari Upaya Penanggulangan

Penyakit

Benur Parla

l{atchery

Udang, Surabaya:59-61.

Zafran, D. Roza, K. Sugama, S. Wada, and K. Hatai. 1994. Histological study

of

luminescens Vibrio

harueyi infection

in

hatchery reared larvae of Penaeus monodon. Proceeding

Thircl

Asian Fisheries Forum, Singapore: 2g4-297.

Zatran dan

Il.

lloza. lg9J. Teknik penanggulangan

penyakit _{udang menyala}

di

_{hatchery melalui}

pengendalian _{populasi bakteri. J. penel. Budidaya} Pantai, 9(2):t27-182.