KROMATOGRAFI GEL KROMATOGRAFI GEL
A.
A. PEPENDNDAHAHULULUAUANN
Kromatografi gel memiliki nama lain yaitu
Kromatografi gel memiliki nama lain yaitu size exclusion chromat size exclusion chromatographyography (SEC) yang disebut juga
(SEC) yang disebut juga gel permeation chromatography gel permeation chromatography (GPC), (GPC), gel filtration gel filtration chromatography
chromatography (GFC), merupakan metode kromatografi yang menggunakan (GFC), merupakan metode kromatografi yang menggunakan partikel berpori untuk memisahkan molekul dengan ukuran yang berbeda !e partikel berpori untuk memisahkan molekul dengan ukuran yang berbeda !eknikknik
kromatografi ini pertama kali ditemukan oleh Grant "endry #athe dan Colin $ kromatografi ini pertama kali ditemukan oleh Grant "endry #athe dan Colin $ $uth%en
$uth%en
Kromatografi gel umumnya diaplikasikan untuk kompleks Kromatografi gel umumnya diaplikasikan untuk kompleks makromolekuler
makromolekuler seperti protein dan seperti protein dan industri polimer industri polimer terutama digunakan untukterutama digunakan untuk memisahkan molekul
memisahkan molekul biologis, untuk menentukan bobot biologis, untuk menentukan bobot molekul dan distrmolekul dan distribusiibusi bobot molekul dari polimer
bobot molekul dari polimer &olekul yang lebih ke'il dari ukuran pori dapat&olekul yang lebih ke'il dari ukuran pori dapat memasuki partikel
memasuki partikel dan mempunyai dan mempunyai jalur dan aktu jalur dan aktu transit yang ltransit yang lebih panjangebih panjang dibandingkan molekul besar
dibandingkan molekul besar yang tidak yang tidak dapat memasuki partidapat memasuki partikel Semua molekulkel Semua molekul yang lebih besar dari ukuran pori
yang lebih besar dari ukuran pori tidak tidak tertahan dan terelusi bersama &tertahan dan terelusi bersama &olekulolekul yang memasuki pori
yang memasuki pori akan mempunyai aktu akan mempunyai aktu tinggal dalam partitinggal dalam partikel yangkel yang tergantung pada ukuran
tergantung pada ukuran dan bentuk molekul &oldan bentuk molekul &olekul ekul yang berbeda mempunyaiyang berbeda mempunyai aktu transit yang berbeda untuk meleati kolom Ketika larutan aueous
aktu transit yang berbeda untuk meleati kolom Ketika larutan aueous digunakan untuk transport sampel melalui kolom, teknik
digunakan untuk transport sampel melalui kolom, teknik tersebut dinamakantersebut dinamakan gel gel filtration chro
filtration chromatographymatography yang digunakan ketika pelarut organik digunakan yang digunakan ketika pelarut organik digunakan sebagai fase gerak
Gambar * Skema kolom kromatografi gel Gambar * Skema kolom kromatografi gel
B.
B. KELKELEBIEBIHAN HAN DAN DAN KEKKEKURAURANGANGANN
*
* KelKelebiebihan khan kromromatoatogragrafi gfi gel adel adalaalah +h + a
a aaktu pektu pemismisahan yahan yang 'eang 'epat dapat dan hasn hasil yail yang baing baik k b
b Frekuensi tajam sehingga menghasilkan sensiti%itas yang baik Frekuensi tajam sehingga menghasilkan sensiti%itas yang baik '
' -ebas -ebas dari kdari kehilaehilangan sangan sampel, mpel, pelarpelarut tiut tidak berdak berinterinteraksi daksi dengan fengan fasease stasioner
stasioner d
d ..aariasriasi larutan dai larutan dapat diaplpat diaplikasiikasikan tanpa menkan tanpa mengganggu progganggu proses filses filtrasitrasi,, sementara mempersiapkan akti%itas biologis partikel untuk memisah sementara mempersiapkan akti%itas biologis partikel untuk memisah /
/ KekuKekuranrangan gan kromkromatoatogragrafi gfi gel ael adaldalah +ah + a
a "anya s"anya sejumlejumlah frah frekuensi ekuensi terbaterbatas datas dapat dipat diakomodakomodasikan asikan karena karena skalaskala aktu kromatogram pendek
aktu kromatogram pendek b
b !idak dapat digunakan untuk sampel dengan ukuran yang seragam, seperti!idak dapat digunakan untuk sampel dengan ukuran yang seragam, seperti isomer 0i
isomer 0iperlukan sedikitnya perbedaan *12 perlukan sedikitnya perbedaan *12 dari berat molekul untukdari berat molekul untuk resolusi yang masuk akal
resolusi yang masuk akal
C
C.. PPRRININSISIPP
Prinsip dari kromatografi gel adalah terjadinya pemisahan Prinsip dari kromatografi gel adalah terjadinya pemisahan molekul polimer sesuai dengan %olume hidrodinamiknya k
molekul polimer sesuai dengan %olume hidrodinamiknya k etika sampeletika sampel diinjeksikan ke dalam
diinjeksikan ke dalam kolom .kolom .ololume hidrodinamik yang ume hidrodinamik yang dihasilkan dari sistemdihasilkan dari sistem kromatografi ini terbagi menjadi tiga ma'am %olume, yaitu+
kromatografi ini terbagi menjadi tiga ma'am %olume, yaitu+ 1.
1. .o.olume interstisial (.lume interstisial (.i) merupakan %olume elusi yang diperoleh jika i) merupakan %olume elusi yang diperoleh jika molekulmolekul polimer memiliki ukuran yang lebih besar daripada ukuran pori3pori
polimer memiliki ukuran yang lebih besar daripada ukuran pori3pori sehinggasehingga tidak mampu masuk ke pori3pori
2.
2. .o.olume interstisial dan %olume pori (.lume interstisial dan %olume pori (.i 4 .p) mi 4 .p) merupakan %olume elusi erupakan %olume elusi yangyang diperoleh jika molekul polimer memiliki ukuran yang lebih
diperoleh jika molekul polimer memiliki ukuran yang lebih ke'ilke'il daripada
daripada ukuran pori3pori sehiukuran pori3pori sehingga mampu meleati ngga mampu meleati dan masuk ke dalamdan masuk ke dalam pori3pori
pori3pori 3.
3. .o.olume elusi (.elume elusi (.e) merupakan ) merupakan %olume pori u%olume pori untuk molekul ntuk molekul polimerpolimer yang
yang memiliki ukuran memiliki ukuran diantara kedua mdiantara kedua molekul polimer olekul polimer sebelumnyasebelumnya 5ntuk %olume
5ntuk %olume ini, dapat dirini, dapat dirumuskan dengan persamaan+ umuskan dengan persamaan+ .e .e 6 .6 .i 4 i 4 Kse'.pKse'.p.. 0imana Kse' adalah nilai konstan pada
0imana Kse' adalah nilai konstan pada kromatografi eksklusi (1 7 Kse' 7 *)kromatografi eksklusi (1 7 Kse' 7 *) Prinsip kromatografi gel dijelaskan oleh skema di baah ini
Prinsip kromatografi gel dijelaskan oleh skema di baah ini ++
Gambar / Prinsip kromatografi gel Gambar / Prinsip kromatografi gel
Gambar 8 Pemisahan Kromatografi Gel Gambar 8 Pemisahan Kromatografi Gel
D
D.. TTEEOORRII
Kolom kromatografi gel mengandung partikel berpori dengan
Kolom kromatografi gel mengandung partikel berpori dengan diameterdiameter pori yang
pori yang berbeda #inarut yang disuntikkan ke dalam kolom tersebut berdifusiberbeda #inarut yang disuntikkan ke dalam kolom tersebut berdifusi ke dalam pori
ke dalam pori yang diameternya lebih besar daripada diameter yang diameternya lebih besar daripada diameter efektif linarutefektif linarut a
alaupun laupun bobot molekulnya sama, dibobot molekulnya sama, diameter efektifnya berbeda, dan ameter efektifnya berbeda, dan komponenkomponen yang diameternya paling besar akan terelusi lebih dahulu 0engan
yang diameternya paling besar akan terelusi lebih dahulu 0engan bertambah
bertambah besarnya diameter linarut, jumlah pori yang dapat dimasukibesarnya diameter linarut, jumlah pori yang dapat dimasuki dan
dan kemampuannya berdifusi dalam kemampuannya berdifusi dalam pori menurun 9adi, pori menurun 9adi, jika linarutjika linarut berdiameter
berdiameter sedemikian rupa sehingga tidak dapat berdifusi ke dalam pori yangsedemikian rupa sehingga tidak dapat berdifusi ke dalam pori yang mana pun, maka
mana pun, maka linarut tersebut linarut tersebut dikatakan tereksklusi semdikatakan tereksklusi sempurna dan tidakpurna dan tidak tertahan, artinya li
tertahan, artinya linarut narut tersebut terelusi tersebut terelusi dalam %olume kolom dalam %olume kolom ..oo #inarut yang#inarut yang mampu berdifusi
mampu berdifusi sempurna ke dalam ssempurna ke dalam semua pori dikatakan bermeasemua pori dikatakan bermeasi sempurnai sempurna ke dalam kemasan
ke dalam kemasan #inarut jenis ini #inarut jenis ini memerlukan %olume pelarut yang jauh lebihmemerlukan %olume pelarut yang jauh lebih besar untuk mengelusinya dari kolom Pemisahan komponen dapat di'apai jika besar untuk mengelusinya dari kolom Pemisahan komponen dapat di'apai jika
komponen itu terelusi dengan
komponen itu terelusi dengan %olume tambat antara .o dan %olume permeasi%olume tambat antara .o dan %olume permeasi total .
total .oolume kromatografi gel ada lume kromatografi gel ada tiga komponen yaitu,tiga komponen yaitu, *
* ..oolume mati (.lume mati (.oo), %olume ruan), %olume ruang antar partig antar partikel yang ditemkel yang ditempati fase gerpati fase gerak yangak yang mengalir
mengalir /
/ ..oolume lume yang dyang ditemitempati opati oleh bleh bagian agian padat padat kemaskemasanan 8
8 ..oolume porlume pori (.p), %i (.p), %olume yanolume yang ditemg ditempati faspati fase gerak ye gerak yang tertang tertahanahan Koefisien distribusi (K) linarut merupakan jumlah %olume pori yang dapat Koefisien distribusi (K) linarut merupakan jumlah %olume pori yang dapat dimasuki linarut (.:
dimasuki linarut (.:) dan %olume ) dan %olume pori total (.p), yaitu pori total (.p), yaitu ++
K K ==VVAA
Vp Vp
&aka, %olume linarut
&aka, %olume linarut yang tertahan (.$) dinyatakan yang tertahan (.$) dinyatakan sebagai; .$ 6 .o sebagai; .$ 6 .o 4 K.p,4 K.p, rentang K antara 1 sampai *,
rentang K antara 1 sampai *, karena jika linarut diekslusi seluruhnya, maka K 6 karena jika linarut diekslusi seluruhnya, maka K 6 11 dan jika pelarut berpermeasi ke dalam pori seluruhnya maka K 6 * &aka untuk dan jika pelarut berpermeasi ke dalam pori seluruhnya maka K 6 * &aka untuk memperoleh pemisahan yang
memperoleh pemisahan yang semaksimum mungkin diperlukan .o semaksimum mungkin diperlukan .o yang lebihyang lebih ke'il dan .p yang
ke'il dan .p yang lebih besarlebih besar
Gambar < Skema Perjalanan Partikel Gambar < Skema Perjalanan Partikel
E.
Peralatan penting yang biasanya digunakan pada kromatografi gel, antara Peralatan penting yang biasanya digunakan pada kromatografi gel, antara lain pompa untuk m
lain pompa untuk mempertahankan aliran yang empertahankan aliran yang konstan, kolom dengan jeniskonstan, kolom dengan jenis molekul tertentu, dan
molekul tertentu, dan detektor untuk hasil detektor untuk hasil yang yang kuantitatifkuantitatif -uffer dipompa melalui kolom oleh alat yang diatur oleh
-uffer dipompa melalui kolom oleh alat yang diatur oleh 'omputer Saat'omputer Saat 'ampuran molekul dan ion3ion yang
'ampuran molekul dan ion3ion yang terlarut dalam pelarut diaplikasikan padaterlarut dalam pelarut diaplikasikan pada ujung atas kolom, molekul3molekul yang lebih ke
ujung atas kolom, molekul3molekul yang lebih ke'il (dan ion) didistribusikan'il (dan ion) didistribusikan melalui %olume pelarut yang lebih besar daripada
melalui %olume pelarut yang lebih besar daripada yang tersedia untuk molekulyang tersedia untuk molekul besar
besar &olekul yang lebih ke'il dari ukuran pori dapat masuk ke dalam partikel&olekul yang lebih ke'il dari ukuran pori dapat masuk ke dalam partikel dan karenanya memiliki jalur yang lebih panjang serta aktu transit yang lebih dan karenanya memiliki jalur yang lebih panjang serta aktu transit yang lebih panjang dibandingkan molekul besar yang tidak dapat memasuki partikel Seluruh panjang dibandingkan molekul besar yang tidak dapat memasuki partikel Seluruh molekul yang lebih besar ukurannya dibandingkan ukuran yang tidak tertahan dan molekul yang lebih besar ukurannya dibandingkan ukuran yang tidak tertahan dan akan dielusi bersamaan &olekul yang dapat masuk ke dalam pori akan memiliki akan dielusi bersamaan &olekul yang dapat masuk ke dalam pori akan memiliki aktu tinggal rata3rata dalam partikel, yang bergantung dari bentuk
aktu tinggal rata3rata dalam partikel, yang bergantung dari bentuk serta ukuranserta ukuran molekulnya Karena itu, molekul besar bergerak lebih 'ep
molekulnya Karena itu, molekul besar bergerak lebih 'ep at meleati kolom, danat meleati kolom, dan dengan inilah 'ampuran tersebut dapat dipisahkan menjadi komponen3
dengan inilah 'ampuran tersebut dapat dipisahkan menjadi komponen3 komponennya
komponennya
Gambar = Pemisahan kromatografi gel untuk du
Gambar = Pemisahan kromatografi gel untuk dua ukuran makromolekul + (*)a ukuran makromolekul + (*) Campuran sampel sebelum memasuki 'olomn pa'king; (/) Campuran sampel Campuran sampel sebelum memasuki 'olomn pa'king; (/) Campuran sampel pada bagian atas kolom; (8) Pemisahan ukuran dimulai; (<) "asil akhir pada bagian atas kolom; (8) Pemisahan ukuran dimulai; (<) "asil akhir
BAB II BAB II
SISTEM PERALATAN SISTEM PERALATAN
I.
I. FFAASE SE DIDIAMAM
Pemisahan dalam kromatografi gel sebagian besar ditentukan oleh jenis fasa Pemisahan dalam kromatografi gel sebagian besar ditentukan oleh jenis fasa diam yang digunakan >leh karena itu, pemilihan gel atau fasa diam untuk suatu diam yang digunakan >leh karena itu, pemilihan gel atau fasa diam untuk suatu pemisahan merupakan langkah penting
pemisahan merupakan langkah penting
Fasa diam yang banyak digunakan untuk kromatografi gel diberikan pada tabel di Fasa diam yang banyak digunakan untuk kromatografi gel diberikan pada tabel di baah ini -ahan ini digunakan untuk ukuran pori berbeda3beda setiap ukuran baah ini -ahan ini digunakan untuk ukuran pori berbeda3beda setiap ukuran
'o'ok untuk pemisahan senyaa tertentu berdasarkan berat molekulnya 'o'ok untuk pemisahan senyaa tertentu berdasarkan berat molekulnya
Kebanyakan dengan kromatografi permeasi gel digunakan fasa diam polistirena Kebanyakan dengan kromatografi permeasi gel digunakan fasa diam polistirena berpori yang mempunyai ikatan silang di%inil ben?ene Poragel dan -io3-ead berpori yang mempunyai ikatan silang di%inil ben?ene Poragel dan -io3-ead dapat untuk memisahkan senyaa yang relati%e ke'il sampai dengan molekul dapat untuk memisahkan senyaa yang relati%e ke'il sampai dengan molekul sekitar /1111 Styragel untuk memisahkan senyaa besar dengan berat molekul sekitar /1111 Styragel untuk memisahkan senyaa besar dengan berat molekul /1 juta Gel %inil asetat berpori serupa dengan
/1 juta Gel %inil asetat berpori serupa dengan gel polistirena, tetapi untukgel polistirena, tetapi untuk senyaa dengan berat molekul rendah &er'kogels berpori ke'il lebih baik senyaa dengan berat molekul rendah &er'kogels berpori ke'il lebih baik
digunakan untuk pemisahan senyaa dengan berat molekul kurang dari /111 dan digunakan untuk pemisahan senyaa dengan berat molekul kurang dari /111 dan yang kurang dari sejuta
yang kurang dari sejuta
Tabel 1 Tabel 1
Fasa diam untuk kromatografi gel Fasa diam untuk kromatografi gel
Kr
Kromomatatogograrafi fi pepermrmeaeasi gsi gel el (p(pelelararut out orrgaganinik)k) Polistirena
Polistirena P
Poorraaggeell, , SSttyyrraaggeell aatteerrss
--iioo33--eeaadd33SS --iioo33$$aad d ##aabbss Gel %inil asetat
Gel %inil asetat &
&eerr''kkooggeell33>>$$ EE33&&eerr''kk, , EE& & ##aabbss Silika atau gelas berpori
Silika atau gelas berpori P
Poorraassiill aatteerr
--iioo33GGllaass --iioo33$$aad d ##aabbss &
&eerr''kkooggeell33SSii EE33&&eerr''kk, , EE& & ##aabbss Filtrasi gel (pelarut air)
Filtrasi gel (pelarut air)
:gak kaku (berat molekul rendah) :gak kaku (berat molekul rendah)
S
--iioo33GGeell33PP --iioo33$$aad d ##aabbss !idak kaku
!idak kaku S
Spphhaarroossee PPhhaarrmmaa''iiaa
--iio o GGiiaa33:: --iioo33$$aad d ##aabbss Gel untuk penggunaan khusus
Gel untuk penggunaan khusus Silika atau gelas berpori Silika atau gelas berpori P
Poorraassiil l ddeeaakkttii%%aassii aatteerrss :
:uuaappaakk aatteerrss
Kromatografi permeasi gel dengan pelarut orgnik juga dapat
Kromatografi permeasi gel dengan pelarut orgnik juga dapat dikerjakan dengandikerjakan dengan fasa diam kaku dari sili'a atau gelas
fasa diam kaku dari sili'a atau gelas berpori -ahan ini lebih stabil daripada gelberpori -ahan ini lebih stabil daripada gel organi' dan pengisian kolom pun lebih
organi' dan pengisian kolom pun lebih mudah !emudah !etapi kerap kali memberikantapi kerap kali memberikan retensi yang jelek karena terjadi serapan oleh
retensi yang jelek karena terjadi serapan oleh permukaan silikapermukaan silika
Filtrasi gel dalam pelarut berair paling banyak dilakukan dengan gel yang agak Filtrasi gel dalam pelarut berair paling banyak dilakukan dengan gel yang agak kaku atau yang tidak kaku Senyaa dengan berat gel sampai beberapa ratus ribu kaku atau yang tidak kaku Senyaa dengan berat gel sampai beberapa ratus ribu dapat dipisahkan dengan Seph
dapat dipisahkan dengan Sephade@ atau -io3Gel3P ade@ atau -io3Gel3P Sephade@ adalah dekstranSephade@ adalah dekstran berikatan silang, sedangkan -io3Gel3P adalah suatu poliakril ami
berikatan silang, sedangkan -io3Gel3P adalah suatu poliakril amida berikatanda berikatan silang Gel berpori ke'il dari jenis ini digunakan
silang Gel berpori ke'il dari jenis ini digunakan untuk senyaa dengan beuntuk senyaa dengan beratrat molekul sampai beberapa ribu, dengan tekanan kolom sampai *113/11 psi, tidak molekul sampai beberapa ribu, dengan tekanan kolom sampai *113/11 psi, tidak lebih dari itu Sepharosa dan -io3Gia3: terdiri dari agarosa, suatu
lebih dari itu Sepharosa dan -io3Gia3: terdiri dari agarosa, suatu
poligalaktopiranosa 5kuran pori ditentukan oleh kadar agarosa Senyaa poligalaktopiranosa 5kuran pori ditentukan oleh kadar agarosa Senyaa
dengan berat molekul antara *1
dengan berat molekul antara *1<<3*13*1AA dapat dipisahkan pada gel agarosa, tetapi dapat dipisahkan pada gel agarosa, tetapi
dengan tekanan rendah
dengan tekanan rendah (1,= psi) untuk gel berpori besar(1,= psi) untuk gel berpori besar
II.
II. FAFASE GERSE GERAK AK
0alam kromatografi gel, tidak seperti pada metode kromatografi 'airan lainnya, 0alam kromatografi gel, tidak seperti pada metode kromatografi 'airan lainnya, fasa gerak tidak diubah3ubah untuk mengatur resolusi Fasa gerak dipilih dengan fasa gerak tidak diubah3ubah untuk mengatur resolusi Fasa gerak dipilih dengan kekentalan rendah pada suhu pemisahan (supaya harga B tinggi) dan untuk kekentalan rendah pada suhu pemisahan (supaya harga B tinggi) dan untuk
melaruutkan 'uplikan Fasa gerak dengan kekentalan rendah itu mempunyai titik melaruutkan 'uplikan Fasa gerak dengan kekentalan rendah itu mempunyai titik
didih sekitar /=3=1
didih sekitar /=3=1ooC di atas suhu kolom 9ika 'uplikan C di atas suhu kolom 9ika 'uplikan sukar larut, fasa geraksukar larut, fasa gerak
dipilih supaya dapat melarutkan 'uplikan dipilih supaya dapat melarutkan 'uplikan
Pengaruh fasa gerak pada fasa diam yang tidak kaku untuk kromatografi gel Pengaruh fasa gerak pada fasa diam yang tidak kaku untuk kromatografi gel harus dipertimbangkan 0alam filtrasi gel, harus ditambahkan garam pada harus dipertimbangkan 0alam filtrasi gel, harus ditambahkan garam pada fasafasa gerak untuk menjaga kekuatan ion supaya tetap Sebaliknya perjalanan ion gerak untuk menjaga kekuatan ion supaya tetap Sebaliknya perjalanan ion 'uplikan meleati fasa diam dapat menyebabkan penyusutan gel dan penurunan 'uplikan meleati fasa diam dapat menyebabkan penyusutan gel dan penurunan permeabiliitas kolom -erbagai gel untuk kromatoografi gel dapat tahan terhadap permeabiliitas kolom -erbagai gel untuk kromatoografi gel dapat tahan terhadap berbagai pelarut organi', tetapi ada penge'ualian pada aseton dan al'ohol tidak berbagai pelarut organi', tetapi ada penge'ualian pada aseton dan al'ohol tidak boleh digunakan dengan fasa diam polistirena
boleh digunakan dengan fasa diam polistirena
Fase gerak dalam kromatografi gel harus merupakan polimer yang baik untuk Fase gerak dalam kromatografi gel harus merupakan polimer yang baik untuk menghindari efek noneksklusi Sampel harus terdisolusi pada suhu
menghindari efek noneksklusi Sampel harus terdisolusi pada suhu yang sesuaiyang sesuai dan bertahan 'ukup lama sebelum akhirnya disuntikkan "al tersebut bertujuan dan bertahan 'ukup lama sebelum akhirnya disuntikkan "al tersebut bertujuan agar pelipatan dapat mengembang dalam fase gerak atau dengan kata lain agar pelipatan dapat mengembang dalam fase gerak atau dengan kata lain
meme'ahkan agregat -ila sampel hanya terlarut dalam fase gerak, mmaka dapat meme'ahkan agregat -ila sampel hanya terlarut dalam fase gerak, mmaka dapat terjadi peningkatan tekanan pada kolom karena ukuran partikel yang terlalu terjadi peningkatan tekanan pada kolom karena ukuran partikel yang terlalu besar Ef
besar Efek tersebut dapat diatasi dengan 'ara; *) memilih pelarut lain, atau /)ek tersebut dapat diatasi dengan 'ara; *) memilih pelarut lain, atau /) meningkatkan temperature kolom Pada beberapa kondisi, perlu adanya
meningkatkan temperature kolom Pada beberapa kondisi, perlu adanya penambahan elekttrolit agar terjadi disagregasi -eberapa polimer,
penambahan elekttrolit agar terjadi disagregasi -eberapa polimer, sepertiseperti polyolefin, biasa digunakan untuk analisis pada suhu tinggi (*<13*=1
polyolefin, biasa digunakan untuk analisis pada suhu tinggi (*<13*=1ooC) bilaC) bila
analisis dilakukan pada kondisi tersebut, maka fase gerak bersifat toksik tidak analisis dilakukan pada kondisi tersebut, maka fase gerak bersifat toksik tidak dapat digunakan ('ontoh; trikloroben?ene), sehingga perlu dipilih fase gerak dapat digunakan ('ontoh; trikloroben?ene), sehingga perlu dipilih fase gerak yang lain Fase gerak d
yang lain Fase gerak dalam kromatografi gel terbagi menjadi dua bagian alam kromatografi gel terbagi menjadi dua bagian besar,besar, yaitu +
yaitu + *
* Fase geFase gerak krorak kromatogrmatografi gel afi gel untuk pruntuk protein dotein dan polian polimer larmer larut airut air, dan, dan /
/ Fase geFase gerak krorak kromatogrmatografi gel afi gel untuk pountuk polimer limer polar dapolar dan polimn polimer larer larut dalamut dalam pelarut organi'
Gambar = Sistem peralatan kromatografi gel Gambar = Sistem peralatan kromatografi gel
Peralatan penting yang biasa digunakan pada kromatografi gel antara lain pompa Peralatan penting yang biasa digunakan pada kromatografi gel antara lain pompa untuk mempertahankan aliran yang konstan, kolom dengan jenis molekul tertentu, untuk mempertahankan aliran yang konstan, kolom dengan jenis molekul tertentu, dan dete'tor untuk hasil yang kuantitatif
dan dete'tor untuk hasil yang kuantitatif
Gambar Skematis dari system kromatografi gel Gambar Skematis dari system kromatografi gel
BAB III BAB III APLIKASI APLIKASI
Kromatografi ekslusi atau filtrasi gel digunakan untuk memurnikan proteinDen?im Kromatografi ekslusi atau filtrasi gel digunakan untuk memurnikan proteinDen?im berdasarkan ukuran molekulnya Pemisahan di'apai dengan menggunakan matriks berdasarkan ukuran molekulnya Pemisahan di'apai dengan menggunakan matriks berpori, misalnya Sepha'ryl S3811 "$; dimana molekul, memiliki tingkat akses berpori, misalnya Sepha'ryl S3811 "$; dimana molekul, memiliki tingkat akses
yang berbeda &olekul yang lebih ke'il memiliki akses yang lebih besar dan molekul yang berbeda &olekul yang lebih ke'il memiliki akses yang lebih besar dan molekul yang lebih besar tidak termasuk dalam
yang lebih besar tidak termasuk dalam matriks >leh karena itu, protein dielusi darimatriks >leh karena itu, protein dielusi dari kolom filtrasi gel berdasarkan urutan ukuran (Shibahara et al, *A=) -erat molekul kolom filtrasi gel berdasarkan urutan ukuran (Shibahara et al, *A=) -erat molekul dan bentuk tiga dimensi berkontribusi pada ak
dan bentuk tiga dimensi berkontribusi pada aktu retensi dalam kolomtu retensi dalam kolom
Protein dapat dipisahkan sehubungan dengan ukuran pada kolom filtrasi gel 0engan Protein dapat dipisahkan sehubungan dengan ukuran pada kolom filtrasi gel 0engan memilih porositas media filtrasi, protein dapat dipisahkan berdasarkan ukuran 0asar memilih porositas media filtrasi, protein dapat dipisahkan berdasarkan ukuran 0asar untuk jenis pemisahan adalah baha molekul (dalam hal ini adalah protein) akan untuk jenis pemisahan adalah baha molekul (dalam hal ini adalah protein) akan berdifusi ke dalam pori3pori butiran3butiran gelas 5kuran molekul yang berbeda berdifusi ke dalam pori3pori butiran3butiran gelas 5kuran molekul yang berbeda
akan tertunda dengan aktu yang berbeda dealnya, molekul ke'il berdifusi ke dalam akan tertunda dengan aktu yang berbeda dealnya, molekul ke'il berdifusi ke dalam fase diam; sehingga akan dielusi lebih lambat d
fase diam; sehingga akan dielusi lebih lambat dari molekul besar &olekul besar akanari molekul besar &olekul besar akan berpindah tanpa hambatan melalui kolom, terutama jika tidak bisa masuk ke pori3pori berpindah tanpa hambatan melalui kolom, terutama jika tidak bisa masuk ke pori3pori
kolom &olekul mun'ul dari kolom urutan penurunan berdasarkan berat molekul kolom &olekul mun'ul dari kolom urutan penurunan berdasarkan berat molekul -ila menggunakan filtrasi gel itu sangat penting untuk
-ila menggunakan filtrasi gel itu sangat penting untuk memiliki %olume sampel ke'ilmemiliki %olume sampel ke'il dan solusi terkonsentrasi
dan solusi terkonsentrasi
Kromatografi untuk analisa karakteristik en?im dan deri%ate en?im yaitu
Kromatografi untuk analisa karakteristik en?im dan deri%ate en?im yaitu alkalialkali fosfatase :lkali
fosfatase :lkaline fosfatase merupakan ne fosfatase merupakan metalloen?yme, yang menghidrolisismetalloen?yme, yang menghidrolisis nonspesifik fosfat
