LAPORAN PRAKTIKUM IV
ANALISIS JENIS DAN KANDUNGAN AFLATOKSIN PADA KACANG TANAH
Miladiarsi : G351140101 Alfan Cahyadi : G351140171
SEKOLAH PASCASARJANA INSTITUT PERTANIAN BOGOR
PENDAHULUAN
Latar belakang
Kacang tanah (Arachis hypogaea) adalah komoditas pertanian yang bernilai ekonomi cukup tinggi dan merupakan salah satu sumber protein dalam pola pangan penduduk Indonesia. Selain itu, konsumsi kacang tanah menempati urutan ketiga setelah jagung dan kedelai. Kacang tanah memiliki potensi besar sebagai produk pangan ekspor dan kini menjadi sumber pendapatan penting bagi petani. Kebutuhan kacang tanah untuk konsumsi tahun 2004 sebesar 181.387 ton (Kasno 2010) dan pada tahun 2013 produksi kacang tanah mencapai 1,20 juta ton biji kering (BPS 2013).
Kontaminasi aflatoksin pada kacang tanah disebabkan serangan galur tertentu cendawan Aspergillus flavus akibat dari banyaknya biji rusak, pengeringan yang kurang baik sehingga kadar air kacang tanah meningkat. Tingginya kadar air akan meningkatkan serangan cendawan. Faktor pendukung pertumbuhan cendawan antara lain kadar air dan kualitas fisik biji (biji utuh, biji keriput, dan biji rusak) dipengaruhi oleh cara pemanenan dan penanganan pascapanen (Dharmaputra et al. 2013).
Laporan mengenai kontaminasi aflatoksin pada kacang tanah di Indonesia sudah dilaporkan oleh beberapa peneliti. Kacang tanah dalam bentuk polong segar, polong kering, biji serta berbagai produk olahan sederhana seperti kacang rebus, kacang garing, bungkil, oncom dan olahan modern seperti kacang atom, kacang mentega, pasta kacang umumnya telah terkontaminasi aflatoksin B1 dengan kandungan di luar batas aman (Dharmaputra et al. 1989).
Untuk mengetahui seberapa jauh tingkat kontaminasi mikotoksin pada suatu komoditas diperlukan metode deteksi yang akurat. Hasil analisis yang cepat dan akurat akan sangat membantu dalam upaya pengendalian kontamiasi mikotoksin, baik yang berkaitan dengan kesehatan masyarakat maupun dalam penentuan kebijakan atau regulasi dari pemerintah. Berbagai metode deteksi dapat digunakan untuk analisis mikotoksin terutama aflatoksin. TLC (Thin Layer Chromatography atau Kromatografi Lapis Tipis) merupakan metode yang telah lama digunakan untuk pemisahan dan deteksi berbagai senyawa seperti halnya mikotoksin, hal ini karena metode ini mudah dilakukan, relatif murah, dan sangat berguna untuk pengujian kualitatif dan semikuantitatif. TLC juga digunakan untuk deteksi komoditas pertanian yang digunakan sebagai bahan baku pangan dan pakan ternak (Maryam 2007)
Tujuan
Praktikum kali ini bertujuan untuk mengetahui jenis dan kandungan aflatoksin pada biji kacang tanah.
BAHAN DAN METODE
Analisis jenis dan kandungan aflatoksin dilakukan berdasarkan Bainton et al. (1980) dan AOAC (2005).
Pembuatan Pasta Biji Kacang Tanah
Ekstraksi Aflatoksin
Pasta kacang sebanyak 130 g ditempatkan di dalam labu Erlenmeyer 250 mL, kemudian ditambahkan 50 mL larutan garam 2.2%, 150 mL metanol dan 100 mL n-heksana. Campuran tersebut diaduk menggunakan pengaduk magnet selama 30 menit, kemudian dibiarkan selama 30 menit untuk mendapatkan pemisahan yang baik. Fase metanol yang dihasilkan dari pengendapan dipipet sebanyak 25 mL dan dimasukkan ke dalam corong pemisah 250 mL, kemudian diekstraksi menggunakan 25 mL kloroform. Fraksi kloroform (lapisan bawah) yang dihasilkan dari proses ekstraksi, dikumpulkan dalam botol 100 mL dan diuapkan sampai hampir kering. Residu yang diperoleh dipindahkan ke dalam botol (vial) menggunakan kloroform dan diuapkan kembali. Sebelum diidentifikasi, sampel hasil penguapan dilarutkan kembali menggunakan 500 μL kloroform secara kuantitatif.
Persiapan dan Penyimpanan Larutan Standar Aflatoksin
Masing-masing 1 mg aflatoksin standar B1, B2, G1, dan G2 (dari Sigma-Aldirch) dalam kontainer aslinya dilarutkan secara kuantitatif menggunakan 1 mL metanol. Konsentrasi larutan standar ini adalah 1000 μg/mL (SS-1 = 1000 ppm). Larutan stok standar dibagi ke dalam 10 botol (vial) kaca masing-masing 100 μL dan didapatkan larutan stok standar aflatoksin 1000 ppm. Larutan standar aflatoksin tidak dibenarkan disimpan dalam larutan metanol. Jika larutan stok ingin disimpan dalam waktu lama, larutan metanol diuapkan sampai kering terlebih dahulu, kemudian dilarutkan kembali menggunakan 10 mL pelarut benzena : asetonitril (98:2), sehingga diperoleh larutan SS-2 dengan konsentrasi 10 ppm. Pada pengujian sehari-hari dibuat larutan working standar (WS-1 maupun WS-2) dan dibuat larutan campuran antara keempat jenis aflatoksin tersebut, kemudian larutan standar dan larutan working standar disimpan di dalam freezer. Sebelum digunakan, larutan stok standar dibiarkan pada temperatur kamar sampai larutan standar mencair.
Identifikasi Aflatoksin
larutan standar aflatoksin B1 1 μL sampai dengan 10 μL. Konsentrasi aflatoksin standar yang digunakan adalah 2-4 ppm. Lempeng kromatografi tersebut dimasukkan ke dalam bejana yang berisi eluen, kemudian dielusi dari bawah ke atas sampai pelarut mencapai batas, setelah itu lempeng kromatografi dikeringkan menggunakan pengering rambut (hair dryer) dan diamati di bawah lampu UV dengan panjang gelombang 366 nm. Uji kualitatif dilakukan dengan membandingkan waktu tambat (Rf) bercak sampel dan standar, sedangkan uji kuantitatif dilakukan dengan membandingkan intensitas perpendaran bercak sampel dan standar.
Perhitungan Kandungan Aflatoksin
Kandungan aflatoksin (μg/kg) dihitung menggunakan rumus: Kandungan aflatoksin (μg/kg) = S x Y x V x fp
W x Z
S = volume aflatoksin standar (μL) yang memberikan perpendaran setara dengan Z μL sampel
Y = konsentrasi aflatoksin standar dalam μg/mL
Z = volume ekstrak sampel (μL) yang dibutuhkan untuk memberikan perpendaran setara dengan S μL standar aflatoksin
W = berat sampel yang diekstrak (g)
V = volume pelarut (μL) yang dibutuhkan untuk melarutkan ekstrak sampel Fp = faktor pengenceran 150/25.
HASIL DAN PEMBAHASAN
Kromatografi lapis tipis merupakan salah satu metode untuk mendeteksi keberadaan aflatoksin dalam kacang tanah berdasarkan perbedaan warna biru atau hijau yang dihasilkan setelah penotolan dan dilihat di bawah lampu UV pada gelombang tertentu (Poole dan Poole 1994). Perbedaan warna yang dihasilkan menentukan jenis aflatoksin, pada suatu sampel. Warna biru menunjukkan bahwa sampel mengandung aflatoksin B sedangkan warna hijau menujukkan sampel mengandung aflatoksin G. Hasil yang diperoleh pada praktikum menunjukkan bahwa kacang tanah terdeteksi mengandung aflatoksin B1 berdasarkan warna perpendaran biru yang terlihat pada pengamatan dibawah sinar UV dengan perpendaran standar aflatoksin B1 urutan ke 8 (Gambar 1).
Gambar 1 Profil kromatogram lapis tipis (KLT) sampel A dan B dan standar aflatoksin B1 dan B2 di bawah lampu UV 366 nm. Sampel menunjukkan kesamaan warna perpendaran dengan sampel aflatoksin B1 urutan no 8.
kacang tanah dan produk olahannya masing-masing 15 ppb dan 20 ppb (SNI 2009)
Berdasarkan hasil yang diperoleh menunjukkan bahwa kacang tanah tersebut tidak layak untuk dikomsumsi karena melebihi batas minimum kandungan aflatoksin yang ditentukan yaitu 74.95 ppb sehingga dapat membahayakan kesehatan. Bahan baku kacang tanah yang terkontaminasi dengan AFB1 sulit untuk dihilangkan, karena sifatnya yang tahan panas (titik cair 268-269 C). Pemanasan sampai 150 C hanya mengurangi konsentrasi aflatoksin 33-75%, sedangkan proses pengolahan, seperti penyangraian, penggorengan, dan fermentasi hanya dapat mengurangi kandungan aflatoksin 73-87% (Rahmianna dan Ginting 2005).
KESIMPULAN
Sampel kacang tanah yang digunakan memiliki kandungan aflatoksin yang melebihi batas minimum yang ditentukan yaitu sebesar 74.95 ppb sehingga sampel kacang tanah tidak layak untuk dikonsumsi karena dapat bersifat toksik bagi tubuh.
DAFTAR PUSTAKA
[AOAC] Association of Official Analytical Chemist. 2005. Natural Toxin. Di dalam: Horwitz W, editor. Official Methods of Analysis of AOAC International. Edisi ke 18. Vol II Bab 49. Gaithersburg: AOAC.
Bainton S, Coker RD, Jones BD, Morlet EM, Naglerand MJ, Turner RL. 1980. Mycotoxin Training Manual. London (GB): Tropical Product Institute. Hlm 18-22.
[BPS] Badan Pusat Statistik. 2013. Produksi kacang hijau dan kacang tanah turun signifikan. Jakarta(ID): Indonesia
Dharmaputra OS. 2002. Review on aflatoxin in indonesian food- and feedstuffs and their products. Biotropia (19):26 – 46.
Dharmaputra OS, Ambarwati S, Retnowati I, Windyarani A. 2013. Kualitas Fisik, Populasi Aspergillus flavus, dan Kandungan Aflatoksin B1 pada Biji Kacang Tanah Mentah.J Fitopatol Indones.9(4):99-106.
FAO. 1997. Worldwide Regulations for Mycotoxins 1995 - A Compendium. FAO Food and Nutrition Paper. No. 64. Rome.
Kasno A. 2010. Varietas kacang tanah tahan Aspergillus flavus sebagai komponen esensial dalam pencegahan kontaminasi aflatoksin. Jurnal Pengembangan Inovasi Pertanian. 3(4):260-273.
Kasno A. 2009. Pencegahan Infeksi A. flavus dan Kontaminasi Aflatoksin pada Kacang Tanah. J Iptek Tanaman Pangan. 4 (2):194-201.
Maryam R. 2007. Metode deteksi mikotoksin. J Mikol Ked Indon. 7(1-2):12-24. Pitt JI, Hocking, AD. 2009. Fungi and Food Spoilage, 3rd edn. London (GB):
Springer.
Poole CF, Poole SK. 1994. Instrumental Thin-Layer Chromatography. J Analytical Chemistry. 66( 1):27-37.
Rahmianna AA, Ginting E. 2005. Kacang tanah: Sumber pangan sehat dan menyehatkan. Sinar Tani Badan Litbang Pertanian. 42(3449):1-8.
[SNI] Standar Nasional Indonesia. 7385:2009. 2009. Batas Maksimum Kandungan Mikotoksin dalam Pangan. Jakarta (ID): Badan Standardisasi Nasional.
Zahari P, Bahri S, Maryam R. 1991. Mycotoxin contamination of peanut after harvest in Sukabumi, West Java, Indonesia. p. 220. In Champ et al. (Eds). Proceeding of an International Conference. held at Bangkok. Thailand: 23-26 April 1991.
LAMPIRAN
Kandungan aflatoksin dihitung sebagai (μL/kg) dengan rumus sebagai berikut:
Kandungan aflatoksin (μg/kg) = S x Y x V x fp W x Z
S = volume aflatoksin standar (μL) yang memberikan perpendaran setara dengan Z μL sampel
Y = konsentrasi aflatoksin standar dalam μg/mL
V = volume pelarut (μL) yang dibutuhkan untuk melarutkan ekstrak sampel Fp = faktor pengenceran 150/25
Kandungan aflatoksin (μg/kg) = S x Y x V x fp W x Z
= 8 µ L x 2.03 ppm x 1.000 µ L x 6
