Cgata kanen uirusu kansen ni kanrensuru kan shikkan no yobo ni mukete

Title Sub Title Author Publisher Publication year Jtitle Abstract Notes Genre URL. Powered by TCPDF (www.tcpdf.org). C型肝炎ウイルス感染に関連する肝疾患の予防に向けて 下遠野, 邦忠(Shimotono, Kunitada) 慶應医学会 2007 慶應医学 (Journal of the Keio Medical Society). Vol.84, No.4 (2007. 12) ,p.217- 225 綜説 Journal Article http://koara.lib.keio.ac.jp/xoonips/modules/xoonips/detail.php?koara_id=AN00069296-20071200 -0217.

画. 慶 慮 医 学 ・84(4):217∼225,2007. C型 肝 炎 ウイ ル ス感 染 に関連 す る肝 疾 患 の予 防 に 向 け て 慶慮 義 塾 大学 医 学部. 総 合 医科学 研 究 セ ンター. しもとの の. くに. ただ. 下遠野 邦 忠 Key. Words:chronic. hepatitis,. hepatitis. C. virus,. viral. genome,. hepatocellular. carcinoma,. cycIosporin,. lipid. droplet. す る こど 〉 な ど に 加 え,そ. は じめ に. の 他 の 実 験 結 果 か らRNAウ. イ ル スの 一 種 で フ ラ ビウ イ ル ス科 に属 す る と考 え られ た. C型 肝 炎 ウ イ ル ス(HCV)は. 慢 性 肝 炎,肝. 硬変 およ. 本 ウ イ ル ス の 遺 伝 子 断 片 が1989年. に 見 い だ さ れC型. び肝 が ん発 症 の 原 因 ウ イ ル スで あ る.感 染 者 は肝 疾 患 以. 肝 炎 ウ イ ル ス(Hepatitis. 外 に 自 己免 疫 病 発症 の 割 合 も高 い と い う報 告 もあ る.我. よ うに な っ たal.そ の 遺 伝 子 を 酵 母 で 発 現 さ せ た 蛋 白 質. が 国 で は感 染 者 が 人 口の 約1.5%,WHOの. を抗 原 と して 調 べ る と,輸 血 後 非A非B型. と全 世 界 の 人 口 の約3%が. 惟 計 によ る. 感 染 して い る.慢 性C型. 肝. C Virus:HCV)と. 者 血清 が 高 い 割 合(75%以. 呼ばれる. 上)でHCVタ. 慢 性肝 炎患 ンパ ク質 に反. 炎患 者 に対 す る イ ン ター フ ェ ロ ンと リバ ピ リンの 併用 療. 応 す る こ とが 明 らか に な っ だ).ま. 法 に よ り治 療 を受 け た患 者 の 約 半 数 で ウ イ ル スが 排 除 さ. 性 肝 炎 に 由 来 す る肝 が ん 患 者 で も ほぼ 同 じよ うな 高 い値. れ て お り,肝 疾 患 か ら も解 放 され て い る.従. を 示 し た こ とか ら,非A非B型. ってHCV. 感 染 は薬 で排 除 が 可 能 に な って きて い る.HCV感 よ る肝 臓 がん の 犠 牲 者 は,我 が 国 の 場 合,全 割 に達 す る.そ の 中 でHCV感. 染 が8割. 染に. がん の約1. イ ル ス の 多 く はHCVで. た,非A非B型. 慢性 肝炎 を発症 す るウ. あ る こ とが 判 明 した.非A非B. 型慢 性 肝 炎 ウ イ ル ス とい う名 前 は,そ. に達 す る. HCV. 肝 炎 ウ イ ル ス で な くB型. 慢. の 名 の 通 りA型. 肝 炎 ウ イル スで もない新 た な. を 排除 す る事 が で きる よ うに なれ ば,が ん の1割 を 削 減. ウイ ル ス と して 定 義 され て い た た め に,当 初 は そ の 因 子. す るこ とが で き るの で社 会 に 与 え る影 響 は棚 め て 大 きい.. が1種 類 な の か 複 数 種 あ る の か さ え も不 明 で あ った,し. 本 総 説 で は主 にHCVの. か し,HCV抗. 性,お. よ び抗HCV剤. 生 活環 を述 べ,肝. 疾 患 と の関 連. 開 発 にむ け た最 近 の 知 見 を紹 介 し. た い,. 体 が 輸 血 後 非A非B型. い は非A罪B型. 非A非B肝 炎 ウイルス時代か ら C型 肝炎ウイルスの発見 まで 代 の 後 半 ご ろ に はHBVやHAV以. な って い る(肝 炎 ウ イ ル ス は6種 類 知 られ て い る.そ れ らの中 で慢 性 肝 炎,肝 が ん の 発症 と関 辿 す る可 能 性 の あ. 外の因 子. に よ る 輸 血 後 慢 性 肝 炎 の 存 在 が 明 らか に な り,そ. の因子. を 非A非B型. non-B. chronic. 慢 性 肝 炎 ウ イ ル ス. hepatitis. に な っ た.輸. virus)と. 呼 び,研. (Non・A,. HBV), HDV)が. D型. 血 後 慢 性 肝 炎 患 者 血 液 を 投 与 さ れ た チ ンパ イル ス. HGV)も. 肝 炎 ウ イ ル ス(Hepatitis. 肝 炎 ウ イ ル ス(Hepatitis. 既 に 知 られ て い る.1990年. 発 見 さ れ たG型. 究 が 行 わ れ るよ う. ン ジ ー で 慢 性 肝 炎 と 似 た 症 状 を 呈 す る こ とV,ウ. 慢性肝 炎 ウ イルス. ほぼ 同 義 語 で あ る,と 考 え られ る位 に ま で に. る も の と し てB型 1970年. る. 慢 性 肝 炎 由 来 肝 が ん 患 者 の 多 くに 検 出. され る こ と か ら,輸 血 後非A非B型 はHCVと. 慢 性 肝 炎,あ. B Virus;l. delta. Virus:. 代 に な って 新 た に. 肝 炎 ウ イ ル ス(Hepatitis. G. Virus:. 肝 炎 発 症 と関 辿 す る と考 え られ たが5現 在 で は. 関 連 性 が 低 い と考 え られ る). C型 慢 性 肝 炎 の患 者 に は,イ. ン ター フ ェ ロ ンを 中心 に. 粒 子 を 透 過 す る フ ィ ル タ ー を 通 した 血 清 で も チ ンパ ン ジ ー. した治 療 が 広 く行 わ れ るよ うにな った,最 近 で は イ ン ター. に 感 染 し似 た 症 状 を 呈 す る こ と か ら ウ イ ル ス 性 因 子 で あ. フェ ロ ン と リバ ビ リ ンの 併 用 療 法 が 主 流 に な って い る.. る と椎 定 さ れ た.こ. 興 味 深 い こ と にHCVが. の 因 子 は ク ロ ロ フ ォル ム処 理 で失 活 一217一. 発 見 され る前 に す で に 非A非.

慶慮医学. HCV. 成19年12月). IRES. 枇1 ⊥口 3. (A). 84巻4号(平. ノ ムRNA. 5'. タンパ ク質 暁 み枠(ORF). 一. 1脇 纐 前駆体 タンパ ク質. c. El. 領域. NS4B E2. NS2. -一 一. NS3. NSsA. 母 セ リン プ ロテ アー ゼ(ウ. く ×}. 凹回 回. NSsB. NS4A. シグナルペプチダーゼ(宿 主由来} 一. 〈〉 ◇. ＼. 非構 造(NS)タ ンパ ク質 領 域. P7. (B). 3ロ. A HCVゲ. イル ス由 来 〕. 》》 》. 》. 口回 匝]口 口回[NSsB] ・7it[NS4A. NS4B. 金属依存性プ ロテアーゼ (ウイルス由来) 図1. ,/VHCVの. ゲ ノム と コ ー ドさ れ る 前 駆 体 タ ンパ ク 質.1lCVlb型. のHCV. RドAゲ. ノム と そ こ に コ ー ド. さ れ る 前 駆 体 ポ リ タ ン バ ク 質 の 構 造 を 示 し た,内 部 リボ ソ ー ム 挿 入 部 位(lRES)は5'非 翻 眠 領 域,3'X は3'非 翻 訳 領 域 に#在 し ゲ ノ ム の シ ス 因 子 と し て 働 く.前 駆 体 ポ リタ ン パ ク 質 の ア ミ ノ(NH2)末 端側 は ウ イ ル ス 粒 子 を 構 成 す る3租 顛 の 柵 造 タ ンパ ク質(コ ァ:C,エ ン ベ ロ ー プ1:El,エ ン ペo一 プ2: E2)か ら成 る,カ ル ボ キ シ(COOH)末 端 側 に は ウ イ ル ス 遺 伝 子 複 製 に 機 能 す る 非 構 造(皿onstructural: NS)タ ン パ ク貿 群(NS2, NS3. NS4A, NS4B。 NSsA. NSsB)が コ・ 一 ドさ れ て い る. tB}前 駆 体 ポ リプ 0テ イ ン は プ ロ テ ア ー ゼ に よ リ切 断 を 受 け て 個 々 の ウ イ ル ス タ ン パ ク 質 に な る.宿 主 細 胞 小 胞 体 の シ グ ナ ル ペ プ チ ダ ー ゼ に よ る 切 噺 部 位,ウ イ ル ス 由 来 の 金 屈 依 存 性 プ ロ テ ア ー ゼ と セ リ ン プOテ ア ー ゼ の 領 燵 と 切 断 部 位 を そ れ ぞ れ 示 した.. B型 慢 性 肝 炎 患 者 に 対 して イ ン タ ー フ ェ ロ ンが 効 果 的 で あ る こ と が 明 ら か に さ れ て い だ1. HCVの. を格 段 に上 げ る ため の投 与 方 法 等 が 明 らか に され る と期. 発 見 後 は,イ. ン タ ー フ ェ ロ ン投 与 に よ る治 療. 評 価 に ウ イ ル ス(RNA)景. を 指 標 に した 臨 床 研 究 が 進. み 治 療 法 も改 善 さ れ て き た.し. か し,HCVに. イ ンター. フ ェ ロ ンが 有 効 で あ る 事 に 対 す る 情 力 的 な 研 究 は 後 に 述 べ るHCVゲ. ノ ム が 自 立 的 に 複 製 可 能 な 細 胞(レ. ン細 胞)が. 1を 優 位 に す る,{2}ウ. 抑 制 す る,㈲ る,(4)細. て い る が71,こ 者 のHCv最. れ らの う ち,ど. 慢性肝 炎患 っきり. ン タ ー フ ェ ロ ン 単 独 投 与 に お い て,治. した 患 者 の 約30%近. 療. くが ウ イ ル ス を 完 全 に 排 除 で き て. ン タ ー フ ェ ロ ン と リバ ビ リ ンの 併 用 療 法 に お. い て は さ ら に 高 い 割 合(約50%)の 除 が み ら れ る.今. 後HCVに. 用 い た薬 剤 作 用 の 評 価 は今 後 のHCVの み な らず,HCV感. れを. 基 礎 的 な 研究 の. 染 に よ り苦 しん で い る患 者 の救 済 の. た め に極 め て 重 要で あ る.. ノ ム と ウ イ ル ス タ ンパ ク 質 の 発 現. HCVの. ゲ ノ ム 構 造 お よ び ゲ ノ ム に コ ー ドされ て い る. タ ンパ ク質 の 産 生 機 構 の 概略 を 図1に 示 した.. が あ る とさ れ. を 下 げ る の に 作 用 して い る か は,は. して い な い.イ. い る し,イ. の 機 構 がC型. 増 殖 複 製 系 の 開 発,そ. 疫系に働 き. イル スポ リメラーゼの活性 を. ー ル を ドげ る,等. って,HCVの. HCVゲ. ウ イ ル ス 核 酸 に 取 り込 ま れ て 変 異 率 を 上 げ. 胞 内 のGTPプ. 待 さ れ る.従. プ リコ. 樹 立 さ れ て か らの こ と で あ る,. リバ ビ リ ン の 抗 ウ イ ル ス 作 用 と して,U晩 Th. よ う な機 構 で作 用す る かが は っ き り分 か れ ば,治 療 成 績. 患 者 で ウ イ ル ス排. 対 して これ ら の 薬 剤 が ど の 一218一. (1}HCVゲ HCVの. ノ ムRNAの. 構 造 と機 能. ゲ ノ ム は 長 さ 約9,500ヌ. プ ラ ス 鎖RNAで し た 後 に,こ. あ る.つ. ク レ オ チ ドか ら 成 る. ま りHCVが. 宿 主 細 胞 に感 染. の ゲ ノ ム は す ぐ に 細 胞 質 内 でmRNAと. て 機 能 し,HCVタ ノ ム 中 に は 約9.000ヌ. し. ンパ ク質 の 産 生 が お こ な わ れ る.ゲ ク レ オ チ ド に わ た る,最. ン パ ク 質 読 み 枠(ORF:open. reading. frame)が. 大の タ 存在.

下遠 野:C型. ucv IRES. ＼. ノム 催A. 5.. 構造タンパク貿領域 一 El. C. 5,. 図2. U領. Site:IRES))が. NS4A. NS4B. I RES. HCVゲ. 感染性HCVゲ. に 存在 リ. 次構造 が. HCVは. ヒ ト,チ. ンパ ン ジー に 感 染 し増 殖 す る こ とが. 最 近 に な る ま で 待 た な けれ ば な ら な か っ た.1999年 な りHCVゲ. れ た こ と に よ り,ゲ ノ ム複 製 の 分 子 機 構 が 解 析 出 来 るよ う に な っ た.こ の 系 は ウ イ ル ス 粒 子 を 産 生 で き る系 で は 染 か ら ウ イ ル ス の放 出 まで の 全 て を解 祈 で. き る もの で は な い が,ウ ンパ ク質 の ウ イ ル ス増 殖 に於 け る機 能. ウイ ル ス タ ンパ ク質 は全 部 で約10種 ち3極 類 は粒 子 構 成 タ ンパ ク質(構. イ ル ス ゲ ノム 複 製 に分 子 生 物 学. 的 な手 法 を 導 人 で き る よ う に した.一 方,2006. 類 あ り,そ の う. 造 タ ンパ ク質),残. に. ノ ム が 自立 的 に 復 製 す る培 養細 胞 が 樹 立 さ. な い ので,感. ゲ ノ ム の 複 製 に 必 須 で あ る こ と が 分 っ て い る1。}.. (2}HCVタ. ノムの構築. 知 られ て い る もの の,培 養 細 胞 を 用 い た感 染 系 の 確 立 は. Ribosome. 富 む 領 域(ポ. の 保 存 さ れ たRNA高. ノム自立複製細胞の樹立お よび. ク. その 下 流 に塩 基 配 列 が 保 存 さ れ た二 次 構 造. を 持 っ 領 域 か ら な る.こ. NSsB. NSsA. の部分 には. 存 在 す る9). ORFの3'側. 翻 訳 領 域 は ウ リ ジ ン(U)に. 域)と. NS3. NSsB. 樽5A. プ リコ ンの構 造.概 酪 は分 中 に記 載 した.. 翻課 開始 に関 わ る. 部 リ ボ ソ ー ム 挿 入 部 位(lnternat. す る3'非. EStCV. に 隣 接 して341ヌ. 翻 訳 領 域 が あ り,こ. 榎 製 に 関 わ る 領 域 とORFの. Entry. NS4B. イ ル ス タ ンパ ク質 は す べ て こ の 領 域 に コ ー. レ オ チ ドか ら な る5'非. 領 域(内. NS4A. ↑. IRES. 自立 禎 製可能 なHCVレ. ド さ れ て い るB〕.そ のORFの5'側. RNAの. 説. NS2. Neo「. ↑ HCV. して お り,ウ. P7. 3. 郡 Ψ サ ブゲ ノム レブ リコン 剛A. E2. 非牌遭タンパ ク質甑域 3. HCVゲ. 肝 炎 ウイ ル ス感 染 に 関 連 す る肝 疾 態 の 予 防 に 向 け て. り,劇 症 肝 炎 患 者 か ら感 染 性 を 有 す るHCVゲ. '・Fにな ノム が 単. 離 され,感 染 の 初 期 か ら粒 子 の 放 出 まで を 追 跡 が 可 能 に. りが感 染 細 胞 内 で ウ イル スの 複 製 に 働 く非 構 造 タ ンパ ク. な っだ3,.. 質 で あ る. 構 造 タ ンパ ク質 の ひ と っ,コ. アはRNAゲ. ノ ム と会 合. して ウ イ ル ス粒 子 に取 り込 み,ウ イ ル ス粒 子 の 中 心 構 造 を形 成 す る と考 え られ る.後 で述 べ るが,コ. ア は油 滴 と. 会 合 す る こ と に よ り,感 染性 ウイ ル ス粒 子 の 産 生 に も寄 与 して い る。 ま た外 膜 タ ンパ ク質 で あ るE1とE2は. 多. (1}HCV遺. 伝 子 複 製 単 位(レ. 1999年. にHCVの. プ リ コ ン)の. ゲ ノ ム の 一 部 分 が 自 立 複 製 し続 け. る 培 養 細 胞 が 樹 立 さ れ た13'.C型 HCVゲ ン)の. 樹 立. 肝 炎患 者 か ら得 た. ノ ム を も と に し て 構 築 し た 複 製 単 位(レ 構 造 を 図2上. に 示 す.こ. のRNAか. プ リコ. ら構 造 タ ンパ. 量 体 を 形 成 し,脂 質膜 で 覆 わ れ た ウイ ル ス粒 子 の 表 面 か. ク 質 を コ ー ドす る 一 連 の 領 域 を 除 き,そ. らスパ イ ク状 に 突 き出 た 形 で 存在 す る と考 え られ る.っ. 物 質 ネオ マ イ シ ンを無 毒 化 す る た め に 機能 す る ア ミノ グ. ま りElとE2は. 1,コ シ ド リ ン 酸 基 転 移 酵 素(AGPT)遺. 宿 主 細 胞 の 細 胞 膜 表 面 に 存 在 す る受 容. 体 と結 合 す る こ とでHCVの 考 え られ る.E2と 81,LDL(低 Density. 感 染 ス テ ップ で 機能 す る と. 結 合 す る受 容 体 の 候 補 と して はCD. 比 重(低 Lipoprotein)受. L・SIGN/DC・SIGN受. 密 度)リ. に 置 き 換 え,さ. す るIRESが. 容 体,ス カ ベ ン ジ ャー受 容 体,. 容 体 な どの 報 告 が な され て い るが,. コ ンRNAを. virus:EMCV)遺. 挿 入 し た の が 図2下. パ ク 質 はEMCV. IRESを. 肝 が ん 由 来 のHuH・7細. 巾 で 効 率 良 く 自 己 複 製 す れ ば,ゲ に 産 生 さ れ るAGPTに. p7以 外 の 非 構 造 タ ンパ ク質 の 主 た る 役 割 は ウ イ ル ス ゲ. ン抵 抗 性 を 獲 得 で き る .こ. る.. 複 製 が 可 能 なHCVゲ 胞 が 樹 立 さ れ た.こ. 一219一. イ ルス タン. 用 い て 産 生 さ れ る .本. ウ イル スの粒 子 形 成 の た め に イ オ ンチ ャネ ル を 形 成 す る. 製 複 合 体11))を 構 築 す る こ とで あ. 伝 子 に由来. で あ る.ウ. 感 染 に関 す る詳 細 な メカ ニ ズ ム は明 らか に な って いな い.. ノ ムを 複 製 す る場(複. 伝 子(Neo'). らに そ の 下 流 に 脳 心 筋 炎 ウ イ ル ス. (encepharomyocarditis. ポ タ ンパ ク 質Low. の 代 わ りに抗 生. よ っ て,そ. レ プeJ. 胞 に 導 入 し,そ ノ ムRNAか. の. ら持 続 的. の細 胞 は ネ オ マ イ シ. の よ う に して 細 胞 の 中 で 自 己. ノ ム(レ. プ リ コ ン)を. 維 待 す る細. の 実 験 系 か ら非 構 造 タ ンパ ク質 の う.

慶慮医学. ち,NS3か. らNS5Bま. の 良 いHCVゲ. 84巻4号(平. で の タ ンパ ク 質 が あ れ ば,効. 率. ノ ム 自 立 複 製 が お こ な わ れ る こ とが 示 さ. れ た.. 成19年12川). る 因 子 で あ るCaveolin-2が. 検 出 さ れ た た め,. 複 製 は 細 胞 内 ラ フ トで お こ な わ れ る可 能 性 が 示 唆 さ れ る. ま た,NSsA,. NS5Bと. 椙 互 作 用 す る細 胞 姓 因 子 と して. 報 告 の あ るhVAP・33(human {2)HCVレ. vesicle・associated. プ リ コ ン裡 製 細 胞 実 験 系 の 進 歩. これ ま で に い くっ か の グ ル ー プ か ら 同 様 な レ ブ リ コ ン 細 胞 が 樹 立 さ れ て い る16 171.ま. た 最 近 で はAGPTの. 代. homologue. membrane. protein)も. のRNA複. 細 胞 内 で 強 制 発 現 さ せ る と,NSタ. の 後,サ. ブ ゲ ノ ム レプ リ コ ンに 構 造 タ ン. 細 胞 内 のHCV hVAP・33がHCVの. な 細 胞 か ら で も感 染 性 ウ イ ル ス粒 子 の 産 生 は 見 られ な か っ た が,昨. 年 に な り劇 症 肝 炎 患 者 か ら 単 離 した ゲ ノ ム が 感. 染 性 を 示 す こ と が 明 らか に な っ た12'. HuH・7細. ンパ ク 質 が 界 面 活 性. 剤 に 不 溶 性 の 画 分 か ら 可 溶 性 の 画 分 へ と 移 行 し,さ. の 自 立 複 製 細 胞 も 樹 立 さ れ た 卿.し. の様. RNA景. 考 え ら れ る が,そ ま た,コ. も 減 少 し た.こ. い っ た ヒ トの. らに. の こ と か ら,. 複 製 複 合 体 形 成 に 関 与 して い る と の 分 子 機 構 は 明 らか に さ れ て い な い.. レ ス テ ロー ル 産生 反 応 経 路 に関 与 す る酵 素 で. あ る3・methyl・3・methyglutaryl. 胞 以 外 にHepG2やHuH・6と. 同 搬 に,界. ド ミナ ン トネ ガ テ ィ ブ 体 を レ プ リ コ ン 複 製. パ ク 質 領 域 を 挿 入 した 完 全 長 か ら な る レ プ リ コ ンRNA か し な が ら,こ. kDa. 細 胞 内 小 胞 輸 送 に 関 与 す る こ と が 知 ら れ て お り, hVAP・33の. さ れ て い る.そ. of 33. 面 活 性 剤 に 不 溶 性 の 画 分 に 検 出 さ れ た21).hVAP・33は. わ り に ホ タ ル ル シ フ ェ ラ ー ゼ の 遺 伝 子 を 種 入 し,一 一過 性 製 を ル シフ ェ ラー ゼ活 性 で 検 出 す る 系 も作成. HCVの. CoA. 異 的 阻 害 剤 で あ る ロ バ ス タ チ ン が,レ. reductaseの. 特. プ リ コ ン複 製 細 胞. 肝 細 胞 由 来 の 培 養 細 胞 や 肝 臓 以 外 の 組 織 に 由 来 す る,腎. に お い てHCVの. 臓 由 来HEK293細. 流 で 生 じ るテ ンペ ル ア ル コー ル の 一種 で あ る ゲ ラニ ル ゲ. 胞,子. 宮 頸 部 が ん 由 来 のHeLa細. マ ウ ス の 肝 が ん 由 来 細 胞 株Hepa. 1-6を. 胞,. 用 い た場 合 で も. 複 製 を 阻 害 す る22i.こ. ラ ニ オ ー ル に よ る タ ン パ ク質 の ゲ ラ ニ ル ゲ ラ ニ ル 化 修 飾. 同 様 の レプ リコ ン複 製 細 胞 が 樹 立 で き る こ とが 示 さ れ. がHCVの. た19・ 1。1.し か し,HuH・7以. プ リ コ ン 複 製 細 胞 を 抗NS5A抗. 外の細 胞 では細胞 内で維 持. さ れ て い る レ プ リ コ ンRNA量 て 著 し く少 な い こ と か ら,す. はHuH・7細. 胞 に比 較 し. べ て の 細 胞 でHuH・7細. 胞. の反応経路の 下. 複 製 活 性 に 重 要 で あ る こ と が 示 唆 さ れ た.レ. る と,細 RNAの. 体 を用 い て 免 疫 染 色 す. 胞 内 に ド ッ ト状 の 構 造 体 が 検 出 さ れ,HCV 局 在 と一 致 す る こ とか らこの ドッ トは複 製 複 合. と 同 様 の 効 率 で 複 製 が お こ な わ れ て い る わ け で は な い.. 体 で あ る と 考 え られ て い る.ゲ. こ れ ら の 結 果 は,HCV. 阻 害 す る 薬 剤 で レ プ リ コ ン 複 製 細 胞 を 処 理 す る と,. RNAゲ. ノ ム の 複 製 自身 は ヒ ト. の 肝 細 胞 に 特 異 的 な も の で は な い が,複. 製の効率は細胞. NS5Aの. ド ッ ト状 の 構 造 体 が 消 失 す る こ と か ら,ゲ. ニ ル ゲ ラ ニ ル 化 修 飾 はHCVの. の 種 類 に よ り大 き な 違 い が あ る こ と を 示 して い る.. ラニ ル ゲ ラニ ル 化 修 飾 を. して い る 可 能 性 が 示 唆 さ れ た.HCVタ. HCVレ. プリコン複製細胞を用いた. HCV複. 製制御因子 の解明. た め に,こ. プ リコ ン自立 複 製 細 胞 系 を 用 い て 抗HCV剤. の 探 索,あ. の 修 飾 を 受 け る分 子 は宿 主 タ ンパ ク質 で あ る. 定 さ れ て お ら ず,ゲ. る い は ウイ ル ス複 製 を 制 御 す る細 胞 側 因 子 の. 解 析 が 可 能 で あ る.ま た,こ れ ま で にHCVタ. 阻 害 候 補 因 子 の 検 証 に も有 用 で あ る.以 下 に ウ イ ル ス ゲ ノ ム複 製 を 制 御 す る こ とが明 らか に な った細 胞 側 因 子 の. (2)タ. タ ンパ クあ る い は コ レス デo一 ル代 謝 の 制 御 に関 製制椥因子. HCVゲ. ノム 複製 制 御. 分 子 薬 理 作 用 がす で に知 られ て い る化 合物 や 薬 剤 の 中 ノ ム複 製 活 性 に 影 響 を 及 ぼ す も の を 見 い だ. HCVゲ. 合 物 の 既 知 の 薬 理 作 用 を手 が か りと して,. ノ ム複 製 を 制 御 す る細 胞 性 因 子 の 同 定 が 可 能 に. な る.そ の 様 な手 法 に よ り,現 在免 疫 抑 制 剤 と して 広 く ョ糖密 度 勾. 配 を 用 い た 超 遠 心 法 に よ って 分 画 す る と,HCV お よ びNSタ. ラ ニ ル ゲ ラ ニ ス化 修飾 が ど の よ うに. ン パ ク質 の 高 次 構 造 の 変 換 に 関 わ る 因 子 に よ る. せ れ ば,化. レプ リコ ン複 製 細 胞 の 膜 画分 を調 製 し,シ. の 様 な 細 胞性 因 子 は 未 だ に 同. 複 製 複 合 体 の 形 成 に 関 与 す る か は 不 明 で あ る.. に,HCVゲ. 幾 っ か を紹 介 す る.. 迎 す るHCV複. か し,そ. ンパ ク質. が 持 っ 酵 素 活 性 を 指 慷 に して得 られ て い る ウ イ ル ス複 製. {1}膜. ンパ ク質 に は ゲ. ラ ニ ルゲ ラ ニ ル化 修 飾 の コ ンセ ンサ ス配 列 が 存 在 しな い. と 予 想 さ れ る.し. HCVレ. ラ. 複 製 複 合 体 の 形 成 に関 与. 臨 床 で 用 い られ て い る シ ク ロ ス ポ リ ン(CsA;cyclo・ sporin A)がHCVの. RNA. ンパ ク質 の一 部が 界 面 活 性 剤 に不 溶 性 を示. す 画 分 に 存在 す る.こ の 画 分 に は細 胞 内 ラ フ トを構 成 す 一220一. ゲ ノ ム複 製 を 抑 制 す る こ とが 明 ら. か に な っ だ3」,ま た そ の 抗HCV作 (CyP;cyclophilin)のPH害. 用 は シクロフ ィリン. を 介 して 発 郷 さ れ る こ とが.

下垣 野. ウ で ノ レ 了、悪 染 に 閏 辿'it'る1】1=症 患 の1'・ 防 にlt」]け て. (B). 1000. 1 無 へ 〒 魚 く呂閏 ,匂=. (く詫配 一躍一〇一 駈昌 ㌧h二〇ε. (且). c卜1踊1=炎. TLtSsA. PDI. contrel. 100. 10 1 FtSFa. 1 0. 0.菖. 1. t.5. 2. 2.5. 3. 薬 剤 の 鴻 度(P9/ml). (C}. CsA. レプ リコ ン細 胞. FK506. OO噂出﹂. く號9. 昌泥≒. [oh芒 むu. 卜﹂ ヨ}H. 丼SsA,. ,N'SsB. β一actin. 図[s み. IFI刈 a{川OO. HC>RNA量. をR丁. FK[SC6{!μgみ7、1〕. CsA{. ・PCR法. て二 定 量 し た.〔 臼}およ び[C:1未. Ji CJ/m1),. 5側{μg/rnl)荘. の 蜘 割. さ ま ざ ま な 用 撞 で 処 理 し た レ ブ リ]ン. 処 理. CcontrDl).. lFN. 」SsA , T{SsBタ. a. fm. ノ ム 複:製. い る こ と が 示 唆 さ れ た.. シ ク ロ ス ポ リ ン に よ るIICVゲ C5Aの. 〔,yク ロ リ ム ス). ヨ),同. 擾 蛍 光 法1:B,1およ び イ ム. シ ク ロ ス ポ リ ン の 抗HCV作. 用 の 分 子 機 構. .ま. 主 要 な 分 」二が 知 ら れ て. す 細 胞t'k. tra鵬iSOInernse(P1'latic}で. 」 司 依 存 的 て あ る.. 様 に 免疫 抑 制 剤 ラバ マ. のPl]rase'舌{生. さ ら に 形 成 さ れ たCsA〆C}・P複 '{一. よ う な 抗HCV. 一 ノ † いt-[ゴ. 合 し,こ. peptidyl. 舎"cは. るCNの. れ に 上 る 免 疫 応 答 の 抑 制 を 導 く,ま. C5Aに い たin. よ る 抗HCV効 ll加oウ. 送. 聚 はHCV惑. 染 患 者 のIll[旋を 嘱. 〔CN〕. に 辛、 止1. ク ン バ ク 質 で あ るP糖. よ. 不 活 化,そ. たCStXは. タ ン パ'ク 質(P-9P)の. 細 胞 膜 輸 機 能 を. もi二 」i'占す る.. イ ル ス 感 染 実 験 で も み ら れ る . HCV:1ホ. さ 主 ざ ま なC鵠A誘 部 を 欠 失 し て い る,を. 胞 をc5A処. 7';Jコ. H(=Yの. ホ スフ ァター ゼス ー. 【;且 害 は 〒占黒 血{」 に 転 写 囲 ・1'・NF-ATの. 染 許 容 細ll抱の ひ と っ で'あ 凸 ヒ ト]M:臓ltlll胞 州I PH5(=1・18細 理'・i一 る と ウ イ 串 ス ゲ'ノ ム の 増 福 は .見ら れ ノ.」. か 一 ・た 、 以 上 の 結 栗 に よ り,培. ン. を 消 失 さ せ る.. ll嗣 『る 加 レ シ ニ ュ ー リ ン. ま1'〕免 疫 抑 制 剤 の['itで もCsAが を もつ と 考え られ る、. cis/. の ホ ス フ ーr'クー ゼ 活 性 を 阻i害 す る.CsAに. イ シ ン処 理 に よ っ て も 大 き な 変 化 は 見 ら れ な か 「 た.っ 特 翼 的 にtr」`HCV効lll. pmlyl. あ る シ ク ロ フfリ. (CyP)にIILI:接i{=」1合L,そ. :まや1.二り 免1受釦llllq:v〒]とLてr,1 .']. 床 で 用 い ら れ て い る 薬 剤 で あ る がCsAの 効 果 は 観 察 さ れ な い(図. 梱 胞 中 の. OsA{1μg〆ml}.. これ ま で の 酬一 究 に よ りCsAの. ノム複 製 の 抑 制. 効 果 は 用{1七依 存 的 で あ り,時. FK506. L」/m1),. ン パ ク 質 記{}免. い る(図4A)一':'=. 申. (100. PDFI:E引1}」よ び β 一acti[【O:ll≡tコン ト1]一 ノレと し'〔 用LLI三 苧田胞 窄 ゴ=タ ニ ノ!{ク セ{」 、. れ ら の こ と よ1,CyPほHGVゲ. を 促 追i的 に 制 卸Lて. FK. を 処 理 し1三 レ プ リ コ ン 柘i暑 中 のHCV卜. ノ プ ロ ・y卜i去i〔1τ 隅負出 し た .. 示 さ れ た.こ. シ ク ロ ス ポ リ ン に よ る[lc、TM製. U/ml〕,. 導 体. 用 い,併C5A誘. ン1'1il抱【leの1・IC、'RNA■. 1農妖 を 謂 べ る こ と に よt). 養 紐1砲 に お い てCsAほ. デ ノ ム 複 製 を 抑 制'lt'る能 力 を も っ と 汚え ら れ た.. 誘 導 体 の:3標 C}'Pi;且1聾 CsAと. 221. 〔.L記t乍H]の. 一一部 あ る い は 令 導 体 処 理 後 の レ. ■1お よ びHCVタ. ,抗HCV効. 的 と 比1殴 す る と,C5Aの. 果 の'k'無. ンパ ク を 評 価L、. 抗HCV効. を 介 し 一 ご 発 拘{≡き れ る こ とtii:i:1][lji Lノ.二 (図4B). は 別o-)分r'胃1格. を も 一'JたCyP. l11[害1卉 」fでvhる. 果 は . →ト ン.

慶 慮 医学. (A). 84巻4号(平. 成19{? 12月). シ ク ロ ス ポ リ ン(CsA). 一. シ ク ロフ イ リン 噂糖 タ ンパ ク質. HCVゲ. 1鰐. ノム. ハ 纏1Lノ)^^^ノ. (CyP). (FgP). ＼一 カ ル シニ ュ ー リン. P. ti:-AT. (B). ーQ畷. 十. 十. 一. 十. 十 8. 3. 十. 2. 7. P-9P阻 害 活 性 十 1. 一. 十. 十. 十. 十. 6. CN阻 害 活 性. 一. 十. +. 十. 5. Cyp阻 害 活 性. 十. 十. 十. ⑧ 十. 抗HCV活 性. 免疫応答遺伝子. 4. 図4 CsAの 働 き お よ び, CsA誘 導 体 に よ るHCVゲ ノム裡製 抑制 桝 CsAの 細 胞 性 棟 的 因 子 と して の シ ク ロ フ ィ リ ン(CyP),カ ル シニ ュ ー リ ン(CN), P穂 タ ンパ ク質(P-gp). CyP`9 peptidyl・prolyl cis・trans isomerase活 性 を 有 す る 酵 累, CNはNF-ATの 脱 リ ン 酸 化 を 触 媒 す る脱 リ ン 酸 化 酪 素.P・gpは 細 胞 膜 トラ ン ス ポ ー タ ー で あ る. NF・ATはCNの 働 き に よ り 転 写 活 性 化 し,免 疫 応 答 に 亜 要 な サ イ トカ イ ン類 な ご を 産 生 す る.CsAはCyPに 直 接 結 合 し,そ の 酵 素 活 性 を 失 わ せ る. CsA/CyP複 合体 はCNと 結 合 し,脱 リ ン酸 化 酵 素 活 性 を 阻 害 す る.ま たCsAはP・gpの 機 能 を も 阻 晋 す る. HCVゲ ノム裡製 に は,CyPが 亜 要 な 役 割 を 果 た し て い る こ とが 示 唆 さ れ た.(B)CsA(1)お よ びCsA誘 導 体8℃H・MeBmtLCs (2),MeAla6-Cs(3)t D-lyse-Cs(4), MeVal`・Cs(5), cyctosporin H(6), NIM811(7)、 PSC833(8)の 抗HCV 効 果 お よ びCyP, CN, P-gpへ の 阻 害 効 粟 の 有 無 を 示 した. CyP阻 害 作 用 と抗HC>効 果 に 相 関 関 係 が 見 られ る 点 に 注 目.. グ リフ ェ リンA,Bに つ ま りCyPの. よ って もHCV複. 阻 害 はHCV複. 製 は抑 制 され た.. 分 か の タ ンパ ク質 は油 滴 に も局 在 す る こ とが 分 か った.. 製 を抑制 す ることが示 さ. れ た.ま た細 胞 の 内 在性CyPの. 発 現 をRNAi法. そ の際 に これ まで 油滴 へ の局 在 が 報 告 され て いな か った. によ り. 抑 制 す る とや は りHCV複. 製 が 抑 制 され た.以 上 の こ と. よ り,細 胞 性CyPはHCVゲ. ノ ム 複製 を 促 進 的 に制 御. 非 構 造 ウ イ ルス タンパ ク質 も油 滴 に局 在 す る ことが わか っ た.そ. こで コ アが 欠失 して い る ウ イ ル ス レプ リコ ンを 導. 入 した細 胞 で の ウイ ル ス タ ンパ ク質 の 油 滴 との 会 合 を 調 べ る と,今 度 はど の ウイ ル ス タ ンパ ク質 も油 滴 との会 合. して い る こ とが 明 らか に な った.. は見 られ な か うた.こ の こ とか ら,コ アが 他 の ウイ ル ス ク ンパ ク贋'の油滴 との 会 合 に重 要 な働 き を して い る と考. 感染性 ウイルス粒子 の産生には 油滴の存在が重要である. え られ る.し か し,別 の実 験 か ら,コ ア と非 構 造 タ ンパ ク質 との 直接 的 な 会 合 は な い こ とが 分 か って い るの で,. HCVタ. コ アに よ る非 構造 タ ンパ ク質 の油 滴 へ の 誘 導 は直 接 的 な. ンパ ク質 の 細 胞 内 局 在 を 調 べ る こ と に よ り,. ウ イ ル ス複製 の た め に 重 要 な細 胞 側 要 因 を調 べ る こ とが. 働 きで は な い,感 染性HCVゲ. 出 来 る.HCVタ. の 油'滴の 周 りに は 膜 成 分が 密 に 分布 して い る.お そ ら く. る,ウ. ンパ ク質 の 多 くは 小 胞 体 に 会合 して い. イ ル ス タ ン パ ク 質 の 中 で,コ. この よ う な膜 成 分 を 介 して,ウ. ア は小 胞 体 だ けで な. ノム が 複 製 して い る細 胞. イル ス タ ンパ ク質 が 油 滴. く油 滴 あ る い は ミ ト コ ン ド リ ア に も会 合 す る と い わ れ て. を囲 む 領 域 に集 め られ る もの と考 え られ るが,詳 細 は不. い る26-2t'}.最近 に な り 樹 立 さ れ た 感 染 性HCVレ. プ リコ. 明 で あ る.油 滴 の 周 りに誘 導 さ れ る ウイ ル スタ ンパ ク質. ン を 用 い て 細 胞 内 ウ イ ル ス タ ンパ ク質 の 局 在 を 観 察 す る. は機 能 的 な複 製 複 合 体 を 構 築 して お り.ウ イ ル スゲ ノム. と,や. の合 成活 性 が 小 胞 体 膜 の 他 に油滴 周辺 で も観 察 され る.. は り大 方 の タ ン パ ク質 は 小 胞 体 に 局 在 す る が,幾. 222一.

fk一 三血 皐=]= ∫ C. 」lltjjモ=:]と1,. イ ∫1'. -a'幽 r4ヒ 「こ 斐1」虫 す. る 」Fト=IJ「 ミ_!11_L び, 一】, ;ノi{ 二 rゴ1睾 { , 一ご. (B}. 〔A}. 野 生 型HCV. 一Cete. x151. Eし旧A. JFHIWT. ,ヴエ)[ 三. 1:ヌ===. s二il気. {il LI ,莞. 口旨 ⋮ ﹂﹁. .d:"三 ,、 琵] 1,・で ' ..1;. ・:, .2㌻. 「1「 「,コ 由錦 ・ 町. ..』. t%. mgf9εd 十. 十. 画 ■. 嗣. -. 十. 十. 1. I b. 卿. a. 一. 十. ■. 十 ■. 層. ￠. ■. 評事 ・. 帽. F=﹄﹁. ﹂ 古﹂ 二耳︼登 軋 工 ⊥ 邑 う `. 油 滴 に・tD 会コ合 できなJFH1 い変 異HCV 崩 軸. 欄. 一. ■. ■. ポ. 十 十. 十. セ ヨ ';';,1. 暮1 置,. d. ■. -. 十. 十. mer9εd. 一. ε. 十 十 十. 隔=・. 一. .. 占十. f. ヤ「. 一一`. 璽. †+ 十. 11iZ. ` 「es. 》.. 1[e. 11, 聖t] 血 「牲句. 11f. 1:」. 図5 1忙 、'感崇 纈 胞 か ら の ウ イ ル ス 拉 子 の 産 生 削1し ょ 塘 密 産 勾 配 趣 心 に よ 愚 解 折 、 上 の 図 は 野 生 型 の トfCVゲ ノ ム ωF矧WT,を 導 入 した梱 胞 一 と清 中 の ウ イ ル ス植 子 の 解 析.倶 の 重9は ウ イ ル ス 墾 を コ ア タ ン バ ク質 の 畢 で 示 し た.浮 遊 密 度1.15に 大 部 分 の ウ イ ル ス が 演 出 さ 札 る 力堤1耳 染亨 生(赤)は 后=い,赤 の 樟 は:1曄耳罰生 を 示 す 、'滋 染 性 を示 ず ウ イ ル ス 植 子1ユ 浮j故密 魔 が 僅n、に 小 さ い 画 分(浮 遊 密 厘 がT.12〕1こ 位 置 す 凸.下 の ・図 は ヴ イ ル ス タ ン バ ク黄 が1由両 に 会 合 出 来 暮 い 変 異HCVザ ノ ム く」F田 二晶")を 導 λ した と蹄 包の 上 請 に 肛 出 ≡ ヨ1る 拉 子 の し'塘 ≡茅 窪勾 配 通 心 の 枯 果 膏 示 す.班 垂 信 ウ イ ル ス 拉 子 の 産 生 が 見 ら れ な い 弔 に 注 目,旧:1コ ア タ ンバ ク 質 に よ る 油 滴 の 増 加.野 竺 型HGVゲ ノ ム(、,FH1)1下 の3枚 の パ 車 ル は 同U視 卦 を 示 可',左 か ら 油1麿1{LD)(d), HCVのNS5瓜 タ ン パ ク 賃 σ)存在(e)e5よB: dとe を 重 ね 自 わtゴ た 写 真 〔f)を示 し た1,罷 よ 口=コ ア を コ ー1;す る 頒 域 が 欠 失 し て い る ゲ ノ ム(JFHI'功(上 の3枚 の バ ネ ル.同 し視 野 を 胆 監 し て い る.並 び は`ドの パ ‡ ル と「 司 じ)卍}導 入 し た 迎 胞 の 染 色,石 の バ ネ ル こDAPI 三 幹邑 偶 色)に † ど 示 し た 乃 の が ワ イ ル ス ゲ ノ ム が 甚i凱し て い 臣 把 ㌍一.コ ア が 欠 三 モして いるケ ノム に比 べ て野 生 型 の ゲyム で は,油 滴 〔左 の バ 皐 ル 、LDど 示 した)の マ ー カ ー シ ク フール が 強 く な,て い る の に 注 団.. 油 滴 に 会 合 出 来 な い1・K=V変PJ?一 ・ ・rル ス1、t〔 子 の 産 生 は 見 られ な い. ゲ ノム か ら は感 染性 ウ. ,. Lか. し,非. 感 染 性 執1覧. 成 さ れ た111性 脂 肪 が 集 ま っ て で き る,い. ゆ る 粘1胞 内 のll旨肪 レ=,貯噸拮ll亙 で あ る か,近i醤. わ. 由滴1' .]身 か1111. 胞 内 の 輪 送 に 能 動 的 に 関 わ っ て い る 上L・ う 報 告 が 出 さ れ, il[1滴 の'活 た な 磯 能 と し て 注L]さ 増 殖 に お い て1ま,1由. れ て い る':'II.11CV. か は 今 後 の 、{留 垣 で あ る か,例 る い は 叫冶. I惑 染. 滴 が1直 染 性 ウ イ ル ス 誼 子 産 生 に1「1要. な 働 き を し て い る と 考 え ら れ る,モ. 場,あ. し た ウ'f」 レ スtll`子 が 雑1胞 の 外1訪. 簡 の 産 生 が 増 尊11Lて. し か し,. これ か ら の研 究 に待. 産 生 す る た め の 重1些 な 機 構 の ひ と つ で あ ろ う と 汚え て い る,そ. の 桔 渠,細. 胞 内 の 脂 肪 硅 力{増え る`ilに な る が.個'. 体 レ ベ ル で は そ れ が 脂 肪 症 と い う 叛 患 に な り.モ. の こ と. ゐ瑚[t・fEかん のL要1ヲ{「 の ひ と つ1こ な る と ・ 暫え る,. お わ りに. 1・ICV感 染 に よ り が ん を 発 班11'る か,そ. 要田ll包で. コア か 油滴 の 産 生 に関 わ 一 一). て い る1」1が わ か る. コ ア シ ンパ ク 質 を 発現 一 ・1一 る ト ラ ン ス ジ ェ ニ プ ク マ1'1ス で は.脂. 肪 症 を 発 オ11{する と い う 耗乏告 か.ち る.. で は,脂. 肪 症 山 後 にll干が ん を 発 症 す る,. よ'〕に 説 明 さ れ る の だ ろ う か? 1からT感. い る(図5B),こ. モ のSL,川 胞 に コ ア を ∫}1!生さt±・る と. 見 ら れ る}k. {:・甘 る 二 と か ら,. 複f製Lて:1盛 染 性 ウ イ ル ス 粒Jt・を 効 率 よ く. 烈1さ. ア リコ ン を持. の よ う なilllit茸iの 上噌 加 は コ'}'を クくツミし た レ フ'り=;ン はllLら れ な い.. 加 は.HCVが. え ば ウ イ ル ス 位 チ の 集r〒 の. 感 染 性 ウ イ ル ス 植 チ を 産 生+るHCVレ ,1由. 加 と は]塾J連憧 か あ ∫ 二の だ ろ うか?. れが どん な 働 き なお. れ る た め の 運 搬 の 俊 割 な と'が 考 メーら れ る.. "'"'lltl胞 で 呂. 了 を 発 現 す る 培 養 細1庖 に お け るi:lll滴 の[}1のt'IEii. た な け れ ば な らな いが 、 准 者 ほ コ 了 に よ る油 滴 の 蟻 の 増. 1よ産 生 さ れ て い る(図5A). 1白滴 は,r†. 肪 症 と,ゴ. 二L'}マ ウ ス. この マ ゥ ス の脂. 一2L,:s. の 機 構 は と'め. こ れ ま で の 多 くのli}F究. 染 に よ る肝 臓 の 炎症 を 伴 う障 害 が 病 態 の 進 展 に. 弔:要な 働 き をLて. い る 事1士 明 ら か で・ あ る.そ. れ で は1「{:i;章. 害 と 病 態 の 進 展 に1‡ど の.上 う な 分 一1:的な 昂【llぴ'・ つ きが あ る のたろ ・ うか?. =]一ゴを1輩'L寸 る トラ ン ス ジ.L二. ・'1ク マ ウ. ズ で 兇 ら れ る.il R肪 症.そ. れ に 引 き続 く肝 が ん の 発 症 に は. 炎 症 は 観 寮 さ れ な い.こ. の モ デ ル 疾 患 の 場 合 に は,ヒ. ト. と は か な り 異 な る 機 柑彦一 こ起 こ る が ん の 発 症 を 親 寝 し て い る.1二う に も 思 え る.LかL.,培. 撞 網 胞 で も 観 察 さ れ る=J.

慶慮医学. 84崔41}(平. 成19fl{12月). アに よ る脂 肪 代 謝 の 充進 はII下 が ん も含 め た肝 疾 患 の 発 症. A、Internal. に 重要 な 働 きを して い る と思 われ る.. virus. ribosome. RNA。. 10)Tanaka. entry. site. wiIhin. hepatitis. C. ノt「iro',66:1476-1483,1992. T,. Kato. N,. fOund. aI. Cho. MJ,. Shimotohno. K.. A. novel. ウ イル ス性疾 患 の場 合 に は,ウ イ ル スを 排 除 出 来 れ ば sequencc. 疾 患 か ら解 放 さ れ る.HCV感. 染増 殖 系 を川 い た 抗 ウ イ. virus. ル ス作 用 を示 す 薬 剤 の開 発 が一 層 進 む と期 待 され る.ウ. genome.. the. Biocitem. 11)Miyanari. Y.. Takahashi. 剤 な ど の開 発 は,新 た な抗 ウイ ル スの 標 的 と な ろ う.. BiOPh),s. Hijikata. H,. M,. K.. s吐nlctura量proteins. 献. Mosley. Gitnick. JW,. Werch. JB,. mission. GL,. Stevens. Aach. CE,. Lander. in. JJ.. RD,. Peters. Non・A,. viruses. Szmuness. W,. Weiner. JM,. RL,. non・B. hepatitis. chimpanzces:aprojec10f. transmitted. tlle. study. in. group.」. London. Mihalik. WT.. virus. KB,. PurceU. and. trans・. RH.. non・A,. QL,. Kuo. Houghton. Kamimura. by. non。A,. hcpatitis. B. chloroform.. J,. LR,. a cDNA. non・B. Katayama. H,. T,. Bradley. clone. viral. DW,. derived. hepatitis. Serodiagnosis an. Matsuura. Kikuchi. HCV. hepatitis. core. protein. arecombinant. Y,. S,. of. Saito C. Wages. Krawczynski. KZ,. Y,. Shih. C,Fernandez. from. cell. genome.. Lifson. H,. R{?s. HCV・N. strain. by. disease. Koonin. E,. Yotmg. L,. Kim. association. P.. Morris. et. aL. T,. Hyams. G. T,. Date. genotype KC,. A,. Mullell. Peters. EA.. Treatment. with. recombinant. nary. repor'.. N. virus:a【rans-. DB.. Waggoncr. chronic human. JG. nol1・A,. alpha. Park. V, Y,. non・B. Di. 副. Robert. C. o`acヒion. t「ea1ment. Tam,. 伽f・. of. ribavirin. of. chronic. M,. Oo吐suyama. Liang, iπ 、 the. IICV. N,. Zhi. Ohkoshi. S,. cloning. of吐he. Japanese. Sugimura human. patients Aead.. 9)Tsukiyama-1くohara. Sci,. T,. Shinlotohno. hepatitis with. Ilon『A,. C. K. virus. non-B. Iizuka. Hosaka. hne.. Kato. M,. N。. Miyanari. Y,. derivedゴrom. hepatitis. K.. C. a. virus.」Bf`,chem. Lemon. SM,. Selectable. dicistronic. RNAs. 窟nolecula「clone C. virus. JA, of. Wakita. of. replicate. the. emcient!y. Marcotrigiano. hepatitis. M. T.. C. J, Rice. virus. CM,. genotype. la. Fumsaka. A.. Tokushige. C. Ef「icien吐replication virus. Lohmann. of. s曲genomic. V,. G,. virus. Kaul. Strand. transient. D,. the. replicon.. A,. in. Krieger. N,. Bar吐enschlager. replication. genomes. Kato. T,. M,. Miyamo吐o. Wakita. subgcnomic. Q.. o`. cello. M,. T.. R.. ful1・length. cuIture.ノ;liro',. Zhao. Genotype. repticon. can. celts.∫Bio'C加. Guo. virus. M,. 2D. Molecular. Gao. genome`rom. RNA. Seeger. Z, 2a. Yasui. K,. hepatitis. rcplicate. in. C. HepG2. 川,279:22371-22376,. Replicalion. o「hepatitis. nonhepatic. epithelial. C and. cells.ノllirr}',77:9204-9210,2003. Ai2aki viral. C. in. hepatoma L,. hVAP・33 Proc.. JT,. subgenomes. tween. USA,87:952小9528,1990 K,. M,. replicon. Li. Miyamoto. IMY・N9. 20)Zhu. combi・. hepa吐itis.. cell. 2004. infection。. Y。 Nakagawa. Y,. hepatitis. and. T,. rnouse. Hijikata. Nio. hepatitis. C. Ψirus. Ilepatology,35:篁002-1009,2002 8)Hl)Kato. T,. 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